人心肌肌钙蛋白Ⅰ胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立一种简便实用胶体金免疫层析检测方法．用于人心肌肌钙蛋白I（cTnI）的快速检测。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,以兔源抗cTnI多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,采用免疫层析技术制备快速检测cThI胶体金免疫层析检测试纸条。并与国外生产的胶体金试剂盒作对比。结果该试纸条检测范围质量浓度为5ng／mL～1μg／mL;灵敏度质量浓度为5ng／mL：特异性：与肌红蛋白、肌酸磷酸激酶同工酶、cTnT、cTnC无交叉反应：与国外胶体金试纸条检测结果比较阳性符合率为96．4％,阴性符合率为100．0％。结论成功建立cTnI胶体金免疫层析检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,适于急性心肌梗死的早期诊断及科研工作需要．     

基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析技术的初步研究

为建立基于纳米抗体的检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析技术,将已经通过噬菌体文库筛选得到的两株纳米抗体的质粒,在枯草芽孢杆菌中表达,得到具有活性的抗体蛋白(VHH-48、VHH-52)并以NI-NTA亲合层析纯化。以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记VHH-48和VHH-52抗体蛋白并制备金标垫,分别用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和羊抗鼠Ig G作为检测线和质控线,确定抗体蛋白的最佳标记pH和最适蛋白浓度。采用抗体双夹心的方法对两株抗体蛋白进行组合,建立胶体金免疫层析方法。以优化的双夹心抗体组合,组装试纸条,进行了灵敏度的测定和血吸虫病人粪检阳性血清的敏感性评估,以并殖吸虫等其他寄生虫感染的血清测定了试纸条的特异性。结果显示,成功表达并获得了纯度较高的纳米抗体。胶体金标记VHH-48和VHH-52抗体的最适蛋白量为14和10μg/mL,最适pH分别需要加入16和12μL体积的0.2 mol/L K_2CO_3,并确定以VHH-52标金和VHH52划线为最佳的抗体双夹心组合。对可溶性虫卵抗原的最低检测量为3.4 ng/mL,检测血吸虫病人阳性血清的检出率为2.27%,检测其他寄生虫感染血清结果显示出良好的特异性。本文构建了基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析试纸条方法,为纳米抗体在血吸虫病快速诊断的应用奠定了一定基础。     

胶体金免疫层析法检测血清癌胚抗原

建立一种快速、简易的检测血清中癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗CEA单克隆抗体4A3。将单克隆抗体3B5划线包被于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试纸条。血清中CEA与试纸条上胶体金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的包被抗体结合形成肉眼可见的红色线条。用GICA与ELISA试剂盒对比检测了637份血清标本，其灵敏度为96．69％，特异性为99．38％，两法符合率为98．74％。GICA检测血清中的CEA特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

免疫层析法同时检测孕妇TORCH—IgM抗体的研究

目的建立一种免疫层析法用于同时检测孕妇血清中TORCH—IgM抗体。方法用胶体金标记羊抗人IgM（斗链）抗体，将巨细胞病毒（CMV）、风疹病毒（RV）、弓形体（Tox）、单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-Ⅱ）四种重组抗原同时包被在硝酸纤维膜上，研制出同时检测TORCH—IgM抗体免疫层析试纸条。结果自制的免疫层析法与ELISA法对比检测阴阳性血清标本，各单项指标抗-CMV—IgM、抗-RV—IgM、抗-Tox—IgM、抗-HSV-Ⅱ-IgM阳性符合率分别为85．7％、100％、100％、100％，两法总符合率分别为97．9％、100％、100％、100％。结论本方法操作简便，显示结果直观，并且特异、稳定、快速、重复性好，可用于孕妇优生优育检测。     

早期诊断心肌损伤肌球蛋白胶体金免疫层析法研究

目的建立一种简便、快速、准确检测人心肌损伤的胶体金免疫层析法（GICA）。方法制备胶体金标记抗Myosin多肽抗体，抗Myosin单克隆抗体，结合垫和样品垫的处理，组装免疫层析试纸条。检测患者血清中Myosin，进行敏感性和特异性评定。结果测试条灵敏度可达5ng／mL。检测30例急性心肌梗塞（AMI）患者血清Myosin水平，并与Roche肌钙蛋白胶体金免疫层析试剂条比较，符合率达84.2％。结论本方法特异性强、灵敏度高、简便快速、可用于急性心肌损伤的早期诊断。     

免疫层析法快速测定鸡肉和鸡蛋中磺胺类药物残留

目的：用免疫层析试纸条法快速测定鸡蛋及鸡肉中磺胺类药物残留。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记抗磺胺类药物母核结构单克隆抗体,磺胺类药物竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。结果：该方法可以在15分钟内完成对磺胺类药物的半定量残留检测,检测磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺对甲氧嘧啶（SMD）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）的灵敏度为10ng/ml,肉眼判定检测限为20ng/ml,样品中回收率在85%～95.6%之间;检测磺胺嘧啶（SDZ）的灵敏度为10ng/ml,肉眼判定检测限为40ng/ml,样品中的回收率在44.8%～60.9%之间。用本方法与高效液相色谱法（HPLC）对来自动物试验的鸡肉和鸡蛋样品进行对比检测,具有较高的符合率。结论：该方法灵敏度高,检测快速、准确,无需特殊仪器设备,可作为磺胺类药物残留的快速筛选方法。     

抗人血红蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制

目的研制用胶体金免疫层析法定性检测人体粪便中血红蛋白(Hb)的试纸条。方法试纸条的玻璃纤维膜上包被胶体金标记的小鼠抗人Hb SPR-5单克隆抗体,硝酸纤维素膜的检测线(T)与质控线(C)处分别包被小鼠抗人Hb SP-5单克隆抗体和山羊抗小鼠IgG,通过双抗体夹心技术和免疫层析作用,使阳性样本在T线和C线处均显色,而阴性样本只在C线显色。结果制备的试纸条对人Hb的检测下限为21 ng/mL,与鸡、兔、羊、猪、牛这5种动物血样不发生交叉反应。结论制备的检测试纸条能明显提高人体粪便潜血的检出率并避免假阳性结果。     

pH值对胶体金标记单克隆抗体性能的影响

目的探讨pH值对胶体金标记单克隆抗体(mAb)性能的影响。方法用K2CO3调整胶体金溶液的pH值,得到pH值在5.0~9.0范围内的胶体金溶液,并用抗肠道病毒71型(EV71)VP1 mAb进行标记,牛血清白蛋白(BSA)封闭。用紫外-可见光谱扫描监测该标记过程中胶体金的性能改变。采用Mey氏稳定化实验检测免疫金的稳定性并检测制得的成品胶体金试纸条的灵敏度。结果 EV71-VP1 mAb在胶体金溶液pH值为7.0~8.5范围内制备的免疫金较稳定,且制得试纸条灵敏度高。结论 pH值是影响胶体金稳定性、决定胶体金与mAb间作用力的重要因素,并证实了紫外-可见光谱扫描评价pH值对胶体金标记的效果,建立了用紫外-可见光谱选择最适标记pH的方法标准。     

抗吗啡单克隆抗体的制备及其胶体金交联物的初步应用

目的：制备吗啡特异性单克隆抗体(mAb)。方法：将吗啡分子与兔血清白蛋白或牛血清白蛋白交联，免疫BALB／c小鼠并检测免疫效价后，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗吗啡mAb。将纯化mAb与胶体金颗粒交联后利用纸层析技术进行标本检测。结果：成功地制备了3株抗吗啡mAb，利用其中1株抗体制备的胶体金试纸条，检测样品灵敏度达200μg／L。结论：吗啡mAb胶体金试纸条研制成功将为毒品的现场检测打下基础。     

人心肌肌钙蛋白T胶体金免疫层析法的建立

目的 建立一种简便,快速,准确检测人心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）。方法 制备的胶体金标记抗ｃＴｎＴ单克隆抗体３Ｆ７,生物素标记另一株抗体２Ｈ８,链霉亲和素结合于硝酸纤维素膜上,制成免疫层析试纸条,血清中ｃＴｎＴ与测试条两种抗体结合后,沿硝酸纤维素膜移动,与链霉亲和素交联形成肉眼可见的红色线条。结果 测试条灵敏度可达０．５ｎｇ／ｍｌ。检测３０例急性心肌梗塞（ＡＭＩ）患者血     

Fast dipstick dye immunoassay for detection of immunoglobulin G (IgG) and IgM antibodies of human toxoplasmosis

A dipstick dye immunoassay (DDIA) was developed to detect immunoglobulin G (IgG) or IgM antibodies of toxoplasmosis infection in humans. The assays employ a blue colloidal dye particles (D-1) conjugated to sheep anti-human IgG and rabbit anti-human IgM as the visualizing agents and a soluble antigen of tachyzoites of Toxoplasma gondii strain RH (TSA) as the detective antigen. The mixture of dye-labeled anti-human antibody-special human antibody was captured by TSA onto a nitrocellulose membrane dipstick by means of immunochromatography. The assays are rapid (the whole test can be completed within 15 min), simple, and cheap, and they don't require any equipment. They are sensitive and specific for the detection of anti-Toxoplasma IgG or IgM antibodies and generally agree closely with the results from the enzyme-linked immunosorbent assay. The assays are especially suitable for field applications.     

Fast Dipstick Dye Immunoassay for Detection of Immunoglobulin G (IgG) and IgM Antibodies of Human Toxoplasmosis

A dipstick dye immunoassay (DDIA) was developed to detect immunoglobulin G (IgG) or IgM antibodies of toxoplasmosis infection in humans. The assays employ a blue colloidal dye particles (D-1) conjugated to sheep anti-human IgG and rabbit anti-human IgM as the visualizing agents and a soluble antigen of tachyzoites of Toxoplasma gondii strain RH (TSA) as the detective antigen. The mixture of dye-labeled anti-human antibody-special human antibody was captured by TSA onto a nitrocellulose membrane dipstick by means of immunochromatography. The assays are rapid (the whole test can be completed within 15 min), simple, and cheap, and they don't require any equipment. They are sensitive and specific for the detection of anti-Toxoplasma IgG or IgM antibodies and generally agree closely with the results from the enzyme-linked immunosorbent assay. The assays are especially suitable for field applications.     

检测Asia I型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用

目的:建立一种快速、简便的检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法:采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,用其标记纯化的AsiaⅠ型口蹄疫抗体后包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的AsiaI型口蹄疫抗体和纯化的羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜按顺序组装成胶体金快速诊断试纸条,通过系列实验验证其灵敏度、特异性、重复性及稳定性。结果:研制的AsiaⅠ型口蹄疫快速检测试纸条对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的检测灵敏度为0.116mg/L,对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。交叉反应证实该方法与其他血清型口蹄疫抗原和猪水疱病抗原(SVD)无交叉反应。检测田间样品,GICA与反向间接血凝的定型的符合率为96.87%。稳定性实验证实试纸条可保存12个月。结论:建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。     

银强化滴金免疫法检测肾综合征出血热IgM的研究

目的 建立一种检测血清汉滩病毒抗体ＩｇＭ的方法。方法 将汉滩病毒抗原点于硝基纤维膜上,应用Φ１５ｎｍ的羊抗人ＩｇＭ金标抗体与血清标本中的汉滩病毒ＩｇＭ结合,再加银加强试剂,阳性者为棕黑色。结果 整个试验过程需要１０ｍｉｎ,用该法与ＥＬＩＳＡ法对比检测临床标本,结果有良好的一致性,总符合率为９８％。结论 银强化滴金免疫法操作简单,试剂稳定、安全、敏感、快速,适于基层。     

五种方法检测抗dsDNA抗体性能比较与临床评价

用化学发光免疫分析法(CLIA)、免疫印迹法(WB)、间接免疫荧光法(IIF)、胶体金免疫层析法(CGCIA) 和ELISA检测dsDNA抗体,评价方法的分析性能、相关性及对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值.用五种方法检测300例SLE组患者、300例疾病对照组患者和100名健康人对照组血清抗dsDNA抗体.经统计学...     

点免疫金渗滤法筛选胶体金标记抗人IgG 的研究

目的:应用点免疫金渗滤法筛选适宜胶体金标记的抗人IgG(以下简称二抗),并运用多个评价指标进行比较和分析。方法:选择三个不同公司的二抗用胶体金标记,根据棋盘滴定法确定最佳标记条件;运用点免疫金渗滤法对三种二抗的胶体金标记后检测效能进行比较,采用包虫病人和健康对照血清,用包虫病特异性抗原检测包虫病患者血清中的特异性抗体,评价最优的二抗,并与酶联免疫吸附测定法进行比较。结果:A、B、C 三种二抗标记的最佳标记条件为:pH 均为8.5,加入量分别为38.4、24、19.2 g/ ml,综合评价二抗B 检测效能最优。将其与酶联免疫吸附测定法检测效能进行比较,两种方法检测结果的Kappa=0.895(P<0.05),吻合度较强。结论:应用点免疫金渗滤法,以及本文提出的评价指标,能够筛选出最佳二抗,对检测试剂盒中二抗的选择具有重要的参考价值。     

Direct enzyme-linked immunosorbent assay that uses peroxidase-labeled antigen for determination of immunoglobulin M antibody to cytomegalovirus.

A direct enzyme-linked immunosorbent assay was developed for the measurement of immunoglobulin M (IgM) antibody to cytomegalovirus (CMV). Wells of microtiter plates were coated with anti-human IgM. Each patient's serum was added at a dilution of 1:100, and IgM from the serum was allowed to react with anti-human IgM. The amount of CMV-specific IgM antibody bound was determined by measuring the intensity of color change after the addition of peroxidase-labeled CMV antigen and substrate. Nuclei of infected cells served as an antigen source. CMV IgM could be detected only in IgM fractions of sera from patients with a recent CMV infection. Rheumatoid factor did not cause false-positive results. No cross-reactions were observed when paired sera from 22 patients with herpes simplex or varicella and single sera from 12 patients with suspected infectious mononucleosis were tested by the direct enzyme-linked immunosorbent assay. Each of 17 patients with a seroconversion for CMV antibody showed CMV-specific IgM antibody. In six of these patients the antibody was detected in the initial serum. The direct enzyme-linked immunosorbent assay for CMV IgM is a specific and sensitive test for the diagnosis of recent CMV infections and possesses distinct advantages over indirect tests.