siRNA靶向沉默MALAT-1基因对人食管癌EC9706细胞体外侵袭迁移的影响

目的:研究长链非编码RNA MALAT-1对食管癌EC9706细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法:化学合成针对MALAT-1的siRNA,脂质体法转染EC9706细胞,转染48h后RT-PCR和Western blot检测各细胞MALAT-1在mRNA和蛋白质水平的表达。Transwell实验检测迁移、侵袭能力改变。结果:小干扰RNA下调MALAT-1表达后,RT-PCR和Western blot证实食管癌EC9706细胞中MALAT-1的表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显下调,Transwell实验证实食管癌EC9706细胞迁移、侵袭能力下降。结论:抑制MALAT-1表达能够使食管鳞癌细胞的侵袭转移能力明显降低。     

干扰GTPBP4基因对食管癌EC9706细胞放射敏感性影响

目的:探讨沉默GTPBP4基因对人食管癌EC9706细胞系放射敏感性影响。方法:通过GEO数据库分析食管癌患者组织中GTPBP4的表达情况。利用重组质粒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术转染食管癌EC9706细胞系,使细胞中GTPBP4基因沉默,观察GTPBP4基因沉默对EC9706细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响。通...     

microRNA-10b对人食管癌细胞系EC9706迁移和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-10b(microRNA-10b,miR-10b)对食管癌细胞系EC9706迁移和侵袭能力的影响。方法:构建pEGFP-miR-10b真核表达载体,在食管癌细胞系EC9706中稳定表达miR-10b,利用real-time PCR检测其表达水平,应用划痕试验,Transwell小室实验分析迁移和侵袭能力的改变。结果:转染miR-10b载体后,real-time PCR检测其表达水平显著高于对照组(P<0.05),miR-10b的表达能够显著促进EC9706细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:miR-10b能够促进食管癌细胞系EC9706的迁移和侵袭,可作为评价食管癌转移能力的指标。     

阿米洛利对食管癌EC9706细胞侵袭能力的影响及其作用机制

 【摘要】　目的　研究阿米洛利对人类食管癌EC9706细胞体外侵袭能力的影响,探讨其可能的作用机制。方法　食管癌细胞EC9706经阿米洛利处理后,采用Transwell小室法检测其对细胞侵袭能力的影响,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot法分别检测阿米洛利对细胞尿纤溶酶原激活物（uPA）mRNA及蛋白相对于β-actin表达的影响。结果　经10、20、40、80 μmol／L阿米洛利作用24 h后,EC9706细胞体外侵袭人工重组基膜的能力降低,并随着阿米洛利浓度的增加,EC9706细胞的穿膜细胞数由对照组的（96±7）个分别下降为（78±6）、（57±6）、（33±4）、（15±3）个（F＝43.46,P＜0.01）。随着阿米洛利浓度的增加,uPA mRNA的表达由对照组的（0.623±0.065）分别下降为（0.526±0.054）、（0.389±0.041）、（0.312±0.038）、（0.247±0.025）（F＝6.71,P＜0.01）,uPA 蛋白由对照组的（0.732±0.064）分别下降为（0.644±0.057）、（0.533±0.058）、（0.391±0.036）、（0.267±0.043）（F＝ 6.71,P＜0.01）。结论　阿米洛利能抑制食管癌细胞的侵袭能力,其作用机制可能与抑制uPA系统的表达有关。     

下调PRDX6对食管癌EC9706细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响

目的:探讨PRDX6表达水平对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响。方法:应用GEPIA数据库分析食管癌组织PRDX6表达情况;将抑制基因PRDX6表达的“PRDX6-shRNA”质粒转染到EC9706细胞(sh-PRDX6组)。qRT-PCR和Western Blot检测转染效果。CCK8法检测增殖活力。划痕实验检测迁移能力。Transwell实验检测侵袭能力。克隆形成实验检测克隆形成能力。Western Blot检测AKT、p-AKT的蛋白表达量。结果:食管癌组织中PRDX6表达水平明显高于癌旁组织。qRT-PCR和Western Blot证实“PRDX6-shRNA”质粒有效抑制PRDX6基因表达。与对照组相比,sh-PRDX6组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著下降,放射敏感性增强。sh-PRDX6组细胞中AKT的表达水平无明显变化,而p-AKT表达水平明显下降。结论:PRDX6促进食管癌细胞EC9706的增殖、迁移、侵袭及放射抵抗。     

siRNA沉默STAT5对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

Objective  

The aim of the study was to explore the effect of STAT5 silenced by siRNA on proliferation, apoptosis and invasion of esophageal carcinoma cell line EC9706.     

索拉非尼对食管癌EC9706细胞的生长抑制作用

目的 探讨索拉非尼（sorafenib）体外对EC9706细胞生长抑制作用及其机制。方法 qRTPCR检测sorafenib作用后MMP-2、MMP-9、TIMP1、AKT和Bcl-2 mRNA的表达;Western blot检测sorafenib作用后AKT、p-AKT、Bcl-2、MMP-2和TIMP1蛋白表达水平的变化;Hoechst/PI 染色荧光显微镜观察sorafenib诱导的细胞凋亡/坏死;细胞划痕实验观察sorafenib对EC9706细胞的迁移抑制作用。结果 与对照组相比,qRT-PCR显示sorafenib下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2 mRNA表达,上调TIMP1 mRNA 表达（P<0.05）;Western blot显示sorafenib降低MMP-2、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达水平,上调TIMP1蛋白表达水平（P<0.05）;荧光显微镜观察发现sorafenib诱导红染细胞增加（P<0.05）;细胞划痕实验发现sorafenib作用后划痕明显变宽,并且具有浓度依赖性（P<0.05）。结论 索拉非尼能够上调TIMP1表达水平、下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2表达水平,可以抑制食管鳞癌EC9706细胞的迁移、促进凋亡坏死,这些可能是其产生抗肿瘤作用的机制之一。     

YAP1在食管癌KYSE30和EC9706细胞侵袭和转移中的作用机制探讨

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在食管癌KYSE30和EC9706细胞侵袭转移中的作用。方法将不做任何处理空白食管癌KYSE30和EC9706细胞分别作为A组和E组,将只添加Lipofectamine 2000转染试剂的食管癌KYSE30和EC9706细胞分别作为B组和F组,将转染无义干扰小RNA(siRNA)和YAP1 siRNA的食管癌KYSE30细胞和EC9706细胞分别作为C组、D组和G组、H组。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、血管内皮生长因子(VEGF)和YAP1 mRNA及其对应蛋白的相对表达量,CCK8法、Transwell小室和划痕实验检测各组细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果 D组细胞中MMP2、VEGF、YAP1 m RNA和蛋白的相对表达量均低于A、B和C组细胞(P﹤0.05),H组细胞MMP2、VEGF、YAP1 mRNA和蛋白的相对表达量均低于E、F和G组细胞(P﹤0.05)。转染48、72 h后,D组细胞OD值低于A、B和C组(P﹤0.05),H组细胞OD值低于E、F和G组细胞(P﹤0.05)。D组穿膜细胞数少于A、B和C组细胞(P﹤0.05),划痕愈合距离小于A、B和C组细胞(P﹤0.05);H组穿膜细胞数少于E、F和G组细胞(P﹤0.05),划痕愈合距离小于E、F和G组细胞(P﹤0.05)。结论 YAP1可能通过抑制MMP2和VEGF的表达,抑制食管癌细胞的侵袭和转移,有望成为抑制食管癌恶性进程的有效靶点。     

沉默 ABCE1 基因对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响

目的：探讨电转法沉默ATP结合盒转运子E1（ATP-binding cassette protein E1, ABCE1 ）基因的表达对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响。方法：合成靶向 ABCE1 的siRNA序列（ABCE1-siRNA）以及阴性对照序列（NC-siRNA）,电转法转染至EC109细胞,分别形成ABCE1-EC109、NC-siRNA-EC109细胞。RT-PCR、Western blotting检测转染后EC109细胞中 ABCE1 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检测EC109细胞周期及凋亡,CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell法分别检测EC109细胞的增殖、迁移以及侵袭的能力。结果： ABCE1-EC109细胞中 ABCE1 mRNA和蛋白表达较NC-siRNA-EC109细胞明显降低\[(0.47±0.04) vs (0.67±0.05),(0.63±0.09) vs (0.86±0.11);均P<0.05\]。与NC-siRNA-EC109细胞相比,ABCE1-EC109细胞的增殖速度明显减慢\[（2.20±0.10） vs （2.91±0.13）,P<0.05\],细胞周期阻滞在G0/G1期细胞数目明显增多\[（76.5±3.1)% vs (56.1±2.7)%, P<0.05）\];细胞的凋亡率明显升高\[（15 .46±3.12）% vs (0.54±024）%,P<001\],迁移、侵袭能力均显著下降\[迁移：（8.12±0.23） vs （1.91±0.11）μm,P<0.05;侵袭：（42.56±4.68） vs (68.78±6.98)个,P<001\]。结论：电转法沉默 ABCE1 基因的表达可促进食管癌EC109细胞的凋亡,抑制其体外增殖、侵袭及迁移。     

LncRNA AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706转移潜能影响机制探讨

目的 食管癌是常见的消化道肿瘤,其细胞侵袭与迁移机制尚不清楚.本研究旨在探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA) AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706侵袭及迁移能力的影响及可能的作用机制.方法 构建AFAP1-AS1真核表达载体,用脂质体2000将pcDNA3.1-AFAP1-AS1表达载体及pcDNA3.1空载体转染食管癌细胞EC9706.通过G418筛选,建立稳定表达AFAP1-AS1 RNA的EC9706-AFAP1-AS1细胞系.Millicell小室检测2株细胞侵袭及迁移能力的变化,Real-time PCR法检测2株细胞中血管内皮生长因子C(vascular endothelialgrowth factor C,VEGF-C)及Artemin的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测2株细胞中VEGF-C及Artemin蛋白表达的变化.结果 成功构建稳定表达AFAP1-AS1的EC9706细胞系,过表达AFAP1-AS1后,EC9706细胞的迁移(数据分布符合正态分布,SW1=0.912,SW2=0.878,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.002,P＜0.001)及侵袭(数据分布符合正态分布,SW1=0.945,SW2=0.972,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.02,P＜0.001)能力均增加,VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.931,SW2=0.922,均P＞0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.14,P＞0.05)和Artemin(数据分布符合正态分布,SW1 =0.964,SW2=0.981,均P＞0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.29,P＞0.05)的mRNA表达差异无统计学意义,但VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.762,SW2=0.82,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.005,P＜0.001)及Artemin(数据分布符合正态分布,SW1 =0.892,SW2=0.853,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,￡=0.004,P＜0.001)的蛋白表达明显增加.结论 AFAP1-AS1可能通过增加EC9706细胞中VEGF-C及Artemin的蛋白表达来增强其侵袭及迁移能力,在食管癌侵袭及进展中发挥作用.     

沉默MTA1抑制肝癌细胞黏附、迁移和侵袭能力的实验研究

目的:研究沉默转移相关基因1(MTA1)对肝癌细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响。方法:在肝癌细胞中转染MTA1 siRNA、siRNA control,同时以不做转染的细胞作为对照,qRT-PCR和Western blot分别检测细胞中MTA1的表达水平,MTT检测细胞增殖,细胞黏附试验检测细胞黏附能力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、上皮钙黏附素(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、神经型钙黏素(N-cadherin)蛋白水平,明胶酶谱实验检测MMP-2和MMP-9活性。结果:细胞中转染MTA1 siRNA能够下调肝癌细胞中MTA1 mRNA和蛋白水平,转染siRNA control对细胞中MTA1 mRNA和蛋白水平没有影响。沉默MTA1后的肝癌细胞存活率和黏附率降低,侵袭细胞数目减少,与没有转染的细胞比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。沉默MTA1后的肝癌细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平及活性降低,细胞中E-cadherin蛋白水平升高,N-cadherin蛋白水平降低,与没有转染的细胞比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:沉默MTA1抑制肝癌细胞黏附、迁移和侵袭能力,作用机制与抑制细胞分泌MMP-2、MMP-9及抑制细胞EMT有关。     

食管癌细胞系KYSE150中RNA干扰MTA1的基因芯片分析

目的探讨MTA1对食管癌转移相关基因的影响。方法用RNA干扰的方法在食管癌细胞系KYSE150中沉默MTA1基因的表达,随后进行转移相关基因芯片分析。以两次芯片分析中均上调2倍以上(或下调1/2)为差异显著基因。通过DIVID生物信息学数据库进行gene ontology的通路分析。结果在两次基因芯片分析中均有意义上调的基因共有7个,分别是LAMC1、MMP14、MMP15、MDM2、API5、ODC1、PTGS2;而两次均显著下调的基因共有14个,它们是CSF1R、HGF、IGF2、ITGA6、MMP9、MMP11、MMP13、CASP8、CTSD、TMPRSS4、THBS2、TIMP1、ENPP2、SNCG。通过在DAVID生物信息学数据库中对上述表达差异显著的基因进行通路分析,结果提示差异基因主要富集在5条信号通路上,分别是肿瘤信号通路(MDM2、CASP8、CSF1R、HGF、ITGA6、LAMC1、MMP9、PTGS2)、ECM受体整合信号通路(LAMC1、THBS、ITGA6)、基质金属蛋白酶信号通路(TIMP1、MMP9)、小细胞肺癌信号通路(ITGA6、Cox2)和黏着斑信号通路(ITGA6、HGF、IGF2)。结论 MTA1参与了转移相关的一系列分子改变事件,尚需进一步的分子生物学方法验证这些基因调控的信号途径。     

沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察转移相关基因1（MTA1）基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨 MTA1基因在胃癌发生发展中的作用。方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰 RNA（siRNA） 转染到胃癌细胞株 SGC7901中。运用Real time PCR 和Western blot 技术检测SGC7901细胞内MTA1的 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MTA1 siRNA 可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在 mRNA 和蛋白水平上的表达（P﹤0.01）。CCK-8实验表明MTA1 siRNA 转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降。结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株 SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖。MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用。     

干扰HMGB1基因表达对食管鳞癌细胞侵袭迁移及放射敏感性的影响

目的：探讨干扰HMGB1基因对X线照射后食管鳞癌细胞增殖活性、存活能力及侵袭、迁移能力的影响及其机制。方法：构建含有HMGB1 shRNA的慢病毒载体并转染人食管鳞癌EC9706细胞（HMGB1 shRNA组）,并以转染阴性序列的细胞为对照组,两组均设置X射线照射和未照射2个亚组。采用Western blot法评估HMGB1基因的干扰效果;MTS法和集落形成实验分别检测食管鳞癌EC9706细胞的增殖活性和存活能力;划痕实验和Transwell小室实验分别检测干扰HMGB1基因对EC9706细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot分别检测照射后各组的细胞凋亡率及上皮间质转化（EMT）相关蛋白的表达。结果：与阴性对照组比较,Western blot结果显示干扰HMGB1基因明显降低了HMGB1蛋白的表达（P < 0.01）,MTS法检测结果显示X射线照射后干扰HMGB1显著抑制了食管鳞癌细胞的增殖水平（P < 0.05）,集落形成实验结果显示HMGB1 shRNA组细胞的放射敏感性明显增加（P < 0.01）。划痕实验结果显示,X射线照射后HMGB1 shRNA组细胞24 h的划痕愈合率为（20.78±4.38）%,低于阴性对照组的（39.02±3.25）%（P < 0.01）。Transwell实验结果显示X射线照射后HMGB1 shRNA组细胞在3.5 h的迁移细胞数为（67.00±16.56）个,低于阴性对照组的（194.00±19.74）个（P < 0.01）。流式细胞术结果显示,X射线照射后阴性对照组细胞凋亡率为（13.64±1.24）%,HMGB1shRNA组细胞凋亡率为（20.67±1.38）%;与阴性对照组比较,X射线照射后HMGB1 shRNA组细胞E-cadherin表达显著增加,而Ncadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9的表达明显降低（均为P < 0.01）。结论：干扰食管鳞癌细胞中HMGB1基因的表达后经X射线照射,降低了肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移水平和存活能力,诱导了细胞凋亡,增加了放射敏感性,并调控EMT相关蛋白的表达。     

Bmi-1在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及初步功能研究

Background and Objective:Previous studies have shown that Bmi-1 is overexpressed in a variety of tumors,suggesting that Bmi-1 plays an important role in tumorigenesis.In this study,we investigated the effect of Bim-1 siRNA on cell proliferation,cell cycle,cell apoptosis and migration of human esophageal carcinoma EC9706 cells,and explored its potential mechanisms.Methods:Bmi-1 small interfering RNA(siRNA) was transferred into EC9706 cells.Then,cell proliferation was measured using cell counting kit-8(CCK-8)...     

siＲNA 介导的eIF3b基因沉默抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和迁移

目的:探讨siＲNA介导的eIF3b基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7侵袭和迁移能力的影响。方法:设计eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA)片段,脂质体介导转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:I组(空白对照组)、II组(转染非特异性对照组)和III组（转染eIF3b-siRNA组）。应用qＲT-PCＲ和Western blotting免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mＲNA和蛋白表达水平;运用Matrigel 胶模型细胞迁移和侵袭实验检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:与I组（1.09±0.19）、II组（1.05±0.17）相比,III组eIF3b 蛋白表达水平（0.45±0.06）明显下降,差异具有统计学意义(P＜0.05),I组和II组eIF3b蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。III组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于I组(1.12±0.16)和II组(1.08±0.18),差异有统计学意义（P＜0.05）,I组和II组eIF3b mRNA表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。细胞迁移实验中,III组细胞明显少于I组和II组(P＜0.05);细胞侵袭实验中,III组穿过人工基底膜的细胞明显少于I组和II组(P＜0.05)。结论:下调eIF3b表达可明显抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移。     

Expression of MTA1 promotes motility and invasiveness of PANC-1 pancreatic carcinoma cells

The human metastasis-associated protein 1 (MTA1) is a constituent of the nucleosome-remodelling and -deacetylation complex. Its expression has been correlated with the invasion and metastasis of epithelial neoplasms. To address the functional consequences of MTA1 expression in pancreatic carcinoma cells, we have established PANC-1 pancreatic carcinoma cells that stably express MTA1 as an enhanced green fluorescent fusion protein (EGFP-MTA1). Here, we demonstrate that heterologous expression of EGFP-MTA1 markedly enhanced the cellular motility and the invasive penetration of epithelial barriers by the cells. Expression of EGFP-MTA1 had no effect on substrate-independent growth, but reduced substrate-dependent cell proliferation. In addition, the organisation of the cytokeratin filament system and the localisation of the actin cytoskeleton-associated protein IQGAP1 were distinctly altered in EGFP-MTA1-expressing cells. These results indicate that enhanced expression of MTA1 promotes the acquisition of an invasive, metastatic phenotype, and thus enhances the malignancy of pancreatic adenocarcinoma cells by modulation of the cytoskeleton.