流式细胞术测定骨骼肌细胞分化中DNA合成及其细胞周期变化

目的：分析骨骼肌细胞分化中细胞周期及其对ＤＮＡ合成的影响。方法采用小鼠Ｃ２Ｃ１２骨骼肌细胞系作为体外肌细胞分化的研究模型，对照组１００ｍＬ．Ｌ＾－１胎牛血清ＤＭＥＭ培养液培养，实验组换为２０ｍＬ．Ｌ＾－１胎牛血清ＤＭＥＭ培养液培养，诱导肌母细胞分化，分别于换２０ｍＬ．Ｌ＾－１血清浓度ＤＭＥＭ培养液后的２４，４８和７２ｈ进行流式细胞术检测，分析肌母细胞分化过程中ＤＮＡ合成和细胞周期变化。结果发现肌细     

流式细胞术检测细胞周期分析软件的比较

目的探讨流式细胞术中不同细胞周期分析软件在细胞周期分析中的特点和差异。方法采用碘化丙啶染色,在Epics XL流式细胞仪上检测细胞周期,分别应用MultiCycle和Modfit LT软件对检测数据进行分析,并比较分析结果。结果 MultiCycle和Modfit LT软件分析细胞周期各时相比例、DNA倍体分析、细胞增殖及细胞凋亡数值,比较其结果基本一致。仅人肺癌细胞系A549细胞G2/G1值应用2种不同软件分析其数据差异有统计学意义(P<0.01);Jurkat T细胞聚集体的比例应用2种不同软件分析其数据差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MultiCycle和Modfit LT软件分析同一样本所得拟合结果有较高的一致性;对G2/G1值进行限制的操作可能更适用于组成成分较复杂的样本;虽然不同采集软件区分粘连细胞和细胞集落的方法不同,导致聚集体的比例差异显著,但并未对细胞周期分析结果的判定产生影响。     

流式细胞术检测细胞周期实验条件的影响因素分析

［摘要］目的: 研究流式细胞术检测细胞周期的各个实验环节对结果的影响。方法: 应用流式细胞术检测经秋水仙素刺激后的人结肠癌细胞株,分析细胞周期的固定方式、细胞数量、固定温度、固定时间以及染色时间等环节对结果的影响。结果： 用PBS吹散后经纯乙醇固定的效果最佳;细胞数太多或太少时,影响检测结果和曲线的平滑程度,且变异系数（coefficient of variation,CV）值增大;固定后放置于常温影响检测结果,置于4℃或-20℃没有显著差异;固定后-20℃放置70 d内检测结果无明显差异;染色完成后2 h内检测结果无明显差异。结论： 1×106细胞沉淀用PBS吹散后经纯乙醇固定,放置于-20 ℃,70 d内检测,染色后2 h之内完成检测。     

早期细胞凋亡的流式细胞术分析

目的：探讨多参数流式细胞术分析肿瘤细胞早期凋亡的方法。方法：采用Annexin V FITC／PI双染法及JC-1染色法标记食管癌EC6细胞，通过多参数流式细胞术分析X射线、顺铂诱导产生的细胞凋亡情况及线粒体膜电位的变化。结果：随着剂量的增加，凋亡细胞的百分率逐渐增加，线粒体膜电位下降，去极化细胞增多，并且有明显的剂量依赖性。结论：多参数流式细胞术具有广阔的应用前景，短时间内能够获得大量统计学意义上可靠的数据，为探讨细胞凋亡机制、寻找治疗靶点提供了有益线索。     

两种不同染色法在流式细胞术中检测细胞周期的探讨

目的 比较碘化丙啶(PI)和4,6-联脒-2苯基吲哚(DAPI)两种不同染色方法在流式细胞术中对细胞周期检测的影响.方法 A549细胞分别采用PI和DAPI染色法进行染色,于染色后0和24h进行流式细胞仪检测细胞G0/G1期、S期和G2/M期的DNA含量,比较两种方法的测定结果,同时进行细胞计数,观察细胞浓度变化.结果 PI和DAPI法染色后0h上机测定,结果分别为:CV值(7.72±0.19)、(5.92±0.09),G0/G1期含量(69.63±1.16)％、(69.87±1.28)％,S期含量(24.53±0.47)％、(24.43±0.86)％,G2/M期含量(5.85±1.04)％、(5.72-0.65)％,两种方法检测细胞周期的结果基本一致(P＞0.05);染色后24h重新测定,结果分别为:CV值(8.82±0.05)、(6.09±0.30),G0/G1期含量(58.50±0.90)％、(70.47±0.81)％,S期含量(31.73±0.75)％、(23.67±0.45)％,G2/M期含量(9.51±0.47)％、(5.86±0.46)％,两种方法检测细胞周期的结果差异有统计学意义(P＜0.05).DAPI法染色后0和24h测定结果基本一致(P＞0.05),而PI法检测结果差异有统计学意义(P＜0.05).细胞计数结果显示,放置24hPI法细胞损耗为63.14％,DAPI法细胞损耗为12.50％,两种方法结果差异有统计学意义(P＜0.05).染色24h后PI法细胞开始崩解,镜下见较多的细胞碎片,而DAPI法细胞形态良好.结论 应用流式细胞术检测细胞周期,DAPI染色法优于PI染色法.     

流式细胞术快速测定细胞活性

0　引言　细胞周期动力学研究和细胞凋亡的研究是目前生物医学领域的热门课题之一 [1 ] ,流式细胞术 (FCM)检测细胞周期和凋亡是其主要研究手段 [2 ] .FCM对细胞周期的分析方法已很成熟 ,但是我们在分析化学或物理因素对细胞周期的影响时 ,发现在 DNA直方图上出现 DNA含量较低的细胞峰 ,为确定该细胞峰的性质 ,鉴定细胞的活性 ,我们用 FCM法和台盼蓝染色法进行对比实验 ,建立了 FCM同时检测细胞周期和细胞活性的新方法 .1　材料和方法1.1　材料　所用设备包括 :EL ITE ESP型流式细胞仪 (美国Coulter公司 ) ,XD- 10 1型倒置显微…     

对MOLT-4细胞用cyclin E+A/DNA流式细胞术分析 - 细胞周期六分法的建立

目的　越来越多的资料表明肿瘤是一类细胞周期性疾病 ,从而使得细胞周期分析在细胞生物学 ,肿瘤生物学领域显得格外重要。迄今为止 ,有很多方法应用于细胞周期分析中 ,但这些方法因为这样或者那样的缺点已无法适应今天的细胞周期分析。本研究的目的是建立一种新的 ,更为合理的细胞周期分析方法。方法　将cyclinE以及cyclinA的单克隆抗体按一定的比例混合后与固定了的MOLT 4细胞孵育 ,后用流式细胞仪检测。结果　我们发明的CyclinE A/DNA多参数流式细胞术能将细胞分为六个细胞群体 :G0 、早G1、晚G1、S、G2 、M期细胞。而在DNA含量直方图仅能区分三个细胞群体 :G0 /G1、S、G2 /M期细胞。结论　CyclinE A/DNA多参数流式细胞术能同时在同一样本中将细胞分为六个细胞群体 :G0 、早G1、晚G1、S、G2 、M期细胞。其对细胞周期分析明显优于目前采用的细胞周期分析方法 ,并且有明显的生物学基础。     

头颈部鳞状细胞癌流式细胞术分析

头颈部鳞状细胞癌流式细胞术分析景捷头颈部鳞状细胞癌（Ｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉ－ｎｏｍａｓｏｆｔｈｅｈｅａｄａｎｄｎｅｃｋ，ＳＣＣＨＮ）具有特殊生物学特性，其颈后受临床分期、病理分级、营养状况、免疫状态和治疗方案等多因素影响。通过对ＳＣＣＨＮ...     

应用流式细胞术动态观测小鼠树突状细胞诱导的T细胞增殖的变化

目的：运用流式细胞术（FCM）分析小鼠混合淋巴细胞反应（MLR）中T细胞增殖的动态变化。方法：把分别经脂多糖（LPS）和生理盐水（NS）刺激的小鼠树突状细胞（DC）经H22肿瘤细胞抗原肽冲击后，以1：50的比例与小鼠T细胞（TC）进行同种MLR，分别作为LPS＋DC＋TC组和NS＋DC＋TC组，同时设LPS＋TC组和空白TC对照组。经体外培养，分别于反应的第0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d收集TC，FCM检测TC细胞周期。结果：随培养时间的延长，LPS＋DC＋TC组、NS＋DC＋TC组S期细胞及细胞增殖指数均先增后减、LPS＋TC组和空白TC对照组则呈下降趋势（P〈0．05），各组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：FCM可以从单细胞水平客观、准确地反映淋巴细胞增殖的动态变化。     

流式细胞术检测LAK细胞的杀伤活性

ＬＡＫ细胞的过继免疫治疗已在国内外广泛开展,并取得了令人瞩目的成就。如今肿瘤的过继免疫治疗已经与手术、化疗、放疗等并列而成为肿瘤治疗的一个模式。为监控ＬＡＫ细胞过继免疫治疗的质量、疗效,ＬＡＫ细胞活性的测定显得十分重要。目前常用的比较经典的ＬＡＫ细胞活性检测方法是同位素检测法,而此法有同位素污染、半衰期限制、操作繁琐、费时较长等缺点。应用流式细胞术（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅ－ｔｒｙ, ＦＣＭ）检测细胞毒细胞的活性,国外已有类似报道,但国内报道甚少。本研究即应用ＦＣＭ检测ＬＡＫ细胞活性,并与’Ｈ－Ｔｄ…     

食管癌细胞DNA含量和细胞周期的分析

报道100例食管瘤手术切除新鲜标本组织的DNA含量和细胞周期的流式细胞光度分析。结果显示癌细胞DNA非整倍体（AN）检出率为70．7％，细胞增殖指数（PI）为（20．79．1）％（xS）；非整倍体肿瘤S期细胞比例和PI显著高于二倍体肿瘤（P＜0．05和P＜0．01）。食管癌AN与肿瘤细胞分化和局部淋巴结转移密切相关（P＜0．05和P＜0.01）。食管癌流式细胞的DNA含量和细胞周期的分析在揭示肿瘤恶性生物学行为、指导临床治疗方面具有重要的意义。     

不同分子区域的Caveolin-1真核表达载体构建及其对Caveolin-1基因敲除小鼠系膜细胞周期的影响

目的:构建含不同分子区域的caveolin-1真核表达质粒,转染caveolin-1基因敲除小鼠(Cav-1-/-)的肾小球系膜细胞,观察能否逆转系膜细胞周期阻滞。方法:首先从pLHCX-N-FLAG2/caveolin-1全长质粒中扩增cave-olin-1 N末端(第1-82位氨基酸)、N末端+脚手架区(第1-101位氨基酸)的cDNA片段,同时在引物两端加上限制性酶切位点HindⅢ及XhoⅠ,再与复制缺陷型逆转录病毒表达载体pLHCX-N-FLAG3连接。完成酶切和测序鉴定后将pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLHCX-N-FLAG3/cav-1-101分别转染HEK293T细胞,包装产生有感染力的病毒颗粒,再分别感染Cav-1-/-系膜细胞,流式细胞分析观察能否逆转细胞周期阻滞。结果:成功构建含caveolin-1 N末端、N末端+脚手架区片段的重组真核表达载体,流式细胞分析发现pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLH-CX-N-FLAG3/cav-1-101基因导入Cav-1-/-系膜细胞,可逆转G0/G1细胞周期阻滞。Vcaveolin-1可能主要通过N末端第1-82位氨基酸区域参与细胞周期进程,具体机制还需进一步研究。     

补肾生血药干预不同时间对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠细胞周期与细胞增殖的影响

目的 观察补肾生血药干预不同时间对环磷酰胺诱发骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期及细胞增殖的影响.方法 52只雄性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、补肾生血药低剂量组、补肾生血药高剂量组.先预防用药3 d,补肾生血药低剂量组、高剂量组灌胃不同剂量补肾生血药,其余组灌胃蒸馏水.第4～6天造模,除空白对照组...     

Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

酒石酸锑钾在诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡中的影响

目的:本研究旨在明确酒石酸锑钾(PAT)在体外对人肝癌BEL7402细胞凋亡的影响及抑癌机制。方法:用PAT以不同浓度、不同时间作用于人肝癌BEL7402细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、TUNEL染色法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:PAT以剂量依赖和时间依赖的方式抑制BEL7402细胞的生长。5～40μmol·L-1的PAT处理48h后,形态学上,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。DNA末端原位标记染色法、流式细胞仪均能检测到凋亡细胞。结论:PAT在体外诱导肝癌BEL7402细胞凋亡,能作为一种凋亡诱导剂用于肝癌的治疗。     

细胞周期调控蛋白在K562细胞的表达及意义

目的：探讨细胞周期调控蛋白CyclinD1,CyclinE,Cdk2,Cdk5在K562细胞增殖和分化时的不同表达。方法：本实验采用Western-Blotting-ECL方法分析了苦参碱作用K562细胞前、后24,48,72h,CyclinD1,CycliE,Cdk2,Cdk5的不同表达。结果：在增殖的K562细胞中,伴随着DNA合成增加,CyclinE和Cdk2保持高表达;而在分化的细胞中,随着DNA合成减少,CyclinD1,Cdk5表达增强。结论：在细胞从增殖向分化途径逆转时,伴随着一些特殊的Cyclin/Cdk表达的改变。     

Notch在血液肿瘤细胞周期阻滞中的作用

细胞周期调控依赖多种调控蛋白协同作用以及生长因子等细胞外因素通过信号转导调控。这中间任一环节异常都可能引起细胞周期阻滞。p53、p21以及p16基因使细胞停滞在G1期的研究已相当透彻。Notch信号传递途径在胚胎发育和肿瘤血管发生中扮演重要的角色,尚有抑制Notch达到抑制肿瘤细胞增长的目的。新近研究发现,由配体刺激的Notch活化调节了急慢性髓细胞白血病细胞增长,Notch系统对白血病的治疗是一个很有前景的途径。     

羟基磷灰石纳米粒子抑制结肠癌SW-480细胞生长的体外实验

目的:本研究旨在明确羟基磷灰石纳米粒子(HAP)在体外能否诱导人结肠癌SW-480细胞凋亡并从凋亡角度探讨其抑癌机制。方法:用HAP以不同浓度作用于人结肠癌SW-480细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:HAP以剂量和时间依赖的方式抑制人结肠癌SW-480细胞的生长。25 mg/L,50mg/L HAP作用72 h细胞的生长抑制率分别是49.71%和61.03%。12.5-100 mg/L的HAP处理48 h后,结肠癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。流式细胞仪均能检测到凋亡峰,12.5,25,50,100 mg/L HAP作用48 h,凋亡率分别是3.57%,21.45%,37.10%和49.45%。结论:HAP在体外能抑制人结肠癌SW-480细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

复苏饮对心脏骤停复苏犬脑细胞超微结构影响的实验研究

目的：观察复苏饮对犬心脏停跳复苏后脑组织超微结构的影响。方法：将健康犬随机分为假手术组、模型组和复苏饮组，后两组复制心脏骤停和复苏模型；观察各组循环建立时肾上腺素、阿托品用量及循环恢复时间；在电镜下观察复苏犬自主循环恢复180min后大脑皮层脑组织超微结构。结果：与模型组相比，复苏饮组复苏所用肾上腺素、阿托品用量明显减少，总复苏时间明显缩短，脑组织病理损害亦明显减轻。结论：复苏饮能明显减少肾上腺素用量，减轻脑组织形态学损害，对复苏犬脑细胞有保护作用。     

脐血造血干细胞特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术（ＦＣＭ），观察了脐血中粒一单系祖细胞（ＣＰＵ－ＧＭ）、红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）的数量和特性，并对其细胞增殖周期和骨贿及成人外周血做了比较，实验提示脐血中含丰富的ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ，其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平，脐血红系祖细胞对ＥＰＯ、ＢＰＡ表现出更高的敏感性，而粒系祖细胞对ＣＳＦ的敏感性和骨髓比较似无明显差别．脐血Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期，及Ｓ＋Ｇ２Ｍ期细胞数均明显低于骨髓，虽略高于外周血各期细胞数，但差别无显著性意义．