DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2''''-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人食管癌细胞株Eca109增殖作用的影响.方法应用不同浓度(10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR,于不同作用时间(24～168 h) 处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-aza-CdR作用下Eca109细胞株的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化.结果不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞株生存率差异有统计学意义(P＜0.05);同一药物浓度不同作用时间组之间(24～96 h)的细胞生存率差异也有统计学意义(P＜0.05),且96 h时对人食管鳞癌细胞株Eca109生长抑制作用最明显.形态学观察显示癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块.结论5-aza-CdR有抑制人食管癌细胞株Eca109生长的作用,抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性;并且干预后癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态改变.     

DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2＇-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

目的：探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对人食管癌细胞株Eca109增殖作用的影响.方法：应用不同浓度（10^-7、10^-6、10^-5、10^-4 mol/L）的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR,于不同作用时间（24～168 h） 处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定5-aza-CdR作用下Eca109细胞株的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化.结果：不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞株生存率差异有统计学意义（P＜0.05）;同一药物浓度不同作用时间组之间（24～96 h）的细胞生存率差异也有统计学意义（P＜0.05）,且96 h时对人食管鳞癌细胞株Eca109生长抑制作用最明显.形态学观察显示：癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块.结论：5-aza-CdR有抑制人食管癌细胞株Eca109生长的作用,抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性;并且干预后癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态改变.     

体外培养的人体食管癌细胞与食管癌细胞形态学的比较研究

本文报道体外培养的人体食管癌Eca109细胞与食管癌病人癌细胞涂片所作细胞形态学比较研究结果。所用Eca109细胞系经300代以上传代,而食管癌细胞涂片采自50名病人。结果表明Eca109细胞与拉网法获得的鳞癌细胞相比,前者具备不少后者的细胞形态特征,诸如:细胞边界清楚,恶性核结构,胞核的中央位,胞浆匀实,位于核周围的胞浆退化性空泡,出现典型的鳞癌细胞,出现“封入细胞”等。结论是Eca109细胞仍保持食管鳞状上皮癌细胞形态特征,并根据细胞形态特征,认为Eca109细胞属中分化鳞癌细胞。Eca109细胞具较     

云芝多糖-B对人食管癌细胞Eca109转移的影响

【目的】 应用新型云芝多糖-B(CVPs-B)作用食管鳞癌Eca109细胞,探讨其对Eca109细胞转移特性的作用?【方法】 Western blot检测CVPS-B作用后,食管鳞癌Eca109细胞CXCL12蛋白表达的变化,Transwell侵袭实验评估食管癌细胞侵袭能力的变化,MTT法观察食管癌细胞与Matrigel胶黏附能力的变化,划痕法检测食管癌细胞迁移能力的变化?【结果】 实验组Eca109细胞CXCL12蛋白表达水平较对照组显著降低(P < 0.05)?CVPs-B孵育后,食管癌Eca109细胞黏附?侵袭及迁移能力下降?【结论】CVPs-B降低食管癌细胞CXCL12蛋白表达,有效抑制食管癌Eca109细胞的转移潜能,提示CVPs-B可能可以通过CXCL12/CXCR4通路抑制食管鳞癌细胞转移特性?     

人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:探讨6种人食管鳞癌细胞株KYSE150,KYSE510,TE13,EC9706,CaEs17和EC109中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;观察特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对存在甲基化的细胞株RIZ1基因的转录调控作用及其对该细胞生长增殖的影响。方法:甲基化特异PCR(MSP)法检测6种人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;实时定量PCR法检测5-Aza-CdR处理前后RIZ1基因启动子区CpG岛高度甲基化的人食管鳞癌细胞株TE13中RIZ1 mRNA表达量的变化;MTT法检测5-Aza-CdR对TE13细胞生长增殖的影响。结果:(1)6种人食管鳞癌细胞株中TE13,CaEs17,EC109三株细胞RIZ1基因启动子区存在甲基化;(2)5-Aza-CdR处理细胞株TE13后,RIZ1 mRNA表达量上调;(3)5-Aza-CdR能抑制TE13的生长增殖,并随时间的延长和浓度的增加抑制作用变明显。结论:启动子区CpG岛高度甲基化是人食管鳞癌细胞株TE13 RIZ1基因表达沉默的重要原因;5-Aza-CdR能使TE13 RIZ1 mRNA表达上调;并能抑制TE13细胞的生长增殖,并呈时间和浓度依赖性。     

阿司匹林对食管鳞癌细胞株致凋亡的作用及对烟草提取物作用的影响

目的研究非选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂阿司匹林对食管癌细胞株EC109凋亡的影响,观察烟草提取物对食管癌细胞株EC109的增生作用及阿司匹林对其增生及凋亡作用的影响。方法用流式细胞仪检测细胞凋亡。噻唑蓝(MTT)比色法测定烟草提取物对食管鳞癌细胞株的增生作用。结果阿司匹林诱导EC109细胞凋亡,呈浓度时间依赖性,烟草氯仿提取物(CE)、乙醇提取物(EE)和4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)在一定浓度范围内对食管鳞癌细胞株EC109有促增生作用。阿司匹林可以抑制烟草的促增生作用。一定浓度范围内的CE和NNK可以抑制阿司匹林4 mmol/L诱导凋亡的作用,而EE无此作用。结论阿司匹林通过诱导EC109细胞发生凋亡抑制细胞生长,其致凋亡作用可被烟草所抑制,而烟草的促食管癌细胞增生作用可能与COX-2途径有关。     

硒、锌对人食管癌细胞株Eca109生长增殖的影响

目的 观察硒、锌单独和联合作用对人食管癌细胞株Eca109生长增殖的影响.方法 用不同浓度硒、锌培养液培养人食管癌细胞株Eca109,以人正常肝上皮细胞株HL7702为正常细胞对照,采用MTT、3H-TDR掺入实验及流式细胞术研究不同浓度硒、锌对两株细胞生长增殖的影响.结果 高浓度硒(0.3μg/ml)、锌(3.5 μg/ml)抑制Eca109细胞增殖,且二者联合作用比单独作用强(P<0.05);高浓度硒、锌单独促进HL7702细胞生长,联合则抑制其生长.生理浓度硒、锌(分别为0.1、1.0μg/ml)对该癌细胞株和正常细胞株生长增殖作用与对照相近(19>0.05).0.3 μg/ml硒引起癌细胞S期阻滞,作用不明显(P>0.05),而3.5 μg/ml锌引起G1期癌细胞显著增加(P<0.05),二者联合使其出现G1期阻滞,并都促进细胞凋亡,联合作用强于单独作用(P<0.05).结论 高浓度硒、锌抑制人食管癌细胞株Eca109生长增殖,且二者联合作用比单独作用强;该联合作用对人正常肝上皮细胞株可能有一定毒性作用.细胞生长周期改变、促进细胞凋亡可能是硒、锌抑制食管癌细胞生长增殖的机制之一.     

食管鳞癌细胞中PTEN基因表达水平及突变位点分析

目的:探讨PTEN基因在食管鳞癌细胞中的表达水平及突变情况。方法:采用RT-PCR技术检测高分化的Eca109、低分化的EC9706和EC1食管鳞癌细胞株细胞中PTEN mRNA的表达水平,并克隆PTEN基因全长,与野生型PTEN基因序列比对,分析突变情况。结果:EC1、EC9706、Eca109细胞株中PTEN mRNA的表达水平分别为(0.06±0.02)、(0.24±0.02)、(0.41±0.01),3株细胞中PTEN mRNA的表达水平差异有统计学意义(F=306.330,P<0.001),Eca109细胞中PTEN mRNA的表达水平高于EC9706和EC1细胞(P<0.05)。3株细胞中PTEN基因均存在不同程度突变,突变主要集中在外显子5和8。结论:食管鳞癌细胞中PTEN表达水平与细胞的分化程度有关,PTEN基因突变与食管鳞癌的发生发展有关。     

过表达KLF7对食管鳞状癌细胞的增殖和迁移的影响

目的 探索Kruppel-like factor 7(KLF7)对食管鳞癌细胞Eca109细胞增殖、迁移和周期的影响。方法 利用生物信息学方法研究KLF7在食管鳞癌组织中的表达模式及其与患者预后、病理分级的关系。利用Real-time PCR、Western blot与细胞免疫荧光技术研究食管鳞癌细胞中KLF7的表达模式与亚细胞定位。利用KLF7过表达质粒(pcDNA-3.10-KLF7)细胞转染实现KLF7在Eca109食管鳞癌细胞中过表达。采用平板克隆计数和CCK-8检测研究细胞增殖能力,利用Transwell研究细胞迁移能力,利用流式细胞术检测细胞周期。结果 KLF7在食管癌组织和细胞中均有表达,其表达水平与患者病理分级显著相关(P<0.05),与患者生存率无显著相关性。食管癌细胞系(Eca109和EC9706)中KLF7的表达水平显著高于正常食管上皮细胞(Het-1A,P<0.05),并且Het-1A细胞中KLF7高表达于细胞质和细胞核,而2种食管癌细胞Eca109和EC9706中KLF7仅高表达于细胞核,在Eca109细胞中过表达KLF7后改变细胞周期、促进细胞的...     

紫杉醇对人食管癌Eca109细胞株生长的影响

目的：观察不同浓度的紫杉醇对食管癌细胞Eca109的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验,细胞形态学观察及流式细胞仪等方法对人食管癌细胞Eca109进行检测和观察。结果：MTT实验显示紫杉醇可抑制食管癌细胞增殖;光镜及电镜可发现药物作用组细胞核固缩、解聚以及凋亡小体,流式细胞仪检测显示G1峰前有明显的凋亡峰。细胞周期分析提示紫杉醇可将Eca细胞阻滞于G2－M期,且与浓度相关。结论：紫杉醇对人食管癌细胞系Eca109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2－M期,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

硒酸酯多糖对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响

目的研究硒酸酯多糖(KSC)对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度KSC对Eca109细胞增殖的影响;流式细胞术观察KSC对Eca109细胞凋亡的影响;Westernblot技术检测KSC对Eca109细胞核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的影响。结果 KSC可明显抑制Eca109的增殖(P<0.05),并呈时间及浓度依赖性;经KSC作用后,Eca109细胞的凋亡率随KSC作用时间的延长(24、48、72h)及KSC浓度的增加(30、60、120μg/mL)而明显升高(P<0.01);KSC(60、120μg/mL)显著下调Eca109细胞核中NF-κB蛋白水平(P<0.01)。结论 KSC对Eca109细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

阿霉素诱导食管癌耐药细胞中ABCG2的表达及其意义

 目的研究阿霉素(ADM)药物诱导食管癌细胞(Eca109)产生耐药细胞株(Eca109/ADM)中ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达及其意义。方法通过逐步增加培养液中阿霉素的浓度,长期筛选培养,建立食管癌耐药细胞株Eca109/ADM。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测耐药细胞中ABCG2mRNA的表达量,流式细胞术(FCM)和蛋白印迹(Westernblot)方法检测耐药细胞中ABCG2蛋白的表达量及细胞定位。FCM方法检测Eca109/ADM细胞药物外排作用,MTT方法检测Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数。结果Eca109/ADM细胞与Eca109细胞相比,ABCG2表达显著性增高(P<0.05)。Eca109/ADM细胞药物外排作用较Eca109细胞增加,Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数为3.29。结论成功建立耐药细胞株Eca109/ADM。Eca109/ADM细胞是一个理想的耐药细胞模型。Eca109/ADM细胞中ABCG2的表达量增高,提示ABCG2参与食管癌细胞耐药的形成。     

烟草提取物与环氧化酶-2对食管鳞癌细胞株增生作用的研究

目的通过研究烟草提取物对食管鳞癌细胞系EC109和EC9706的促增生作用,探索烟草致癌的机制。方法将人食管鳞癌细胞株EC109和EC9706与烟草提取物孵育后,用噻唑蓝法定量检测细胞增生情况,用反转录聚合酶链反应法检测其环氧化酶-2(COX-2)的mRNA表达情况。结果细胞培养结果表明,2种烟草提取物对EC109和EC9706细胞株的促增生作用均具有时间依赖性的特点,但剂量依赖性不明显。组间差异有统计学意义(P<0.01)。烟草乙醇提取物(EE)的促增生作用与COX-2基因表达增强相关。结论烟草提取物对食管鳞癌细胞存在促增生作用,且这种促增生作用可能与COX-2的表达增强有关。     

羟基喜树碱脂质体对人食管癌Eca109细胞株作用的研究

目的 研究羟基喜树碱脂质体对人食管癌Eca109细胞增殖、凋亡以及相关蛋白表达的影响.方法 将人食管癌细胞株Eca109常规培养于RPMI-1640培养基中,实验分空白对照组和浓度分别为0.1、1、10、50 mmol/L的羟基喜树碱脂质体组,应用MTT法检测羟基喜树碱脂质体对食管癌细胞增殖的影响,Western blot检测细胞膜P糖蛋白水平的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的改变.结果 各剂量组羟基喜树碱脂质体均对人食管癌Eca109细胞的增殖具有抑制作用,并伴随着对细胞凋亡的诱导,以及对和多药耐药性(MDR)相关的P糖蛋白的抑制.结论 羟基喜树碱脂质体能够抑制人食管癌细胞的增殖,诱导其凋亡并能够抑制P糖蛋白的表达,减少细胞耐药,且在0.1～50 mmol/L浓度范围内,随着浓度增加,上述抑制作用增强,存在浓度依赖性.     

siRNA阻断NF-κB信号通路对食管鳞癌细胞增殖、耐药的影响

目的:通过RNA干扰(RNAi)阻断食管鳞癌细胞中NF-κB信号通路,研究其与肿瘤细胞增殖、耐药的关系.方法:使用NF-κB p65 siRNA分别转染人食管鳞癌Eca109和EC9706细胞72 h,以未转染的Eca109和EC9706细胞为对照,采用Western blot检测p65蛋白的表达;MTT法检测转染NF-κB p65 siRNA 24 h、48 h、72 h后Eca109和EC9706细胞的增殖情况及转染同时联合应用不同质量浓度5-Fu(0 mg/L,16.35 mg/L,32.7 mg/L,327 mg/L,3 270mg/L,6 540 mg/L)对Eca109和EC9706细胞增殖的影响.结果:①NF-κB亚单位p65在Eca109和EC9706细胞质中高表达,p65 siRNA可有效阻断p65蛋白表达.②MTT实验表明,转染组细胞存活率较未转染组明显下降(P＜0.05);与化疗药5-Fu联用,转染组和未转染组细胞的增殖活性随着5-Fu浓度的增加有下降趋势,但在同一浓度,转染p65siRNA的细胞与未转染组相比,细胞增殖活性明显下降(P＜0.05).结论:应用RNAi技术可有效干扰p65的表达,抑制食管鳞癌细胞的增殖,增强对化疗药5-Fu的敏感性.因此,可将阻断NF-κB信号通路作为基因治疗的靶点.     

过表达miR-218增强食管鳞状细胞癌对顺铂敏感性

目的 研究miR-218 在食管鳞癌细胞中对顺铂药物敏感性的影响.方法 采用递增药物浓度、间歇冲击作用的方法构建耐药细胞株;实时荧光定量PCR检测miR-218 在食管鳞癌细胞株Eca109 与顺铂耐药株Eca109-CisR差异性表达;进一步在顺铂耐药株Eca109-CisR中过表达miR-218:① CCK8实验检测细胞增殖;② 流式细胞仪检测细胞凋亡率;③ Western blot方法检测凋亡抑制蛋白Survivin、Mcl-1及Bcl-2的相对表达量.结果 miR-218在顺铂耐药株Eca109-CisR细胞中呈低表达;过表达 miR-218 增加顺铂耐药株Eca109-CisR对顺铂的药物敏感性;Western blot结果证实凋亡相关蛋白Survivin、Mcl-1 及 Bcl-2相对表达减少.结论 miR-218表达有助于增加食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性,且给对顺铂耐药的食管鳞癌患者提供潜在的基因治疗靶点.     

一种用于鉴定食管癌相关抗原特异抗血清的制备(简报)

用封闭食管癌正常抗原成分的食管癌细胞Eca109龟疫动物产生的抗血清,可与食管癌细胞株(Eca190及Ecal7)以及食管癌组织切片产生反应。流式荧光细胞技术证明,正常食管粘膜细胞不能除去其活性,经食管癌细胞吸收则活性全部消失,说明该血清活性是针对食管癌相关抗原的。再次证明食管癌相关抗原是存在的。此血清与肝癌细胞株7402、胃癌细胞株7901和鼻咽癌细胞株均有明显的交叉反应,与肉瘤细胞     

大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109生长的抑制作用

目的研究大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109增殖抑制作用。方法传代培养人食管癌细胞，MTT法及流式细胞仪检测测定Eca-109细胞增殖抑制率。结果大蒜素对细胞的生长均有明显的抑制作用，且呈浓度、时间依赖性。结论一定浓度的大蒜素能抑制食管癌细胞的生长。     

LIGHT-Fc基因转染对食管癌细胞株Eca109抑制作用的初步研究

目的探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应.方法以DOTAP脂质体介导LIGHT-Fc基因转染人食管癌细胞株Eca109,通过绘制细胞生长曲线及MTF比色法观察LIGHT-Fc转染对Eca109细胞生长的影响,用RT-PCR法检测LIGHT受体在Eca109细胞上的表达.结果LIGHT-Fc基因的表达可以抑制Eca109细胞的生长.在低血清培养时,Eca109/LIGHT细胞的生长曲线较对照组明显降低;MTT比色显示Eca109/LIGHT的细胞活力与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论LIGHT-Fc基因转染对人食管癌Eca109细胞具有体外抑制作用,但全面评价有待进一步的研究.     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞株的增殖抑制作用研究

目的：观察褪黑素（Mel）联合顺铂（DDP）对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响.方法：以DDP 2.5 mg/L、不同浓度Mel及两药联合作用于食管癌Eca109细胞.通过MTT实验检测用药后对食管癌Eca109细胞增殖的影响,并计算抑制率;通过集落克隆形成实验观察用药后对细胞集落克隆形成的影响;通过流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率的变化.结果：DDP 2.5 mg/L与不同浓度Mel联合用药组对食管癌Eca109细胞生长抑制率均明显高于单独使用DDP或Mel组（P＜0.01）;10-5 mol/L Mel诱导人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为7.8%,10-5 mol/L Mel与2.5 mg/L DDP联合刺激人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为32.0%,高于DDP本身诱导的24 h凋亡率9.7%（P＜0.01）.结论：Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并增强其诱导凋亡作用,为临床食管癌的治疗提供了一定的实验研究基础.