白血病细胞相关抑制活性对IL—2分泌细胞和IL—2受体表达的…

本文用免疫酶标法测定ＩＬ－２分泌细胞和细胞膜ＩＬ－２受体。其结果表明急性非淋白血病细胞条件培养液（即含白血病细胞相关抑制活性）对ＰＨＡ诱导的正常人外周血ＩＬ－２分泌细胞和细胞膜ＩＬ－２受体表达均有明显抑制作用，但对ＰＨＡ诱导的正常人外周血单个核细胞培养上清的ＩＬ－２活性无明显影响。     

雷公藤甲素对人扁桃体淋巴细胞表面IL—2受体表达的抑制作用

应用体外培养方法和APAAP 桥联酶标技术,观察了雷公藤甲素对人扁桃体淋巴细胞增殖、IL-2产生及其表面IL-2受体表达的影响。结果发现,雷公藤甲素(0.4～10ng/ml)可显著抑制PHA 诱导的人扁桃体细胞增殖及IL-2受体表达,且呈剂量依赖关系;而在相同浓度范围内,对PHA 诱导的IL-2产生无明显影响。提示雷公藤甲素的免疫抑制作用不是通过抑制IL-2产生,而可能是由于抑制了IL-2受体表达,以及干扰IL-2的信号传导系统所致。     

白血病患者IL－2的缺陷与其分泌细胞和免疫应答的关系

用抗白细胞介素２（ｉｎｔｅｒｉｅｕｋｉｎ－２，ＩＬ－２）分泌细胞的单克隆抗体及３氢标记胸腺嘧啶脱氧核苷（ｔｒｉｔｉａｔｅｄｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，３Ｈ－ＴｄＲ）掺入脱氧核糖核酸（ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ，ＤＮＡ）法，分别对３０例化疗前后白血病患者及２０例正常人外周血淋巴细胞中ＩＬ－２分泌细胞的比率、产生ＩＬ－２的活性，以及与植物凝血索（ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ，ＰＨＡ）的增殖反应三项指标同时作了检测分析。结果显示，该病患者的这些免疫应答功能均较健康人的明显降低（Ｐ＜０．０１），表明这些患者有多项免疫功能缺陷的同时存在。这对白血病的临床及其发病机理的探讨提供了有益的参考。     

枸杞对IL—2产生和IL—2受体（α,β）表达的调节

枸杞对于ＰＨＡ活化的淋巴细胞的ＩＬ－２产生有明显促进作用（Ｐ〈０．０５）；ＡＰＡＡＰ和ＦＡＣＳ检测表明，枸杞对经ＰＨＡ活化的淋巴细胞的ＩＬ－２受体α和β的一有达有明显的促进作用，ＦＡＣＳ分析同时表明枸杞不仅使高表达ＩＬ－２Ｒ（α，β）的细胞数量增加，同时也促进细胞表面的ＩＬ－２Ｒ（α，β）表达量的增加，利用ＹＴ细胞检测的结果表明在枸杞的作用下，ＹＴ细胞的ＩＬ－２Ｒ（α，β）的表达都有的增加，提示枸     

电转人IL6受体基因对急性白血病细胞生物学特性的影响

为了探索重组ＩＬ６－ＰＥ４０融合蛋白靶向杀伤白血病的效应，我们已成功地将编码人ＩＬ６Ｒ的全长ｃＤＮＡ转入ＢＮＭＬ大鼠急性早幼粒细胞白血病ＬＴ１２细胞中。本文研究了ＩＬ６Ｒ ｃＤＮＡ转入ＬＴ１２细胞后对该细胞原有生物学特性的影响。结果表明：①ＬＴ１２－ＩＬ６Ｒ＾＋细胞与原代细胞五种酶学组化无任何区别；②ＬＴ１２－ＩＬ６Ｒ＾＋细胞不仅高表达ＩＬ６Ｒ而且仍保持原的表面抗原性质，如与ＲＭ－１２４单抗结合；     

重组人IL—6对大鼠急性白血病细胞体外增殖的抑制

我们已报道重组大鼠ＩＬ－３和小鼠ＧＭ－ＣＳＦ对ＬＴ１２白血病细胞的增殖有不同程度的抑制活。本研究发现且人ＩＬ－６在１０００－５０００Ｕ／ｍｌ呈剂量依赖性抑制ＬＴ１２白血病细胞集落形成及ＤＮＡ合成。     

静注免疫球蛋白对新生儿单个核细胞IL-2、IL-4 mRNA表达的调节

目的探讨静注免疫球蛋白（ＩＶＩＧ）抑制体外脐血Ｂ细胞免疫球蛋白释放的机制。方法运用ＲＴ－ＰＣＲ法观察ＩＶＩＧ对体外新生儿单个核细胞（ＣＢＭＣ）分泌的ＩＬ－２ｍＲＮＡ及ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。结果佛波醇乙酯结合钙离子导入剂（ＰＭＡ＋ＩＯＮＯ）激活ＣＢＭＣ，很容易检测到ＩＬ－２ｍＲ－ＮＡ的表达，但不能检测出ＩＬ－４ｍＲＮＡ的表达。将ＰＨＡ刺激后的ＣＢＭＣ与ｒＩＬ－２一起孵育，再用ＰＭＡ＋ＩＯＮＯ刺激，ＣＢＭＣ始表达ＩＬ－４ｍＲＮＡ。在活化后的ＣＢＭＣ接受ＰＭＡ＋ＩＯＮＯ再刺激的同时加入ＩＶＩＧ（５ｍｇ／ｍｌ）。发现ＩＶＩＧ抑制了上述两种细胞因子ｍＲＮＡ的表达。结论ＩＶＩＧ对ＩＬ－２，ＩＬ－４两种细胞因子产生的抑制可能源于转录到分泌至胞外整个阶段任一时相上的抑制     

脂氧素对Jurkat T细胞增殖和白细胞介素-2/白细胞介素-2受体表达的影响

目的：研究脂氧素对Jurkat T细胞增殖和白细胞介素-2表达的影响。方法:体外培养Jurkat T细胞，anti-CD3（2 mg/L）和anti-CD28（2 mg/L）单抗刺激Jurkat细胞活化，加入不同浓度脂氧素（0.1 nmol/L-100 nmol/L）共同孵育24h后，加入［3H］-TdR继续孵育6 h，液闪仪测放射性活度；或收集培养上清，ELISA测IL-2水平，收集细胞，流式细胞仪检测细胞表面IL-2受体α亚单位CD25表达，PI染色后经流式细胞仪进行细胞周期分析。结果:脂氧素剂量依赖性抑制anti-CD3和anti-CD28活化的Jurkat T细胞增殖（P<0.05）；细胞周期分析发现脂氧素处理组S期细胞比例减少；脂氧素显著降低培养上清中IL-2 含量（P<0.05）但对CD25表达无明显影响（P>0.05）。结论:脂氧素能抑制活化Jurkat T细胞增殖和白细胞介素-2表达；脂氧素可通过影响T淋巴细胞的活化增殖进而发挥免疫负性调节作用。     

靶向MR-1基因shRNA表达载体的构建及其对白血病K562细胞增殖的抑制作用

目的 构建一种靶向MR-1基因的shRNA稳定表达载体,并检验其对白血病K562细胞增殖能力的影响.方法 以带有H1启动子可稳定表达靶基因shRNA的pCD-shRNA为载体,采用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切pCD-shRNA并回收线性空载体,采用T4 DNA连接酶将MR-1shRNA模板DNA双链与酶切后线性化的载体连接,从而建立稳定表达MR-1-shRNA的载体.将构建的pCD-shRNA-MR-1载体转染人白血病K562细胞,建立稳定沉默MR-1的细胞系,采用细胞计数法和westem blot对MR-1沉默后细胞的增殖能力和信号通路进行检测分析.结果 成功构建了可稳定表达MR-1-shRNA的载体pCD-shRNA-MR-1,经酶切鉴定及基因测序测定,结果表明载体中的MR-1-shRNA与设计序列完全相符,目的基因序列准确无误.将pCD-shRNA-MR-1转染白血病K562细胞,建立了两株稳定沉默MR-1的K562/MR-1细胞株.细胞增殖实验表明,MR-1稳定沉默细胞的增殖能力显著降低;细胞信号通路结果表明,MR-1稳定沉默细胞Jak2和Bcr-Abl的磷酸化水平降低.结论 利用pCD-shRNA质粒构建了一个可表达MR-1-shRNA的表达载体,该载体转染K562细胞后引起细胞增殖能力降低.研究表明MR-1基因在肿瘤细胞增殖过程具有促增殖作用,其机制是降低Jak2和Bcr-Abl的磷酸化水平.     

应用IL-2和IL-3联合基因疗法对骨髓移植后造血及免疫功能重建的影响

以大剂量化疗后骨髓功能严重损伤再给予同基因骨髓移植的小鼠为实验模型，动态观察了联合应用成纤维细胞介导的ＩＬ－２基因疗法和ＩＬ－３基因疗法对同基因骨髓移植后实验小鼠骨髓造血免疫功能重建的影响。结果表明，ＩＬ－２基因疗法对造血重建无明显效果，ＩＬ－３基因疗法对免疫重建无明显作用，但联合应用ＩＬ－２基因疗法和ＩＬ－３基因疗法能显著加快骨髓ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＭＫ及ＣＦＵ－Ｅ恢复过程及提高骨髓细胞ＮＫ、ＬＡＫ活性和ＣｏｎＡ刺激的骨髓细胞增殖反应。提示联合应用成纤维细胞介导的ＩＬ－２和ＩＬ－３基因疗法能显著加快骨髓移植后造血及免疫重建过程，从而有可能提高骨髓移植成功率。     

外源性IL-4基因表达对K562细胞增殖及死亡的影响

目的：观察外源性ＩＬ－４对Ｋ５６２增殖及死亡的影响。方法：用逆转录病毒载体将ＩＬ－４ｃＤＮＡ导入Ｋ５６２细胞,检测其增殖反应,用流式细胞依及ＤＮＡ片段凝胶电泳检测细胞增殖周期及凋亡情况,用台盼蓝排除法计数死亡细胞。结果：高表达ＩＬ－４的Ｋ５６２细胞增殖反应明显低于表达株。亲代Ｋ５６２株;前者２过程中死亡细胞百分率明显升高且可被ＩＬ－４单克隆抗体阻断,但其自发凋亡细胞数及增殖周期均无改变。结论Ｌ：外     

白细胞介素—6反义基因对人肺癌细胞生长的抑制作用

目的通过体外实验证实白细胞介素－６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６,ＩＬ－６）为人肺癌细胞系ＰＧ自分泌生长刺激因子,本研究旨在进一步探讨ＩＬ－６对ＰＧ细胞体内生长的影响。方法构建ＩＬ－６反义基因表达载体,应用磷酸钙沉淀法导入ＰＧ细胞以降低内源性ＩＬ－６表达;应用ＲＮＡ斑点杂交检测ＩＬ－６反义ｍＲＮＡ表达;应用生物活性检测法测定ＩＬ－６分泌,裸鼠皮下接种检测细胞成瘤性。结果转染反义ＩＬ－６基因的细胞ＰＧＴＡＳ１、ＰＧＴＡＳ６、ＰＧＴＡＳ８、ＰＧＴＡＳ９能够表达较高水平ＩＬ－６反义ｍＲＮＡ,所分泌的有生物活性的ＩＬ－６降低;ＰＧＴＡＳ１、ＰＧＴＡＳ６、ＰＧＴＡＳ８、ＰＧＴＡＳ９细胞体外生长减慢;ＰＧ－ＴＡＳ６、ＰＧＴＡＳ８、ＰＧＴＡＳ９细胞体内成瘤延迟,生长减慢。反义ＩＬ－６对ＰＧ细胞生长的抑制作用与ＩＬ－６分泌量呈负相关。结论ＩＬ－６对ＰＧ细胞生长具有重要的调控作用,ＩＬ－６为ＰＧ细胞自分泌生长刺激因子。     

E-cadherin表达缺失在白血病细胞行为中的作用

目的:确定上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)表达缺失在白血病细胞行为中的作用,最终阐明E-cadherin介导的骨髓微环境与造血细胞相互作用改变在白血病发生中的作用。 方法:细胞黏附实验测定 HL-60细胞经5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza-CdR）诱导E-cadherin表达后细胞黏附能力的改变,MTT法测定细胞增殖能力,细胞迁移实验确定细胞的迁移能力。结果:HL-60细胞经5-Aza-CdR诱导E-cadherin表达后,其对E-cadherin-Fc的黏附能力增加,细胞在E-cadherin-Fc上的增殖能力下降,细胞黏附导致细胞迁移能力下降。结论:白血病细胞中由于E-cadherin表达丧失,引起细胞黏附降低,增殖能力增强,细胞迁移活跃,表明E-cadherin表达缺失与白血病细胞行为的获得有关。     

IL-2基因修饰对巨噬细胞表型和抗原提呈功能的影响

目的：观察了白细胞介素２（ＩＬ－２）基因修饰的巨噬细胞ＩＬ－２动态分泌水平及对其表面分子的表达和抗原提呈能力变化的影响。方法：通过重组腺病毒介导,将ＩＬ－２基因转染至腹腔巨噬细胞,ＭＭＴ法检测其ＩＬ－２动态和分泌水平,ＦＡＣＳ检测巨噬细胞表型,混合淋巴细胞反应法（ＭＬＲ）测定巨噬细胞抗原提呈能力。结果：ＩＬ－２基因修饰４ｈ后巨噬细胞即可表达较高水平的ＩＬ－２,１８￣４８ｈ之间的ＩＬ－２分泌处于高峰     

Interleukin (IL) 4 counteracts the helper effect of IL2 on antigen-activated human B cells

We tested the effect of interleukin (IL) 4 on the specific IgM antibody response induced by trinitrophenylated-polyacrylamide beads (TNP-PAA) in cultures of human B cells. T cell help was provided by exogeneous IL2. IL4 profoundly suppressed the response to optimal concentrations (50 U/ml) of IL2, with a 50% inhibitory concentration of 6 U/ml. This was due neither to a shift in the kinetics nor to a switch to an IgG response. The production of anti-TNP antibody (as measured by an enzyme-linked immunosorbent assay in the culture supernatant) was inhibited to the same extent as the generation of plaque-forming cells. The effect of IL4 was completely abolished by a neutralizing antibody toward IL4. Kinetic studies showed that IL4 had to be present during the first 48 h of culture to fully inhibit the response. The sequential stimulation of B cells by antigen and by IL2 showed that IL4 does not negatively interfere with signaling through membrane Ig but counteracts the effect of IL2 on antigen-activated B cells.     

HCV核心蛋白在HepG2细胞中对COX-2表达的影响

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是否影响环氧化酶-2(COX-2)的表达。方法用PCR从含HCVH77株全长基因组序列质粒中扩增HCV核心蛋白基因,并克隆至pcDNA3.1载体中,构建HCV核心蛋白基因的真核表达载体HCV-C/pcDNA3.1。用HCV-C/pcDNA3.1和含COX-2启动子的荧光素酶报告载体COX2pro1.5kb/luc瞬时共转染HepG2细胞,测定萤火虫荧光素酶的活性,并用Westernblot检测COX-2蛋白的表达水平。结果成功地构建了HCV-C/pcD-NA3.1重组质粒。瞬时转染后的HepG2细胞中,COX2启动子荧光素酶的活性显著增强。Westernblot检测,发现COX-2的表达明显升高。结论HCV核心蛋白在HepG2细胞中激活COX-2启动子,并且明显诱导COX-2的表达,为进一步研究COX-2与HCV致病性的关系提供了新的实验依据。