用呼吸道合胞病毒亚单位疫苗粘膜免疫接种小鼠

作者评价了用纯化的呼吸道合胞病毒（RSV）融合(F）蛋白和霍乱毒素（CT）佐剂疫苗粘膜免疫接种小鼠的保护效力。 取4周龄小鼠进行实验。用于鼻内接种的10μl疫苗中含CT2.5μg、F蛋白3μg;肌肉接种的0.1ml明矾疫苗中含F蛋白3μg,用PBS作安慰剂。活病毒疫苗为2.5μl中含2×10~6空斑形成单位（PFU）病毒。在0和4周各免疫1次,8周时用RSV Long株5×10~6PFU攻击。病毒攻击后4天杀死小鼠,取血清,用酶免疫试验测定抗F蛋白和CT的IgG抗体,并作微量中和试验。无菌取鼻洗液,一部分立刻用HEp-2细胞滴定病毒滴度,一部分测定IgA。 动物共分9组,每组6只。实验结果表明,鼻内接种活RSV组血清中有高滴度抗F特异IgG具有强的中和力,鼻洗液中有IgA,病毒攻击后,所有小鼠均未检出病毒。鼻内和肌肉同时接种PBS组,无抗体产生,不能阻止病毒复制,鼻内病毒滴度为log_210.1±0.2PFU。鼻内或肌肉接种F蛋白组,鼻洗液中均无IgA,不能阻止病毒复制,但后者有血清抗体。鼻内和肌肉同时接种F蛋白组亦有高滴度血清抗体但无鼻洗液IgA,病毒复制力比PBS组低。鼻内单独接种CT组,虽无抗F抗体,但能轻度抑制病毒复制,鼻洗液中病毒滴度为log_26.8±2.2 PFU,每只小鼠皆查到病毒说明与免疫接种无关。鼻内接种F+CT组,血清中有高滴度F和CT特异性IgG并     

HSV-2全长gD DNA疫苗肌内途径的优越性和共同接种GM-CSF基因的增强作用

本文报道了分别用表达 2型单纯疱疹病毒 ( HSV- 2 )全长 g D或截短 g D( Δg D)的质粒p CDNAg D或 p CDNAΔ g D通过不同途径免疫小鼠 ,比较其诱导的体液和细胞免疫应答 ,并证明与粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子(GM- CSF)基因表达盒共同接种可增强HSV DNA疫苗的保护作用。　　每组 1 0只小鼠 ,在 0、1 5和 30天分别肌内 ( i.m.)或皮内 ( i.d.)接种 p CDNAg D或p CDNAΔg D 5 0μg,有些组还将 GM- CSF表达盒 30 μg与 p CDNAg D共同接种 ,末次接种后 1 5天 ,取血清、阴道洗液 ,用间接ELISA测定 Ig G,并分析亚型。通过测…     

小鼠胃肠外和粘膜免疫接种HSV-gD2DNA后产生淋巴集结特异性CD4~ 细胞和粘膜抗体应答

作者用含有表达 2型单纯疱疹病毒( HSV- 2 )全长糖蛋白 D基因的质粒 ( p HSV-g D2 ) DNA与促进 DNA体内转染的局部麻醉剂丁哌卡因制成 DNA疫苗 ,通过不同途径接种小鼠以确定免疫刺激的最适送递途径。　　取 6～ 8周龄雌性 Balb/c小鼠 ,每组 5只 ,分别经肌肉 ( im)、腹腔内 ( ip)、经口 ( po)、皮内 ( id)、阴道内 ( ivag)、鼻内 ( in)接种 2 0 μg疫苗 ,1个月时再加强 1次。末次接种后两周收集血清、阴道灌洗液和新鲜屎丸悬液 ,并取小肠碎片和淋巴集结 ( PP)作器官培养 ,收集培养 7天的上清液。用 EL ISA检测血清、粘膜分泌液和器…     

结合电穿孔术的肌肉DNA免疫可增强抗结核杆菌抗原的细胞及体液免疫应答

6组 B6 D2小鼠分别注射 1 0 0 μg、1 0 μg或 1μg插入了编码结核杆菌抗原 85B序列( ag85b)的 v1 Jns- tp A质粒或插入了编码牛分枝杆菌抗原 MPB70序列 ( mpb70 )的pc DNA3质粒 ,每个剂量注射两组小鼠 ,其中一组在 DNA注射时结合电穿孔术 ,另一组则不采用电穿孔术。对照小鼠注射盐水并结合电穿孔术。在注射 DNA后 4和 8周分别取小鼠血清 ,用 ELISA法检测其亚类抗体水平。　　取 6只 BALB/c小鼠注射 1 2 0μg插入了编码结核杆菌抗原 85A序列 ( ag85a)的VR1 0 2 0质粒 ,其中 3只结合电穿孔术。同样取 6只小鼠注射 1 0 0 μg编码…     

鼠疫组分疫苗免疫后小鼠血清抗体滴度检测与豚鼠效力观察

目的 根据对小鼠血清抗体滴度检测和对豚鼠的保护力观察,评估鼠疫组分疫苗的免疫效果.方法 通过氢氧化铝佐剂吸附15μg F1、15μg rV、15μg F1+15μg rV抗原,分别制成鼠疫单组分疫苗和双组分疫苗.采用2剂(0、2周)皮下接种途径,分别免疫NIH小鼠和豚鼠.以皮上划痕人用鼠疫活疫苗1剂免疫作为对照.免疫6周后,采用间接ELISA法检测小鼠血清IgG滴度,采用t检验作组间比较.与此同时,使用强毒鼠疫杆菌141株对豚鼠进行皮下攻击,以观察疫苗效力.结果 小鼠血清抗体检测结果表明,鼠疫组分疫苗组血清F1抗体或/和rV抗体滴度均高于鼠疫活疫苗组,差异有统计学意义(t=3.041、3.472、15.958、16.264,P值均＜0.01).豚鼠攻击试验结果显示,F1+rV组的存活率可达到90%(9/10),而F1组和rV组分别为50%(5/10)和20%(2/10).结论 鼠疫F1+rV双组分疫苗是有效的抗鼠疫疫苗,而单组分F1或rV鼠疫疫苗不能有效防御鼠疫杆菌攻击.     

日本血吸虫脂肪酸结合蛋白DNA联合白细胞介素-12的免疫保护作用

目的探讨白细胞介素-12(IL-12)对日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)DNA疫苗的辅佐作用。方法大量制备pVIVO2、pVIVO2 IL-12、pVIVO2-Sj14FABP质粒DNA。48只雄性Balb/c小鼠随机分为A、B、C、D组，每组各12只，每只小鼠于免疫前1 d在右后腿股四头肌肌内注射075%盐酸布比卡因30 μL。A组给予0.9%氯化钠注射液100 μL，im；B组给予pVIVO2质粒DNA 100 μg，im； C组给予pVIVO2-Sj14FABP质粒DNA 100 μg，im；D组给予pVIVO2-Sj14FABP质粒DNA 50 μg 和pVIVO2-IL-12质粒DNA 50 μg，im。免疫30 d后，每只小鼠以(40±2)条尾蚴感染，感染45 d后，计数成虫及肝内虫卵；用ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体水平。结果C、D组的减虫率分别为24.11%和38.83%,减卵率为27.20%和40.27%，差异有显著性（P＜0.05）；免疫30 d后小鼠血清IgG水平无明显升高，各组间差异无显著性 (P＞005)。结论pVIVO2-Sj14FABP能够诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力，IL-12是一种有效的血吸虫病DNA疫苗佐剂。     

质粒DNA的鼻腔吸收和生物分布

近来 ,在基因疫苗和基因治疗领域 DNA疫苗鼻腔途径接种受人关注。本文报道了质粒 DNA鼻内接种的吸收动力学和程度 ,以及 DNA质粒在淋巴结和各器官中的分布。　　作者以编码 β半乳糖苷酶基因的质粒DNA为研究模型质粒。将模型质粒 DNA鼻内接种 6～ 8周龄 BALB/c小鼠 ,每只小鼠接受 50μg质粒 DNA,于接种后不同时间取血清、器官、鼻组织、肌肉和淋巴结 ,用定量聚合酶链反应 (PCR)测定质粒 DNA含量。　　结果表明 ,质粒 DNA鼻内接种后 5分钟被吸收进入系统循环 ,此时的血清浓度为1 50± 83 pg/ml,接种后 90分钟血清浓度达到高峰 ,…     

淋球菌NspA核酸疫苗小鼠体内诱生保护性抗体研究

目的进一步研究前期构建淋球菌NspA真核细胞表达质粒pcNspA作为淋病核酸疫苗的可行性。方法将pcNspA分别通过肌内注射(IM)、滴鼻(IN)和阴道接种(IVAG)等3种途径免疫BALB/c小鼠,对免疫鼠的血清、支气管肺泡和阴道洗液等样品分别用间接ELISA检测淋球菌特异性抗体的类型和效价,比较不同接种途径刺激小鼠体内特异性抗体水平的差异以及相应抗体的体外溶菌活性。结果 pcNspA质粒经滴鼻免疫和肌内注射均可在小鼠体内诱导产生较高的特异性体液免疫水平,尤其是滴鼻免疫途径不仅可诱生较高水平的血清IgG抗体(1∶1600),而且在支气管肺泡洗液和阴道洗液中均可检测到特异性sIgA的存在。而阴道接种pcNspA质粒仅能在阴道局部检测到较低水平的特异性sIgA。用pcNspA质粒诱生的血清IgG抗体做体外溶菌活性实验,证实滴鼻免疫小鼠血清具有溶菌活性。结论淋球菌NspA基因疫苗可在小鼠体内诱导产生特异性抗体,并对机体有免疫保护作用;滴鼻可能是淋球菌NspA核酸疫苗的一个有效接种途径。     

豚鼠接种重组单纯疱疹病毒糖蛋白D和佐剂后能抵抗阴道感染

作者将0.1μg或1.0μg重组2型单纯疱疹病毒（HSV-2）糖蛋白D（gD-2t）置于佐剂SAF-m（Syntex佐剂配方-m）或盐水中,分别于0和28天皮下接种Hartley品系雌性豚鼠（5周龄,300～350g）。另两组豚鼠接种SAF-m或不接种作为对照。第2次接种后2周用HSV-2MS株作阴道内攻击。 结果表明,接受gD-2t和SAF-m的豚鼠产生的抗gD-2t抗体滴度高于接受gD-2t和盐水的豚鼠。在免疫接种后65天,前者的抗体滴度达到高峰,为12万～32万。另外,接种gD-2t和SAF-m的豚鼠只产生轻微的阴道     

单纯疱疹病毒糖蛋白治疗复发性生殖器疱疹

作者用豚鼠生殖器单纯疱疹病毒(HSV)感染模型探讨了HSV糖蛋白免疫治疗复发性HSV病的可能性。给阴道内接种HSV-2的58只豚鼠(350～400g)饮用加有无环鸟苷(5μg/ml)的饮水,自接种后12小时开始,连饮10天,使之康复。遂将它们随机分为对照组和治疗组。逐日检查动物HSV病复发的证据。作者用两种糖蛋白进行免疫:一种为从感染的Vero细胞中获得的HSV-2糖蛋白混合     

对2型单纯疱疹病毒糖蛋白亚单位疫苗的宫颈抗体应答[英]

作者选择18～55岁、无生殖器疤疹史的未孕女性作为试验对象,其中18人单纯疱疹病毒(HSV)血清阴性,20人HSV-1血清阳性。分别在0、28和180天肌注含佐剂的重组HSV-2糖蛋白gB2和gD2疫苗各30μg,其中14名HSV血清阴性和16名HSV-1血清阳性者在1年后又注射第4剂疫苗。在0、28、42、90、180、194、270和360天以及第4剂后14天取宫颈分泌物,分别与经电泳的重组gB2或gD2抗原带反应,用增强的化学发光蛋白印迹法（ECL-WB）检测lgG和IgA,并用免疫印迹试验测定抗体滴度。     

HIV-1 DNA-单磷酰脂质A佐剂疫苗鼻内与肌肉免疫的比较

最近作者对1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)DNA疫苗接种的研究证明,从细菌脂多糖取得的单磷酰脂质A(MPL)免疫佐剂可有效增强抗原特异性免疫力.免疫对象为BALB/c小鼠,DNA疫苗用pCMV160ⅢB和pCREV(ⅡB/REV)构建,使用稳定乳剂中的MPL(MPL-SE)作佐剂.肌肉免疫方法为:ⅢB/REV各2μg(总量4μg)溶于灭菌PBS,加(或不加)50μl MPL-SE,在小鼠股二头肌注射100μl疫苗.鼻内免疫的DNA剂量相同,仅MPL-SE改为5和20μl.用乙醚麻醉小鼠后,将30μl疫苗渐渐滴入小鼠鼻孔,让小鼠用自然方式吸入.肌肉和皮内途径均只接种1次.用ELISA检测血清IgG、IgG1和IgG2a及粪便中分泌性IgA(SIgA)滴度;用小鼠足垫试验评估迟发型超敏(DTH)反应;用标准~51Cr释放试验测定免     

口服可生物降解微球后唾液、肠道、阴道和鼻腔中的抗体应答

作者用聚丙交酯和乙交酯共聚物(PLG)制成微球包裹不同剂量的卵清蛋白(OVA).于0和4周用微球经口免疫雌性BALB/c 小鼠,初免和加强免疫均为连续口服3天.于初免后2、4、6和8周取小鼠唾液、肠道和阴道洗液及血清,用ELISA法测定IgA、IgG抗体.并于初免后1、5、9和13周取小鼠唾液腺和鼻粘膜组织.用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测抗体形成细胞(AFC).对照小鼠则口服可溶性抗原.结果显示,可溶性抗原初免或加强免疫后,血清中均未测得IgA抗体,IgG抗体可于第8周测得;初免含抗原微球后2周小鼠产生显著的血清IgA抗体应答,加强免疫后应答显著增强,8周时达最高峰,IgG抗体滴度也明显高于对照组.可溶性抗原初免后,可在小鼠唾液中检得IgA抗体,加强免疫后抗体滴度升高;而试验组小鼠2次免疫后的唾液IgA抗体均明显高于对照组.可溶性抗原免     

全面防御流感、单纯疱疹、呼吸道合胞病毒共同感染的联合疫苗

为确定由甲型流感病毒血凝素 ( INF-HA)和核蛋白 ( NP)、1型单纯疱疹病毒糖蛋白 D( HSV1 - g D)、呼吸道合胞病毒糖蛋白 F( RSV- F)基因构成的联合疫苗的保护效果作者将 6～ 8周龄雌性 Balb/c小鼠随机分入试验组和对照组 ,试验组于 0、3、6周接种联合基因疫苗 ,对照组按同样免疫程序接种无抗原质粒 ( p CMVi- tpa)、p CMVi- RSV- F或p CMVi- Flu。全程免疫后采血 ,用 ELISA法检测血清中特异性 Ig G抗体 ;免后 1 4～ 2 1天 ,各组用 Flu、HSV、RSV、肺炎支原体( MP)单独或联合攻击 ,观察小鼠的行为改变和死亡率 ;用免疫组…     

麻疹DNA疫苗的成功免疫

作者将编码麻疹病毒 ( MV)血凝素 ( H)和融合 ( F)糖蛋白的 DNA质粒疫苗在恒河猴模型中作了免疫应答、保护力及安全性试验。　　将 1 4只猴子分为 5组 ,( 1 ) F质粒皮内注射 50 0 μg,2只 ;( 2 ) H质粒皮内注射50 0 μg,3只 ;( 3) H+ F质粒 ,皮内注射各50 0μg,3只 ;( 4) H质粒 8μg,基因枪接种 ,3只 ;( 5) H+ F质粒 ,各 8μg,基因枪接种 ,3只。另有 2只猴子注射麻疹减毒活疫苗作为对照。　　蚀斑减少中和试验表明 ,单剂 DNA疫苗可在所有猴子中诱生中和抗体。抗体产生的时间过程和中和作用水平各 DNA疫苗组相似 ,且抗体水平保持稳定…     

接种编码乙型脑炎病毒E糖蛋白的质粒DNA可提供显著保护作用

作者构建了单独编码乙型脑炎病毒(JEV)包膜 (E)糖蛋白的 DNA质粒 p CMX-ENV,该质粒转染 Vero细胞后可在细胞内表达 E蛋白。作者就其在小鼠肌内 (im)和鼻内 (in)接种对脑内 (ic) JEV攻击的防御作用进行了研究。　　对 4～ 6周龄异系交配瑞士雄性小鼠间隔两周在四头肌 im接种 5 0 μg DNA质粒 ;或间隔 1周共五次 in接种 2 0 μg DNA质粒。末次接种后两周 ,用 JEV P2 0 788株作 ic攻击(1 0 0 pfu/鼠 ) ,每日观察至攻击后 1 5天。　　经 im免疫 p CMXENV的小鼠的存活率为 33%～ 70 % ,总体存活率为 5 1± 1 2 %。经 in免疫 p CMX…     

接种重组单纯疱疹病毒糖蛋白对初发和复发生殖器疱疹的防御作用

本文报道了植物血凝素纯化的单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白混合物和克隆的HSV-1糖蛋白B(gB)和D(gD)接种豚鼠后,对原发和复发生殖器疱疹的防御作用。作者将80只350～400g雌性豚鼠分成9组;于后足垫接种0.1ml不同疫苗:Ⅰ组为未免疫对照组;Ⅱ组接种32μg含弗氏完全佐剂(CFA)的正常细胞蛋白提取物;Ⅲ和Ⅳ组分别接种10μg和     

口服连接于霍乱毒素A2/B亚单位的细菌蛋白抗原后的血清与唾液抗体应答持久性

作者通过采用将编码粘膜免疫原的基因融合到霍乱毒素(CT)A2亚单位基因(A2亚单位与一种有效免疫增强因子CTB亚单位相连)的方法开发了一种适合口服免疫的方案.用于评估的基于非毒性CTA2/B构建体的口服免疫原来自于变异链球菌AgⅠ/Ⅱ粘附素的唾液结合区(SBR).SBR与CTA2/B相连构成SBR-CT~(△Al).口服接种证实这种抗原有免疫原性,可诱生高水平的抗AgⅠ/Ⅱ分泌性IgA(S-IgA)及血清IgG抗体.作者对小鼠口服SBR-CT~(△Al)抗原后产生的抗AgⅠ/Ⅱ粘附素抗体应答进行了评估.第1组5只小鼠,口服3剂100μgSBR-CT~△Al及μg完整CT(作为佐剂);第2组3只小鼠,仅口服3剂SBR-CT~△Al;第3组6只小鼠,口服缓冲液作为对照.于末次免疫后11个月收集唾液和血清标本,并用100μgSBR-CT~(△Al)胃内加强接种所有小鼠,同时给予第1组小鼠及半数对照组小鼠CT佐剂5μg.于加强免疫后7天收集血清和唾液标本,用ELISA测定抗体应答.     

DNA介导的HBsAg免疫:初次应答的持久性和加强接种的效果

作者报道在巨细胞病毒立即早期启动子控制下,构建了编码乙型肝炎病毒(HBV)的小(S)、中(S2+S)和大(S1+S2+S)包膜蛋白的质粒DNA表达载体,分别称为pCMV-S、pCMV-S1.S和pCMV-S1.S2.S.以pCMV-S 100μg对6～8周龄C57BL/6小鼠肌肉接种后1个月,产生的ELISA抗体滴度超过10~4,3个月时峰值为4×10~4左右,直到74周时仅稍有降低.如对成年小鼠(29周龄)免疫DNA,则抗体滴度峰值稍低(10~4),但至少可维持45周.此类成年小鼠,如以HBsAg蛋白免疫,则抗体滴度仅为10~2,以DNA免疫幼鼠和成鼠的抗体滴度分别相当於1000和100mIU/ml,成年小鼠以蛋白免疫者抗体滴度≤1mIU/ml.     

截短的HCV核心蛋白DNA疫苗在小鼠诱导迟缓但强烈的免疫应答

将编码丙型肝炎病毒 ( HCV)核心蛋白 1～ 1 76位氨基酸的 DNA片段插入真核表达质粒载体 p AEC- K6 ,得到质粒 p IDKCo。以 6～ 8周龄雌性 BAL B/c小鼠为动物模型 ,实验组和对照组各 6只。实验组于四头肌注射p IDKCo,对照组注射空载体 p AEC- K6。两组小鼠分别在 0、3、7、1 4和 2 1周注射质粒1 0 0μg。在初次免疫后的 0、2、4、6、8、1 0、1 2、1 6、2 3及 2 7周取小鼠血清 ,用含 HCV核心蛋白 1～ 1 2 0位氨基酸的重组蛋白 Co.1 2 0作为捕获抗原 ,用 EL ISA和竞争 ELISA检测小鼠血清的抗 HCV核心抗体 ,并还用Co.1 2 0作…