NRF4转染对横纹肌肉瘤RD细胞分化及生肌调节因子表达的影响

为观察MRF4转染对人横纹肌肉瘤RD细胞分化及生肌调节因子MyoD表达的影响,利用脂质体法将MRF4转染人横纹肌肉瘤RD细胞,原位杂交检测MRF4、MyoD mRNA的表达,观察细胞形态、生长速度变化,并采用免疫细胞化学方法检测横纹肌肌球蛋白重链及肌动蛋白α-actin表达。结果显示,转染后RD细胞形态向高分化方向变化,生长受抑;MRF4、MyoD表达明显增加;细胞肌球蛋白重链和肌动蛋白α-actin表达显著增强。提示MRF具有促进RD细胞分化的作用,并可激活另一生肌调节因子MyoD的表达。     

转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义

目的探讨转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义。方法以Ficoll密度梯度离心法从SD大鼠骨髓分离单个核细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,以DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色和FITC标记的CD133、CD34进行鉴定。细胞免疫化学法检测原代培养7d内皮祖细胞KLF4的表达,RT-PCR法检测原代培养5、10、15d后细胞内KLF4及一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。结果经DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色鉴定证实获得的细胞为内皮祖细胞。细胞免疫化学检测发现KLF4表达于细胞核内;RT-PCR检测结果显示,5、10、15d大鼠内皮祖细胞的KLF4mRNA表达(分别为0.830±0.017,0.980±0.014,1.090±0.014)逐渐增强(P<0.01),eNOSmRNA表达(分别为0.310±0.008,0.500±0.011,0.650±0.010)也逐渐增强(P<0.01)。结论在内皮祖细胞分化为内皮细胞的过程中,KLF4的表达逐渐增强,并与成熟内皮功能相关。     

电离辐射对EL-4细胞Caspase-3蛋白表达的影响

Caspase-3（cysteinyl aspartic acid protease-3）是人类白细胞介素1β转化酶家族的重要成员之一,是细胞凋亡过程中的重要激酶.在凋亡的执行阶段,Caspase-3负责对全部或部分关键性蛋白的酶切（激活或灭活）.许多凋亡调节因子最终作用于下游效应器Caspase-3,形成凋亡特征性改变[1].电离辐射可诱导多种正常组织和肿瘤组织发生凋亡.笔者采用流式细胞术系统研究了不同剂量X射线对Caspase-3蛋白表达的影响,从而为探讨电离辐射引起细胞凋亡机制提供一定的科学依据.     

替米沙坦和胰岛素对糖尿病大鼠睾丸内质网应激和沉默信息调节因子1表达的影响

目的 观察替米沙坦和胰岛素对1型糖尿病大鼠睾丸组织内质网应激和沉默信息调节因子1(Sirt1)表达的影响,探讨替米沙坦和胰岛素对糖尿病大鼠睾丸的保护作用及其机制.方法 健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、糖尿病对照组(B组)、糖尿病胰岛素治疗组(C组)和糖尿病替米沙坦治疗组(D组),每组8只.B、C、D组用链脲佐菌素制备1型糖尿病大鼠模型,C组大鼠每日皮下注射精蛋白锌胰岛素,D组每日给予替米沙坦灌胃.于实验第8周末留取标本,测定并计算睾丸重量及睾丸指数、精子数量及活动率,测定睾酮水平及睾丸组织中CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白-78(GRP-78)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-12(caspase-12)、Sirt1 mRNA的表达水平.结果 与A组比较,B组糖尿病大鼠睾酮水平、睾丸重量、精子数量及活动率明显降低(P＜0.05),睾丸组织CHOP、GRP-78、caspase-12 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05),Sirt1 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05).经胰岛素治疗后,C组大鼠血清睾酮、睾丸睾酮、睾丸重量、精子数量及活动率较B组明显升高(P＜0.05),睾丸组织CHOP、GRP-78、caspase-12 mRNA表达水平较B组明显降低(P＜0.05),Sirt1 mRNA表达水平较B组明显升高(P＜0.05).替米沙坦治疗后,D组大鼠精子数量、精子活动率较B组明显升高(P＜0.05),血清睾酮、睾丸睾酮、睾丸重量与B组比较无明显变化(P＞0.05),睾丸组织CHOP、GRP-78、caspase-12 mRNA表达水平均较B组明显降低(P＜0.05),Sirt1 mRNA表达水平较B组明显升高(P＜0.05).4组大鼠睾丸指数比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 替米沙坦和胰岛素通过下调内质网应激水平、上调Sirt1表达对糖尿病大鼠睾丸组织产生保护作用.     

转录因子Oct-4在肺癌中的表达及对其生长、增殖的影响

目的观察Oct-4蛋白在肺癌组织及肺癌细胞系中的表达,探讨Oct-4对肺癌细胞生长、增殖的影响。方法比较正常组织、肺癌组织,正常肺细胞系和肺癌细胞系中Oct-4的表达水平;选取高表达Oct-4的肺癌细胞系,运用siRNA技术降低Oct-4表达,通过MTT实验、BrdU掺入实验等技术检测肺癌细胞的生长、增殖,并检测PI3K分子的表达变化。结果 Oct-4在肺癌组织及肺癌细胞中表达上调,分别与正常组织及HBE比较差异有统计学意义(P<0.05);降低Oct-4表达后,细胞BrdU掺入率明显降低(P<0.05),生长速度减慢(P<0.05),PI3K水平明显降低。结论 Oct-4在肺癌组织及肺癌细胞中表达升高,并通过PI3K促进肺癌细胞生长及增殖。     

γ射线对肺成纤维细胞中转录因子SP1,AP1和Smad3-Smad4活性的影响及意义

目的检测不同剂量γ射线照射对大鼠肺成纤维细胞（rat lung fibroblast，RLF）中转录因子SP1，AP1和Smad3-Smad4活性的影响并探讨其意义。方法进行大鼠肺成纤维细胞的原代分离培养，应用3、5和8Gyγ射线照射，通过凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）、免疫印迹和免疫组织化学等方法检测照射后转录因子SP1，AP1和Smad3-Smad4活性的变化及Ⅰ型胶原和Ⅰ型组织纤溶酶原激活物抑制剂（typeⅠplasminogen activator inhibitor，PAI—Ⅰ）的表达变化。结果正常RLF中AP1和Smad3-Smad4形成弱阻滞条带，SP1无阻滞条带形成，3、5和8Gy γ射线照射后，3种转录因子所形成的阻滞条带明显增强，PAI—Ⅰ和Ⅰ型胶原的表达增多。结论一定剂量γ射线能促进大鼠肺成纤维细胞中转录因子SP1，AP1和Smad3-Smad4的活化，并进而促进PAI—Ⅰ和Ⅰ型胶原的表达。     

IL-1和IL-4对肾小球系膜细胞p27和CDK2表达的影响

探讨白细胞介素 1(IL 1)和白细胞介素 4 (IL 4 )对肾小球系膜细胞细胞周期调节蛋白 p2 7和周期素依赖性蛋白激酶CDK2表达的影响。利用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞观察IL 1促进系膜细胞增生前后p2 7和CDK2 的表达变化 ,及同时应用IL 4后对上述表达变化的影响。结果发现 ,IL 1可以明显促进系膜细胞增生 ,同时观测到p2 7表达下降而CDK2 表达增高 ;IL 4可以抑制IL 1诱导的系膜细胞增生 ,同时发现p2 7表达增加而CDK2 表达减弱。提示IL 1和IL 4对系膜细胞增生的促进和抑制作用与细胞周期调节蛋白的表达变化密切相关。     

血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞PAI-1 基因表达的调节作用及其机制

为探讨血管紧张素Ⅱ与系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物－1（PAI－1）基因表达的关系，从健康成人肾（肾移植配型不合）培养肾小球系膜细胞，经过10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L浓度的血管紧张素Ⅱ刺激后，分别检测系膜细胞血管紧张素ⅡAT1和AT2受体基因表达以及PAI－1基因表达，并测定培养上清中纤溶酶原激活物的活性。结果发现，在血管紧张素Ⅱ刺激下，系膜细胞AT1受体mRNA表达明显增强，而AT2受体的基因表达不论是在正常状态下，还是在血管紧张素Ⅱ刺激后均未检测到；血管紧张素Ⅱ诱导48h后，系膜细胞PAI－1的基因表达显著增强，并呈现浓度依赖性，而培养上清中纤溶酶原激活物的活性则下降。说明血管紧张素Ⅱ能显著促进系膜细胞PAI－1基因的表达，其作用可能是通过AT1受体介导的。     

狗骨髓基质干细胞体外分化为肌源性细胞的初步观察

用贴壁法体外分离骨髓基质干细胞，实验组5—氮胞苷诱导，对照组加入等量培养基，用相差显微镜和免疫组织化学方法观察、鉴定培养细胞。探讨成年狗骨髓基质干细胞体外诱导分化为肌细胞的可行性，为心肌梗死和心力衰竭的细胞移植治疗提供新的细胞系。结果表明，实验组诱导后4周，多数培养细胞由梭形变为杆状，免疫组织化学检查结蛋白、平滑肌肌动蛋白和肌钙蛋白I染色阳性；对照组多数培养细胞为梭形，免疫组织化学检查结蛋白染色弱阳性，平滑肌肌动蛋白染色弱阳性，肌钙蛋白I染色阴性。结果提示，成年狗骨髓基质干细胞体外可诱导分化为肌源性细胞。     

hTERT基因转染对人胚胎成纤维细胞端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响

为了探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞 (hEFs)端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响 ,采用基因重组技术构建hTERT全长cDNA正义荧光真核表达载体 ,并采用脂质体法将正义重组质粒pIRES2 EGFP hTERT及空载质粒pIRES2 EGFP分别转染原代培养hEFs,检测转染细胞端粒长度、端粒酶活性及端粒酶亚单位的变化。结果显示 ,外源性hTERT基因转染细胞 (hEF hTERT)端粒酶活性较未转染细胞 (hEFs)及空载体转染细胞 (hEF EGFP)显著增加 (P <0 0 1) ,hEF hTERT、hEFs及hEF EGFP端粒长度分别为 6 0kb、5 3kb及 5 4kb ,端粒酶亚单位中除hTERT在mRNA和蛋白水平表达均增加外 ,hTR和TP1mRNA无明显变化。以上结果提示 ,外源性hTERT基因转染能使原代培养的hEFs端粒酶活化 ,端粒长度不再继续缩短 ,hTERT在mR NA和蛋白水平表达增加     

人骨骼肌细胞体外分化过程及特征

为研究人骨骼肌细胞（HSMC）体外分化模式及其生物学、形态学、生化学特征,在体外培养HSMC,并进行免疫组化鉴定,细胞生物学和形态学观察、肌酸激酶（CK）及蛋白质含量测定。结果发现,体外培养的HSMC能达到高度分化;CK活力、肌细胞蛋白质合成与其分化、成熟程度及肌管的功能状态呈正相关。提示HSMC体外重新分化过程与在体相似。     

CD44V6的表达对大肠癌细胞缝隙连接细胞间通讯的影响

应用原位分子杂交，免疫组化，免疫荧光定量分析的方法研究ＣＤ４４Ｖ６在人大肠癌细胞中的表达，应用激光漂白后荧光恢复技术研究ＣＤ４４Ｖ６对大肠癌细胞的缝隙连接细胞间通讯的影响。     

骨髓基质细胞负调因子与 IL-4、IL-10的关系

目的:探讨IL-4、IL-10对骨髓基质细胞负调因子TGF-β、MIP-1α、LIF的调节。方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定在IL-4、IL-10作用下骨髓基质细胞负调因子TGF-β、MIP-1α、LIF的水平。结果:IL-4作用下,TGF-β、MIP-1α的水平明显升高,P<0.05;而LIF水平却明显降低,P<0.05;IL-10则对三种负调因子无明显作用,P>0.1。结论:IL-能上调骨髓基质细胞TGF-β、MIP-1α表达,而下调LIF的表达;IL-10对这三种负调因子则无明显调控作用。     

维甲酸诱导白血病细胞分化对WT1基因表达的影响

为了解WT1基因的表达与白血病细胞分化的关系以及WT1基因在白血病细胞分化中的作用。本文采用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL-60、K562细胞系分化,然后应用NBT还原试验和RT-PCR方法分别测定细胞分化程度笔WT1基因表达的变化。结果发现,ATRA作用5天后可以诱导HL-60细胞分化,WT1的表达随着HL-60细胞的分化而降低;ATRA对K562细胞无诱导分化作用。其WT1的表达也无显著变化。提示WT1基因的表达与造血细胞分化呈负相关,与白血病细胞的分化有密切联系。