川芎嗪对心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的观察川芎嗪（TMP）对体外培养心脏成纤维细胞（CF）的增殖与胶原合成的影响。方法用消化法培养新生SD大鼠的CF，用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成．观察不同浓度TMP对CF增殖和胶原合成的影响。结果随着TMP浓度的升高，MTT比色法A490值呈下降趋势；CF分泌的胶原随着TMP作用浓度和时间的增加呈递降趋势。结论TMP具有抑制SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。     

低氧促进大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成

目的研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成、总蛋白合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达的影响.方法分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H-亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化,采用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达.结果成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第24、48小时胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率较常氧组显著增加,分别增加132%(P＜0.05)和163%(P＜0.01);低氧12 h起Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞.结论低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达,提示低氧对心脏成纤维细胞胶原合成代谢的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制.     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌成纤维细胞胶原合成及其机制的初步研究

目的研究牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及TGF—Bl蛋白表达的影响，初步探讨其抗纤维化的作用和机制。方法在培养的心肌成纤维细胞中加不同浓度的牛磺酸72h，用羟脯氨酸法及MTT比色法分别测胶原量和细胞增殖情况，ELISA法测TGF—β1，蛋白含量。结果牛磺酸能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成，并减少TGF—βl蛋白的表达。结论牛磺酸能通过下调TGF—β1蛋白的表达，抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成，起到抗心肌纤维化的作用。     

溶血磷脂酸对心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：观察溶血磷脂酸（LPA）对体外培养心脏成纤维细胞（CF）的细胞增殖和胶原合成的影响。方法：用消化法培养新生SD大鼠的CF，实验分为四组。对照组（加含5％小牛血清的DMEM培养液），实验组根据不同浓度的LPA又分为10^-6μmol／L组、10^-7μmol／L组和10^-8μmol／L组。用单四唑（MTT）比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成，分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响。结果：①随着LPA浓度的升高，MTT比色法吸光度（A490）值呈上升趋势。在药物作用48h后，仅有10^-6μmol／L组A。值较对照组有显著升高（P〈0．05）；作用至72h后，10^-8μmol／L组、10^-7μmol／L组、10^-6μmol／L组A490值均较对照组显著升高（P〈0．05）；作用至96h后，各实验组A。值较对照组均有显著升高（P〈0．05和P〈0．01）。②随着LPA浓度和作用时间的增加，CF分泌的胶原呈递增趋势。LPA作用48h仅10^-6μmol／L组胶原浓度较对照组显著升高（P〈0．01）；作用至72h后，10^-7μmol／L组、10^-8μmol／L组胶原含量较对照组有显著升高（P〈0．05和P〈0．01）；作用至96h，各实验组胶原含量均较对照组有显著升高，10^-6μmol／L组与10^-7μmol／L组、10^-8μmol／L组之间差异亦有显著性意义（P〈0．05）。结论：LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。     

风湿性心脏病人心瓣膜成纤维细胞的体外培养及其胶原合成

目的：观察风湿性心脏病人瓣膜成纤维细胞的胶原合成，为研究风湿性心脏病瓣膜纤维化的发病机制建立基础。方法：采用消化组织块培养法建立人二尖瓣和主脉瓣成纤维细胞体外培养方法，对５例风湿性心脏病人和５例尸检中除外心血管疾病和胶原系统疾病的二尖瓣和主动脉瓣成纤维细胞进行了体外培养，并用３Ｈ－脯氨酸测定瓣膜成纤维细胞的胶原合成。结果：二尖瓣和主动脉瓣的瓣膜成纤维细胞其形态、生长方式及胶原合成差异均不明显，风湿性心脏病瓣膜成纤维细胞的胶原合成明显高于对照组。结论：体外培养的风湿性心脏病人瓣膜成纤维细胞胶原合成明显增加     

卡维地洛联合美托洛尔对大鼠心脏成纤维细胞白介素-6(IL-6)表达的影响

目的探讨联合应用两种不同作用机制的β受体阻滞剂与二者单独应用对大鼠心脏成纤维细胞白介素-6(IL-6)表达的影响。方法通过体外培养大鼠心脏成纤维细胞(CFs),应用不同剂量卡维地洛、美托洛尔以及两种联合干预细胞,MTT法检测细胞增殖,ELISA法检测IL-6的表达,并进行组间、组内对比研究。结果卡维地洛有抑制心脏成纤维细胞增殖的作用,卡维地洛和美托洛尔均对心脏成纤维细胞IL-6的表达有抑制作用,而且存在剂量依赖效应,卡维地洛与美托洛尔联用与单独使用它们相比无明显差异。结论卡维地洛与美托洛尔两药联合暂未发现存在协同作用。     

川芎嗪对溶血磷脂酸诱导的心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养的心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,进一步研究中药川芎嗪单体对其的干预作用。方法:用消化法培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响及川芎嗪的干预作用。结果:随着LPA浓度的升高,MTT比色法A490值呈上升趋势。CF分泌的胶原随着LPA浓度和作用时间的增加呈递增趋势。20μg/m l的川芎嗪作用48 h即能明显抑制LPA(10-6μmol/L)诱导的细胞增殖作用(P<0.05)。结论:LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成作用,而川芎嗪能对其产生明显的抑制作用,并呈浓度依赖性。     

中药马勃对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

［摘 要］ 目的：中药马勃作用于体外培养大鼠皮肤的成纤维细胞,观察大鼠成纤维细胞增殖及胶原合成的能力,探讨马勃有效组分在细胞水平上促皮肤患处愈合的作用机制。方法：运用体外细胞培养技术对新生大鼠乳鼠皮肤的成纤维细胞进行培养,实验分为对照组（不给药组）和马勃有效组分37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L组;实验组于传代培养24 h后加入不同浓度的药物,继续培养24、48、72 h后收集细胞。采用MTT比色法测定细胞增殖,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定细胞胶原含量。结果：与对照组比较,37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L实验组的成纤维细胞增长率和成纤维细胞胶原合成能力均显著性升高（P＜0.01）。在药物作用时间方面,与对照组比较,在24、48和72 h观察细胞增殖率和胶原合成能力均显著增强,72 h最强,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：在不同剂量马勃有效组分作用下,大鼠成纤维细胞活化增殖,胶原合成的能力增强。     

丝裂霉素C对人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响

目的　观察丝裂霉素 C(MMC)对培养的人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响 .方法　用 3H-脯氨酸掺入和原位杂交法观察 MMC对培养人结膜囊成纤维细胞胶原合成活性的作用 .结果　 0 .4g· L- 1 MMC作用 5 min,可使结膜囊成纤维细胞对 3H-脯氨酸的摄取减少 5 5 %以上 (P<0 .0 5 ) ,并降低了 型前胶原 m RNA原位杂交信号 .结论　临床青光眼滤过手术中使用的 MMC剂量与作用时间 ,可减少成纤维细胞胶原的合成 ,有利于青光眼滤过手术成功率的提高     

钙调神经磷酸酶调控血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的作用

目的：探讨钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路对血管升压素（AVP）诱导新生大鼠心脏成纤维细胞（CF）胶原合成的调控作用。方法：采用胰酶消化法培养新生SD大鼠CF，应用羟基脯氨酸比色法测定细胞培养上清中羟基脯氨酸含量，CaN活性通过分光光度计测定。结果：①CF培养上清中羟基脯氨酸含量随着AVP浓度的升高而增加，其中10^-7mol／LAVP和10^-6mol／LAVP组羟基脯氨酸含量与空白对照组比较有显著性差异（均P〈0．01）；在0．5μg／mlCaN的特异性抑制剂环孢素共同干预下，羟基脯氨酸含量明显减少，并有统计学意义（P〈0．01）。②随着AVP浓度的升高，CF内CaN活性亦随之增高，与空白对照组比较，10^-7和10^-6mol／LAVP组细胞内CaN活性显著增高（P〈0．01）。③在10^-7mol／LAVP作用下，随着细胞内CaN活性的升高，CF培养上清中羟基脯氨酸含量随之增加，两者之间呈显著正相关（r=0．91，P〈0．05）：④在10^-7mol／LVI受体拮抗剂[d（CH2）5-Tyr2（Me）]AVP和10^-7mol／LAVP共同作用下，CF中CaN活性和培养上清中羟基脯氨酸含量与单独10^-7mol／LAVP作用组比较均显著降低，并有统计学意义（均P〈0．01）：结论：CaN信号通路在AVP诱导CF胶原合成过程中起到了重要的调控作用，该通路的激活可能是通过V1受体介导的.     

阿伐他汀对成年大鼠心肌成纤维细胞分泌内皮素-1及一氧化氮合酶/一氧化氮系统活性的影响

目的 :探讨阿伐他汀 (Atorvastatin)对大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)分泌内皮素 1(ET 1)含量及一氧化氮合酶 /一氧化氮 (NOS NO)系统活性的影响。　方法 :采用胰蛋白酶和胶原酶混合消化法 ,差速贴壁获取CFs。应用放免法、硝酸还原酶法和分光光度法分别测定不同干预条件下CFs培养液中ET 1水平及NOS NO活性。　结果 :①阿伐他汀呈浓度依赖性抑制CFs分泌ET 1,10 -6、10 -5和 10 -4mol/L阿伐他汀组与对照组相比差异非常显著 (均P <0 .0 1) ;10 -5和 10 -4mol/L阿伐他汀组分别与 10 -7和 10 -6mol/L阿伐他汀组相比差异非常显著 (均P <0 .0 1)。②阿伐他汀可升高CFsNO含量 ,10 -5和 10 -4mol/L阿伐他汀组与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 )和非常显著 (P <0 .0 1) ;10 -4mol/L阿伐他汀组与 10 -7mol/L阿伐他汀组相比差异显著 (P <0 .0 5 )。③阿伐他汀可增强CFsNOS活性 ,10 -5和 10 -4mol/L组阿伐他汀与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 )或非常显著 (P <0 .0 1) ;10 -4mol/L与 10 -7mol/L阿伐他汀组相比差异显著 (P <0 .0 5 )。　结论 :阿伐他汀能抑制CFs分泌ET 1,提高CFsNOS NO系统活性 ,拮抗血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )的部分生物活性 ,发挥其逆转心室重塑、改善心功能的作用     

依那普利拉对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及NOS/NO系统的影响

目的：观察血管紧张素Ⅰ转换酶抑制剂（ACEI）依那普利拉（Ena）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞（CFb）增殖及其对一氧化氮合酶/一氧化氮系统（NOS/NO）的影响，探讨Ena抑制心肌成纤维细胞增殖的初步机制。方法：培养的新生Wistar大鼠CFb，分为对照组、模型组和3个剂量Ena给药组，采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb，四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖；流式细胞仪测定细胞周期；硝酸还原酶法和分光光度法分别测定不同干预条件下CFb培养液中NOS/NO活性。结果：Ena能够显著抑制AngⅡ诱导的CFb增殖，Ena 3个剂量组作用24、48和72 h时间点的MTT值与模型组比较，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，Ena能提高细胞周期G₀/G₁百分率，降低S期百分率，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较， Ena能够提高CFb上清液中NOS/NO 水平，且随着用药剂量和作用时间增加，NOS活性和NO含量明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：Ena抗CFb增殖的作用与提高CFb NOS/NO 系统活性，拮抗AngⅡ的生物效应有关。     

冷冻对心肌合成一氧化氮的影响

目的:观测心肌局部冷冻对心肌合成一氧化氮(NO)的影响,探讨冷冻阻滞心脏传导的机理.方法:采用液氮(-60℃±2℃)冷冻心肌,并用温生理盐水复温,在冷冻时加入L-精氨酸和美兰,观测心肌中NO及一氧化氮合酶(NOS)的含量.结果:心肌冷冻后NO和NOS的含量均下降,但左右房心肌NO的含量未见差异.L-精氨酸组在冷冻时、复温时及冷冻复温时持续滴注L-精氨酸,心肌NO含量分别为(107.4±15.1)、(109.6±15.7 )、(121.8±18.4)nmol/g高于未加L-精氨酸组[(86.8±13.2)nmol/g],且以冷冻前加入并持续滴注组最为明显;美兰组在冷冻时、复温时及冷冻复温时持续滴注美兰,心肌NO分别为(62.3±11.2)、(64.7±11.0)、(42.8±10.6)nmol/g低于未加美兰组[(86.8±13.2)nmol/g],以冷冻前加入并持续滴注组最为明显.冷冻后血液中NO含量未见改变(P>0.05).结论:心肌冷冻后心肌中NO含量减少.     

心脏糜酶对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的观察心脏糜酶对自发性高血压大鼠(SHR)心肌组织胶原合成和心肌纤维化的影响.方法应用病理检查、计算机分析结合逆转录-聚合酶链式反应等方法,检测SHR应用糜酶抑制剂(Ch-Ⅰ)组、SHR组及WistarKyoto大鼠(WKY)组的收缩压、心肌胶原容积分数(CVF)、心肌血管周围胶原面积比(PVCA)和心肌糜酶及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达.结果Chy-Ⅰ组心脏CVF、PVCA分别为(26.8±8.7)%和0.4±0.1,SHR组分别为(46.4±7.8)%和1.9±0.9,WKY组为(24.4±10.7)%和0.4±0.1,Chy-Ⅰ组比SHR组明显下降(P＜0.01),与WKY组无明显差别(P＞0.05).Chy-Ⅰ组心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原和糜酶mRNA表达相对含量均明显低于SHR组(P＜0.01),与WKY组无明显差别(P＞0.05).应用Chy-Ⅰ后大鼠血压无改变.结论心肌组织糜酶参与胶原的合成,参与细胞外基质的形成和降解,促进自发性高血压大鼠心肌纤维化.     

急性胰腺炎胰腺组织一氧化氮含量变化及意义

目的：探讨急性胰腺炎(AP)时大鼠胰腺组织一氧化氮(NO)含量变化规律及意义。方法：一次性大剂量精氨酸腹腔内注射制成AP模型，并观察6、12、24、48和72h胰腺组织NO含量的变化。结果：随着胰腺炎病变程度的加重，胰腺组织中NO的含量逐渐下降，并在坏死的高峰(48h)达到最低，此后开始缓慢上升。而对照组则无明显变化。结论：胰腺组织中NO含量降低与胰腺炎病变程度的加重呈正相关。     

血小板源性生长因子诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的信号转导途径研究

①目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径在血小板源性生长因子(PDGF)刺激大鼠心脏成纤维细胞胶原合成中的作用。②方法分离培养新生大鼠心脏成纤维细胞。免疫细胞化学法、Western blot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化。③结果与对照组相比,在PDGF刺激下,大鼠心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达增加,PD98059 25μmol/L预孵育1小时能够抑制PDGF的刺激作用。④结论PDGF能够通过ERK1/2途径调节大鼠心脏成纤维细胞的胶原合成。     

TWEAK通过P38MAPK途径促进大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原和MMP-1的表达

目的 探讨肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)影响心肌成纤维细胞(CFs)中Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶1(MMP-1)表达的作用机制。方法 取Wistar新生大鼠CFs,加入重组人TWEAK(rhTWEAK)及P38MAPK抑制剂(SB203580)干预,将实验分为① 对照组：不加干预因素;② TWEAK组：加入100ng/mL TWEAK;③ TWEAK+SB203580组：加入100ng/mLTWEAK+SB203580。 采用MTT法检测CFs增殖;Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白及磷酸化P38MAPK(P-P38MAPK)蛋白表达;qRT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达;ELISA法检测CFs细胞培养液中MMP-1的浓度。结果 加入TWEAK干预后,促进了CFs增殖,Ⅰ型胶原蛋白及P-P38MAPK蛋白表达上调,Ⅰ型胶原mRNA和MMP-1 表达上调。加入SB203580可抑制CFs增殖,部分抑制Ⅰ型胶原mRNA、Ⅰ型胶原蛋白、P-P38MAPK蛋白及MMP-1的表达。结论 TWEAK可通过P38MAPK途径促进CFs 表达Ⅰ型胶原和MMP 1。