乙型肝炎病毒S基因在毕赤酵母中的表达及在乙型肝炎病毒表面抗体检测中的应用

目的　构建含有乙型肝炎病毒S基因的表达载体 ,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)S蛋白 ,用以制备乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)酶免试剂盒。 方法采用聚合酶链反应从含乙型肝炎病毒全基因序列 (adw)的质粒PHBV1中扩增出S基因 ,并将其插入pPICZB质粒。携带有S片段的pPICZB质粒转化毕赤酵母菌株KM71H ,甲醇诱导重组酵母细胞表达S蛋白。表达产物包被聚丙乙烯反应板 ,用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测HBsAb。结果　酶切电泳及DNA测序证实乙型肝炎病毒S基因已正确克隆到表达载体中 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示HBsAg在毕赤酵母中表达 ;表达量约占总蛋白的 2 5 %～ 35 %。表达产物用ELISA测定效价达 1∶2 5 6 0 0 ;Westernblot显示与正常人血清无交叉反应 ;用纯化产物作为包被抗原对卫生部临床检验中心HBsAb质控物及血清标本进行检测 ,灵敏度达 10mIu/ml,特异性达 10 0 % ,重复性及线性良好 ,与国产商品试剂检测结果一致。结论　毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBsAg,可用于基因工程原材料的HBsAb酶免试剂盒的研制     

乙型肝炎病毒核心基因在毕赤酵母中的表达及表达产物在乙型肝炎病毒核心抗体检测中的应用评价

目的在毕赤酵母中表达出高免疫反应性和特异性的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg),探讨该表达产物在乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)免疫检测中的应用。方法用PCR从含有乙型肝炎病毒DNA模板的质粒中扩增出编码HBcAg的C基因,插入pPIC9酵母表达载体。携带有C片段的pPIC9转化毕赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HBcAg。分别用分子筛纯化毕赤酵母表达的HBcAg(A)、单克隆HBcAb特异结合纯化毕赤表达的HBcAg(B)、分子筛纯化大肠杆菌表达的HBcAg(C)、单克隆HBcAb特异结合纯化大肠杆菌表达的HBcAg(D)作为固相抗原,辣根过氧化物酶标记多克隆HBcAb为探测抗体,用竞争抑制法酶联免疫吸附测定(competitiveinhibitionELISA)检测HBcAb标准品及含有乙型肝炎病毒PCR阳性和阴性血清的临床标本。结果聚丙烯酰胺凝胶电泳、immunoblot、ELISA显示HBcAg在毕赤酵母中高效表达;分别用抗原A、B、C、D制备的试剂检测中国药品生物制品检定所HBcAb国家参考品:试剂A与B结果相同:阴性符合率(-/-)15/15,阳性符合率(+/+)15/15;最低检出量(稀释度):灵敏度参考品2#=1∶128,3#=1∶16,4#=1∶64。试剂C与D结果相同:阴性符合率(-/-)15/15;阳性符合率(+/+)14/15;最低检出量(稀释度):灵敏度参考品2#=1∶32;3#=1∶16;4#=1∶32;大肠杆菌抗原的灵敏度明显低于毕赤酵母抗原。对乙型肝炎病毒PCR阳性及阴性的临床标本进行检测,结果如下:PCR阳性组HBcAb阳性检出率:试剂A97.8%;试剂B98.1%;试剂C96.6%;试剂D91.4%;A、B、C三组间比较差异无统计学意义(P>0.05);D分别与A、B、C相比较差异均有统计学意义(P<0.005)。PCR阴性组HBcAb阴性检出率:试剂A80.3%;试剂B80.9%;试剂C75.0%;试剂D85.7%;AB两组比较差异无统计学意义(P>0.05);AC、AD、BC,BD、CD相比较差异均有统计学意义(P<0.005);分子筛纯化的大肠杆菌HBcAg含有干扰检测的杂质,结果出现假阳性;大肠杆菌HBcAg存在表位缺失导致结果出现假阴性。结论毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBcAg,用于HBcAb的检测灵敏度及特异性均优于大肠杆菌表达产物。     

乙型肝炎病毒合成e基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性

目的 合成适合酵母表达的乙型肝炎病毒（HBV）e抗原基因，在毕赤酵母中表达出高免疫反应性和特异性的重组乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）。方法 采取基因搭桥法及Taq酶聚合反应，选用酵母菌偏爱的同义密码子替换野生型e基因的部分密码子，制备合成e基因，插入pPICZαA酵母菌表达载体。携带有合成e基因的pPICZαA转化毕赤酵母菌株GS115，经甲醇诱导表达HBeAg。结果 酶切电泳及DNA测序证实合成的e基因已正确克隆到表达载体中；聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、immunoblt及ELISA显示HBeAg在毕赤酵母中高效分泌表达，表达量约为63mg／L，培养上清液ELISA测定效价1：81920，最大吸光度值达2．8；重组HBeAg与乙型肝炎病毒核心抗体间无交叉反应。结论 毕赤酵母表达系统高效分泌表达出与乙型肝炎病毒核心抗原间无交叉抗原性、具有良好免疫反应性的HBeAg。     

前S1抗原与慢性乙型肝炎“两对半”关系的初步探讨

前S1抗原(Pre—S1)主要存在于Dane颗粒中，少量存在于HBsAg球形颗粒中，由HBV基因组的前S1基因区所编码。有报道证实Pre—S1在HBV感染肝细胞以及HBV体内复制等方面有重要的作用，与HBV—DNA密切相关，可作为补充慢性乙型肝炎(以下简称乙肝)“两对半”检测的重要的血清学指标。为进一步了解前S1抗原与乙肝“两对半”的关系，我们检测了320份HBV感染者及9例原发性肝癌患者血清Pre—S1抗原，现将结果报告如下。     

乙型肝炎血清标志物HBsAg和HBsAb同时阳性模式的相关研究

目的分析乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎表面抗体（HBsAb）同时阳性患者的病毒复制、肝功能状况及临床特点，探讨此类模式的产生原因及其临床意义。方法应用微粒子酶免疫荧光分析法检测标本的HBV血清标志物，从中筛选出HBsAg和HBsAb同时阳性的标本，检测此类标本HBVDNA定量值和肝功能结果，并结合患者的临床特征进行综合分析。结果检测17759例患者的HBV血清标志物，HBsAg阳性2060例，阳性率为11．6％；HBsAg和HBsAb同时阳性者占4．08％（84／2060）。将84例HBsAg和HBsAb同时阳性的患者根据其HBV血清指标的组合模式不同分成6种类型，以HBsAg、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎核心抗体（HBcAb）阳性模式和HBsAg、乙型肝炎e抗体（HBeAb）、HBcAb阳性模式最多见；84例HBsAg和HBsAb同时阳性的患者中，HBVDNA〉l×10^3 IU／mL者占85．7％；肝功能指标的异常率为68．4％；临床分类：慢性乙型肝炎占53％，肝硬化占20％，肝癌占13％。结论乙型肝炎患者出现HBsAg和HBsAb同时阳性并不代表乙型肝炎恢复，相反此类患者往往持续存在HBV的复制和突变，更容易造成肝功能的慢性损伤，预后较差，应当引起实验室和临床的高度重视。     

不同方法检测乙型肝炎血清学标志物的结果比较

目的探讨不同方法在乙型肝炎血清学标志物临床检测中的应用价值。方法用3种试剂[酶免法(EIA)、时间分辨荧光法(TrF)、微粒子酶免疫分析(MEIA)]对乙型肝炎初诊疑似患者血清进行5项标志物检测。结果TrF试剂检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的相对灵敏度、相对特异性和总符合率均优于EIA试剂；TrF试剂的最低可检测稀释度与MEIA试剂基本相同。结论与EIA试剂相比，TrF试剂在乙型肝炎5项血清学指标临床检测中具有相对灵敏度、相对特异性和检测灵敏度较高的优势。     

不同方法检测乙型肝炎血清学标志物的结果比较

目的　探讨不同方法在乙型肝炎血清学标志物临床检测中的应用价值。方法　用 3种试剂 [酶免法(EIA)、时间分辨荧光法 (TrF)、微粒子酶免疫分析 (MEIA) ]对乙型肝炎初诊疑似患者血清进行 5项标志物检测。结果　TrF试剂检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的相对灵敏度、相对特异性和总符合率均优于EIA试剂 ;TrF试剂的最低可检测稀释度与MEIA试剂基本相同。结论　与EIA试剂相比 ,TrF试剂在乙型肝炎 5项血清学指标临床检测中具有相对灵敏度、相对特异性和检测灵敏度较高的优势。     

重组酵母乙型肝炎疫苗应用于乙型肝炎病毒感染者的免疫效果

管荣斌，韩光红，张司担，等．中毕流行病学杂志，1999，20（8）：246133例乙型肝炎病毒感染者先用ELISA法筛选，疫苗采用重组酵母乙型肝炎疫苗，用0，l，6个月程序，于上图三角朋内接种，剂量为1次5Pg。全程接种后回～3个月来血，用免疫放射分析法检测血清HBsAb滴度。结果：①HBs＾g单项阳性6例中，5例抗原转阴，有3例HBsAb转口性，原HBsAg＄度较低者，HBsAb阳转率较高；②免疫前HBcAb单项阳性9例，免疫后HBSAb均转阳性；③免疫前HBsAg和HffeAb同时阳性的7例中，免疫后HBV霞染状况未见改变；④免疫前单项HBSAb阳性114例，…     

乙型肝炎前S1抗原与HBsAg滴度的关系

乙型肝炎前S1抗原是近年新发现的一种乙型肝炎标志物，主要存在于乙肝病毒的Dane颗粒上，参与介导乙肝病毒与肝细胞膜特异性受体的结合，在病毒侵入肝细胞及刺激机体免疫应答过程中起主要作用，它是继HBeAg，HBV-DNA之后被看作HBV复制与传染性的另一个指标，为了了解该标志物与其他乙肝标志物及HBsAg滴度的相关性，我们做如下探讨。     

时间分辨荧光技术及酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎两对半指标的比对分析

目的通过比对时间分辨荧光技术(TRFIA)及酶联免疫吸附试验(ELISA)对血清标本中乙型肝炎两对半指标的检测结果,验证这两种方法是否具有等效性。方法分别用TRFIA及ELISA检测160份临床标本的两对半指标,记录检验结果并对检验结果进行统计学分析。结果经过配对资料χ~2检验分析,两种方法测定乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)时结果差异有统计学意义(P0.05)。结论两种检测方法均可用于临床乙型肝炎两对半指标的检测,但TRFIA优于ELISA的灵敏度和特异度。     

Efficient haemodialysis improves the response to hepatitis B virus vaccination

BACKGROUND: As patients on chronic haemodialysis (PCHD) elicit a weaker response to vaccination with recombinant hepatitis B virus surface antigen (HBsAg), we conducted this study to see how dialysis efficacy affects response to hepatitis B virus (HBV) vaccination. METHODS: Study subjects consisted of 30 PCHD. All subjects were vaccinated with 4 x 40 microg HBsAg i.m. at 0, 1, 2, and 6 months. If a subject had an HBsAg antibody (HBsAb) level <10 IU/l after vaccination, he or she received a booster dose. Subjects were divided into groups according to the level of HBsAb: non-responders (<10 IU/l), weak responders (10-100 IU/l), and good responders (>100 IU/l). RESULTS: The group of responders had a significantly more efficient dialysis (Kt/V) than the group of non-responders (p = 0.027). This difference was not observed between groups of non-responders and weak responders. The group of good responders had a significantly better Kt/V than the group of non-responders (p = 0.012). Good responders had a significantly better Kt/V than weak responders (p = 0.019). Kt/V values showed a significantly positive correlation with the HBsAb level (r = 0.47; p = 0.006). CONCLUSIONS: The HBV vaccination reaction was weaker in PCHD with inefficient dialysis. Efficient haemodialysis significantly improves the response to vaccination with recombinant HBsAg.     

两种方法在乙型肝炎病毒检测中的应用比较

目的调查时间分辨荧光免疫分析技术和胶体金法在乙型肝炎血清学标志物检测中的应用情况。方法采用泰莱——I型半自动时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂对96例乙型肝炎患者血清检测乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒表面抗体（HBsAb）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒e抗体（HBeAb）及乙肝病毒核心抗体（HBcAb）,同时用胶体金法进行检测。结果时间分辨荧光免疫分析法（TRF）检测乙型肝炎血清学5项标志物结果同胶体金法比较灵敏度较高,特异性稍差。结论时间分辨荧光免疫分析技术检测乙型肝炎血清学5项标志物,灵敏度高、稳定性好、经济、符合国情。可作为乙型肝炎病毒定量的一种常规方法。     

2015年北京市朝阳区居民乙型病毒性肝炎病毒血清流行病学调查结果分析

目的 了解北京市朝阳区常住人口乙型病毒性肝炎（乙肝）病毒血清标志物流行情况。方法 按照多阶段整群随机抽样的方法,抽取北京市朝阳区常住人口（居住6个月及以上）家庭中1~70岁人群,调查问卷同时采集静脉血3~5 ml进行乙肝三项检测。结果 完成调查13 229人,HBsAg阳性率为2.68%（354/13 229）（标化率2.37%）、HBsAb阳性率47.05%（6 230/13 229）。北京市户籍人群HBsAg和HBsAb阳性率（2.20%;44.54%）均低于外地户籍人群（3.51%;51.51%）。乡村居住人群HBsAb阳性率（44.91%）低于城市居住人群（48.91%）。男性HBsAg和HBsAb阳性率（3.15%;48.85%）均高于女性HBsAg阳性率（2.36%;45.93%）。随调查人群年龄上升,HBsAg阳性率逐渐上升,HBsAb阳性率逐渐下降。15岁及以下儿童中乙肝疫苗调查接种率为98.13%,15岁以上人群乙肝疫苗调查接种率为38.66%。结论 北京市朝阳区35岁以下人群HBsAg阳性率较低,35~45岁人群HBsAg阳性率较高并且乙肝疫苗接种率较低,提示我们需要加强35~45岁人群乙肝防控工作。     

遵义医学院珠海校区2007级新生HBV感染状况分析

目的掌握遵义医学院珠海校区2007级新生乙型肝炎(简称乙肝)病毒(HBV)感染情况,为防治HBV传染提供一定依据。方法空腹静脉采血5 mL,分离血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中的HBsAg,对HBsAg阳性者进行乙肝三系统(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)检测;用全自动生化分析仪检测〔紫外-乳酸脱氢酶法测丙氨酸氨基转移酶(ALT),紫外-苹果酸脱氢法测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)〕肝功能。结果受检的933名新生中,HBsAg阳性率为4.61%,其中男生为7.94%,女生为2.91%,男生HBV感染率高于女生,不同性别间感染情况差异有统计学意义(χ2=10.39,P0.01)。ALT异常者占0.86%,HBsAg阳性者中合并ALT异常的人数占11.63%,ALT异常者中HBsAg阳性人数占62.50%。结论2007级新生HBsAg阳性率低于全国平均水平(10%)。     

乙型肝炎病毒DNA含量与HBeAg、ALT相关分析及其临床意义

目的 探讨乙型肝炎病毒HBV-DNA含量与血清标记物HBeAg、谷丙转氨酶（ALT）的相关性及其对肝病患者诊断、预后的意义.方法 采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测523例乙肝患者血清学标记物（HBV-M）,其血清学模型包括以下四种组合,A组：HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）（大三阳）;B组：HBsAg（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）（小三阳）;C组HBsAg（＋）、HBcAb（＋）;D组：HBsAb（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）;并选取65例HBsAg（-）、HBsAb（-）HBeAg（-）、HBeAb（-）、HBcAb（＋）正常人（E组）作为对照.实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测血清中HBV-DNA含量,同时采用酶法测定血清ALT水平.结果 A组HBV-DNA阳性率为92.55%,明显高于B组78.97%（x2=189.60,P〈0.001）和C组50.98%（x2=234.15,P〈0.001）,A、D、C三组ALT水平均高于对照组（P〈0.001,P〈0.001,P〈0.001）;Log HBV-DNA与HBeAg S/CO之间存在正相关性（r=0.418,P〈0.001）,而ALT与Log HBV-DNA及HBeAg S/CO之间均无相关性.结论 HBV-DNA含量与乙肝病毒e抗原具有显著相关性,HBV-M和HBV-DNA定量检测并联合ALT水平对于临床乙肝病毒感染、复制及临床治疗有重要意义.     

蚌埠市部分单位乙型肝炎病毒携带者调查结果分析

目的观察蚌埠市部分单位人员乙型肝炎病毒感染情况,初步分析各年龄段感染率,为了解现阶段乙肝感染情况提供参考数据。方法将受检者按年龄从小到大分成5组;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标本,并将结果按HBsAg阳性和阴性、抗-HBs阳性和阴性以及乙肝病毒感染的不同模式进行统计学分析。结果 16～25年龄组HBsAg阳性率最低为4.69%,远低于其他年龄组,差异有统计学意义(P0.01),而抗-HBs阳性率高于其他年龄组,差异有统计学意义(P0.05);16～25岁和26～35岁年龄组大三阳模式分别为29.27%、26.67%,高于其他组,差异有统计学意义(P0.05)。结论青年人具有保护性抗体人数比例增加,乙型肝炎的感染率有所下降,但多为病毒复制活跃期,其血清具有较强的传染性。     

HBsAg和HBsAb双阳患者前C/C区基因突变分析

目的 探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎表面抗体(HBsAb)同时阳性(以下简称双阳)患者前C/C区基因突变的特点及其与S区基因突变的关系.方法 选取18例双阳患者,对前C/C区及S区基因序列扩增并测序,分析测序结果.结果 18例双阳患者中,检出前C/C区氨基酸突变者7例;前C/C区发生突变与未发生突变者比较,其S区氨基酸的突变次数及突变率明显增加(P<0.05);7例前C/C区氨基酸突变患者中,4例为前C区nt1896突变,其中1例为HBeAg(-),3例为HBeAg(+).结论 双阳患者不仅S区氨基酸突变增多,其前C/C区氨基酸突变也明显增加;双阳患者前C区nt1896突变更常见于HBeAg阳性者,可能与双阳患者病毒株的复杂性有关.     

原发性肝癌甲胎蛋白阳性与乙肝病毒标志物感染血清学的关系

目的：探讨原发性肝癌患者血清甲胎蛋白阳性与乙型肝炎病毒感染发生的关系。方法：采用化学发光免疫分析和ELISA法分别检测90例原发性肝癌患者、40例健康对照组进行了血清甲胎蛋白、乙型肝炎病毒血清五项标志物检测。结果：90例原发性肝癌患者中有87例乙肝五项标志阳性，乙型肝炎病毒总感染率为96．7％。乙型肝炎病毒总出现率：HBsAg（＋）为92．2％，HBeAg（＋）为17．8％，HBsAb（＋）为4．4％，HBeAb（＋）为57．8％，HBcAb（＋）为65．5％；5项指标全为阴性者占3．3％，明显高于健康对照组47．5％（19／40）（P〈0．01）和乙型肝炎病毒总感染率（52．5％）（P〈0．01）。肝癌组乙型肝炎病毒血清标志物感染模式，以HBsAg、抗-HBe和抗-HBC阳性模式多见，为40％。表明该模式的乙肝患者为原发性肝癌的高危人群。结论：乙型肝炎病毒与原发性肝癌之间的关系非常明确，乙型肝炎病毒感染不仅是肝癌发生的一个重要的危险因素，而且表明肝癌患者常伴有乙型肝炎病毒的复制活跃。因此，积极预防和控制乙型肝炎病毒感染流行，是减少原发性肝癌发生的关键所在。     

乙型肝炎病毒DNA与血清标志物的关系

目的探讨乙型肝炎(下称乙肝)免疫标志物(HBV-M)两对半模式与乙肝病毒核酸(HBV DNA)阳性率及复制水平之间的关系和临床意义。方法乙肝患者血清分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝两对半免疫指标(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc),实时荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA含量,并对结果进行对比分析。结果在HBV-M不同模式中,HBV DNA的阳性率不同,HBV DNA含量也不相同;在HBV-M中HBeAg阳性与HBV DNA检出率呈正相关。以HBsAg(+)HBeAg(+)抗-HBc(+)组(大三阳组)HBV DNA的阳性率最高,病毒载量较高。结论不同HBV-M具有不同的临床意义,而HBV DNA是衡量乙肝传染性的最精确指标,是确定HBV感染不同复制状态的检测手段,HBV DNA阳性表明有完整的病毒颗粒复制,即有传染性。因此,联合检测HBV-M和HBV DNA,不仅可以提高检出率,避免漏诊,而且为临床对HBV感染、复制、传染性判定以及抗病毒治疗的疗效评估提供了更为可靠的判定依据。     

乙型肝炎病毒前S1抗原与相关血清标志物联合检测的临床价值探讨

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S1抗原在感染者不同模式血清标志物(HBV-M)中的阳性表达情况,评价其临床应用价值。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测386例乙型肝炎(下称乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)阳性血清标本的乙肝病毒前S1抗原和HBsAg、抗-HBs、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、抗-HBe、抗-HBc,并对检测结果进行比较分析。结果前S1抗原在HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗-HBc阳性和HBsAg阳性、HBeAg阳性组的阳性率显著增高,分别为87.1%和84.6%;在HBsAg阳性、抗-HBc阳性、和HBsAg阳性、抗-HBe阳性、抗-HBc阳性以及HBsAg阳性组前S1抗原的阳性率依次为60.0%、49.8%和33.3%;HBeAg阳性组的前S1抗原阳性率86.7%,明显高于HBeAg阴性组51.0%(P0.01);386例乙型肝炎病毒感染者中,前S1抗原阳性率为60.1%,HBeAg阳性率为25.4%,两者差异有统计学意义(P0.01)。结论前S1抗原作为HBV感染、复制的指标较HBeAg更敏感,可补充和完善乙肝五项检测的不足,尤其对HBeAg阴性的血清,检测前S1抗原,能更好地反映病毒的复制状态和传染性,同时对病情的预后和疗效的判断也有一定的指导意义。