脑胶质瘤中miR-29b-3p核心靶基因的鉴定与分析

目的:探讨miR-29b-3p在脑胶质瘤中的核心靶基因,并分析核心靶基因的临床意义.方法:采用生物信息学分析方法预测、筛选miR-29b-3p的靶基因;使用STRING、Cytoscape软件分析靶基因的蛋白间互相作用(protein-protein interaction,PPI);用GEPIA、CGGA分析其在胶质...     

miR-34b-3p和miR-491-3p在早期诊断儿童脓毒血症中的价值研究

目的：检测并分析微小RNA(miRNA)-34b-3p和miR-491-3p在脓毒血症患儿外周血中的表达及其诊断儿童脓毒血症中的临床价值。方法：选取咸宁市第一人民医院2018年2月～2021年10月疑似脓毒血症患儿130例,根据最终诊断分为脓毒血症组82例和非脓毒血症组48例。检测所有研究对象入院当天的外周血中miR-34b-3p和miR-491-3p的相对表达水平,同时运用受试者工作特征(ROC)曲线计算miR-34b-3p和miR-491-3p在儿童脓毒血症的诊断价值。结果：脓毒血症组外周血中miR-34b-3p和miR-491-3p含量均显著高于非脓毒血症组,差异有统计学意义(P<0.05)。且miR-34b-3p和miR-491-3p在脓毒血症组患儿外周血中的相对表达含量呈显著正相关(r=0.632,P=0.027)。miR-34b-3p、miR-491-3p及联合区分脓毒血症与非脓毒血症的ROC下面积和最佳横断值分别为0.678、3.121(95%CI:0.582～0.774,P<0.05)、0.654、2.050(95%CI:0.318～0.853,P<0...     

膀胱癌组织中miR-29c-3p的表达与临床病理特征的关系及对治疗预后的影响

目的 探讨膀胱癌组织中miR-29c-3p的表达与临床病理特征的关系及对治疗预后的影响。方法 2013年12月—2016年12月该院接受手术治疗的原发性膀胱癌患者90例,同期膀胱囊肿患者术后正常膀胱组织50例进行对照,对比膀胱癌组织、正常膀胱组织中miR-29c-3p表达水平的差异,采用受试者工作特征（ROC）曲线分析组织中miR-29c-3p对膀胱癌的辅助诊断价值。分析膀胱癌组织中miR-29c-3p表达水平与临床病理特征的关系,以及膀胱癌患者术后随访期复发转移的危险因素。采用Kaplan-Meier生存曲线分析膀胱癌组织中不同miR-29c-3p表达量对随访期无病生存情况的影响。结果 膀胱癌组织中miR-29c-3p的表达水平低于正常膀胱组织（P<0.05）。ROC曲线显示,组织miR-29c-3p表达水平辅助诊断膀胱癌的最佳截断值为0.535,AUC为0.755(95%CI 0.675～0.835),对应的灵敏度、特异度分别为64.00%、72.22%。不同性别、年龄、肿瘤数目的膀胱癌患者组织中miR-29c-3p表达水平的差异无统计学意义（P>0.05）;不同肿瘤最...     

miR-29b-3p靶向FoxO3基因改善非酒精性脂肪肝预后的初步研究

目的：　探讨miR-29b-3p靶向FoxO3对非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的作用。方法：　人肝细胞HL-7702（L02）通过miR-29b-3p抑制剂或NC抑制剂或pcDNA FoxO3转染,经棕榈酸（palmitic acid,PA）处理后,采用油红O染色测定脂质积累;全自动生化分析仪检测甘油三酯（triglycerides,TG）、胆固醇（total cholesterol,TC）含量;ELISA检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;采用RT-qPCR检测叉头转录因子O亚型3（forkhead box class O3,FoxO3）、miR-29b-3p mRNA表达;Western blot检测FoxO3蛋白表达;双荧光素酶实验验证miR-29b-3p靶向FoxO3。结果：　与对照组比较,PA组TG（2.05±0.22）mmol/L、TC（7.80±1.23）mmol/L、TNF-α（149.67±8.96）%、IL-6（157.00±18.33）%、IL-8（177.33±24.58）%、miR-29b-3p（161.00±13.0）%、MDA（0.456±0.028）nmol/mL及油红O染成红色的脂滴数量明显升高,SOD（12.91±0.53）ng/mL、GSH-Px（0.515±0.038）ng/mL含量及FoxO3（65.93±4.56）%表达明显降低;miR-29b-3p靶向FoxO3;与PA组比较,PA+miR-29b-3p inhibitor组、PA+miR-29b-3p inhibitor + pcDNA-FoxO3组可明显降低TG、TC、TNF-α、IL-6、IL-8、miR-29b-3p、MDA含量及油红O染成红色的脂滴数量,明显升高SOD、GSH-Px含量。结论：　miR-29b-3p靶向FoxO3可减轻PA诱导的L02细胞脂质积累和炎症。     

miR-133b-3p对大鼠脑缺血/再灌注损伤的影响及其作用机制

目的:探讨miR-133b-3p对脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的影响.方法:将36只雄性SD大鼠随机分为6组,每组6只,分别为假手术组、I/R组、I/R+miR-133b-3p激动剂(agomir)组、I/R+miR-133b-3p抑制剂(antagomir)组、I/R+agomir阴性对照(NC)组、I/R+an...     

MicroRNA-29b-3p重组腺相关病毒制备及在大鼠前额叶皮质中的表达研究

目的获得表达microRNA-29b-3p 的重组腺相关病毒（rAAV-miR-29b-3p）,并检测其在大鼠前额叶皮质中的感染效果和表达水平。方法将前体miR-29b-3p 基因片段置入AAV 表达质粒中构建重组AAV质粒,将重组AAV 质粒、包装质粒和辅助质粒通过脂质体LipaFiterTM共转染HEK293 细胞包装rAAVmiR-29b-3p。从转染的HEK293 细胞中收集并通过树脂柱纯化rAAV-miR-29b-3p,通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定rAAV-miR-29b-3p滴度。通过脑立体定位仪注射rAAV-miR-29b-3p 至大鼠前额叶皮质,免疫荧光显微镜观察rAAV-miR-29b-3p的感染效果,qRT-PCR检测rAAV-miR-29b-3p表达水平。结果成功包装的rAAV-miR-29b-3p 经纯化后获得了高纯度的rAAV-miR-29b-3p,qRT-PCR检测rAAV-miR-29b-3p 的病毒滴度达到1.0×1012 vg/ml,经感染21 d后,脑组织前额叶皮质荧光表达明显,miR-29b-3p 表达水平明显提高。结论构建的rAAV-miR-29b-3p 可使大鼠前脑皮层miR-29b-3p 高表达,为进一步研究miR-29b-3p的生物学功能提供了有效工具。     

lncRNA MALAT1、miR-146b-5p膀胱癌组织的表达变化

目的 分析lncRNA MALAT1、miR-146b-5p膀胱癌(BC)组织的表达变化。方法 选取2017年1月6日至2020年1月6日本院收治的90例膀胱癌病患为研究样本,病患接受手术治疗疾病,留取膀胱癌组织、癌旁组织。应用荧光实时定量PCR法对于以上组织内的lncRNA MALAT1、miR-146b-5p进行测定,分析以上物质在BC组织内的表达变化。结果 癌旁组织和BC内miR-146b-5p、lncRNA MALATI相对表达量对比具有统计学意义(P<0.05);BC淋巴结转移和miR-146b-5p、lncRNA MALATI表达存在相关性;BC组织内的miR-146b-5p、lncRNA MALAT1表达情况呈负相关(P<0.05)。结论 膀胱癌组织内的miR-146b-5p表达降低,lncRNA MALAT1表达上升。以上两者负相关。这种情况的出现和病患淋巴结转移有关联性,日后其可能成为诊治膀胱癌疾病的重要标记物。     

miR-181b-5p负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-181b-5p通过下调CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-181b-5p在膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637)和人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中的表达水平。在T24和UM-UC-3细胞中转染miR-181b-5p模拟物 (miR-181b-5p组)和miR-NC(对照组),CCK-8实验和克隆形成实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞迁移和侵袭的影响。采用生物信息学预测miR-181b-5p潜在下游靶基因CYLD,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p是否与CYLD的3′-UTR结合,qRT-PCR检测过表达miR-181b-5p对CYLD mRNA的影响,Western blot法检测过表达miR-181b-5p对CYLD蛋白的影响。在T24和UM-UC-3细胞中沉默CYLD的表达,采用CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测沉默CYLD对T24和UM-UC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与SV-HUC-1比较,膀胱癌细胞系中miR-181b-5p的表达水平升高(P<0.05)。与对照比较,过表达miR-181b-5p和沉默CYLD均促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,过表达miR-181b-5p 明显降低野生型CYLD 的荧光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot法结果显示过表达miR-181b-5p显著下调CYLD mRNA和蛋白的水平(P<0.05)。结论 miR-181b-5p通过负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-130b-3p在肾癌中表达及PI3K/AKT途径参与的机制研究

目的 探究miR-130b-3p调节PI3K/AKT途径对肾癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 临床收集肾癌患者78例,检测肿瘤组织和癌旁组织中miR-130b-3p和PTEN蛋白水平,分析miR-130b-3p与肾癌病理特征的关系。通过相关性分析探究肾癌组织中miR-130b-3p与PTEN蛋白的相关性。786-O细胞分为NC、miR-130b-3p、PTEN和miR-130b-3p+PTEN组,分别转染NC、miR-130b-3p mimic和/或pcDNA 3.1 PTEN来过表达miR-130b-3p和/或PTEN。分别检测各组细胞活力、凋亡率、侵袭能力以及PI3K/AKT通路水平。结果 肾癌组织中miR-130b-3p水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。miR-130b-3p表达水平与性别、年龄、肿瘤直径无关,高水平的miR-130b-3p与高临床分期和淋巴转移有关(P<0.05)。miR-130b-3p与PTEN靶向结合(P<0.05)。与NC组比较,miR-130b-3p组的PTEN蛋白和凋亡率显著降低,增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著...     

miR-125b-1增强乳腺癌SKBR-3细胞对紫杉醇的药物敏感性

目的探讨miR-125b-1增强紫杉醇对乳腺癌SKBR-3细胞化疗敏感性的影响,及其对靶基因Her2蛋白表达的影响。方法合成miR-125b-1并通过LipofectamineTM2000转染SKBR-3细胞,将实验分为空白对照组(脂质体转染SKBR-3细胞株)、阴性对照组(siRNA转染SKBR-3细胞株)、miR-125b-1组(miR-125-1转染SKBR-3细胞株)3组。分别用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Her2 mRNA和蛋白质表达水平的变化;流式细胞仪检测细胞周期;MTT法检测miR-125b-1对紫杉醇作用于SKBR-3细胞化疗敏感性的影响。结果 miR-125b-1转染后的SKBR-3细胞中Her2 mRNA和蛋白质水平显著下降;流式细胞仪检测结果显示,转染miRNA-125b-1的SKBR-3细胞G2M期细胞比例显著高于其他组(P=0.000),而空白对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P=0.094)。三组之间比较,G0-G1期、S期比例差异无统计学意义;用miR-125b-1处理组细胞的IC50与未处理组相比下降2.69倍,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-125b-1可增强乳腺癌SKBR-3细胞对紫杉醇的化疗敏感性,下调Her2可能是其作用机制之一。     

靶向TUG1的mir-29c-3p通过调节CAPN7的表达影响膀胱癌细 胞的迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA TUG1影响膀胱癌细胞迁移和侵袭的机制。方法 逆转录实时定量PCR检测膀胱癌组织和细胞中TUG1和mir-29c-3p的表达水平。在膀胱癌细胞系T24细胞中利用RNA干扰技术下调TUG1的表达后Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力的变化,并检测CAPN7的表达水平。在膀胱癌细胞系T24细胞中利用mir-29c-3p类似物过表达mir-29c-3p后在转录及转录后水平检测CAPN7的表达变化。功能回复试验验证CAPN7及TUG1对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响。结果 TUG1和mir-29c-3p在膀胱癌细胞和组织中分别表达升高（P=0.01）及减低（P<0.01）,同时它们的表达呈现负相关关系（P=0.0109,r2=0.4295）。TUG1表达下调后可以抑制膀胱癌细胞T24的迁移和侵袭能力（P<0.01）。mir-29c-3p过表达后可以下调CAPN7的表达水平,CAPN7的表达水平与TUG1在膀胱癌中呈正相关关系（P=0.0139,r2=0.4081）,荧光素酶报告试验验证了 mir-29c-3p可同时靶向调节TUG1及CAPN7,功能回复试验验证了TUG1可以正向调节CAPN7的表达及其对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响（P<0.01）。结论 靶向TUG1的mir-29c-3p可通过调节CAPN7的表达影响膀胱癌细胞的迁移和侵袭。     

siRNA沉默膀胱癌T24细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的研究

目的 研究siRNA对膀胱癌细胞T24 DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的沉默作用.方法 将筛选出的siRNA转染入膀胱癌T24细胞分为空白组、脂质体组、阴性对照组和siRNA组,分别运用RT-PCR、Western blot检测转染后不同时段DNMT1 mRNA水平、蛋白水平变化.结果 筛选出的siRNA转染膀胱癌T24细胞DNMT1 24 h开始出现mRNA减少,24 h、48 h、72 h分别降至(66.05±4.87)％、(39.36±4.53)％和(40.86±4.81)％(P＜0.05).转染后24 h、48 h、72 h蛋白水平分别降至(90.21±3.68)％、(71.45±3.44)％和(67.74±3.38)％(P＜0.05).结论 siRNA能有效地沉默膀胱癌细胞T24 DNMT1的表达.     

MiR-24-3p Attenuates Doxorubicin-induced Cardiotoxicity via the Nrf2 Pathway in Mice

Objective:The nuclear factor erythroid 2(NFE2)-related factor 2(Nrf2)is associated with doxorubicin(DOX)-induced cardiac injury.It has been reported that microR...     

P^53蛋白表达与膀胱癌预后关系的探讨

我们应用免疫组织化学方法，对３４例石蜡包埋的膀胱癌组织标本Ｐ＾５３蛋白表达进行了检测。结果发现，３４例膀胱癌标本中有１４例Ｐ＾５３蛋白表达阳性，且Ｐ＾５３蛋白的表达与膀胱癌病理分级和临床分期密切相关。１４例Ｐ＾５３阳性病例膀胱癌的复发率为８５．７％，而２０例Ｐ＾５３阴性者膀胱癌的复发率为４５％。Ｐ＾５３阳性病例几乎全有淋巴结转移，明显高于Ｐ＾５３阴性者。提示Ｐ＾５３蛋白阳性病例预后较差。     

miRNA-146b-3p在早期非小细胞肺癌中的诊断价值

目的探讨miR-146b-3p在早期非小细胞肺癌、良性肺结节与健康人群外周循环血中的表达差异及诊断价值。方法通过RT-PCR测定118例早期非小细胞肺癌、42例良性肺结节与48例健康人群外周循环血中的6种miRNAs（miR-15b-5p、miR-17-5p、miR-19a-3p、miR-20a-5p、miR-92a-3p、miR-146b-3p）的相对表达量,并进行统计学分析评价其在早期的诊断价值。结果相较于良性肺结节患者与健康人群,miR-146b-3p在非小细胞肺癌患者外周循环血中呈显著过表达。用ROC曲线来评价miR-146b-3p的诊断价值,在肺癌与良性结节组中： miR-146b-3p的曲线下面积为0.77,当取临界值0.01时,灵敏度为75%,特异性为71%;在肺癌与健康人组中： miR-146b-3p的曲线下面积为0.93,当取临界值0.72时,灵敏度为89%,特异性为84%。Logistic回归模型表明： 在肺癌与良性结节组中,年龄与miR-146b-3p为独立危险因素,其ROC曲线下面积为0.81,当取临界值0.85时,灵敏度为65%,特异性为89%;在肺癌与良性结节组中,miR-19a-3p与miR-146b-3p为独立危险因素,其ROC曲线下面积为0.98,当取临界值0.90时,灵敏度为94%,特异性为95%。结论miR-146b-3p对早期非小细胞肺癌、良性肺结节与健康人群有一定鉴别意义,可作为临床一种新的血液标志物。     

linc00152通过调控DNMT3A和DNMT3B促进人宫颈癌细胞生长与侵袭

探讨linc00152在宫颈癌中的生物学功能及其调控机制。运用qRT-PCR检测人宫颈癌细胞与正常宫颈上皮细胞中linc00152的表达;转染sh-linc00152、si-DNMT3A和si-DNMT3B于HeLa细胞以敲低细胞中linc00152、DNMT3A和DNMT3B的表达水平,采用qRT-PCR与Western blot法检测转染效率;采用Western blot法检测sh-linc00152对甲基化转移酶(DNMT)3A和3B蛋白表达水平的影响;采用MTT、Transwell侵袭实验检测sh-linc00152、si-DNMT3A以及si-DNMT3B对人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭的影响。结果显示,linc00152在宫颈癌细胞中的表达水平明显高于正常宫颈上皮细胞(P<0.01);在HeLa细胞中,sh-linc00152组DNMT3A和DNMT3B蛋白表达水平明显低于sh-control组;sh-linc00152组、si-DNMT3A以及si-DNMT3B组HeLa细胞的存活率及穿过基质胶的HeLa细胞数量均明显低于各自对照组。linc00152可能通过调控DNMT3A和DNMT3B信号通路促进人宫颈癌细胞生长与侵袭。