有机氚化物对离体培养小鼠胎儿中脑细胞增殖及分化的…

目的 作者就四种有氚化物对体外培养细胞的增殖及分化的影响进行了研究。方法 细胞取自１１日胎龄小鼠中脑组织，对其进行高密度细胞培养，并加入有机氚化物与培养液。结果中脑细胞的分化比增殖对辐射更敏感，辐射引起剂量依赖性的培养细胞ＤＮＡ和蛋白质含量的减少。以各指标５０％的抑制剂量，用Ｘ射线为参考辐射估算的氚ＲＢＥ值在４．６～８．７范围，混合辐射，特别是当使用＾３Ｈ－ＴｄＲ时，能更有效地抑制中脑细胞的分化，     

诊断超声对胎儿角膜的影响

将 90名早孕妇女 (孕 8～ 12周 )随机分为 3组 :Ⅰ组 (对照组 ) ;Ⅱ组 (超声辐照 3min组 ) ;Ⅲ组 (超声辐照 2 0min组 )。采用诊断超声辐照人体宫内胎儿 ,2 4h后取胎儿角膜做透射电镜及组织化学研究。结果表明 :诊断超声辐照 3min ,胎儿角膜出现水肿改变 ,SDH(琥珀酸脱氢酶 )活性下降 (P <0 .0 5 ) ;辐照 2 0min ,角膜结构明显损伤 ,SDH活性下降显著 (P <0 .0 1)     

诊断超声对人体宫内胎儿安全性的影响

将80名早孕妇女随机分为4组:Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(超声辐照5min组)、Ⅲ组(辐照10min组)、Ⅳ组(辐照20mim组).采用诊断超声辐照人体宫内胎儿,24h后取胎儿角膜、晶体及绒毛细胞进行超微结构及生化研究,以探讨诊断超声对胎儿是否有损伤?其量效关系如何?结果表明:诊断超声辐照5min,胎儿角膜上皮出现水肿改变;辐照20min,绒毛细胞的SOD、GSH-Px的活性下降显著(P<0.05).     

不同糖浓度对体外培养小鼠成纤维细胞增殖、分化的影响

目的 研究不同糖浓度下成纤维细胞的生长情况.方法 采用体外模型,观察不同糖浓度的培养液下成纤维细胞的生长情况,对细胞增殖和Ⅰ型胶原合成情况进行研究.结果 当培养液糖浓度低于40mmol/L时,成纤维细胞的增殖并未发现受到太多抑制,随着糖浓度的升高,成纤维细胞的增殖随之抑制(P<0.01);成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的量与糖浓度无明显相关(P>0.05).随着糖浓度的升高,成纤维细胞产生肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的量增加.结论 应激状态下,当培养液糖浓度在一定范围内(25-40mmol/L),并不影响创面的愈合,当高于这个范围,创面的愈合将得到抑制.成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的量与糖浓度无直接关系;当糖浓度升高时,成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的发生率随之升高.     

裂变中子照射对小鼠脾脏淋巴细胞增殖功能的影响

小鼠经梯度剂量的裂变中子和６０Ｃｏγ射线照射，照后１天脾脏淋巴细胞数的变化，显示了其是由对中子和γ射线辐射敏感和辐射抗性两种成分组成，而同一种成分对中子辐射的敏感性又高于对γ射线的辐射敏感性。对中子和γ射线辐射敏感成分的Ｄ０值分别为０．４０Ｇｙ和０．９６Ｇｙ，ＲＢＥ值为２．４０。用丝裂原刺激后的３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定照后小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应，表明脾脏的Ｔ、Ｂ淋巴细胞也是由辐射敏感性不同的两种成分组成。对中子和γ射线敏感性高的Ｔ细胞的Ｄ３７值约为０．８２和０．７５Ｇｙ，Ｂ细胞的Ｄ３７值约为１．０５和２．３８Ｇｙ，ＲＢＥ值相应为０．９１和２．２７。裂变中子２．３Ｇｙ和６０Ｃｏγ射线等效致死剂量４．５Ｇｙ照射后，小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞转化功能的损伤和恢复的趋势基本一致。Ｂ淋巴细胞转化功能的损伤和恢复的趋势也基本一致。     

小鼠骨髓干细胞的分离培养鉴定及诱导分化的研究

目的分离培养鉴定小鼠的骨髓间充质干细胞,观察体外培养生长特性,并在特定条件下诱导分化,探讨其成脂成骨分化能力。方法采用全骨髓培养法培养小鼠骨髓间充质干细胞,观察干细胞的形态和生长特性,用流式细胞仪对其细胞表型CD29、CD90、CD34、CD44、CD31、CD45进行鉴定,成脂成骨诱导分化能力鉴定。结果原代分离的细胞培养24 h,干细胞开始贴壁,胞体呈圆形,其他血细胞悬浮。培养3 d,贴壁细胞逐渐变梭形;培养第4 d,细胞开始分裂;随着细胞数目的增加,逐渐形成漩涡状排列,细胞形态呈梭形、三角形、多边形、不规则形;培养第10 d,贴壁细胞长满瓶底的80%,按1∶2传代。选择第3代骨髓干细胞分析显示,CD29、CD44、CD90阳性表达,CD31、CD34、CD45阴性表达。细胞成脂成骨诱导后染色鉴定呈阳性。结论采用全骨髓法培养可获得生长状态良好,增殖能力强的骨髓间充质干细胞,方法简便、实用。     

高压氧干预对绿色荧光蛋白小鼠骨髓间充质干细胞培养及增殖分化的影响CSCD

目的 探讨骨髓间充质干细胞培养及高压氧对其增殖分化的影响.方法 采用全骨髓细胞贴壁培养法提取绿色荧光蛋白小鼠骨髓间充质干细胞进行培养,取P3代骨髓间充质干细胞,用神经节苷脂和胶质细胞源性神经生长因子诱导液进行成神经元样细胞诱导,并在培养及诱导时进行高压氧干预,1次/d,为高压氧干预组（高压氧组）.采用免疫荧光检测神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase,NSE）表达,绘制细胞生长曲线.未进行高压氧干预的为对照组.结果 贴壁培养法分离培养骨髓间充质干细胞,经多次换液后可纯化细胞.高压氧组间充质干细胞对数生长期提前,进入平台期后细胞数量多于对照组,高压氧干预后细胞于24 h内出现轴突、树突,48 h后2组对比,高压氧组80％以上细胞出现突起,且细胞突起较长、较粗.对照组突起的细胞比例不足80％,细胞分散,突起短,未连成网状.结论 骨髓间充质干细胞全骨髓贴壁培养法操作简单,细胞繁殖能力强,经高压氧干预后骨髓间充质干细胞生长加快.在细胞诱导时联合高压氧干预,细胞分化数量多,突起长.提示高压氧能促进体外骨髓间充质干细胞向神经元样细胞增殖和分化.     

裂变中子照射对小鼠空肠隐窝细胞增殖周期的影响

小鼠经335rad裂变中子全身照射后,用标记分裂指数法测定了空肠隐窝细胞周期的变化。实验结果表明,照后7天内GT时间缩短较明显,而后有恢复趋势,9天时已接近正常水平。增殖周期各时相以G_I期变化最显著,对GT的影响最大。对相近似致死剂量的中子和~(60)Coγ线照射后GT的变化进行比较看到,中子照射引起的GT缩短比γ线引起的GT缩短更明显。文章中对肠上皮修复的可能机制进行了讨论。     

新型特异性环氧合酶-2抑制剂对胎鼠中脑细胞增殖和分化的影响

目的早期评价新型环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂Ia-10及Ib-10潜在的生殖毒性。方法原代微团培养法培养大鼠胚胎中脑神经细胞,采用中性红吸收法和微团集落计数法,分别观察化合物Ia-10、Ib-10、已上市COX-2抑制剂赛来昔布以及生殖毒性阳性对照药羟基脲暴露后对细胞增殖和分化的影响,计算受试物对中脑神经细胞微团的半数增殖抑制浓度（50％ inhibition of cell viability,IV50）和半数分化抑制浓度（50％ inhibition of cells differentiation,ID50）,并根据IV50与ID50的比值R来评价化合物的潜在生殖毒性（R〉2．0,化合物具有潜在生殖毒性;R〈2．0,化合物无潜在生殖毒性）。结果化合物Ia-10对中脑神经细胞微团的IV50为31．48μg·mL^-1,ID50为8．76μg·mL^-1（R=3．59）;化合物Ib-10的Ⅳ50为35．46μg·mL^-1,ID50为23．55μg·mL^-1（R=1．51）;赛来昔布的IV50为28．89μg·mL^-1,ID50为36．55μg·mL^-1（R=0．79）;阳性药羟基脲的IV50为6．64μg·mL^-1,ID加为2．52μg·mL^-1（R=2．63）。结论根据R值进行判断,阳性药物羟基脲具有生殖毒性,赛来昔布无潜在的生殖毒性;化合物Ia-10具有潜在的生殖毒性,而化合物Ib-10无潜在生殖毒性,提示具有良好的市场开发前景。     

六道管式炉氧化燃烧联合分离海产品中有机结合氚与14 C的影响因素研究与不确定度评定

目的 建立海产品中有机结合氚(OBT)与¹⁴C的联合处理检测方法,分析测量过程中不确定度的来源并进行评定,实现海鱼、海虾、海蟹、海贝和海藻等不同种类海产品中的OBT和¹⁴C的快速、准确测定。方法 采用六道管式燃烧装置结合自制六通玻璃管,研究联合氧化燃烧与收集海产品中OBT和¹⁴C的方法;分析评定元素分析、氧化燃烧、液体闪烁计数测量等过程中引入的不确定度。结果 建立了5管合并收集OBT、单管收集¹⁴C的联合分离方法,-110℃ 冷阱收集条件下氢的燃烧回收率得到有效提升,样品转移时的损耗更少,收集碳所需氢氧化钠、氯化铵和氯化钙等试剂的用量大大降低。联合分离5.0 g样品中氢和碳(包含所有氢和碳的同位素),葡萄糖中氢和碳的燃烧回收率分别为98.7%和93.1%,5种海产品中氢和碳的燃烧回收率分别为92.5% ~ 97.3%和82.7%~96.3%,3次平行性实验相对标准偏差均<5%,表明该方法具有良好的准确性和精密度。样品计数是结果不确定度的主要来源,其次为元素含量分析和计数效率。结论 本研究建立的海产品中OBT和¹⁴C 联合分离体系燃烧回收率高、处理时间短、分离效果好、获得量足,可有效减少样品使用量,能满足海产品放射性污染健康风险评估要求。     

放射复合伤对骨髓基质细胞粘附功能影响的初步观察

目的初步探讨放射复合伤对骨髓造血微环境中基质细胞粘附功能损伤的机理。方法采用流式细胞仪、细胞粘附实验和细胞粘附阻断实验等方法,检测５０Ｇｙγ射线全身照射、１５％体表面积Ⅲ度烧伤和放射复合伤小鼠骨髓基质细胞表达血管细胞粘附分子（ＶＣＡＭ１）、纤维连接素（Ｆｎ）、层粘素（Ｌｎ）和Ⅳ型胶原（ＣｏｌⅣ）等成分的变化以及骨髓基质细胞贴壁层对骨髓单个核细胞粘附能力的影响。结果①骨髓基质细胞表达ＶＣＡＭ１、Ｆｎ、Ｌｎ和ＣｏｌⅣ的水平具有以单烧组＞正常组＞复合伤组＞单放组的特点。②伤后第３～７天,单烧组骨髓基质细胞的粘附能力显著高于正常组（Ｐ＜００５～Ｐ＜００１）;单放组和伤后第３天的复合伤组则反之。③分别用ＶＣＡＭ１、Ｆｎ、Ｌｎ和ＣｏｌⅣ单抗处理骨髓基质细胞贴壁层后,骨髓单个核细胞的粘附率较未加单抗组均有不同程度的下降。结论骨髓微环境基质细胞粘附功能的损伤可能是影响放射复合伤骨髓造血功能障碍的原因之一。     

基质细胞支持的体外扩增造血细胞对致死剂量照射小鼠造血恢复的促进作用

目的 研究基质细胞支持条件下体外扩增的造血细胞回输体内后，促进经致死剂量照射小鼠造血功能恢复的作用。方法 在培养的小鼠骨髓基质细胞层存在的条件下，加入或不加入几种细胞因子组合，分别在小鼠骨髓单个核细胞液体培养体系中进行造血细胞体外扩增。将不同条件下扩增的细胞经尾静脉回输至经致死剂量照射的小鼠体内，并与单纯细胞因子存在条件下的扩增及末扩增造血细胞进行比较，动态观察小鼠的外周血象变化及其一般状况和生存宰。结果 ①单纯细胞因子介导小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)体外扩增后并不能增进这些细胞促进造血恢复的能力；②含有骨髓基质细胞底层的体外扩增，无论是否加入细胞因子，均有明显的促进移植受体造血功能迅速恢复的作用。     

Cellular processing of (125)I- and (111)in-labeled epidermal growth factor (EGF) bound to cultured A431 tumor cells

Low molecular weight of epidermal growth factor (EGF) enables better intratumoral penetration in comparison with larger targeting proteins, but the cellular retention of EGF-associated radioactivity is poor for directly iodinated EGF. An attempt was made to improve intracellular retention by the use of metal-diethylenetriaminepentaacetic acid or nonphenolic linker (N-succinimidyl-para-iodobenzoate) as labeling agents. The use of nonphenolic linker did not improve retention of the radioactivity in A431 carcinoma cell line. The use of the radiometal label provided an appreciable prolongation of radioactivity residence inside the cell.     

内皮素对肝硬化大鼠Kupffer细胞血小板活化因子生成水平的影响

目的 探讨肝硬化时Kupffer细胞与血小板活化因子(PAF)生成的关系及内皮素-1(ET-1)在其中的作用.方法 30只SD大鼠随机分为正常对照组与CCl4诱导的肝硬化模型组,每组15只.分离、培养Kupffer细胞,培养24h后,分别用0、1、10、100和1 000nmol/L ET-1刺激,测定Kupffer细胞产生和释放的PAF水平.通过RT-PCR、受体饱和结合试验分析Kupffer细胞PAF、ET-1受体(ETA、ETB)和内皮素前体原(ppET-1)mRNA表达情况.结果 肝硬化大鼠Kupffer细胞合成与释放PAF明显增加,分别为对照组的1.48倍(1.02±0.06pg/g DNA vs 0.69±0.07pg/g DNA,P＜0.01)和2.15倍(1.42±0.14pg/g DNA vs 0.66±0.04pg/g DNA,P＜0.01).ET-1刺激增强了Kupffer细胞生成与释放PAF的效应,并呈剂量依赖性,在肝硬化组尤为明显.肝硬化组Kupffer细胞PAF及ETB受体mRNA水平及受体密度明显增加,而受体亲和力无变化,无ETA受体和ppET-1 mRNA表达.结论 Kupffer细胞是肝硬化时PAF生成的一个重要来源,ET-1通过表达增加的ETB受体进一步促进Kupffer细胞生成并释放PAF,提示Kupffer细胞参与了肝硬化门脉高压的形成.     

Effects of radiation from a radiofrequency identification (RFID) microchip on human cancer cells

Purpose Radiofrequency identification (RFID) microchips are used to remotely identify objects, e.g. an animal in which a chip is implanted. A passive RFID microchip absorbs energy from an external source and emits a radiofrequency identification signal which is then decoded by a detector. In the present study, we investigated the effect of the radiofrequency energy emitted by a RFID microchip on human cancer cells.

Materials and methods Molt-4 leukemia, BT474 breast cancer, and HepG2 hepatic cancer cells were exposed in vitro to RFID microchip-emitted radiofrequency field for 1?h. Cells were counted before and after exposure. Effects of pretreatment with the spin-trap compound N-tert-butyl-alpha-phenylnitrone or the iron-chelator deferoxamine were also investigated.

Results We found that the energy effectively killed/retarded the growth of the three different types of cancer cells, and the effect was blocked by the spin-trap compound or the iron-chelator, whereas an inactive microchip and energy from the external source had no significant effect on the cells.

Conclusions Data of the present study suggest that radiofrequency field from the microchip affects cancer cells via the Fenton Reaction. Implantation of RFID microchips in tumors may provide a new method for cancer treatment.     

肝细胞生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化的实验研究

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）诱导小鼠胚胎干细胞（ESC）体外定向分化为肝细胞的能力。方法对ESC体外悬浮培养5～7天形成的拟胚体,观察ESC自主分化、HGF诱导分化的情况。观察和检测经诱导4周的细胞的HE染色,糖原染色,尿素氮及甘油三酯合成,心肌MHC、白蛋白、AFP、CK18的表达,以及吲哚氰绿（ICG）染色情况。结果ESC自主分化难以控制。HGF可促进ESC向内胚层进一步分化,但更可能诱导其向心肌分化。表达白蛋白、AFP、CK18、ICG和FDA染色阳性。结论HGF可诱导ESC分化出肝细胞,但HGF的单一作用能力有限,提示肝细胞的诱导分化可能需要多种因素共同作用。     

放射及复合烧伤大鼠腹腔灌洗液对骨髓造血祖细胞生长的影响

目的　观察放射损伤、烧伤及放烧复合伤腹腔灌洗液对骨髓体外造血的影响。方法60 Coγ射线全身照射 1 2Gy、5kW溴钨灯致大鼠背部 30 %TBSAⅢ度烧伤。伤后 3 ,1 2 ,2 4 ,48和 72h无菌抽取腹腔灌洗液 ,按 40 μg ml加入到骨髓红系、粒系培养体系中培养。 结果　伤后 3 ,1 2 ,2 4 ,48和72h,烧伤组和复合伤组的CFU E、BFU E和CFU GM培养集落数均显著高于正常对照组 (P <0 0 1 ) ,且以伤后 2 4h最高 ,烧伤组高达 2 1 5 7%、2 0 2 3 %和 2 4 1 2 % ,复合伤组为 1 88 1 %、1 4 7 7%和2 0 4 6 %。但当加入放射损伤大鼠腹腔灌洗液时 ,仅有很少的CFU E、BFU E和CFU GM集落生长。结论　烧伤与放烧复合伤后的腹腔灌洗液对骨髓红系、粒系造血均有明显的促进作用 ,照射组则显示明显的抑制作用     

GDF11对糖尿病小鼠骨髓间充质干细胞细胞凋亡的影响及其信号机制

 目的 探讨生长分化因子11(GDF11)对糖尿病小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞凋亡的影响及其信号机制。方法 复苏BMSCs并将其分为4组:正常小鼠BMSCs组(Nor),糖尿病小鼠BMSCs组(DB),GDF11干预组(DB+GDF11;GDF11),抑制剂组(DB+GDF11+ LY294002;LY)。各组细胞培养3 d后,台盼蓝染色观察细胞凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和磷酸化(p)-PI3K、p-Akt的表达水平。结果 与正常小鼠BMSCs相比,糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡率显著升高[(36.2±3.3)% vs. (3.1±1.1)%,P＜0.05];GDF11可降低糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡率[(18.9±1.9)% vs. (36.2±3.3)%,P＜0.05],提高Bcl-2/Bax的蛋白表达比[(1.63±0.10) vs. (0.26±0.09);P＜0.05],同时激活PI3K[p-PI3K/PI3K:(0.98±0.08) vs. (0.42±0.11);P＜0.05]/Akt[p-Akt/Akt:(0.94±0.10) vs. (0.32±0.15);P＜0.05]信号通路。而且,当抑制PI3K/Akt信号通路后,GDF11抑制糖尿病小鼠BMSCs凋亡的作用明显减弱[细胞凋亡率:(41.1±3.9)% vs. (18.9±1.9)%,P＜0.05]。结论 GDF11可通过激活PI3K/Ak信号通路抑制糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡。     

丹参对肝星状细胞丝裂原活化蛋白激酶通路的抑制作用

目的探讨肝星状细胞丝裂原活化蛋白激酶(HSCsMAPK)通路中ERK、JNK的活化情况,以及丹参药物血清对磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(PERK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(PJNK)表达的影响。方法用大鼠制备肝纤维化模型。造模后,药物组以每天20ml/kg剂量分2次灌服丹参;对照组灌以等量生理盐水。连续给药6天后经下腔静脉取血并分离血清。采用盲法,用上述10%药物血清培养HSCs24h后,用Westernblot方法检测各组HSCsPERK、PJNK蛋白表达水平。结果各组在约44kD、42kD的位置上均出现杂交带,表明活化的HSCs同时表达PERK1和PERK2;在约46kD、54kD的位置上均出现杂交带,表明HSCs同时表达PJNK1和PJNK2。PERK蛋白表达水平,肝纤维化大鼠经丹参药物血清干预后较对照组显著降低(18.03%±3.99%vs28.16%±5.37%,P<0.01),正常大鼠经丹参药物血清干预后较正常大鼠对照组也显著减少(18.17%±4.02%vs26.35%±8.22%,P<0.05)。PJNK蛋白表达水平,肝纤维化大鼠经丹参药物血清干预后较对照组显著降低(17.70%±2.83%vs32.66%±7.08%,P<0.01),正常大鼠经丹参药物血清干预后较正常大鼠对照组也显著减少(19.53%±2.48%vs29.20%±6.27%,P<0.05)。结论活化的HSCs中ERK、JNK保持着较高的磷酸化水平。提示两者介导的信号转导通路是HSCs活化和增殖的重要途径之一;阻断MAPK信号通路可能是丹参治疗肝纤维化的重要作用途径之一。