PCR—谱酶法检测小儿肝炎综合征人疱疹解毒DNA的研究

为探讨婴儿肝炎综合征（ＮＨＳ）与疱疹病毒（ＨＳＶ）感染的关系。在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对引物，能对ＨＳＶ－Ｉ、ＨＳＶ－Ⅱ、ＥＢＶ和ＣＭＶ四种疱疹病毒ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切酶ＢａｍＨⅠ或ＳｍａⅠ酶切分析扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述四种病毒的ＰＣＲ－酶谱法。灵敏度可测到１ｆｇＤＮＡ，且该引物仅对四种疱疹病毒扩增。用建立的ＰＣＲ－酶谱法检测３０例     

PCR法在疱疹病毒性脑炎诊断及疗效观察中的应用

选择疱疹病毒科病毒ＤＮＡ多聚酶基因高保守区中的一对引物，一次ＰＣＲ可同时扩增疱疹病毒科的４种病毒［单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ１）、单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ２）、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）、及巨细胞病毒（ＣＭＶ）］相应的ＤＮＡ片段。根据扩增产物分子的大小及对扩增产物酶切分析，可将标本中的４种病毒准确分型。用该法检测临床疑为病毒脑炎患者和其他中枢神经系统疾病患者（对照组）的脑脊液（ＣＳＦ），脑炎组ＣＳＦ阳性率３０％（９／３０），对照组ＣＳＦ阳性率６．７％（２／３０）；其中８例为ＨＳＶ１阳性，２例为ＣＭＶ阳性，１例为ＨＳＶ２阳性。２例病毒脑炎患者经用无环鸟苷抗病毒治疗７～１０ｄ后其ＣＳＦ中的ＨＳＶ１ＤＮＡ由阳转阴。由此说明ＰＣＲ法不仅可早期诊断疱疹病毒性脑炎，还可显示抗病毒药物的疗效。     

通用引物检测宫颈脱落细胞中病毒的临床应用

目的：探讨通用引物检测多种病毒的ＰＣＲ方法。方法：应用聚合酶链反应－酶谱法（ＰＣＲ－ＥＣ０和疱疹病毒通用引物,检测宫颈脱落细胞中单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ⅰ）、单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－Ⅱ）、爱泼期坦－巴尔病毒（ＥＢＶ０和人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）。结果：健康人（２０例）和宫颈糜烂患者（３４例）。ＨＣＭＶ阳性检出率分别为１０．０％和４１．２％,两者差异显著;ＨＳＶ－１分别为５．０％和１４．７％;ＨＳ     

用PCR技术研究疱疹病毒与新生儿黄疸的相关性

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３９例新生儿黄疸患儿。结果１３例外周血淋巴细胞检出疱疹病毒ＤＮＡ，总检出率３３３％，其中巨细胞病毒（ＣＭＶ）１１例，Ⅱ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅡ）２例，检出率分别为２８２％（１１／３９）和５１％（２／３９），未检出Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅠ）和ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ。提示新生儿黄疸与疱疹病毒感染有关     

病毒与人类基因组同源性实探

探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用ＥＢ病毒（ＥＢＶ），肠道病毒（ＥＶｓ）、单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１），丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性引的，以６份健康成人外周血ＤＮＡ为模板，分别进行酶链式反应（ＰＣＲ）。初步结果表明，有５份ＤＮＡ样品可通过ＥＢＶ、ＨＣＶ特异性引物扩增，ＥＢＶ引物扩增后的片段大小在１５４－２３４ｂｐ之间；ＨＣＶ引物扩增的片段大小约２００ｂｐ和１２０ｂｐ。提示病毒某些基因可能存在     

用聚合酶链反应技术检测泌尿系疾病患者尿中疱疹病毒DNA

为探讨泌尿系疾病与疱疹病毒感染的关系，我们用ＰＣＲ及限制性内切酶酶切技术检测了尿中疱疹病毒的ＤＮＡ。９９例泌尿系疾病患者中，５８例检出ＣＭＶ；对照组５２例中，８例检出ＣＭＶ，两组检出率间有显著性差异，但不同病种ＣＭＶ检出率之间差异无显著性。患者组和对照组尿中均未检出ＥＢ病毒（ＥＢＶ），Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅠ）和Ⅱ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅡ）。３５例患者同时作了血清抗“Ｏ”检测，１６例急性肾炎，８例慢性肾炎和９例肾病综合征中，抗“Ｏ”阳性率分别为５００％、１２５０％和１１１１％，相应的ＣＭＶ阳性率则分别为６２５０％、６２５０％和５５５６％。     

病毒与人类基因组同源性初探

探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用ＥＢ病毒（ＥＢＶ），肠道病毒（ＥＶｓ）、单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１），丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性引物，以６份健康成人外周血ＤＮＡ为模板，分别进行聚合酶链式反应（ＰＣＲ）。初步结果表明：有５份ＤＮＡ样品可通过ＥＢＶ、ＨＣＶ特异性引物扩增。ＥＢＶ引物扩增后的片段大小在１５４～２３４ｂｐ之间；ＨＣＶ引物扩增后的片段大小约２００ｂｐ和１２０ｂｐ。提示病毒某些基因可能存在人类基因组中或两者具有很高的同源性。     

检测人巨细胞病毒的免疫—PCR方法的建立

目的：依据免疫－ＰＣＲ基本原理，建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）活动性感染的免疫＿ＰＣＲ方法。方法：我们建立的免疫－ＰＣＲ方法与酶联免疫ＥＬＩＳＡ不同之处是，用ＰＣＲ扩增生物素化线性ＰＢＶ２２０ＤＮＡ代替ＥＬＩＳＡ的酶催化底物，经琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色观察分析扩增产物异条带，判断结果。结果：用本法检测ＨＣＭＶ的敏感性高于ＥＬＩＳＡ法１０＾３－１０＾５倍，可检测到５个感染ＨＣＭＶ细胞；而检测ＨＳ     

PCR检测白血病,再生障碍性贫血患者3种疱疹病毒

目的：观察白血病、再生障碍性贫血患者治疗前后巨细胞病毒（ＣＭＶ）、单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）、爱博斯坦巴尔病毒（ＥＢＶ）的感染状况。方法：用ＰＣＲ法检测急性白血病患者骨髓单个核细胞内ＣＭＶ－ＤＮＡ、ＨＳＶ－ＤＮＡ、ＥＢＶ－ＤＮＡ，以及再生障碍性贫血患者血浆中ＣＭＶ－ＤＮＡ感染情况。结果：急性白血病患者骨髓单个核细胞内ＣＭＶ－ＤＮＡ的检出率高于血浆的检出率；初治白血病患者骨髓单个核细胞内及初治再生障碍性     

159例乙型肝炎患者活动性巨细胞病毒感染的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１５９例乙型肝炎患者血清中巨细胞病毒脱氧核糖核酸（ＣＭＶ－ＤＮＡ），结合酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清中ＣＭＶ－ＩｇＭ，以ＣＭＶ－ＤＮＡ和（或）ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性为活性为ＣＭＶ感染诊断标准。结果显示：ＣＭＶ－ＤＮＡ和ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率分别为３０．１９％，１４．４７％，乙肝患者活动性ＣＭＶ感染率为３３．７０％，明显高于健康对照５．４３％，其中急性肝炎，慢性轻     

突发性耳聋患者血清中人类巨细胞病毒和单纯疱疹病毒的检测

采用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对３０例突发性耳聋（突聋）患者血清中人类巨细胞病毒 （ＨＣＭＶ）和单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）进行了检测。结果显示：７例（２３％）ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性，４例 ＨＣＭＶ抗体（ＩｇＡ或 ＩｇＭ）升高或 ＩｇＭ升高，２例 ＨＣＭＶ和 ＨＳＶ ＤＮＡ均阳性，相应抗体水平高于 正常，治疗后１月复查部分病例转阴。提示：用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对突聋患者病毒感染情况的检 测，对于探讨突聋的发病机制和治疗有重要意义。     

突发性耳聋患者血清中人类巨细胞病毒和单纯疱疹病毒的检测

采用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对３０例突发性耳聋（突聋）患者血清中人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）和单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）进行了检测，结果显示：７例（２３％）ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，４例ＨＣＭＶ抗体（ＩｇＡ或ＩｇＭ）升高或ＩｇＭ升高，２例ＨＣＭＶ和ＨＳＶＤＮＡ均阳性，相应抗体水平高于正常，治疗后１月复查部分病例转阴，提示：用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对突聋患者病毒感染情况的检测，对于探讨突聋的发病机制和治疗有重要意     

PCR检测白血病、再生障碍性贫血患者3种疱疹病毒

目的：观察白血病、再生障碍性贫血患者治疗前后巨细胞病毒（ＣＭＶ）、单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）、爱博斯坦巴尔病毒（ＥＢＶ）的感染状况。方法：用ＰＣＲ法检测急性白血病患者骨髓单个核细胞内ＣＭＶＤＮＡ、ＨＳＶＤＮＡ、ＥＢＶＤＮＡ，以及再生障碍性贫血患者血浆中ＣＭＶＤＮＡ感染情况。结果：急性白血病患者骨髓单个核细胞内ＣＭＶＤＮＡ的检出率高于血浆的检出率；初治白血病患者骨髓单个核细胞内及初治再生障碍性贫血患者的血浆ＣＭＶＤＮＡ阳性率分别为７３％和５４％，明显高于正常人（Ｐ＜０．０５）；经治疗半年后未能缓解的急性白血病患者骨髓单个核细胞内３种疱疹病毒ＤＮＡ检出率高于完全缓解和部分缓解的急性白血病患者；病情无改善或恶化的再生障碍性贫血患者血浆ＣＭＶＤＮＡ检出率亦高于病情有好转的患者。结论：初治白血病患者和初治再生障碍性贫血患者血浆ＣＭＶＤＮＡ阳性率高于正常人，治疗后３种疱疹病毒ＤＮＡ的检出率在未缓解的白血病患者中较高，ＣＭＶＤＮＡ检出率在治疗效果差的再生障碍性贫血患者中较高。     

原发性肝癌与肝炎病毒感染的关系

目的探讨原发性肝癌（ＰＨＣ）与肝炎病毒感染的关系。②方法采用ＥＬＩＳＡ法和ＰＣＲ法对１２６例ＰＨＣ病人,６０例慢性肝炎（ＣＨ）病人和６０例健康人（正常对照组）ＨＡＶ,ＨＢＶ,ＨＣＶ和ＨＥＶ等４种病毒的血清标志物进行了检测。③结果ＰＨＣ病人中ＨＢＶ感染率为９２．８５％,ＨＣＶ感染率为２０．６３％,显著高于正常对照组的１１．６７％和１．６７％（χ２＝１１．７８,１２０．５６,Ｐ＜０．０１）．５１．２８％的ＨＢＶ感染者表现为抗ＨＢｅ阳性和ＨＢｅＡｇ阴性。所有ＨＣＶ感染者均伴有ＨＢＶ感染。④结论ＰＨＣ发生除主要与ＨＢＶ感染有关外,亦与ＨＣＶ感染有关,而与ＨＡＶ和ＨＥＶ感染关系不大。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关，而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

用聚合酶链反应检测乙肝患者血清中的HBV－DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了１１４例传染科门诊病人血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与ＨＢＶ有关的血清学标志（ＨＢＶＭ）进行了比较。结果表明：在９２和ＪＨＢｓＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者５０例，占５４．３４％；在２８例ＨＢｅＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者２６例，占９２．８６％；在２０例ＨＢＶＭ均为阴性的病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者有６例，占３０．００％。证明ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ较用ＥＬＩＳＡ法检测抗原一抗体更加灵敏、可靠。     

乙型肝炎病毒基因多重PCR的临床观测

为探讨多重多聚酶链反应（ＰＣＲ）在慢性乙型肝炎检测中的应用价值，选用ＨＢＶＤＮＡ的Ｓ区、Ｃ区及Ｘ区的３对引物Ｓ１／Ｓ２，Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２，同时扩增ＤＮＡ。结果发现，３个基因区的表达情况不同。７７例慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率分别是Ｓ区６１０％，Ｃ区４５５％，Ｘ区３９０％；且三区联合检出率为７５３％，与单独Ｃ区检出有明显差异（Ｐ＜００５）。提示多重ＰＣＲ能对ＨＢＶＤＮＡ同一模板的各基因区同时扩增，从而可以得到Ｃ区以外的其它保守基因区特异性的扩增片段，提高了对乙型肝炎病毒患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗－ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关。而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

妊娠期单纯疱疹病毒感染及母婴传播的研究

应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和多聚酶链反应（ＰＣＲ）研究３８０例孕妇单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）感染及母婴传播。结果表明：孕妇ＨＳＶ感染相当普遍,ＨＳＶ１和ＨＳＶ２感染率分别为８１．８５％、４８．０６％,其中ＨＳＶ２感染与有异常孕产史者关系更加密切。孕妇宫颈分泌物中ＨＳＶ２ＤＮＡ检出率为２．４１％。ＨＳＶ２宫内感染率为４．１７％。孕早期绒毛组织中ＨＳＶ２垂直传播率为１０％。１例无脑儿的胎脑、胎肺及其胎盘组织中均可检出ＨＳＶ２ＤＮＡ。     

巢式PCR检测先天性心脏病心脏石蜡标本中B19病毒的感染

目的：探讨微小病毒Ｂ１９与先天性心脏病（ＣＨＤ）的相关性及可能致畸机理。方法：采用病例对照研究，病例组为２９例ＣＨＤ尸解心脏组织，对照组为３０例同期非先天性畸形尸解心脏组织，应用巢式ＰＣＲ扩增Ｂ１９－ＤＮＡ，单纯疱疹病毒（ＨＳＶ），兔弓形虫（ＴＯＸ），巨细胞病毒（ＣＭＶ），结果：２９例ＣＨＤＢ１９－ＤＮＡ５例阳性，全瓿对照组为均阴性（Ｐ＝０．０２３７），ＨＳＶ，ＴＯＸ两组中均阴性，ＣＭＶ在两组中均