增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长差异比较

【目的】探讨增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因表现型的差异以及EGF、PDGF和bFGF对其的影响。【方法】测定细胞生长曲线;应用液闪计数测定成纤维细胞胶原蛋白的合成。【结果】增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度比正常皮肤成纤维细胞慢;胶原蛋白的合成高于正常皮肤成纤维细胞。EGF、PDGF和bFGF均对两种成纤维细胞的增殖具有强烈的刺激作用。EGF和bFGF可减少增生性瘢痕成纤维细胞的胶原蛋白合成,PDGF可以使两种成纤维细胞的胶原蛋白合成增加。【结论】增生性瘢痕成纤维细胞是一种特殊基因表现型的成纤维细胞,它具有自己特殊的生物学特性。EGF、PDGF和bFGF在增生性瘢痕的形成过程中可能具有重要作用。     

TGF-β1对皮肤成纤维细胞的p-ERK表达的影响

目的探讨TGF-β1刺激后对皮肤成纤维细胞中磷酸化ERK表达的影响及相互关系。方法以原代培养人正常皮肤成纤维细胞为研究对象。细胞分2组:浓度组:10 ng/ml、5 ng/ml、1.0 ng/ml、0 ng/ml。时间组:给予10 ng/ml的TGF-β1刺激不同时间,分别在0、15、30、60、120 min的时间点提取蛋白。采用Western blotting法检测成纤维细胞中磷酸化ERK蛋白的表达变化。结果浓度组及时间组p-ERK蛋白表达与对照组相比均有差异(P0.05),随着TGF-β1剂量增加和作用时间延长,其磷酸化ERK蛋白表达水平逐渐增强,在TGF-β1 5 ng/ml时p-ERK水平达作用最强,在作用60 min时p-ERK达高峰。结论随着TGF-β1浓度增加及作用时间延长,大剂量TGF-β1时可上调体外培养成纤维细胞内的ERK信号蛋白活性。TGF-β1诱导的成纤维细胞的p-ERK水平增高可能是依赖ERK通路激活的,但ERK通路与TGF-β/Smad通路存在交互作用的机制,目前还无定论。     

bFGF、TGFβ1在人皮肤病理性瘢痕不同时期的表达及意义

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、转化生长因子β1（transforming growth fac-torβ1,TGFβ1）在病理性瘢痕不同时期中的表达情况,并探讨它们在瘢痕形成中的作用。方法：收集病理性瘢痕患者43例,应用免疫组化SP法检测其瘢痕组织及正常皮肤中bFGF、TGFβ1的表达并进行统计学分析。结果：瘢痕形成晚期的组织bFGF表达水平明显高于瘢痕形成早期,在增殖期瘢痕、成熟期瘢痕的表达显著低于正常皮肤组织,差异有统计学意义（P〈0.05）。但在不同发生时期的瘢痕中,TGFβ1表达水平差异不明显（P〉0.05）,而在病理性瘢痕的表达明显高于正常皮肤组织（P〈0.05）。结论：bFGF可能是抑制瘢痕形成的重要因子;TGFβ1可能是瘢痕维持其形态和结构的主要内源性生长因子。     

恒稳磁场对离体增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的 观察不同强度的恒稳磁场对增生性瘢痕离体的成纤维细胞在TGF-β1表达强度的影响;探讨恒稳磁场的抗增生性瘢痕作用机理. 方法 取体外分离培养的皮肤增生性瘢痕成纤维细胞,离体培养后,分为4个实验组即0 T磁场组、0.1 T磁场组、0.2 T磁场组、0.3 T磁场组,各组先在无处理因素下培养12 h,再分别加上强度为0 T 、0.1T、0.2T、0.3T的恒稳磁场,0 T磁场组不加磁场,在4个时间点上采用Western blot检测各组TGF-β1表达对数总灰度值. 结果 处理组表达强度较对照组明显减弱(P<0.05);在处理组之间,随着磁场强度的增强,TGF-β1(转化生长因子β1)表达强度逐渐减弱. 结论 恒稳磁场可抑制增生期瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达强度.     

转化生长因子-β1对瘢痕成纤维细胞的调节及意义

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中纤维粘连蛋白(FN)和肌动蛋白(α—actin)表达的诱导作用，探讨TGF-β1与瘢痕挛缩的关系。方法 采用细胞培养、免疫组化、图像分析技术，观察在不同含量TGF-β1的作用下，瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达情况。结果 不同含量的TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达FN和α—actin的作用不同，分别以25～100μg／L和10～50μg／L为有效；与正常瘢痕组织相比，增生性瘢痕的成纤维细胞在表达FN和α—actin方面，对TGF-β1的反应更为敏感，差异均有显著性意义(P＜0．01)。结论 TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达增加可能与瘢痕挛缩有关。     

TGF-β1对瘢痕成纤维细胞α-SMA表达的诱导作用

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对瘢痕成肌纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的诱导作用.方法以5例增生性瘢痕为标本,3例正常瘢痕为对照,采用成纤维细胞二维培养和三维培养体系及LSAB免疫组织化学染色技术,观察了在不同TGF-β1浓度条件作用下,来源于增生性瘢痕和正常瘢痕的成纤维细胞表达α-SMA的情况.结果①不同浓度的TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-SMA的作用不同,以5ug/L的TGF-β1作用最有效;②与来源于正常瘢痕的成纤维细胞相比,来源于增生性瘢痕的成纤维细胞在表达α-SMA方面,对TGF-β1的反应更为敏感.③对同一瘢痕来源的成纤维细胞而言,三维培养体系中α-SMA的含量要明显低于二维培养体系.结论①在体外,TGF-β1诱导α-SMA在瘢痕成肌纤维细胞中的表达作用存在着浓度差异;②增生性瘢痕中成纤维细胞与正常瘢痕中成纤维细胞性状存在着差异,对TGF-β1敏感性不同;③细胞外基质成分可能会降低TGF-β1的诱导作用,使α-SMA的表达减少.     

TGF-β1对口腔鳞癌相关成纤维细胞FAP表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对癌相关成纤维细胞(CAFs)中成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达的影响.方法 应用10 ng/ml的TGF-β1作用于CAFs细胞,设置正常成纤维细胞(NFs)和未经处理的CAFs细胞作为对照组,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中FAP的蛋白和mRNA表达情况.结果 FAP在NFs中几乎不表达,而在CAFs中FAP的mRNA和蛋白表达均增加.与NFs组和CAFs组相比,10 ng/ml的TGF-β1能够明显促进CAFs细胞分泌FAP,作用12、24 h后FAP mRNA和蛋白的相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05).且随着作用时间的延长,FAP的表达持续升高,24 h较12 h表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1能够促进CAFs中FAP的表达,在肿瘤上皮-间质交互作用中扮演着重要角色.     

bFGF、TGF-β1在体表海绵状静脉畸形中的表达及其意义

目的：研究bFGF、TGF－β1在体表海绵状静脉畸形中的表达及其意义。方法：体表海绵状静脉畸形标本25例,正常中,小静脉各12例。Envision法免疫组织化学染色观察bFGF、TGF－β1表达,半定量分析。结果：海绵状静脉畸形和正常中,小静脉中bFGF和TGF－β1表达都很微弱,无明显差别。毛细血管和毛细血管后微静脉的血管壁有较强TGF－β1表达,呈棕黄和棕黑色斑块状包绕管腔。结论bFGF、TGF－β1分泌少可能不是体表海绵状静脉畸形始发原因,但与畸形病理结构形成有一定关系。     

尿酸对人尿道成纤维细胞TGF-β1、Smad3的影响

目的 观察人尿道成纤维细胞在尿液、尿酸刺激下TGF-β1、Smad3的表达变化,探讨尿道瘢痕的形成机制.方法 体外培养人尿道成纤维细胞,以尿液、350 μmol/L浓度的尿酸刺激溶液刺激人尿道成纤维细胞,通过免疫荧光染色和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测各组细胞TGF-β1、Smad3因子表达变化,ELISA法比较各组细胞上清液Ⅰ型胶原蛋白差异.结果 免疫荧光检测提示TGF-β1与Smad3蛋白在人尿道成纤维细胞中均有表达,尿液及生理浓度的尿酸刺激后,TGF-β1与Smad3的mRNA表达上调,蛋白表达明显升高(P＜0.05);ELISA法检测显示,尿液和尿酸刺激人尿道成纤维细胞24、48 h后,细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量显著升高(P＜0.05).结论 尿酸刺激引起人尿道成纤维细胞TGF-β1、Smad3的表达升高;尿酸可能对尿道瘢痕的形成起促进作用.     

bFGF和TGF-β_1对人牙龈成纤维细胞生物学作用的影响研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子-β(1TGF-β1)单独及联合应用时对人牙龈成纤维细胞(HGF)增殖及I型胶原的分泌和糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)合成的影响。方法体外培养HGF,MTT法动态检测两种生长因子单独及联合作用后的增殖效应;羟脯氨酸试剂盒消化法及阿利新蓝法分别检测最佳增殖浓度时上清液中I型胶原及糖胺多糖含量。结果第3天开始bFGF和TGF-β1促进HGF增殖,第5天最显著(P0.05),bFGF和TGF-β1的浓度分别为10 ng/mL和1 ng/mL时增殖效应最佳,联合作用更显著(P0.05);最佳增殖浓度时TGF-β1促进I型胶原分泌,而bFGF起抑制作用(P0.05),联合应用时TGF-β1的促进作用占优势,但作用减弱(P0.05);最佳增殖浓度时bFGF和TGF-β1促进GAG合成(P0.05),联合应用时更显著(P0.05)。结论除bFGF单独作用时抑制I型胶原的合成外,bFGF和TGF-β1单独及联合应用时能促进HGF增殖和细胞外基质的合成。     

TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：观察外源性TGF－β3对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）生长增殖的影响，为临床治疗提供理论依据。方法：用MTT比色法检测TGF－β3对HSFB增殖活性的影响，^3H-脯氨酸掺入法检测细胞内胶原合成，免疫组化检测I，Ⅲ型胶原及TGF－β3蛋白表达情况。结果：TGF－β3可抑制HSFB细胞增殖，下调TGF－β1蛋白及I型胶原蛋白表达。结论：TGF－β3具有抗瘢痕形成作用，有望在临床中应用。     

TGF-β1对肾间质成纤维细胞SDF-1表达的影响

目的 探讨大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F)基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)的表达及转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)对其表达的影响.方法 采用RT-PCR和 Western blot及免疫组化方法检测NRK49F细胞 SDF-1表达及不同浓度、不同时间的 TGF-β1 刺激对SDF-1表达的影响.结果 正常NRK49F细胞低表达SDF-1 mRNA,TGF-β1呈时间依赖性增加其表达,在24 h表达最高,为刺激前(2.924±0.235)倍,差异有统计学意义(P<0.05).在剂量反应曲线上,5 ng/mL TGF-β1刺激作用最强,为未刺激组的(2.113±0.314)倍,差异有统计学意义(P<0.05).与SDF-1 mRNA表达一致,正常NRK49F细胞SDF-1蛋白低表达,5 ng/mL TGF-β1 呈时间依赖性的增加SDF-1蛋白表达,24 h已非常明显,36 h达高峰,为刺激前的(2.572±0.238)倍,差异有统计学意义(P<0.05).加入TGF-β1中和抗体后, SDF-1蛋白的表达明显下降.结论 正常NRK49F细胞有SDF-1低表达.TGF-β1以剂量依赖及时间依赖的方式刺激NRK49F细胞表达SDF-1.SDF-1作为一个炎症趋化因子,可能参与了肾脏炎症反应及纤维化的发生发展.     

TGF-β1、bFGF与肝纤维化的关系

近年来研究发现,在肝纤维化的病理生理过程中,储脂细胞通过自分泌和旁分泌的方式分泌TGF-β1、和bFGF,从而调节自身的增生分化和细胞外基质(ECM)的产量,促进肝纤维化的发生和发展.     

壳多糖对不同来源成纤维细胞生物学特性的影响

目的:探讨壳多糖对异常瘢痕成纤维细胞生物学活性的作用.方法:以瘢痕疙瘩及增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象,正常皮肤成纤维细胞为对照,用含0、0.01%、0.02%、0.04%、0.08%、0.16%、0.24%、0.48%壳多糖培养液对不同来源成纤维细胞体外培养72 h.MTT法检测不同来源成纤维细胞生长增殖情况,24 h 3H-脯氨酸标记法检测胶原的相对量,定量酶联免疫试剂盒检测TGF-β1、b-FGF、IL-8含量,同时观察细胞形态的变化.结果:不同浓度壳多糖呈剂量依赖性抑制不同来源成纤维细胞增殖及胶原、TGF-β1、b-FGF的分泌,同时促进IL-8的分泌,且对异常瘢痕组织的作用明显强于正常皮肤(P<0.05,P<0.01), 而瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组间无明显差异.不同来源成纤维细胞无明显形态结构区别.结论:壳多糖可以抑制瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的生长、增殖、合成及分泌胶原功能,有望在异常瘢痕的防治中发挥重要作用.     

TGF-β1对增生性瘢痕成纤维细胞中c-myc和c-fos表达及胶原分泌的影响

目的了解TGF-β1对增生性瘢痕成纤维细胞中癌基因c-myc和c-fos的表达及胶原分泌的影响,探讨瘢痕增生机制. 方法烧伤患者增生性瘢痕6例标本,通过细胞培养研究了TGF-β1对增生性瘢痕成纤维细胞癌基因c-myc和c-fos的表达(免疫组织化学和图像分析方法)及胶原分泌(3H-脯氨酸法)的影响. 结果 TGF-β1可显著提高增生性瘢痕成纤维细胞癌基因c-myc和c-fos的表达, 图像分析结果面密度(c-myc: 0.0687±0.0072 vs 0.0141±0.0016,P<0.01;c-fos: 0.0529±0.0048 vs 0.0223±0.0021,P<0.01);平均灰度(c-myc: 3340±462 vs 1120±232 ,P<0.01; c-fos: 1402±286 vs 605±79,P<0.01);积分吸光度[c-myc: 2.0±0.3 vs -(1.5±0.2), P<0.01; c-fos: 3.3±0.4 vs -(1.3±0.1), P<0.01]等指标经统计学处理与对照组有显著性差异;TGF-β1可促使增生性瘢痕成纤维细胞合成分泌胶原率提高2.0倍(P<0.01). 结论 TGF-β1可能是通过癌基因c-myc和c-fos的表达而促进增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成分泌增加.     

bFGF、TGF-β1在唾液腺黏液表皮样癌组织中的表达及意义

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)在唾液腺黏液表皮样癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组化SP法检测正常唾液腺组织以及高分化、中分化和低分化黏液表皮样癌组织中bFGF、TGF -β1蛋白的表达.结果 bFGF、TGF-β1在正常唾液腺中的阳性表达率低于在黏液表皮样癌组织中的阳性表达率(P均＜0.05).在中分化和低分化黏液表皮样癌组织中,bFGF蛋白表达率高于高分化黏液表皮样癌(P<0.05),TGF-β1蛋白表达率低于高分化黏液表皮样癌(P<0.05); 而bFGF、TGF-β1分别在中分化和低分化黏液表皮样癌组织中的蛋白表达率差异均无统计学意义.TGF-β1的表达与bFGF呈负相关(r=-0.471,P=0.0003).结论 TGF-β1的表达可能抑制黏液表皮样癌的发生,而bFGF的表达则可能促进黏液表皮样癌的发生,二者之间呈负相关.     

RNA干扰对人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1刺激结缔组织生长因子表达的影响

目的 体外构建结缔组织生长因子(CTGF)序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体,研究其对人瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF表达基因和蛋白的影响. 方法 体外构建CTGF序列特异性siRNA质粒表达载体,Dosper脂质体转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后.用10 ng/ml剂量的转化生长因子(TGF-β1)刺激细胞,采用RQ-PCR和Western blot观察CTGF mRNA和蛋白水平的变化.结果经TGF-β1刺激后,重组质粒组CTGF mRNA仅为止常表达的56.6%(P<0.05),CTGF蛋白仅为正常表达的基线水平(P<0.05). 结论 siRNA质粒表达载体可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF基因表达和蛋白分泌,即使在TGF-β1刺激条件下,其分泌功能仍明显受抑.     

整合素和TGF-β受体在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达研究

目的了解增生性瘢痕成纤维细胞表面整合素α1-3、αv、β1和转化生长因子β(TGF-β)受体Ⅰ分布的情况及相互关系.方法采用免疫组化染色的方法,观察10例人体增生性瘢痕和10例正常人皮肤组织成纤维细胞表面各整合素亚单位和TGF-β受体Ⅰ表达的差异,以了解两者间的相关程度.结果增生性瘢痕成纤维细胞表面整合素α1-3、αv、β1和TGF-β受体Ⅰ的表达均明显高于正常对照组(P＜0.01),其中以整合素α1、α3和β1的表达更为显著.增生性瘢痕成纤维细胞表面各整合素亚单位(除了α2以外)与TGF-β受体Ⅰ在表达强度上呈正相关(P＜0.05).结论增生性瘢痕成纤维细胞表面各整合素亚单位的高度表达是瘢痕产生与发展的重要因素之一;TGF-β受体Ⅰ的高度表达提示增生性瘢痕成纤维细胞对于TGF-β的高反应性;整合素与TGF-β受体Ⅰ在瘢痕形成过程中相互影响.     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的:研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对瘢痕成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:取术中切除的增生性瘢痕组织3例,以植块培养法进行成纤维细胞原代培养,取第2代用于实验.选用含1、5、10、50、100、500 ng/mL不同浓度bFGF的培养液作用于细胞72 h,以未加bFGF的培养液作为对照,并进行如下检测:①MTT法检测细胞增殖情况;②流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果:①MTT显示,随bFGF浓度增高,OA值由0.1833±0.019递增至0.3432±0.041(P＜0.05),且具有剂量依赖性.②流式细胞仪检测结果示:bFGF主要影响G1期,G1期细胞百分数随bFGF浓度增加由81.3%±3.24%递减至75.9%±1.21%.凋亡细胞百分比由7.2%±O.56%递减为2.3%±0.49%(P＜0.05).结论:bFGF可通过增加有丝分裂促进瘢痕成纤维细胞增殖,并有保护细胞免于凋亡的作用.