阴道毛滴虫在两种培养基中的生长与形态观察

目的 通过对改良肝浸汤培养液及RPMI1640培养基内阴道毛滴虫生长情况的观察,选择适合教学和科研的培养基。 方法 用临床分离的阴道毛滴虫标本,分别接种至改良肝浸液及RPMI1640两种培养基内进行培养,pH值为5.6~5.8,通过计数了解生长情况并观察阴道毛滴虫的形态。 结果 肝浸汤培养液中培养48 h,阴道毛滴虫达到生长高峰,虫体呈现出多分裂相,虫体变大、呈圆形,内含4~12个细胞核,细胞膜外缘可见数丛鞭毛。RPMI1640培养基中阴道毛滴虫72 h达到生长高峰,虫体密度约为肝浸液高峰期的2／3,未见多分裂现象,虫体与生理盐水涂片中阴道毛滴虫形态、大小相近。 结论 改良的肝浸液培养基适于阴道毛滴虫的药物试验及其他实验项目的研究,RPMI1640培养基更适用于教学、标本的制作及实验室保种工作。     

复方红霉素滴耳液的制备及应用

药品制备:先将3g羧甲基纤维素钠及2g氯霉素粉分别加适量蒸馏水加水溶解,置冷后将5g红霉素粉溶于氯霉素溶液中溶解过滤,另取3g氢化可的松粉(80～120目)细粉置研钵中用50g甘油研匀,将两液缓缓加入到羧甲基纤维素钠溶液中,同时搅拌均匀,再将加热后的10％尼泊金醇溶液5ml缓缓加入上液搅匀,最后加4g吐温—80及蒸馏水至1000ml,用小型搅拌机以每分钟50～100转速搅拌5～10分钟,静置、分装即可。     

人类单核细胞衍生的巨噬细胞对恶性疟原虫的杀伤作用

本文目的是了解人类单核细胞衍生的巨噬细胞(Mφ)对体外培养的恶性疟原虫的杀伤力。作者按Cottrell的方法制备单核细胞。取健康未经免疫的人静脉血50～100ml,去纤维蛋白后,将血置葡聚糖500,沉淀红细胞(RBC),然后置Nycodenz单核细胞分离培养基中。在界面上有活力的细胞达100％,并有95％的细胞具单核细胞/Mφ的形态,非特异性酯酶呈阳性。将细胞冲洗2次,悬浮于寄生虫完全培养基(PCM)中,其成分包括RPMI-1640,辅以0.25％V/VNaHCO_3,25mmol/L Hepes,50μg/ml庆大霉素,4mmol/L谷酰胺以及10％灭活A型人血清,pH7.3。单核细胞(5×10~5/ml)于疏水的Teflon袋或培养血中,37℃,5％CO_2条件下培养。3～6天后     

犬恶丝虫微丝蚴的体外培养

本文报告了在体外应用各种合成培养基保存和培养大恶丝虫微丝蚴的结果。所用的不同培养基有:(1)Tobies培养基(双相性的);(2)含胎牛血清的洛克氏液以及(3)含胎牛血清的RPMI1640组织培养基。这些培养基的pH调整到7.2～7.4,每ml培养基加200青霉素和100μg链霉素。     

3种不同培养基体外培养阴道毛滴虫效果的比较

目的　探索阴道毛滴虫体外培养的适宜条件。　方法　用临床分离的阴道毛滴虫 ,按 9.0× 10 4 / ml的接种量转种至 3种不同培养基进行培养 ,p H值为 5 .6。　结果　经 3种培养基培养 ,96 h后阴道毛滴虫数量存在差异 ,其中以半胱氨酸 -肝 -胨 -麦芽糖培养基 培养基 )虫数较多 ,肝 -胨 -麦芽糖培养基 培养基 )次之 ,大豆 -肝 -胨 -麦芽糖培养基 培养基 )较少。培养基 与培养基 及培养基 相比较 ,滴虫存活率差异具有显著性意义 P<0 .0 1,P<0 .0 5 ) ,滴虫生长密度差异也具有显著性意义 P<0 .0 1,P<0 .0 5 ) ,生长密度高峰持续时间分别为 192 h、14 4 h和 96h,最长存活时间分别为 2 88h、2 16 h和 192 h。　结论　半胱氨酸 -肝 -胨 -麦芽糖培养基较适于阴道毛滴虫体外增殖     

培养大量杜氏利什曼原虫的单相培养基

培养基的配制分甲、乙两部份: 甲:无菌脱纤维全兔血加等量无菌玻璃重蒸馏水,置25℃内10分钟,使溶解。在溶解产物中加等量含有188毫克分子氯化钠和45毫克分子枸橼酸钠的用玻璃重蒸馏水配成的无菌溶液。混悬液在4℃温度下,用25,000g离心60分钟。而后,去掉上清液,保存在4℃温度中。乙:用玻璃重蒸馏水配制含有5%牛肉粉(Bacto-beef)和2%肝粉(Oxoid liver)的浸液,加热至50℃1小时和80℃5分钟。浸液冷却至25℃时,用抽吸法通过两层No     

吡喹酮影响体外培养的斯氏狸殖吸虫活力及表皮超微结构的观察

<正> 为探讨吡喹酮杀灭斯氏狸殖吸虫的作用及其机制,我们于1985～1986年进行了体外实验观察,现将结果摘要报告如下。 从陕西宁强斯氏肺吸虫病流行区采集溪蟹,分离囊蚴。用腹腔注射法感染家犬,第25天和100天解剖。检出虫体经无菌Earle’s液(pH7.4)洗涤后移人RPMI1640培养液中常规培养6小时,再分别与含吡喹酮1μg/ml、10μg/ml和100μg/ml的培养基作用,并设正常对照。在体视显微镜下观察虫体活动,部分虫体     

沙门氏菌肠毒素的提纯和部分特性

<正> 现将φπyep介绍的沙门氏菌肠毒素的提纯方法及其部分特性简述如下。 将鼠伤寒沙门氏菌(No415)接种在改良的微量盐培养基上,37℃通气培养27小时,在6～8℃下将培养液以4000转/分离心1小时,上清波通过Milipore滤膜(0.45μm孔径)过滤,滤液作无菌试验。另一方法是将菌细胞用蒸馏水制成悬液,用MSE超声波击碎。按100ml滤液(或是液)加入56g硫酸铵,混合后在4℃放置16～20小时,再以4000转/分离心。用蒸馏水     

日本血吸虫尾蚴细胞的传代培养及抗原性检测

目的 探索体外培养日本血吸虫尾蚴细胞的增殖与传代技术。 方法 无菌收集日本血吸虫活尾蚴5 000～10 000条,置于含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中,用组织刀快速割切尾蚴使成组织碎裂物,加入250 U蟹胶原酶在26℃下孵育30 min,然后离心去酶,加入含有青霉素(100 U/ml)、链霉素(O.1 mg/ml)、两性霉素B(0.25μg/ml)和适量促细胞生长物的RPMI 1640改良培养基中作原代培养,当贴壁细胞增殖长满瓶底时,以1:2的接种率进行传代培养;获取第5代培养细胞作ELISA检测血吸虫病患者血清中抗体。 结果 在原代培养的第3天可见尾蚴组织的周围有呈单个存在或索状排列的发亮细胞,第10天可见单层细胞形成,第14天贴壁细胞长满瓶底并作传代培养;在传代培养中可见细胞呈均匀生长,每7～14 d传代一次;用第5代培养细胞作抗原,检测31例患者的阳性率为90.3％,检测30名正常人血清的假阳性率为6.7％。 结论 日本血吸虫尾蚴细胞体外传代培养至第5代,可用于免疫学研究。     

田鼠巨噬细胞的体外粘附试验不能区分杜氏利什曼前鞭毛体有无感染性

作者用有感染性和无感染性的杜氏利什曼原虫前鞭毛体与田鼠的脾、淋巴结和腹膜渗出物中的巨噬细胞,在体外进行粘附试验。杜氏利什曼原虫IS株按照Stanber法用田鼠保种。前鞭毛体在肝浸胰胨(LIT)培养基或含20%灭活胎牛血清的Schueider培养基中置于27℃培养,当它们静止6～8天后收集。每ml培养基接种10~6个脾的无鞭     

125例胃粘膜幽门弯曲菌检验分析

我们自1988年始,对临床拟诊为慢性胃炎的内窥镜活检标本,在作常规组织学检查同时,作了切片的细菌学杂色检验、细菌培养及尿素酶试验。旨在探求互相关系,提出一简易检验法。现将资料分析报道如下。 材料:1.临床拟诊为慢性胃炎的内窥镜活检标本125份。其中男83例,女42例;年龄18～67岁。2.保存液:20％葡萄糖液,每瓶1ml。3.增菌培养基:7％人血浆牛心脑浸液,每瓶2ml,内含万古霉素6μg、二性霉素4μg、TMp10μg,4.2％尿素培养基:上述增菌培养基中加入2％尿素及酚红指示剂。     

制霉菌素糊治疗婴儿鹅口疮

制备方法:取制霉菌素粉1500万U(或片剂30片,每片50万U)置乳钵中研细过筛,另取西黄薯胶2g于干燥乳钵中,加入甘油10ml研匀,再加适量蒸馏水迅速研匀,然后加入制霉菌素粉研匀,最后加蒸馏水至100ml研匀,分装10份即得。本品宜临用时配制,置冰箱中保存。用时以无菌棉签蘸少许涂抹口腔,每日2～3次,用1周。     

尿素及乙酰基氨基葡萄糖对体外培养的恶性疟原虫同步发育效果的观察

恶性疟原虫FuP株,用RPMI 1640培养基,人红血球于50ml三角烧瓶中(容量为5％),加入10％马血清。于2％O_2,8％CO_2,90％N_2条件下37℃连续人工培养。按不同时间和顺序,单独或并用及空白对照等六种方法加入尿素OH-urea(简称OH-u),最终浓度10~(-3)M。乙酰基氨基葡萄糖N-Acetylglucosamine(简称N-AG),最终浓度0.11g/ml.每隔24h作血涂片染色,Nikoni光源显微镜检查,计算400个红     

铁离子对体外培养的阴道毛滴虫生长的影响

目的研究铁离子对体外培养的阴道毛滴虫生长的影响。方法在TYM(trypticase-yeast extract-maltose)培养基(pH6.0)中,分别加入100、200、300和400μmol/L铁离子,并设不加铁离子组为对照组,阴道毛滴虫初始浓度为1×105/ml,于37℃定量纯培养。采用台盼蓝染色法镜下观察并计数活滴虫数和死滴虫数,绘制生长曲线和存活率曲线,并计算对数生长期内世代时间。通过连续稀释的方法测定在加入200μmol/L铁离子培养基和对照组培养基中甲硝唑对阴道毛滴虫的最小致死浓度(minimal lethal concentration,MLC)。结果在加入100、200、300和400μmol/L铁离子的培养基中,阴道毛滴虫均于40h达最高密度,分别为2.9×106、3.2×106、3.1×106和2.8×106/ml,对照组阴道毛滴虫于54h达最高密度,为2.5×106/ml。400μmol/L铁离子组阴道毛滴虫的世代时间为(6.8±0.7)h,较100～300μmol/L铁离子组的世代时间[(4.8±0.3)、(4.8±0.2)和(5.0±0.4)h]延长(均P﹤0.05),而100～400μmol/L铁离子组的世代时间均短于对照组[(10.2±3.1)h](均P﹤0.05)。在加入200μmol/L铁离子的培养基中阴道毛滴虫的甲硝唑最小致死浓度为(23.44±11.56)μg/ml,显著低于对照组[(31.25±15.44)μg/ml](均P﹤0.05)。结论阴道毛滴虫在加入100～400μmol/L铁离子的TYM培养基中生长较快,且甲硝唑对阴道毛滴虫的最小致死浓度较小。     

犬恶丝虫感染期幼虫的体外培养

本文比较了犬恶丝虫在3种培养液中的发育情况。犬恶丝虫的感染期幼虫来自阳性埃及伊蚊,处理后接种于下列3种培养液中:(A)含10%人AB型血清,采用HEPES进行缓冲的RPMI 1640。(B)含有机酸(100ml内含失水苹果酸67mg、琥珀酸6mg和α-酮戊二酸37mg、糖(100ml内含葡萄糖70mg和蔗糖2668mg)和10%胎牛血清的TC-199培养液(C)含10%胎牛血清的Grace昆虫培养液。血清在加热灭活后加入培养液。培养液中加入苄青霉素和链霉素并调节pH值为7.2～7.4。以10～12条感染期幼虫培养于盛     

开放式灰化—电极法测定人粪便中总氟含量

本文报道一种运用新型开放式灰化炉及氟离子选择性电极测定人粪便中总氟含量的方法。我们用1克 NaOH 作固定剂,300℃和650℃分段将10ml 经预处理的粪样灰化,每一段加入0.25克 KNO_3以帮助灰化,灰样用盐酸(1∶1,V/V)溶解,调节 pH 并加入4ml TISAB 缓冲液,稀释到25ml 后用一次添加法测定结果。本法在2.0—100μg 范围内对标准氟(NaF)的平均回收率为95.0±5.6%;样品平均回收率为106.4±11.0%;两份样的变异系数分别为8.4%和9.4%;82次测定的空白值为1.62±0.41μg。     

东非利什曼原虫的体外培养

作者用10株东非利什曼原虫株(其中2株为皮肤型,8株为内脏型),于不同的培养基中培养,对其生长情况进行了比较。选用的培养基包括市售的施奈德化果蝇Schneider’s Drosophila培养基、格雷斯氏昆虫组织培养基、Singh’s蚊虫培养基和RPMI 1640培养基。利什曼鞭毛体均于7.5%二甲基亚枫-RPMI 1640中冰冻保存,介冻后立即接种于培养基中。实验用液体培养基加入25ml组织培养瓶中,每瓶加5ml,血液基础培养基1ml放于16×110mm塑料组织培养管中成斜面,接种前加2ml培养液或盐水。     

大鼠肝干细胞的分离培养

目的 分离大鼠胎肝细胞,观察人肝细胞生长肽(HGP)和小鼠白血病抑制因子(mLIF)对其生长和肝干细胞集落形成的影响。方法 从大鼠胚胎(12日龄)肝中分离肝细胞,采用MTT比色法、~3H-TdR掺入法和碱性磷酸酶(AKP)检测法。结果 人HGP能剂量依赖性地促进胎肝细胞的DNA合成和增殖,500～2000u/ml的mLIF能明显促进肝干细胞集落的生长和维持未分化状态。肝干细胞培养基的组成为:5％FBS(国产或进口),10％国产NCS,0.14mM的β-ME,40ng/ml伴白蛋白,10ng/ml的人bFGF,0.5μg～1.0μg/ml的HGP,1000u/ml mLIF,1％非必需氨基酸的高糖DMEM培养基。AKP染色阳性细胞在上述培养基中传至6代仍生长良好和保持未分化状态。结论 从胎鼠肝中能分离到肝干细胞,人HGP能促进鼠胎肝细胞的生长,而mLIF对促进肝干细胞生长和维持未分化是必要的。     

多房棘球蚴虫体蛋白介导NK细胞表面受体NKG2A对NK细胞功能的影响

目的 探讨多房棘球蚴虫体蛋白(Emp)介导自然杀伤(NK)细胞表面抑制性受体NK细胞凝集素样受体亚家族C成员A (NKG2A)对NK细胞功能的影响。方法 采集健康志愿者外周血,纯化NK细胞,按0.3×10~6个/孔(重悬至100μl RPMI 1640培养基),加至96孔细胞培养板,空白对照组不作处理,阴性对照组加入1μg/ml白细胞介素-12 (IL-12)和IL-15各1μl,Emp组加入1μg/ml IL-12、IL-15各1μl和7 081μg/ml Emp 2.5μl,转化生长因子-β1 (TGF-β1)组(阳性对照组)加入1μg/ml IL-12、IL-15、TGF-β1各1μl,不足总量(104.5μl)的用RPMI 1640培养基调整,分别体外刺激培养24 h后,利用流式细胞术检测NK细胞表面受体NKG2A表达情况以及NK细胞和NKG2A~+NK细胞分泌细胞因子[γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、穿孔素]的功能变化。采用单因素方差分析法进行差异性分析,LSD或Dunnett检验法分析组间差异。结果 Emp组和TGF-β1组表达NKG2A的...     

绵羊副睾种布鲁氏菌的分离方法研究

本文报告了绵羊副睾种布鲁氏菌的分离培养,作者推荐选择性培养基Ⅱ,即在改良赫金格尔琼脂(含有10％溶血的马或牛血清)和10％的马血清胰琼脂中,分别加入最终浓度为多粘菌素6u/ml,万古霉素5μg/ml,呋喃旦喧钠10μg/ml,二性霉素1.0μm/ml。此培养基可作为Br.ovis及其它多种布鲁氏菌的分离培养基。