氯化血红素对大鼠局灶性脑缺血组织的作用探讨

目的探讨氯化血红素(Hemin)在局灶性脑缺血脑组织中作用及其诱导脑红蛋白(Ngb)表达的可能机制.方法将SD大鼠随机分为3组(n=20),分别为假手术对照组、手术组、Hemin处理组,3组大鼠于术后24 h检测脑含水量、脑梗死体积、观察组织病理学改变,免疫组织化学技术了解脑红蛋白表达情况.结果 Hemin处理组脑含水量、脑梗死体积较手术组有显著性差异(P<.05).病理切片观察,Hemin处理组水肿程度较手术组减轻,变性神经元数量较手术组减少.免疫组化分析,Hemin处理组脑红蛋白阳性神经元数量较手术组增多.结论 Hemin能减轻局灶性脑缺血时脑组织的损伤,其可能通过诱导脑红蛋白表达达到脑保护作用.     

脑红蛋白在脑缺血大鼠中的动态表达及脑保护作用

目的:研究脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)在大鼠脑缺血模型中的动态表达及缺血缺氧后Ngb的脑保护作用.方法:将SD大鼠随机分为4组.即大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)组、出血性脑梗死(HI)组、氯化血红素(Hemin)干预组和假手术组,以建模后3、6、12、24 h为观察点,测定脑组织含水量、脑梗死体积,H-E染色观察组织病理学改变,免疫组化染色观察Ngb的表达.结果:Hemin处理组脑组织含水量、脑梗死体积较MCAO组和HI组有显著性差异(P<0.01);HI组脑水肿在12 h显著升高;病理切片观察,Hemin处理组水肿程度及变性神经元数量较MCAO组和HI组减轻;免疫组化分析,Hemin处理组Ngb阳性神经元数量较MCAO组和HI组增多.结论:HI组脑水肿高峰提前可能导致原有病情的加重,应用Heroin诱导Ngb的表达,可减轻局灶性脑缺血时脑组织的损伤,从而达到脑保护作用.     

脑红蛋白在脑梗死大鼠脑组织中的表达及其神经保护作用机制

目的：观察脑梗死大鼠脑组织中脑红蛋白（Ngb）的表达及其对PI3K/Akt 信号通路的影响,探讨二者在缺血性脑损伤中的作用及Ngb神经保护作用的可能机制。方法：60只SD大鼠随机分为假手术组、缺血组、Hemin（Ngb 诱导剂）组、LY（PI3-K/Akt抑制剂LY294002）组和Hemin＋LY组,每组12只。应用大脑中动脉线栓法制备脑梗死动物模型,术后24 h观察各组大鼠神经功能评分和脑组织梗死体积;应用RT-PCR法检测各组大鼠脑组织Ngb mRNA表达水平及PI3-K/Akt活性。结果：假手术组未见TTC不着色区,未检出神经功能缺损。与缺血组比较,Hemin组大鼠脑组织中Ngb和Akt mRNA表达水平升高（P<0.01）,神经功能评分降低（P<0.05）,脑梗死体积减小（P<0.01）;与缺血组比较,LY组大鼠脑梗死体积增加（P<0.01）,神经功能评分升高（P<0.05）,Akt mRNA表达水平降低（P<0.01）,Ngb无明显变化。与Hemin组比较,Hemin＋LY组大鼠脑组织损伤加重,Akt mRNA表达水平明显降低（P<0.01）,Ngb未被抑制。结论：Ngb可以减小局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积,改善神经功能,并且可能通过PI3K/ Akt信号通路发挥神经保护作用。     

Hemin对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑保护作用的研究

目的观察氯化高铁血红素(Hemin)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织中脑红蛋白(Ngb)表达的影响,探讨Hemin的脑保护作用及机制。方法将7 d龄新生SD大鼠90只随机分为假手术组、HIBD组、HIBD+Hemin组共3组。采用结扎左颈总动脉、低氧诱导(8%氧气,32℃)2 h方法建立HIBD模型。HIBD建模后2 h,HIBD+Hemin组腹腔注射Hemin(50 mg/kg),假手术组与HIBD组腹腔注射生理盐水。24 h后处死取脑,分别行脑梗死体积百分比测定、荧光定量(RT-PCR)检测Ngb mRNA表达、免疫组化分析Ngb表达。结果 HIBD组和HIBD+Hemin组脑梗死体积百分比、Ngb mRNA和Ngb表达均较假手术组显著上升(P<0.01);与HIBD组比较,HIBD+Hemin组Ngb mRNA和Ngb表达均增加,而脑梗死体积百分比明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Hemin可减轻新生鼠的缺氧缺血性脑损伤,其机制可能是通过上调Ngb的表达发挥作用。     

脑缺血后脑红蛋白的保护作用及信号转导机制

目的 观察脑红蛋白(Ngb)的神经保护作用并探讨其与磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3-K/Akt)信号通路的关系.方法 健康雄性SD大鼠随机分为5组(n=12):①假手术组,②缺血组,③Hemin组,④LY(LY294002)组,⑤Hemin+ LY组,应用大脑中动脉线栓法(MCAO)制作大鼠局灶性脑缺血模型,评定大鼠神经功能并计算脑梗死体积,Western blot方法检测Ngb蛋白表达和PI3-K/Akt活性变化.结果 脑缺血后Ngb蛋白表达增加,Hemin可诱导Ngb高表达,磷酸化Akt (pAkt)水平亦同时升高,脑梗死体积减小,神经功能改善;LY294002特异性阻断了PI3-K/Akt信号通路的活化,加重了脑损伤,不能抑制Ngb表达.结论 细胞存活信号通路PI3-K/Akt可能介导了脑缺血后Ngb的神经保护作用.     

远隔缺血预适应对大鼠局灶性脑缺血后诱导型一氧化氮合酶的影响

目的：研究远隔缺血预适应（ remote ischemic preconditioning,RIPC）对大鼠脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达的影响,以探讨 RIPC 保护脑缺血损伤的相关机制。方法应用线栓法制作大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,将21只健康雄性 SD 大鼠采用数字表法随机分为3组：假手术组（sham,n=7）,MCAO 组（n=7）,RIPC＋MCAO 组（n =7）。在 MCAO 手术前连续3 d,进行远隔肢体缺血预适应处理（双侧股动脉夹闭10 min/放开10 min,每天3次）。在缺血2 h-再灌注24 h 后进行神经功能评分,TTC 染色检测脑梗死体积,采用 Western blotting 方法检测梗死侧脑组织的 iNOS 蛋白表达水平。结果1）在 MCAO 手术过程中,3组实验动物的生理指标均在正常范围内,且组间差异无统计学意义。与 sham 组相比,MCAO 组大鼠再灌注24 h 时神经功能缺损评分显著升高、脑梗死体积明显增大（P〈0.05）。而 RIPC＋MCAO 组大鼠神经功能较 MCAO 组大鼠得到明显改善、脑梗死体积显著减少（P〈0.05）。2）再灌注24 h 时,与 sham 组相比,MCAO 组大鼠脑梗死侧 iNOS 蛋白表达显著增加（P〈0.05）。与 MCAO 组相比,RIPC＋MCAO 组大鼠脑梗死侧 iNOS 蛋白表达显著降低（P〈0.05）。结论 RIPC 处理对大鼠脑缺血损伤具有保护作用,其机制与降低脑缺血大鼠脑内 iNOS 蛋白表达有关。     

马来酸桂哌齐特预处理对脑缺血大鼠MAPK信号转导通路的影响

目的观察马来酸桂哌齐特预处理对脑缺血大鼠胞外信号调节激酶（ERK）1／2和p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）表达的影响,并探讨该药物的脑保护作用。方法将SD大鼠随机分为马来酸桂哌齐特预处理脑缺血手术组（给药手术组）、生理盐水预处理脑缺血手术组（对照手术组）和马来酸桂哌齐特预处理非手术组（给药非手术组）,每组30只,预处理时间均为5d。对两手术组大鼠行改良线栓法手术建立左侧大脑中动脉阻塞脑缺血模型,分别于术后8、24、72h断头取脑,切取左侧（缺血侧）及右侧相应脑组织,Westernblotting检测各时间点双侧脑组织中ERKl／2和p38MAPK表达及其磷酸化水平（p-ERKl／2和p-p38MAPK表达）。结果各组大鼠脑组织中ERKl／2和p38MAPK总蛋白的相对表达量比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。与给药非手术组比较,给药手术组和对照手术组术后8h左侧（手术侧）脑区的p-ERK1／2蛋白相对表达量均显著上调,术后24h和72h的p-ERKl／2蛋白相对表达量均显著下调,差异均有统计学意义（P〈0．05）。与给药非手术组比较,给药手术组和对照手术组术后8、24、72h左侧脑区的p-p38MAPK蛋白相对表达量均显著上调,且对照手术组高于给药手术组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论马来酸桂哌齐特可能在脑缺血早期发挥脑保护作用。     

复方蒲黄颗粒对大鼠脑缺血再灌注后GFAP表达的影响

目的研究复方蒲黄颗粒对大鼠脑缺血再灌注后胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）表达的影响。方法实验采用90只清洁级SD大鼠,随机分为6组（每组15只）：假手术组（Sham组）,模型组（I/R组）,复方蒲黄大剂量组（PHH组）,复方蒲黄中剂量组（PHM组）,复方蒲黄小剂量组（PHL组）,脑血栓片组（NXS组）。采用右侧颈总动脉夹闭手术,建立大鼠脑缺血再灌注模型,分别在术后6 h、24 h、72 h,运用TTC染色计算脑梗死体积,运用免疫组化方法检测脑组织GFAP的动态变化。结果GFAP的表达呈现随时间增加而增长,与I/R组相比较,PHH组、PHM组在术后24 h、72 h表达增长显著增加（P〈0.05）。结论复方蒲黄颗粒能够有效减小大鼠脑缺血再灌注后脑梗死体积,调节脑缺血再灌注损伤后GFAP蛋白表达,以大、中剂量作用最为显著,这可能是本方对全脑保护的重要疗效机制之一。     

电针对脑缺血大鼠缺血皮质区内皮型一氧化氮合酶及血清中一氧化氮含量的影响

目的 观察电针对大脑中动脉缺血大鼠缺血皮质区内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）及一氧化氮（nitric oxide,NO）的调控作用。方法 取SPF级健康雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组14只,利用改良线栓法制备脑缺血大鼠模型,电针组选取“百会”“风府”“内关”“心俞”4个穴位,从第1天术后4 h开始治疗,每日1次,共治疗7 d。干预结束后,比较各组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、脑缺血皮质区细胞病理表现、缺血皮质区eNOS蛋白的表达、血清NO的含量。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损体征明显（P<0.05）,梗死范围显著,脑缺血皮质区eNOS蛋白表达显著下降（P<0.05）,血清NO含量升高（P<0.05）;与模型组比较,电针组大鼠神经功能缺损评分降低（P<0.05）,脑梗死体积明显缩小（P<0.05）,脑皮质缺血区eNOS蛋白表达水平显著上升（P<0.05）,血清NO含量升高（P<0.05）。结论 电针可促进局灶性脑缺血大鼠神经功能的恢复并缩小脑梗死体积,其机制可能与调控血管新生相关因子eNOS、NO表达增多有关。     

针刺大椎、百会、人中穴对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点海马脑红蛋白表达的影响

目的观察针刺大椎、百会、人中穴对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点海马脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)表达的影响,探讨其脑保护作用的部分作用机制。方法采用线栓法制备MCAO模型,将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、对照点组、穴位组4大组,每组再根据再灌注后时间分为24 h、72 h组,每组5只。完成治疗后,先行神经功能缺损评分再处死大鼠,再采用Western Blot法检测大鼠缺血侧海马Ngb的表达水平。结果神经功能缺损评分:与假手术组比较,模型组、对照点组及穴位组神经功能缺损评分均升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);模型组、对照点组、穴位组三组神经功能缺损评分差异无统计学意义(P0.05)。与24 h组比较,72 h模型组神经功能缺损评分差异无统计学意义(P0.05);72 h对照点组及穴位组神经功能缺损评分均下降,差异有统计学意义(P0.05)。Ngb:与假手术组比较,模型组Ngb的表达水平明显降低(P0.01);与模型组比较,对照点组及穴位组Ngb的表达水平均明显升高(P0.01);与对照点组比较,穴位组Ngb的表达水平有升高,但差异无统计学意义(P0.05)。与24 h组比较,72 h假手术组、模型组及对照点组Ngb的表达水平均有下降,但差异无统计学意义(P0.05);72 h穴位组Ngb的表达水平下降明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论针刺能降低脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损评分,并可上调海马Ngb的表达水平,从而实现脑保护作用。     

基于p38 MAPK信号通路探讨电针百会、水沟穴对脓毒性脑病大鼠的脑保护作用

目的:从脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)正性调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路探讨电针百会、水沟穴对脓毒性脑病大鼠脑保护作用及其可能机制。方法:采用经盲肠结肠穿孔(CLP)造模成功的脓毒症大鼠,通过观察大鼠神经行为学改变制作脓毒性脑病模型。随机选取造模组大鼠,分为模型组和电针24 h组、电针72 h组,每组10只;假手术组10只作为对照组。电针24 h组和电针72 h组在造模成功后开始采用电针百会、水沟穴电针治疗,每12 h治疗30 min;其余组不实施电针治疗。分别治疗24 h和72 h后,对大鼠进行神经行为学评分;取大鼠脑组织,行免疫组化检测大鼠脑组织Ngb,采用Western blot分别检测Ngb、p38 MAPK蛋白表达水平。结果:电针组大鼠神经行为学评分均显著高于模型组(P0.01)。与假手术组比较,模型组的Ngb免疫阳性表达、Ngb及p38 MAPK蛋白表达水平均明显升高(P0.01);与模型组比较,电针24 h组及72 h组Ngb阳性表达、Ngb及p38 MAPK蛋白表达水平也均明显升高(P0.05,P0.01)。结论:电针百会、水沟穴对脓毒性脑病大鼠具有脑保护作用,其机制可能与上调脑组织Ngb表达,从而正性调控p38 MAPK信号通路、促进神经元突起生长相关。     

重组质粒pCDNA3.1(+)/Ngb对局灶性脑缺血大鼠脑保护作用的研究

目的 研究重组神经球蛋白表达质粒pCDNA3.1( )/Ngb对缺血中的脑保护作用.方法 54只雄性大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、空质粒组和重组神经球蛋白组,每组18只分别于皮质区两部位注射生理盐水、质粒pCDNA3.1( )和重组质粒pCDNA3.1( )/Ngb,并于注射后24 h采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血24 h模型.采用TTC染色、原位细胞凋亡检测、间接免疫荧光法和Western blot检测各组大鼠脑梗死面积,神经细胞凋亡状况和bcl-2蛋白表达变化.结果 经重组质粒pCDNA3.1( )/Ngb处理的大鼠,其脑梗死面积和注射处缺血半暗带凋亡细胞数较其他两组显著减少(P＜0.01),注射处缺血半暗带bcl-2阳性细胞面积百分比显著增高(P＜0.01),bcl-2蛋白的表达上升约40%～50%.结论 质粒pCDNA3.1( )介导大鼠神经球蛋白基因转入脑内可通过上调bcl-2蛋白表达抑制局灶性脑缺血神经细胞凋亡,起到局灶性脑缺血脑保护作用.     

EPO对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑红蛋白表达的影响

目的观察促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑红蛋白(Neuroglobin,Ngb)表达的影响。方法选用60只健康雄性SD大鼠为研究对象,制备缺血再灌注损伤模型。采用随机区组设计将大鼠分为非治疗组(N-T组30只)、EPO治疗组(T组30只)。其中治疗组再按EPO不同剂量分为三个亚组(EPO1组、EPO2组、EPO3组)。EPO治疗组缺血再灌注损伤2h后分别注射EPO1000u/Kg,3000u/Kg以及5000u/Kg,24h后所有受试对象均处死取脑。应用免疫组织化学技术检测脑缺血再灌注后Ngb的表达情况。结果EPO治疗组Ngb表达明显高于非治疗组,差异具有统计学意义(t=112.205,P=0.000);EPO治疗组不同亚组之间随着EPO剂量的增大,Ngb的表达呈递增趋势,三组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05),且与EPO治疗剂量呈正相关(rs=0.872,P=0.000)。结论大鼠脑缺血再灌注损伤后采用EPO治疗能促进Ngb的表达。     

miRNA-155在大鼠脑缺血/再灌注损伤早期大脑皮层组织中的表达及其意义

目的：探讨微小RNA-155（miRNA-155）在大鼠脑缺血/再灌注损伤早期大脑皮层组织中的表达,初步阐明miRNA-155对脑缺血/再灌注损伤的影响。方法：48只健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组和脑缺血/再灌注组,每组24只。脑缺血/再灌注组通过Longa等改良线栓法栓塞大鼠右侧大脑中动脉建立脑缺血/再灌注模型,假手术组大鼠只分离血管。采用TTC染色评估各组大鼠脑缺血梗死体积,采用qRT-PCR法检测各组大鼠脑皮层组织中miRNA-155表达水平。结果：与假手术组比较,再灌注24、48和72h时脑缺血/再灌注组大鼠脑缺血梗死体积明显增大（P<0.05）,并且随着再灌注时间延长,脑缺血梗死体积逐渐减少。与假手术组比较,再灌注24、48和72 h时脑缺血/再灌注组大鼠脑皮层组织中miRNA-155表达水平明显升高（P<0.05）,并且随着灌注时间延长,表达水平逐渐降低。结论：在大鼠脑缺血/再灌注早期大脑皮层组织中miRNA-155高表达,其参与了脑缺血/再灌注损伤过程。     

大鼠脑组织缺血后Ngb mRNA表达与缺血时间推断的研究

目的 探讨大鼠脑组织缺血后不同时间脑红蛋白（Ngb）mRNA表达及法医学意义。方法 建立Wistar大鼠脑组织缺血模型，应用一步法逆转录-聚合酶链式反应（one step RT-PCR）技术与计算机图像分析技术检测脑组织缺血后不同时间Ngb mRNA表达的差别。结果 脑缺血后Ngb mRNA表达迅速升高，缺血1min达高峰，缺血5min表达迅速降低，但仍高于假手术组水平，10min后随缺血时间延长表达再度逐渐增强。结论大鼠脑组织缺血后Ngb mRNA的表达呈现时相性的变化，可在法医实践中用于早期脑缺血时间的推断。     

原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织神经生长因子表达的影响。方法SD大鼠48只随机分4组：假手术组、缺血再灌注模型组、GSP大剂量组、GSP小剂量组，每组12只，应用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型，术后观察动物神经行为学变化并进行神经病学评分，采用免疫组织化学染色检测各组半暗带区颞顶部脑皮质神经生长因子的表达。结果神经功能评分显示模型组有明显的神经功能缺损症状，GSP用药组神经功能评分明显低于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）；与模型组比较，各GSP组神经生长因子的表达明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论原花青素可上调脑缺血再灌注后缺血脑组织内源性神经生长因子的表达，而起到脑保护作用。