转化生长因子-β1及Bax在犬慢性胰腺炎发病过程中的表达及其意义

目的：观察转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA及Bax在慢性胰腺炎发病过程中的表达和分布。探讨其在犬慢性胰腺炎形成过程中的作用及意义。方法：通过制作犬慢性胰腺炎模型。采用原位杂交(ISH)法对。TGF-β1 mRNA和免疫组化法对Bax在慢性胰腺炎形成过程不同时期组织中的表达和分布进行研究。结果：TGF-β1 mRNA主要表达于间质的纤维组织、成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞。Bax主要表达于胰腺腺泡细胞。TGF-β1 mRNA及Bax在慢性胰腺炎形成过程表达较强且持续存在。结论：TGF-β1持续性高表达是造成慢性胰腺炎形成过程成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积及胰腺组织进行性纤维化的重要因素。而Bax是引起胰腺炎腺泡细胞发生凋亡的主要因素。     

TGF-β_1和α-SMA在慢性胰腺炎组织中的表达及意义

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在慢性胰腺炎组织中的表达及其临床病理意义.方法:应用免疫组织化学EnVisionTM法,检测TGF-β1、α-SMA在38例慢性胰腺炎及20例正常胰腺组织中的表达.结果:TGF-β1在慢性胰腺炎组织中主要表达于胰腺星状细胞(PSC)、腺泡细胞及导管上皮细胞的胞质中,而在正常胰腺组织的腺泡细胞及导管上皮细胞中则不表达;α-SMA在慢性胰腺炎组织中主要表达于胰腺血管或导管平滑肌细胞、PSC的胞质中,而在对照组的PSC中几乎不表达.TGF-β1、α-SMA的表达强度,在正常胰腺组织中要明显弱于慢性胰腺炎组织(P<0.01),并且它们的表达强度与胰腺纤维化的程度呈正相关(P<0.01).结论:TGF-β1是慢性胰腺炎胰腺纤维化过程中的关健因子,而PSC则是产生细胞外基质(ECM)的主要细胞;抑制TGF-β1的表达和PSC和活公在抗胰腺纤维化的治疗方面有着较好的前景.     

TGF-β1对人肾成纤维细胞热休克蛋白47表达的影响

目的 探讨TGF-β1在肾组织纤维化中的作用机制.方法 采用原代培养的人肾成纤维细胞,将细胞分为0、0.1、1、5ng/ml和10ng/ml不同浓度TGF-β1刺激培养组.应用免疫细胞化学方法检测TGF-β1作用下人肾成纤维细胞热休克蛋白47(heat shock protein 47,HSP47)表达,RT-PCR方法检测TGF-β1作用下人肾成纤维细胞HSP47和I型胶原mRNA表达.结果 (1)对照组(0ng/ml TGF-β1组)人肾成纤维细胞几乎无HSP47表达,在 TGF-β1刺激下,培养的人肾成纤维细胞HSP47表达增强.(2)在0.1～5ng/ml范围内,TGF-β1以剂量依赖方式促进培养的人肾间质成纤维细胞表达HSP47和I型胶原mRNA.结论 TGF-β1促进肾组织纤维化形成,可能部分是通过其促进肾间质成纤维细胞表达HSP47,进而增加胶原合成所致.     

黄芪注射液对大鼠胰腺纤维化及TG F-β1、 M M P-1、TIMP-1蛋白表达的影响

目的：探讨黄芪注射液对慢性胰腺炎大鼠胰腺组织中TGF-β1、MMP-1、TIMP-1蛋白表达的影响。方法：通过胰管内注射2%三硝基苯磺酸建立大鼠慢性胰腺炎纤维化模型。30只雄性SD大鼠随机分成三组：正常组、模型组、黄芪干预组,每组10只。4周末应用免疫组化法和图像分析技术定量检测大鼠慢性胰腺炎胰腺组织中TGF-β1、MMP-1、TIMP-1的表达情况,同时胰腺组织行HE染色,观察病理形态学改变。结果：与对照组比较,模型组发生明显的胰腺纤维化,TGF-β1及TIMP-1的表达明显升高（P〈0.01）。干预组纤维化程度及TGF-β1、TIMP-1的表达低于模型组（P〈0.05）,而MMP-1在正常胰腺组织与模型组及干预组中的表达无显著性差异（P〉0.05）。结论：黄芪注射液抑制大鼠胰腺纤维化组织的形成可能与其降低TGF-β1及TIMP-1蛋白表达有关。     

健肾冲剂对慢性肾衰竭大鼠肾TGF-β_1、ET-1mRNA表达的影响

目的 :观察健肾冲剂对慢性肾衰竭 (CRF)大鼠残肾组织中 TGF-β1 、ET- 1m RNA表达的影响。方法 :采用 5 / 6肾切除法复制大鼠 CRF模型 ,将 5 0只 wistar大鼠随机分成病理对照组、保肾康组、洛汀新组、健肾冲剂组、正常组 ,用 RT- PCR技术检测各组大鼠残肾组织中 TGF-β1 、ET- 1m RNA表达水平。结果 :正常组肾组织中 TGF-β1 、ET- 1m RNA表达最弱 (P<0 .0 1) ,病理对照组肾组织中 TGF-β1 、ET- 1m RNA表达最明显 (P<0 .0 1) ,健肾冲剂组肾组织中 TGF- β1 、ET- 1m RNA表达较保肾康组及洛汀新组有明显下降 (P<0 .0 1)。结论 :健肾冲剂可能是通过下调肾脏组织中 TGF- β1 、ET- 1m RNA表达而改善 CRF大鼠肾功能     

β1转化生长因子对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌相关的基质金属蛋白酶的影响

目的探讨β1转化生长因子（TGF-β1）对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）表达的调节作用,及TGF-β1与瘢痕的关系。方法培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞经TGF-β1处理,采用酶联免疫法（ELISA）测定瘢痕疙瘩成纤维细胞上清液中MMP-1、MMP-2和TIMP-1的水平。结果瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1、MMP-2和TIMP-1的生成量显著高于正常皮肤（P〈0.01）;加TGF-β1处理后,瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1的分泌量显著降低（P〈0.01）,MMP-2的分泌量显著升高（P〈0.01）,而TIMP-1的分泌量无显著改变（P〉0.05）。结论培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞显示MMP-1、MMP-2和TIMP-1增加,TGF-β1在生成调节过程中起重要作用。     

MMP、TGF-β1在翼状胬肉中的表达及其意义

目的:研究基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在翼状胬肉组织中的表达,探讨它们在翼状胬肉发生过程中的作用。方法:采用免疫组织化学SP法,比较翼状胬肉和正常结膜组织中MMP-1、MMP-9、TGF-β1的表达差异。结果:MMP-1、MMP-9、TGF-β1在翼状胬肉组织中各层中均有表达,在上皮层和血管内皮层强阳性表达。在正常结膜组织中,上皮细胞层表达较弱,血管内皮细胞和成纤维细胞有弱阳性表达,细胞外基质中为阴性表达。翼状胬肉组织MMP-1、MMP-9、TGF-β1的表达强于正常结膜组织,差异有显著性(P<0.05)。结论:高水平的MMP、TGF-β1是翼状胬肉发生的重要因素。     

MMP-1、TIMP-1及TGF-β1在风湿性心脏病瓣膜组织中的 表达及意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）及转化生长因子-β1（TGF-β1）在风湿性心脏病（RHD）瓣膜组织中的表达及意义。方法 采用Western blot及RT-PCR法检测RHD瓣膜组织（实验组, n=30）及无RHD瓣膜组织（对照组, n=15）中MMP-1、TIMP-1及TGF-β1蛋白与mRNA的表达,碱水解法检测胶原代谢情况,Masson法进行胶原纤维染色并检测胶原容积分数（CVF）。分析MMP-1、TIMP-1及TGF-β1与CVF的相关性。结果 MMP-1及TGF-β1蛋白和mRNA在实验组中的表达高于对照组,而TIMP-1蛋白和mRNA在实验组中的表达低于对照组,差异有统计学意义( P<0.05)。实验组胶原含量及CVF均高于对照组( P<0.05)。相关性分析显示,MMP-1与TGF-β1呈正相关,TIMP-1与TGF-β1呈负相关,MMP-1及TGF-β1与CVF呈正相关,TIMP-1与CVF呈负相关。结论 MMP-1、TGF-β1和TIMP-1参与了RHD瓣膜病变的纤维化进展。     

小窝蛋白-1在CTD-ILD肺组织中的表达及TGF-β1对其表达调控的体外研究

目的:了解小窝蛋白-1(Caveolin-1)在结缔组织病相关肺间质病变(CTD-ILD)患者肺组织中的表达,及转化生长因子-β1(TGF-β1)对小窝蛋白-1在人肺成纤维细胞(HLF)中表达的影响。方法:CTD-ILD患者及正常对照肺组织冰冻切片行小窝蛋白-1免疫荧光染色;原代人肺成纤维细胞培养、鉴定,选用11～20代HLF,以终浓度分别为0、1、3、5、10、15μg/L的TGF-β1诱导24h以及浓度为10μg/L TGF-β1分别诱导0、6、12、24、48h,用定量PCR及Western Blot方法检测小窝蛋白-1mRNA及蛋白表达变化,实验重复3次。并且于HLF中加入10μg/L TGF-β1诱导24h,观察诱导前后小窝蛋白-1的荧光表达变化。结果:小窝蛋白-1在CTD-ILD患者肺间质中的表达与对照组相比减弱;小窝蛋白-1主要表达于人肺成纤维细胞的胞膜上,经TGF-β1诱导可使其表达减弱,且呈现一定的浓度和时间依赖趋势。与TGF-β1 0μg/L(对照组)相比,小窝蛋白-1mRNA表达在5、10、15μg/L TGF-β1组均下降,差异均有统计学意义(P<0.01);而小窝蛋白-1的蛋白表达仅在10、15μg/LTGF-β1组有减少,差异有统计学意义(P<0.01)。以TGF-β1作用0h组为对照,小窝蛋白-1mRNA表达在TGF-β1作用6h、12h、24h、48h组均有下降,差异均有统计学意义(P<0.01);而小窝蛋白-1蛋白表达则在TGF-β1作用24h、48h组下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:小窝蛋白-1在CTD-ILD患者肺组织中的表达减少,TGF-β1可诱导小窝蛋白-1表达下降,小窝蛋白-1的下调可能参与了CTD-ILD的发生和发展。     

人类成熟型TGF-β_1真核表达载体的构建及表达

目的：构建人类成熟型TGF-β1的真核表达载体,转染成纤维细胞进行表达,为其在基因治疗中的应用提供实验依据。方法：TRIzol法抽提人新鲜胎盘组织的总RNA,RT-PCR法扩增人成熟型TGF-β1基因,构建真核重组载体pIRES2-EGFP-hTGF-β1,并采用脂质体介导法转染成纤维细胞。结果：从人新鲜胎盘组织中成功提取得到含有hTGF-β1基因的总RNA。重组载体pIRES2-EGFP-hTGF-β1转染成纤维细胞后,经荧光显微镜观察可见绿色荧光。结论：成功构建了人成熟型TGF-β1基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-hTGF-β1,转染成纤维细胞株后hTGF-β1获得成功表达。     

心肌成纤维细胞DDR2对整合素β1调控的机制研究

目的 探究心肌成纤维细胞盘状结构域受体(discoid domain receptor 2, DDR2)对于整合素(integrin)β1表达的调控分子机制。方法 体外培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,使用RNA干扰和高表达载体分别下调和上调DDR2的表达,Western blot法检测血管紧张素Ⅱ(angiogensinⅡ, AngⅡ)作用细胞后其整合素β1、细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase, Erk1/2)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的表达水平。其后使用Erk1/2的特异性抑制剂PD98059以及TGF-β1的RNA干扰阻断相应信号通路,Western blot法再次检测AngⅡ刺激细胞后整合素β1的表达变化。结果 AngⅡ可以上调心肌成纤维细胞DDR2以及整合素β1的表达水平。DDR2的RNA干扰可以阻断AngⅡ引起的心肌成纤维细胞整合素β1的升高效应,同时降低了磷酸化Erk1/2(p-Erk1/2)和TGF-β1的表达水平。使用Erk1/2的特异...     

胞内高迁移率族蛋白B1对高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨胞内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞表达转化生长因子-β1(TGF-β1)中的作用。方法:酶消化法分离3周C57/BL6小鼠心脏成纤维细胞,培养并传代,实验使用2～4代细胞,波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色鉴定细胞。高糖培养不同时间(0,6,12,24,48h)后分别检测成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达量。在转染siRNA后再高糖培养心脏成纤维细胞6 h,RT-PCR检测HMGB1、TGF-β1 mRNA的水平。结果:与0h相比,高糖培养6,12,24,48 h后成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达都上调。转染HMGB1 siRNA后高糖培养6 h的成纤维细胞TGF-β1表达下调。结论:HMGB1可能参与调节高糖诱导的心脏成纤维细胞的TGF-β1的表达。     

Egr-1蛋白、MMP-2、TGF-β1在肾小管间质纤维化大鼠中的表达及意义

目的 探讨Egr-1(early growth response-1)蛋白、MMP-2、TGF-β1在肾小管间质纤维化大鼠模型中的表达及意义.方法 采用单侧输尿管结扎术(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)致肾小管间质纤维化大鼠模型.将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、贝那普利(Benazepril)治疗组[10 mg/(kg·d)].手术后第5、10和15天分别处死各组中6只大鼠,用免疫组化方法观察各组大鼠肾小管间质中Egr-1蛋白,转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloProteinase-2,MMP-2)表达情况.行HE、Masson染色后进行图像分析评定各组肾小管间质损害程度.结果 模型组各时间点肾小管间质损伤指数及Egr-1蛋白、TGF-β1表达明显高于假手术组(P＜0.05),MMP-2表达明显低于同期假手术组(P＜0.05);而贝那普利组各时间点肾小管间质损伤指数及Egr-1蛋白、TGF-β1表达明显低于模型组(P＜0.05),MMP-2表达明显高于同期模型组(P＜0.05).结论 Egr-1蛋白参与肾小管间质纤维化过程;贝那普利在肾小管间质纤维化中对肾脏有保护作用.     

MiR-29c在大鼠肾间质成纤维细胞中的抗纤维化作用

目的:在细胞水平探索miR-29c在肾脏纤维化中的作用.方法:检测TGF-β,对大鼠肾间质成纤维细胞的促纤维化作用及该过程中miR-29c表达的变化.miRanda和高通量测序找出miR-29c的靶基因.通过转染miR-29c mimics(高表达),检测其对胶原Ⅰ(Col Ⅰ)表达的影响.结果:TGF-β1能刺激大鼠肾间质成纤维细胞转分化;大鼠肾间质成纤维细胞转分化后miR-29c表达下调;上调miR-29c能抑制TGF-β1的促转分化作用.结论:miR-29c mimics通过有效抑制TGF-β1刺激NRK-49F细胞株Col Ⅰ表达起到抗纤维化作用,人工合成的miR-29c mimics转染NRK-49F细胞株有效提高miR-29c表达量从而抑制Col Ⅰ表达,为治疗肾间质纤维化提供了一个新的靶点.     

天然水蛭素对肌腱成纤维细胞抑制作用的体外研究

目的:通过体外实验研究天然水蛭素对兔肌腱成纤维细胞的抑制作用及三种相关细胞因子表达水平的变化,揭示天然水蛭素预防肌腱粘连的作用及相关途径。方法:体外分离培养兔肌腱成纤维细胞,采取MTT法检测不同浓度天然水蛭素对兔肌腱成纤维细胞增殖活性的影响;运用ELISA法测定兔肌腱成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达含量。结果:与未加水蛭素组(0 U/m L)比较,天然水蛭素干预组(1.50、3.00、6.00 U/m L)能够显著抑制兔肌腱成纤维细胞生长;并正向调节b FGF与MMP-2含量表达,负向调节TGF-β1含量表达(P0.05或0.01)。结论:天然水蛭素能够显著抑制体外培养的兔肌腱成纤维细胞的增殖,且具有一定的浓度依赖性;通过降低兔肌腱成纤维细胞TGF-β1的表达并相应提高b FGF与MMP-2的表达可能是其基于TGF-β1/Smads信号通路发挥抗纤维化作用的一种有效途径。     

胃肠道间质瘤中TGF-β1、uPA的表达及其意义

目的:探讨胃肠道间质瘤中TGF-β1、uPA的表达及其在胃肠道间质瘤(GIST)发生及发展中的作用.方法:应用RT-PCR和Western-blot方法检测93例GIST标本中TGF-β1、uPA mRNA和蛋白水平表达.结果:TGF-β1、uPA mRNA及蛋白在GIST组织中呈现高表达,TGF-β1、uPA mRN...     

microRNA-494对大鼠肾间质成纤维细胞分泌细胞外基质的调控作用

目的:探讨microRNA-494(miR-494)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激后大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)细胞外基质分泌的调控作用。方法:体外培养NRK-49F细胞株,并分为以下6组:TGF-β1(3ng/m L)组、miR-494模拟物(50ng/m L)组、miR-494抑制物(50ng/mL)组、miR-494模拟物(50ng/m L)+TGF-β1(3ng/m L)组、miR-494抑制物(50ng/m L)+TGF-β1(3ng/m L)组、空白对照组。茎环实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测细胞miR-494、胶原蛋白I(ColI)、纤维连接蛋白(FN)mRNA;WesternBlot法检测细胞ColI蛋白。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组miR-494(P<0.01)、ColI mRNA(P<0.05)及FN(P<0.01)mRNA表达显著升高;miR-494模拟物组ColI、FN mRNA表达显著升高(P<0.05);miR-494抑制物组ColI(P<0.05)、FN(P<0.01)mRNA表达显著降低。与TGF-β1组比较,miR-494模拟物+TGF-β1组ColI、FN mRNA表达显著升高(P<0.05);mi R-494抑制物+TGF-β1组ColI、FN mRNA表达显著降低(P<0.05)。各组间ColI蛋白与ColI mRNA的表达水平相一致。结论:miR-494可能参与调控并促进TGF-β1诱导肾间质成纤维细胞的细胞外基质分泌。     

白血病抑制因子对肾间质成纤维细胞活化的影响

目的 研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)对肾间质成纤维细胞活化的干预作用.方法 体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞,分对照组、转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理组及TGF-β1和LIF共处理组,电镜下观察细胞形态变化,通过RT-PCR及Western blot检测肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)表达的改变,双抗体夹心ABC-ELISA检测细胞上清Ⅰ型胶原.结果 TGF-β1引起成纤维细胞激活,产生形态学改变,α-SMA表达增高(P<0.01),Ⅰ型胶原产生增加(P<0.01).与TGF-β1处理组相比,LIF干预组形态学改变不明显,LIF能干预TGF-β1引起大鼠肾间质成纤维细胞α-SMA表达和Ⅰ型胶原产生.结论 LIF可以抑制TGF-β1引起的肾间质成纤维细胞激活.     

醛固酮对心脏成纤维细胞转化生长因子β1的影响

目的 探讨醛固酮对心脏成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取新生大鼠心脏成纤维细胞,应用ELISA、Western-Blot、RT-PCR的方法分别测定不同条件下心脏成纤维细胞培养液中TGF-β1水平和心脏成纤维细胞中的TGF-β1含量,以及TGF-β1 mRNA 的表达.结果 醛固酮(10-9、10-8和10-7 mol/L)可剂量依赖性地促进心脏成纤维细胞TGF-β1 mRNA的表达以及TGF-β1的合成和分泌,同时醛固酮(10-7 mol/L)以时间依赖的方式促进TGF-β1 mRNA的表达,在作用4h后表达开始增加,8 h达高峰.提前给予螺内酯(10-6 mol/L)能抑制醛固酮(10-7 mol/L)的上述作用.结论 醛固酮能促使心脏成纤维细胞TGF-β1 mRNA的表达以及TGF-β的合成和分泌,且此作用可能是通过盐皮质激素受体介导的.     

TGF-β1/Smads信号通路在SIRT1抗心肌纤维化中的作用及机制研究

目的 观察沉默信息调节因子1(sirtuin 1,SIRT1)对压力超负荷致大鼠心肌纤维化及血管紧张素Ⅱ(angiotensin, AngⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。方法 在体实验通过不完全结扎大鼠腹主动脉,使压力负荷增加诱导心肌纤维化,给予SIRT1激活剂后,左室心肌组织行Masson染色,观察心肌间质纤维化并计算胶原容积分数,免疫组化染色检测心肌组织TGF-β1/Smads蛋白表达。提取新生大鼠心脏成纤维细胞,给予AngⅡ或AngⅡ加SIRT1激活剂后,采用MTT法检测细胞增殖,qRT-PCR和Western blot法检测心肌组织及成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原(collagenⅠ/Ⅲ,Col1α1/3α1)、SIRT1及TGF-β1/Smads mRNA及蛋白的表达。结果 与假手术组相比,压力超负荷模型组大鼠心肌间质出现显著的纤维化,心肌胶原容积分数增加,Col1α1/3α1、TGF-β1/Smads表达明显增多,SIRT1表达减少;给予SIRT1激活剂SRT1720干预后可改善压力超负荷诱导的心肌间质纤维化,下调Col1α1/3α1、TGF-β1/Sm...