重组日本血吸虫铁蛋白的表达纯化及诱导小鼠保护性免疫研究

目的　表达、纯化重组日本血吸虫铁蛋白 ,观察其免疫小鼠后抗日本血吸虫的免疫保护作用。方法　用基因重组技术 ,将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆至表达载体 pGMC上 ;在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫铁蛋白得到高效表达 ;用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白 ;用SDS -PAGE和Western -blot鉴定表达纯化产物 ;用纯化的重组铁蛋白免疫小鼠三次 ,分别在 0、2、4周进行。第 6周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴。 4 2天后剖杀冲虫 ,计数虫数及肝卵数。结果　纯化的重组铁蛋白分子量为 4 0kD ,具有较好的免疫原性 ,能被日本血吸虫感染兔血清识别。与对照组相比 ,纯化重组铁蛋白免疫小鼠组的减虫率为 2 4 5 % ,减卵率为 4 5 8%。结论　重组日本血吸虫铁蛋白不仅在大肠杆菌中得到高效表达 ,而且纯化的铁蛋白分子能诱导抗日本血吸虫病的保护性免疫。     

一种快速血吸虫毛蚴孵化法

血吸虫毛蚴孵化操作法是对含有血吸虫虫卵的沉淀物加去氯自来水 ,置于有 15 W灯光照明的 2 5 - 30℃温箱中 2- 6 h后才能观察结果。这种方法所耗时间长 ,不能及时满足学生实验操作及观察 ,为此 ,我们对血吸虫毛蚴孵化法作了如下改进。将已感染血吸虫的兔子肝脏取出 ,用捣碎机 (2 0 0 0 r/min)捣碎 ,将肝脏碎末用 1.2 %的食盐水进行自然沉淀 ,直到沉淀水全清为止 ,倾去上清液 ,将沉淀物盛入 5 0 0 ml量杯中 ,在 4℃冰箱内放置备用。学生实验时 ,用恒温水浴箱把自来水加热到 30℃后 ,把水倒入 5 0 0 ml洁净的三角烧瓶的容量之 2 / 3处 ,用吸…     

粪便中日本血吸虫虫卵DNA的提取及PCR检测方法的优化

目的建立一套系统、完整的粪便日本血吸虫虫卵DNA提取法及PCR优化体系。方法利用蛋白酶K和苯酚法从感染日本血吸虫尾蚴的家兔粪便中提取DNA，根据日本血吸虫基因（AF00369）设计特异性引物，以粪便中提取的DNA为模板，采用PCR方法扩增目的基因片段，对PCR方法的各种反应条件进行优化并采用有限稀释法推测PCR检测法可检测到的最低虫卵数。结果以感染家兔的粪便中提取的DNA为模板．用PCR方法可扩增到分子量大小约为400bp的特异性条带，测序结果经BLAST工具进行分析．与日本血吸虫基因（AF00369）比对的同源性为96％；25μl PCR反应体系的最优化反应条件：MgCl2 1．5μl；dNTP0．5μl；引物1．0μl；DNA模板5．0μl；TaqDNA聚合酶0．5μl。扩增程序为：94℃预变性5min、94℃变性30s、53℃退火30s、72℃延伸30s，30个循环、72℃延伸7min、4℃保存。PCR检测法可检测到的最低虫卵数为0．015个。结论成功建立感染家兔粪便中虫卵DNA的提取方法及PCR血吸虫基因片段检测方法，同时对PCR反应条件进行优化，为从分子角度检测日本血吸虫虫卵DNA提供科学的实验依据。     

关于日本血吸虫毛蚴、尾蚴乳突的扫描电镜观察

作者观察了从感染日本血吸虫的兔粪孵化出来的毛蚴和从阳性钉螺逸出的尾蚴。分别将毛蚴和尾蚴置于3%戊二醛 pH7. 4的磷酸缓冲液中,在4℃下固定2小时。然后用磷酸缓冲液充分洗涤,继以1%四氧化锇在4℃继续固定2小时。经各级浓度的乙醇脱水,通过一系列醋酸盐-乙醇混合液(50%醋酸戊酯)处理,再转入酯酸戊酸。然后将标本置于二氧化碳临界点干燥器中干燥,用碳金镀膜,在 JSM-U3扫描电镜下观察。     

旋毛虫感染鼠血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

目的 探讨旋毛虫与血吸虫之间交叉免疫的分子机制,并寻找有效的日本血吸虫疫苗侯选分子。方法 以旋毛虫感染鼠血清为探针,筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,对获得的阳性克隆插入片段进行PCR扩增。结果 共筛选出11个阳性克隆,其插入的cDNA片段大小在1．4－5．0kb之间,其中1．4kb片段2个,5．0kb片段9个。结论 获得的阳性在隆插入基因片段可能为编码旋毛虫与日本血吸虫共同的抗原基因,其表达产物可能有抗日本血吸虫感染的作用。     

曼氏血吸虫虫卵纤溶酶的识别及该酶对曼氏血吸虫感染鼠血纤维蛋白原代谢的调节作用

曼氏血吸虫虫卵提取物能抗血小板活化、凝集 ,从而抑制纤维蛋白原聚集形成纤维蛋白 ,抑制血栓形成。Doenhoff等从虫卵中分离出一种相对分子质量为 2 70 0 0的纤溶酶 ,并分析了该酶对曼氏血吸虫感染鼠血纤维蛋白原的代谢作用。选用波多黎各分离的曼氏血吸虫 ,制备尾蚴、成虫和虫卵及其提取物。取 10U血栓素 ,加至含 5 0mg人纤维蛋白原的10mlPBS中 ,混和液加至 10cm培养皿中 ,放入纤维素膜 ,膜表面分别加曼氏血吸虫尾蚴、成虫和虫卵提取物 ,37℃孵育 4h ,摄影观察结果 ,比较尾蚴、成虫和虫卵提取物和不同浓度人纤溶酶的溶解面积大小 ,检测血…     

在血涂片上观察成人血红蛋白的洗脱法

方法 1.用常法于患者手指采血(肝素、枸橼酸钠、Na_2EDTA抗凝血均可)制成血涂片,在室温自然干燥30分钟。 2.将干燥的血涂片浸入25℃的2.76克分子pH7.2的磷酸钾缓冲液内2～3分钟,不时将玻片上下移动数次。 3.将玻片取出,立即放入95％酒精内10分钟,然后放入蒸馏水内5秒钟,最后置甲醇内5分钟,用水洗后加0.1％藻红B(Erythrosin B)染色4分钟     

SCP提取物合剂对血吸虫卵肉芽肿诱导的Th1型和Th2型细胞因子的调节效应

目的　进一步研究SCP提取物合剂对感染小鼠诱导的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的调节效应和分子机制。方法　BALB/c小鼠 40只 ,均分为 4组 ,每鼠感染 30± 2条尾蚴。 4w后组I和组III小鼠分别口服SCP提取物SCP1和SCP2 ,并联用“42 5”制剂 14d ,SCP1和SCP2的总量均为 70 0 0 μg ,“42 5”制剂 70 0mg ,组II单用SCP1,用量同上。组IV为对照。停药后1w ,剖检小鼠 ,计算各组小鼠每g肝组织虫卵数 (EPG)和成熟虫卵减少率 ;制成肝组织石蜡切片 ,计算肉芽肿大小 ;分离脾淋巴细胞 ,于 37℃ ,5 %CO2 中培养 48～ 72h ,取上清液 ,测定IFN -γ和IL - 4含量水平 (pg/ml)。 结果　实验组小鼠的EPG均显著低于感染对照鼠者 ,成熟虫卵减少率为 80 .5 6 %～ 87.70 % ;实验鼠肉芽肿的平均面积和体积均显著小于感染对照鼠者 (P<0 .0 5 ) ;实验鼠脾淋巴细胞上清中IFN -γ和IL - 4含量水平均显著低于感染对照鼠的 5 46 .15± 2 43.15和 73.78± 2 8.37。结论应用中药SCP提取物合剂能诱导明显的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变效应及血吸虫性纤维化作用 ,其分子机制与Th1型和Th2型细胞因子应答的调节效应密切相关     

植物防护剂防蚴灵预防日本血吸虫感染的研究

目的　从麻风树籽的提取物中研究开发出一种具有良好防护效果的预防日本血吸虫感染的植物防护剂。方法　防蚴灵防护剂是以麻风树籽为原料 ,采取提取、浓缩和生物技术研制出的新型植物防护剂。并在实验室内进行了防蚴灵直接杀尾蚴试验、防止血吸虫尾蚴感染小白鼠实验与生物毒性试验 ;采用“双盲法”随机选择鄂州市芦洲村第 2组的 3 6人作为实验组 ,第 3组的 2 8人作为对照组 ,观察其现场预防人群感染血吸虫的防护效果。结果　防蚴灵防护剂防止血吸虫尾蚴感染小白鼠保护率为 10 0 % ;对大鼠急性经口、皮 L D50 雌、雄分别均大于 5 0 0 0 m g· kg- 1和 2 0 0 0 m g·kg- 1 。实验组与对照组人群感染率分别为 0、2 1.43 % ,现场预防保护率为 10 0 %。结论　防蚴灵杀血吸虫尾蚴效果好 ,显效时间快 ,持续时间长。防蚴灵的研制成功为控制血吸虫病流行提供了新武器 ,将有着极为现实的防治意义     

家兔感染日本血吸虫后虫卵和成虫抗原的IgM,IgG抗体的变化和用吡喹酮治疗前后的酶联免疫吸附试验反应

实验用日本白色家兔,分别以10、20、70、250及800条日本血吸虫尾蚴经皮肤接种。感染一周后,从兔耳静脉取血,分离血清,保存于-20℃。用2囝吡喹酮悬液给感染9周的家兔以100mg/kg分4次间隔3小时灌入胃内。抗原是冰冻干燥的日本血吸虫虫卵及成虫用炭酸盐缓冲液提取的。酶联免疫吸附试验:被检血清用1%BSA-PBS-Tween从1:20作倍比稀释。以正常兔血清OD值的两倍以上作为抗体效     

温度对杀虫丁杀螺效果的影响

目的　观察在不同温度下杀虫丁的灭螺效果 ,以指导其在现场中的合理使用。　方法　用脱氯自然水将杀虫丁从 32 mg/ L 等比稀释至 0 .0 16 mg/ L 的不同浓度各 30 0 ml分别置于玻璃缸中 ,每缸放入 1袋含 30只钉螺的尼龙袋 ,分别浸泡 2 4 h和 4 8h,同时设氯硝柳胺和清水为对照 ,分别在 30℃、2 5℃和 2 0℃下观察杀虫丁的杀螺效果 ,试验结果用 POMS软件进行统计分析。　结果　在实验温度为 30℃、2 5℃和 2 0℃时 ,钉螺在不同浓度的杀虫丁中浸泡 2 4 h和 4 8h的死亡率均有显著性差异 (P均 <0 .0 1) ,钉螺浸杀 2 4 h时 ,杀虫丁的 L C50 依次为 0 .4 4 mg/ L、1.16 mg/ L 和 2 .74 mg/ L,杀虫丁与氯硝柳胺的毒力比分别为 0 .12、0 .0 9和 0 .0 7;钉螺浸杀 4 8h时 ,杀虫丁的 L C50 依次为 0 .13mg/ L、0 .2 7mg/ L和 0 .74mg/ L,杀虫丁与氯硝柳胺的毒力比分别为 0 .4 6、0 .2 7和 0 .11。　结论　随着温度的下降杀虫丁的杀螺效果明显减弱 ,在30℃时杀虫丁的杀螺效力最强     

曼氏血吸虫感染小鼠体内细胞色素P450同工酶表达的变化及相关的致癌物代谢酶活性的变化

肝细胞色素P4 50 (CYP)是一个酶的多基因家族 ,在许多药物和异生化合物的代谢中起关键作用。每种CYP同工酶根据其诱导和抑制机制应答不同的外源化合物。已有研究证实了曼氏血吸虫感染对整体CYP的影响。为了研究曼氏血吸虫感染后宿主体内各种CYP同工酶在细胞水平上的改变及其相关的酶活性 ,作者进行了如下研究。曼氏血吸虫尾蚴经皮感染雄性BK TO小鼠 (每只小鼠感染 2 0 0条尾蚴 ) ,于感染后6 ,1 5,30及 4 5天分别杀死 6只小鼠 ,提取肝微粒体蛋白 ,使用细胞色素P4 50ECLWest ern印迹杂交试剂盒检测特异的CYP同工酶 ,同时以相同数目…     

日本血吸虫可溶性尾蚴抗原早期诊断价值的研究

目的　确定日本血吸虫可溶性尾蚴抗原作为血吸虫病早期诊断检测用抗原的应用价值。方法　从感染日本血吸虫的钉螺收集尾蚴 ,制备可溶性尾蚴抗原 (SCA) ,建立应用 SCA为抗原检测家兔血清抗体的 ELISA法 ,并以此法检测 2 8只低度感染日本血吸虫家兔的感染前和感染后不同时期的血清 ,并与常规 SEA-ELISA法比较。结果　用 SCA检测时 ,感染后 15 d有 2 /2 8只家兔血清开始出现抗 SCA抗体阳性 ,2 0 d已有 2 0只阳性 ,阳性率为 71.4% ,3 0 d 2 8只全部阳性 ,阳性率为10 0 % ,而抗 SEA抗体在感染后 2 0 d开始出现 ,3 4d有 2 1只阳性 ,阳性率为 75 .0 % ,3 7d阳性率为10 0 %。平均出现抗体的时间 SCA-ELISA和 SEA-ELISA分别为 (2 1.2 5± 4.0 7) d和 (3 1.5 0±5 .12 ) d,前者比后者早 10 d。结论　用日本血吸虫可溶性尾蚴抗原检测血吸虫病具有早期诊断的价值     

用多聚酶链反应检测人体粪便和血清中曼氏血吸虫DNA

曼氏血吸虫感染的确诊要求在粪便中检测到虫卵 ,Kato- Katz法是目前公认的既经济又方便的诊断法 ,但在流行率及感染度较低地区 ,这一方法的敏感性较低。此外 ,对新感染虫体尚未产卵阶段亦无法检出 ,因而存在一定的局限性。作者研究和开发了多聚酶链反应 ( PCR)的诊断技术 ,首次从人体粪便与血清中检测曼氏血吸虫 DNA。运用样本抽提技术和二步快速反应来扩增粪便和血清中的曼氏血吸虫的 DNA。收集1 0 0个曼氏血吸虫尾蚴感染 4 5天的小鼠肝脏中的曼氏血吸虫虫卵 ,贮存于 - 2 0℃的 0 .9%盐水中备用。将含有 2 0 0个虫卵的盐水液1 0 μl加…     

环孢菌素A对感染日本血吸虫小鼠肝脏作用的研究

环孢菌素A（cyclosporinA，简称CyA）是认真菌代谢产物中发现的1种环状化合物，有明显的免疫抑制作用。近年来，其在寄生虫病领域中的应用引起了广泛的重视，被认勾是一个较有希望的抗血吸虫药物[1-4]。我们以前的工作[4]证实了CyA能抗日本血吸虫。本实验在此基础上，进一步观察CyA对肝脏组织学和组织化学的影响。材料和方法1药物（”yA购自瑞士Sandozl公司，用生理盐水稀释成浓度为0．5mg／ml的溶液。2动物分组昆明忡小白鼠，雌性，体重18一22g，常规饲料喂养。将小白鼠随机计为用药组和对照组，每组5P。用药组的｝鼠经腹部人工感染新…     

黄连提取物对牙周致病菌的抑制作用

祖国医学认为黄连具有清热解毒的功效 ,但迄今尚未见到治疗牙周病的报告。为探索黄连应用于预防和治疗口腔疾病的可能性 ,我们对黄连提取物对牙周致病菌生长繁殖的抑制作用进行了实验观察。材料与方法 :1黄连提取物的制备 :将 10 g干燥黄连根茎放入 10 0 m l蒸馏水中 ,煮沸 15分钟 ,冷却 ,用滤纸过滤后 ,再用孔径为 0 .2 2 μm滤菌器 (Millex- GP)过滤至无菌试管中 ,- 80℃冷冻。用 EYEL4冷冻干燥器制取黄连水浸液冷干提取物。 2细菌培养 :配制含不同浓度黄连提取物并含 1%酵母提取物的 Todd Hewett液体培养基 ,然后将过夜培养的 4株伴…     

抗血吸虫新药35972R.P初步临床治疗试验

抗血吸虫新药35972R.P 是一种新的非硝基化合物:4-甲基5(2-吡嗪基)1,2-二噻3-硫酮,其结构式为:实验研究:在感染曼氏血吸虫的小鼠和猴的实验中表明该化合物的抗虫效力比硝唑咪大1. 5～4倍,而其毒性则较低,小鼠的3天 LD_(50) 大于5克/公斤体重,比硝唑咪大10     

日本血吸虫虫卵的图像分析研究

日本血吸虫卵的平均长径和短径教科书中早有记载[1 ] 。用图像分析仪测其多种数据 ,经查阅中国医学科学院 1981年元月至 1999年 6月的光盘资料 ,未见有关报道。为了设计人门静脉内日本血吸虫卵过泸器孔眼的大小 ,测量 5 15个虫卵的多项数据 ,报道如下。1　材料与方法　　家兔感染日本血吸虫尾蚴后 42～ 45天处死 ,取出肝脏 ,用匀浆机捣碎 ,生理盐水冲洗 ,以 15 0目和 2 6 0目的过滤筛滤出虫卵 ,保存于 5 %甲醛生理盐水 2 4ｈ。将含新鲜虫卵的上述溶液滴在载玻片上在光镜下观察 ,随机取若干视野用同济医科大学千屏影像工程公司ＨＰ 10 0 0型…     

抗日本血吸虫雌虫卵黄腺单克隆抗体的制备与鉴定

本试验用感染血吸虫BALB/C小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,HAT培养基选择性培养,经筛选和克隆化后,制备了4株抗日本血吸虫单克隆抗体(1G_4、2G_4、4F_5和5B_9)。其免疫球蛋白类型均为IgM;除2G_4腹水稀释度为1:6.4×10~4外,其他3株均达到1:1×10~5;IFA结果表明5B_9仅与血吸虫雌虫卵黄腺起反应,而不与雄虫起反应,其余3株均定位于血吸虫成虫表膜。ELISA结果显示:单克隆抗体5B_9与SjAAg起强反应,与SEA有很弱的反应,与肝吸虫和猪囊尾蚴抗原无交叉反应。用5B_9 Dot-ELISA检测血吸虫病患者血清CAg的阳性率为87.5％(49/56),20例健康人血清检测均呈阴性反应。初步研究表明5B_9具备诊断血吸虫病的潜能。     

血钉草虫灭室内灭螺灭蚴效果观察

血钉草虫灭系沙蚕毒类药物杀虫丹钠盐与苄甲磺隆可湿粉剂的复配制剂 ,用于稻田除草灭虫。为了解该药物对日本血吸虫中间宿主钉螺及血吸虫尾蚴有无杀灭效果。我们于 2 0 0 0年 8-9月在室内进行了一系列灭螺灭蚴实验 ,现将实验结果报道如下 :1　材料和方法1 .1　钉螺采自流行区新鲜钉螺带回后用清水洗净 ,置平皿内让其爬出备用。1 .2　药物血钉草虫灭由蒲江县神农化工厂提供 ,有效含量32 % ,外观呈白色粉末 ,易容于水。1 .3　浸杀灭螺将药物按含量 32 %基质计算 ,用脱氯自来水分别配制成 1 .0 ,0 .5 ,0 .2 5 ,0 .1 2 5和 0 .0 62 5 mg/L 5个…