管花苷B对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的：观察肉苁蓉提取物管花苷B对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤的影响。方法：用MTT法检测细胞存活率，以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化，DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生，并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性。结果：100 μmol·L^-1 H₂O₂处理细胞24 h显著降低细胞的存活率；诱导细胞发生凋亡，凋亡率达48.0％；细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高；而线粒体膜电位却明显降低，红/绿荧光强度的比值由正常的5.97降低为0.41左右。而预先给予1、10或100 mg·L^-1浓度的管花苷B处理细胞12 h，可显著提高细胞存活率；并可有效抑制DNA ladder的发生；流式细胞仪检测凋亡率分别降低到30.9%、18.3%和6.2%；激光共聚焦显微镜结果显示管花苷B可明显降低细胞内活性氧的水平；并可逐渐恢复线粒体的高能量状态；caspase-3的活性不断降低，并呈现了一定的剂量依赖性。结论：管花苷B能显著地抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡，其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平，维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。     

VEGF诱导血管内皮细胞产生H2O2及其促增殖作用

目的： 研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H₂O₂及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法: ① 以H₂DCFDA为H₂O₂指示剂，检测 500 μg/L VEGF刺激下，血管内皮细胞H₂O₂的产生；② 以MTT法检测3×10⁶ U/L过氧化氢酶（CAT），及外源性加入5-20 mmol/L H₂O₂对VEGF促增殖功能的影响。结果: ① 在VEGF刺激血管内皮细胞 15 min 后，细胞内开始出现逐渐增强的荧光，且随时间逐渐增强，至 45 min 左右最强，随后逐渐减弱；而同时加入过氧化氢酶组的细胞则仅有微弱荧光产生，且荧光强度不随时间变化；② 3×10⁶ U/L过氧化氢酶对VEGF的促增殖功能有明显的抑制作用（P<0.01）；③ 外源性加入5-10 mmol/L H₂O₂ 时对血管内皮细胞有明显促增殖作用（P<0.01），但其对VEGF的促增殖功能却有显著抑制作用（P<0.01）。结论: VEGF可刺激血管内皮细胞产生细胞外H₂O₂，在促细胞增殖中可能具有重要作用。而外源性H₂O₂对VEGF的生理功能可能具有抑制作用。     

脂联素激活AKT抑制H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡

目的: 观察脂联素(adiponectin)对H₂O₂诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法: 应用脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法观察脂联素对H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡的影响;应用Western blotting法观察脂联素对Akt和caspase-3活性的影响。结果: 脂联素对H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡具有显著的抑制作用(P<0.01)。脂联素直接激活Akt并增加了H₂O₂诱导的Akt活性,对H₂O₂诱导的caspase-3激活有显著抑制作用(P<0.01)。 Akt上游激酶PI3K的特异抑制剂LY294002 不但增加了H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡率,而且消除了脂联素的抗凋亡作用。结论: 脂联素对H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与其激活PI3K/Akt通路、抑制caspase凋亡信号通路有关。     

木犀草素对卵巢癌细胞株转移能力的影响

目的：研究木犀草素对卵巢癌细胞株HO-891 0PM的体外侵袭能力的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：HO-8910P M细胞经木犀草素处理后用Boyden小室法检测其体外、侵袭和运动能力。并采用明胶酶 谱法检测HO-8910PM细胞分泌的明胶酶活性。RT-PCR检测TIMP-1、NM23基因mRNA的表达情况，蛋白印迹法检测ERK2的蛋白表达变化。结果：HO-8910PM细胞经木犀草 素处理后，体外侵袭、运动能力呈剂量依赖性下降。HO-8910PM细胞MMP-9的分泌下降。ERK2 蛋白表达明显降低，但TIMP-1、NM23基因mRNA的水平无明显变化。结论:木犀草素在体外剂量依赖性地抑制卵巢癌细胞HO-8910PM的转移能力，这可能与木犀草素 抑制MMP-9的分泌及下调ERK2表达有关。     

As2O3诱导肿瘤细胞凋亡依赖H2O2途径

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，As₂O₃）对人乳头瘤病毒（HPV）阳性宫颈癌HeLa细胞和HPV阴性胰腺癌AsPC-1细胞的 凋亡诱导作用与细胞内H₂O₂水平的关系。方法：采用不同浓度的As 2O3处理HeLa细胞和AsPC-1细胞不同时段，显微镜下观察细胞的凋亡，噻唑蓝（MTT）法 测定细胞生长抑制情况；不同浓度的As₂O₃处理细胞2、5、8、12、24 h后，用DCFH-DA 标记检测细胞内的H₂O₂水平。结果：2 μmol/L As₂O₃处理HeLa 细胞48 h后细胞的生长受到明显抑制，表现出细胞凋亡的特征，随着As₂O₃浓度的增加 和作用时间的延长效果更加明显。而 1 μmol/L As₂O₃处理AsPC-1细胞24 h 即呈 现明显 的生长抑制和凋亡特征。As₂O₃处理HeLa细胞2 h细胞内H₂O₂的水平比对照组升高(1 0 μmol/L组达51.30%)，持续到8 h达到高峰（升高84.19%），12 h后下降，24 h水平与 对照组接近，并有明显的剂量依赖性。As₂O₃处理AsPC-1细胞2 h后，细胞内H₂O₂的 水平也明显升高（10 μmol/L组达79%），持续到5 h达到高峰（增高169%），且该细胞内H₂O₂水平升高比HeLa细胞更明显，12 h之后的变化情况与HeLa细胞类似。结论:As₂O₃诱导HeLa细胞和AsPC-1细胞凋亡与细胞内的H₂O₂水平改变有关,而与HPV的感染无明显相关性。H₂O₂积累是As₂O₃诱导细胞凋亡途径中的早期事件,H₂O₂可能在As₂O₃诱导肿瘤细胞凋亡途径中扮演类似第二信使的作用。     

MAPK和caspase-3在异基因CD8+T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡中的作用

目的： 探讨MAPK和caspase-3在异基因CD8+T细胞诱导血管内皮细胞凋亡中的作用。方法：免疫磁珠阳性分选异基因CD8+T细胞,AnnexinⅤ/FITC试剂盒检测异基因CD8+T细胞诱导的HUVECs和HDMECs凋亡率,Western blotting检测血管内皮细胞内caspase-3、MAPK表达。观察SB203580 (p38MAPK抑制剂)、SP600125 (JNK抑制剂)、PD98059（ERK抑制剂）、Z-DEVD-FMK（caspase-3抑制剂）对内皮细胞凋亡的影响。结果：异基因CD8+T细胞作用24 h和48 h后,HUVECs凋亡率分别为41.7％±10.1％和29.4％±8.3％,HDMECs凋亡率分别为28.9％±7.2％和15.2％±4.8％,与对照组相比均具有显著差异（P<0.01）。异基因CD8+T细胞作用后,HUVECs和HDMECs内磷酸化p38MAPK表达、caspase-3裂解增强,而磷酸化JNK、ERK无明显变化。Z-DEVD-FMK和SB203580可显著抑制异基因CD8+T细胞诱导的HUVECs和HEMEC凋亡,并降低内皮细胞caspase-3表达。结论：p38MAPK和caspase-3介导了异基因CD8+T细胞诱导的血管内皮细胞凋亡。     

山萘酚、芹菜素对H2O2诱导的心肌细胞凋亡过程中线粒体损伤的影响

目的：观察山萘酚和芹菜素对H₂O₂诱导的大鼠心肌细胞凋亡过程中线粒体损伤的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法，体外分离和培养新生大鼠心肌细胞，建立H₂O₂损伤心肌细胞模型。以MTT法检测心肌细胞活力，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况，JC-1荧光探针测定线粒体膜电位，estern blotting 法检测胞浆中细胞色素C（Cyt C）的表达。结果:与模型组比较，山萘酚和芹菜素能显著提高心肌细胞活力，降低心肌细胞凋亡率，抑制线粒体膜电位下降和Cyt C释放。结论:山萘酚和芹菜素对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,山萘酚的抗氧化作用强于芹菜素，其机制可能依赖于抑制线粒体膜电位降低和Cyt C释放。     

H2O2对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv通道的作用

 目的:观察H₂O₂在常氧时对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的Kv的影响, 探讨H₂O₂对肺动脉平滑肌细胞的Kv通道的作用。 方法:用酶解法急性分离单个PASMCs，以全细胞膜片钳技术记录PASMCs膜上的电压依赖性钾通道 (voltage-gated potassium channel, Kv) 电流。 结果:常氧下 H₂O₂可显著增加Kv电流，电流-电压关系曲线左上移；而且Kv电流呈浓度依赖性增加。 结论:常氧下H₂O₂ 可使Kv通道开放。     

STI571及As2O3诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的：探讨比较STI571和As₂O₃诱导K562细胞凋亡及抑制其生长的可能机制，为进一步揭示慢性粒细胞白血病（CML）的发病机制及STI571和As₂O₃的临床应用提供理论依据。方法：采用细胞培养、台盼蓝染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、Western blot等方法研究STI571和As₂O₃分别对K562细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用，检测两种药物在诱导K562细胞凋亡的过程中某些凋亡相关蛋白的表达。结果：STI571和As₂O₃均可抑制K562细胞的增殖、诱导其凋亡。两种药物均可下调Bcl-XL的表达，并裂解caspase-3。As₂O₃作用浓度为2 μmol/L时其下调Bcl-XL的作用与1 μmol/L时没有明显的差别，但是其裂解caspase-3的作用较后者更加明显。结论：STI571作为凋亡诱导剂，可通过抑制Bcl-XL的表达从而激活caspase-3，诱导K562细胞凋亡；As₂O₃诱导K562细胞凋亡过程中伴有caspase-3的激活，但其作用并非完全是通过下调Bcl-XL蛋白水平而实现的。     

普罗布考抑制bFGF和H2O2引起的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

目的： 研究普罗布考抑制碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和H2O2促大鼠主动脉平滑肌细胞（RASMCs）增殖的机制。方法: 采用MTT、［³H］-TdR掺入法、流式细胞术和RT-PCR观察普罗布考对bFGF和H₂O₂刺激条件下细胞周期、细胞增殖和凋亡的影响。结果: ①普罗布考抑制bFGF和H₂O₂刺激RASMCs增殖。细胞计数、A值和［³H］-TdR掺入量分别下降了40.0%、39.1%、45.5%和46.9%、45.0%、39.5%（P<0.05，P<0.01）。②普罗布考使RASMCs生长停滞在G₀/G₁期，抑制bFGF刺激的细胞增殖，通过诱导细胞凋亡和抑制细胞生长2种方式抑制H₂O₂刺激的细胞增殖。③bFGF和H₂O₂分别使ERK1mRNA表达量增加近4倍和6倍，MKP-1mRNA表达量下降了62.4%和82.2%。普罗布考抑制ERK1mRNA表达，使H₂O₂诱导的MKP-1表达下降上调，而对bFGF诱导MKP-1表达下降无明显影响。结论: 普罗布考通过降低ERK1mRNA表达抑制细胞周期运转和诱导RASMCs凋亡，从而抑制bFGF和H₂O₂刺激引起的细胞增殖。     

nmhaFGF对过氧化氢诱导的NRK52E细胞凋亡的拮抗作用

目的：研究过氧化氢诱导NRK52E细胞凋亡模型的制作方法，探讨非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子（non-mitogenic human acidic fibroblast growth factor，nmhaFGF）对过氧化氢诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E细胞）凋亡是否具有拮抗作用。方法： 用MTT、Hoechst33342染色以及流式细胞仪检测确定诱导细胞凋亡的过氧化氢的浓度，制作NRK52E细胞凋亡模型，以不同浓度的nmhaFGF作用于凋亡细胞，并以haFGF作为对照，观察nmhaFGF对NRK52E细胞凋亡的影响。结果： 0.4 mmol/L过氧化氢作用NRK52E细胞18 h是诱导NRK52E细胞凋亡的最佳条件。nmhaFGF 0.01、0.03、0.10、0.30、1.00 mg/L剂量范围，随着nmhaFGF浓度升高，细胞凋亡率明显降低，而相同浓度haFGF各剂量组细胞凋亡率呈现不同程度的降低，但haFGF剂量组量效关系不明显。结论： 切除促分裂序列的haFGF可以发挥对NRK52E细胞凋亡的保护作用，该保护作用可能是通过其非促分裂活性实现的。     

ERK1/2－STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用

目的：探讨ERK1/2-STAT3通路在H₂O₂预处理导致的适应性细胞保护中的作用。方法：在PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗氧化应激（300 μmol/L H₂O₂）损伤细胞的模型。应用Hoechst33258核染色法观察细胞调亡的形态学改变；应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率；免疫印记法(Western blotting) 测定p-ERK1/2和p-STAT3的表达水平。结果：100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可明显抑制300 μmol/L H₂O₂作用12 h引起的细胞凋亡，并激活ERK1/2和STAT3；ERK1/2抑制剂UO126和JAK2抑制剂AG-490（10 μmol/L）均可明显地阻断H₂O₂预处理引起的细胞保护作用；UO126（10 μmol/L）亦能明显地抑制H₂O₂预处理对STAT3的上调作用。结论：H₂O₂预处理能激活PC12细胞的ERK1/2-STAT3信号转导旁路，这可能是预处理的细胞保护机制之一。     

JAK-STAT通路调制NF-κB介导H2O2预处理的细胞保护作用

目的：探讨核因子-кB（nuclear factor-кB, NF-кB）在H₂O₂预处理诱导的适应性细胞保护作用中的作用及JAK-STAT通路对NF-кB的调制。方法：在PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗氧化应激（300 μmol/L H₂O₂）损伤细胞的实验模型。应用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫印迹法（Western blotting）测定NF-κB和STAT3的表达水平。结果：用100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/L H₂O₂作用12 h引起的细胞凋亡，并明显地上调NF-κB和STAT3的表达，NF-κB抑制剂MG-132（10 μmol/L）和JAK2抑制剂AG-490（10 μmol/L）均可抑制H₂O₂预处理引起的适应性细胞保护作用及上调NF-κB表达的作用。结论：JAK-STAT通路调节NF-кB介导的H₂O₂预处理的细胞保护作用。     

NPPB和尼弗灭酸对H2O2损伤C6胶质细胞谷氨酸半胱氨酸合成酶及CLIC4表达的影响

目的：观察氯通道阻断剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）-苯甲酸(NPPB)、尼弗灭酸(NFA)对H₂O₂诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响。方法：MTT法检测NPPB、NFA、H₂O₂作用的C6细胞生存率；紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率以及谷胱甘肽GSH水平；RT-PCR检测谷氨酸半胱氨酸合成酶（GCL）亚单位GCLC、GCLM及线粒体氯通道（CLIC4） mRNA表达；Western blotting检测CLIC4的蛋白水平。结果：与对照组相比，H₂O₂组C6细胞存活率和GSH含量明显降低；LDH释放率增加；GCLC、GCLM、CLIC4 mRNA表达降低；CLIC4蛋白水平明显增强。NPPB或NFA与H₂O₂联合作用于C6细胞组，与单独应用H₂O₂组相比，细胞存活率和GSH含量未见明显变化；LDH释放率降低；GCLC、GCLM mRNA表达未见明显差异；CLIC4蛋白表达下降。结论：氯通道阻断剂NPPB或NFA能够在一定程度上减轻氧化应激引起的C6细胞损伤，可能与调节细胞膜功能和下调CLIC4蛋白表达有关。     

Semaphorin 3A过表达对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探讨semaphorin 3A(Sema 3A)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法:构建Sema 3A过表达载体,以脂质体转染法转染HUVECs,过表达效果以qPCR和Western blot法验证;待测细胞以200μmol/L H_2O_2处理4 h;qPCR法检测炎性细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平以相应比色法检测;细胞活力以MTT法检测;流式细胞术检测细胞凋亡,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及Bcl-2水平以Western blot法检测。结果:Sema 3A过表达能显著增加H_2O_2诱导的HUVECs凋亡、炎性细胞因子分泌以及LDH和MDA含量,同时显著抑制SOD活性和细胞活力;Sema 3A对未经H_2O_2处理的HUVECs没有损伤效应,即其对HUVECs的损伤具有H_2O_2依赖性。结论:Sema 3A能显著加重H_2O_2诱导的HUVECs损伤,在氧化应激所致的内皮细胞损伤过程中发挥促进作用。     

西红花酸对H2O2诱发心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的影响

目的：探讨西红花酸对过氧化氢（H₂O₂）诱导的培养心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的作用。 方法： 通过光镜观察细胞形态、碘化丙啶（PI）染色法和流式细胞术相结合检测培养细胞凋亡率、免疫荧光染色法和流式细胞术相结合检测细胞中caspase-3、Bcl-2蛋白。 结果： 在本实验使用浓度范围内，各浓度H₂O₂组细胞形态明显改变、凋亡率明显高于正常对照组，1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂可使培养心肌细胞Bcl-2蛋白表达明显减少，而caspase-3表达明显增多；各剂量西红花酸组细胞形态学改变减少、凋亡率明显低于1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂组，细胞中Bcl-2蛋白减少幅度与caspase-3增加幅度均减小，且较高浓度（5×10^-5 mol·L^-1）西红花酸组比较低浓度（5×10^-7 mol·L^-1）西红花酸组作用也更明显（P<0.05）。 结论： 西红花酸能够减轻H₂O₂对培养心肌细胞的损伤性凋亡作用，可能与稳定细胞内凋亡相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2的功能有关。     

维生素K3对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的凋亡诱导作用

目的： 观察维生素K3对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M的凋亡诱导作用。方法： MTT增殖抑制实验；吖啶橙染色检测细胞凋亡；流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化；NAC抗氧化试验；DCFH-DA荧光分光光度法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平；RT-PCR检测GSH-Px和CAT基因表达的改变。结果： 60 μmol/L剂量以上的VK3均可以有效抑制PC-3M细胞的增殖，并且呈时间剂量依赖性；联合应用不同剂量NAC（5、10、20、40、80 μmol/L）与VK₃（60 μmol/L）共同作用于PC-3M细胞后，结果显示与单独应用VK3相比各浓度的NAC能不同程度增加细胞存活率；吖啶橙染色证明在VK₃（60 μmol/L）作用12 h后，PC-3M细胞出现凋亡的形态学改变；流式细胞计数结果显示VK₃（60 μmol/L）作用12 h后细胞出现凋亡峰，细胞周期被阻滞于G₀/G₁期；DCFH-DA荧光染色，在VK₃作用后1-2 h，细胞内即出现了较强的荧光表达；RT-PCR结果显示，在VK₃作用后细胞内的CAT和GSH-Px两种主要的抗氧化酶类表达降低。结论： VK₃可能主要通过引起PC-3M细胞内氧化应激诱导细胞发生凋亡。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤在H2O2引起的神经胶质瘤U251细胞损伤中的作用

目的: 探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)在H₂O₂诱导的神经胶质瘤U251细胞损伤过程中的作用。方法: 实验分为4组:正常对照组、10 mmol/L 3-MA组、1 mmol/L H₂O₂组、1 mmol/L H₂O₂ +10 mmol/L 3-MA组。MTT法检测各组的U251细胞增殖率;MDC染色检测细胞自噬空泡的变化;Hoechst 33342染色检测细胞核染色质凝聚变化;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果: 与对照组相比,单独应用3-MA对U251细胞无明显影响。H₂O₂作用组U251细胞增殖率明显降低,细胞内出现自噬空泡,细胞核染色质凝聚,细胞凋亡率增加。3-MA与H₂O₂联合作用于U251细胞时,与单独应用H₂O₂组相比,抑制了H₂O₂引起的胞内自噬空泡的积聚,但细胞凋亡率明显增加。结论: 自噬抑制剂3-MA能够一定程度地抑制H₂O₂诱导的U251细胞自噬,但促进了细胞凋亡,表明自噬在H₂O₂诱导的神经胶质瘤U251细胞损伤过程中很可能起到保护性作用。