免疫球蛋白样抑制性受体KIR基因与HLA-Cw的匹配对NK细胞活性的影响

本研究探索自然杀伤（naturalkiller,rqK）细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样抑制性受体（killerimmunoglobulin—like inhibitionreceptor,KIR）基因与HLA—Cw配体匹配对NK细胞活性的影响。对27名健康人取新鲜外周血20ml,用NK细胞免疫磁珠分选试剂盒负向分选高纯度NK细胞。对30例初治确诊急性髓系白血病（AML）患者取新鲜骨髓液10ml,分离单个核细胞作为靶细胞。流式细胞仪检测NK细胞CD158a,CD158b表达水平。取健康人和患者的外周血各2ml,以PROTRANS法抽提DNA,采用序列特异性引物PCR—SSP分型技术分别检测HLA—Cw、KIR基因。MTT法检测KIR与HLA—Cw基因不同组合的NK细胞对AML患者白血病细胞的杀伤率。结果表明：分选后的NK细胞,纯度为（90．8±6．08）％。NK细胞KIR基因与靶细胞HLA—Cw等位基因的匹配数少则NK细胞的杀伤效应强,0个等位基因匹配的杀伤率为（50．66±8．40）％,1个匹配与2个匹配的杀伤率分别为（38．28±6．71）％,（19．74±4．15）％,（F=20．226,P〈0．001）。NK细胞的KIR表达水平与杀伤作用也有一定的联系（F=16．276,P值〈0．001）。结论：NK细胞对AML白血病细胞的杀伤作用与抑制性KIR／HLA—Cw的匹配数及KIR的表达相关,匹配越少、KIR表达越低,杀伤率越高。     

HLA—G与肿瘤免疫逃逸

HLA—G分子是一种非经典HLA—Ⅰ类抗原．相对于经典的Ⅰ类抗原．它的组织分布非常局限，多态性有限。生理情况下HLA—G主要表达于绒毛膜外层细胞（滋养层细胞），在胎儿逃避母体免疫攻击的机制中发挥着至关重要的作用。研究表明，一些肿瘤可表达HLA—G，可能通过抑制NK细胞、T细胞的功能等机制。在肿瘤免疫逃逸中占有重要的地位。HLA—G在肿瘤免疫中所扮演的角色及其与T细胞、Th1/Th2漂移、细胞因子等之间的相关性已成为肿瘤免疫研究的热点。     

ILA配型在实质性器官移植中的意义

HLA在抗原递呈,T淋巴细胞激活和增殖等免疫过程中起重要作用,在同种器官移植中HLA不配合可产生移植排斥,GVHD,导致移植失败,本文对HLA配型在不同实质性器官移植物存活率,排斥反应的影响进行综述。     

造血干细胞移植配型中HLA分型方法的研究进展

移植物抗宿主病(GVHD)是造成异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)和器官移植失败的关键因素之一，而移植前选择供受体HLA合适的配型则是减弱和减轻移植排斥反应的重要措施。随着无关供受体移植数量的逐年增加以及HLA新等位基因的不断发现(已发现1900多个等位基因)．势必要求建立一种快速、特异、高分辨、低成本、大规模及智能化的新型HLA分型技术平台，因此，HLA分型技术为适应这一现状而取得了飞速发展。我们对近年出现的几种HLA分型策略作一概述。     

NKT细胞亚群研究进展及其在移植免疫中的作用

正自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类共表达NK细胞受体及恒定T细胞受体(TCR)的特殊细胞亚群~([1]),既不同于T、B淋巴细胞,亦区别于自然杀伤(NK)细胞,该TCR与高度偏向的Vs链(主要为Vβ8.2)相关,由Vα14和Jα281基因节段所编码~([2])。TCRVα24片段通常和Vβ11片段相结合,NKT细胞活化后能迅速分泌大量白细胞介素4(IL-4)等细胞因子促进     

新等位基因HLA-DRB1＊1462的核苷酸序列分析

本研究验证一个新的HLA等位基因DRB1＊1462的核苷酸序列。应用MR-SSO和MR-SSP基因分型技术对HLA分型,对怀疑是HLA新等位基因进行DNA测序。结果发现,该序列与已知的所有HLA-DRB1等位基因序列不一致,与HLA—DRB1＊140101的序列差异仅表现在第2外显子区域中256位碱基发生了G-〉A的替换,导致相应的氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸。结论：该基因是HLA-DRB1位点的一个新等位基因,已经被WHOHLA命名委员会于2006年1月30日正式命名为HLA-DRB1女1462。     

HLA半相合造血干细胞移植的研究进展

异基因造血干细胞移植是治疗恶性血液病最有效的手段之一,但人类白细胞抗原(HLA)屏障限制了其广泛应用。随着免疫学、分子生物学、细胞生物学理论和技术的不断发展,HLA半相合造血干细胞移植日益受到关注。本文就其研究进展作一综述。     

MYCT1在恶性肿瘤及免疫治疗中的研究进展

MYC靶基因1(MYC target 1,MYCT1)是2003年首次在喉癌中克隆得到的新基因,在喉癌中表达下调,发挥抑癌基因功能。MYCT1不仅对维持机体正常细胞生命活动至关重要,还可通过其异常调控参与肿瘤细胞的增殖、分化、迁移、凋亡和上皮-间充质转化等,与肿瘤预后相关。MYCT1在不同类型的恶性肿瘤中发挥不同的作用,显示出癌基因或抑癌基因的功能。MYCT1参与调节肿瘤血管与免疫细胞之间的相互作用,在肿瘤免疫中发挥作用。MYCT1作为潜在的血管生成基因参与调节肿瘤血管的生长,从而影响肿瘤的转移和侵袭;MYCT1还可以影响肿瘤细胞对免疫细胞的免疫逃逸能力。MYCT1可能会成为恶性肿瘤治疗的新靶点。     

地中海贫血造血干细胞移植供体及预处理方案选择的研究进展

地中海贫血为常染色体隐性遗传疾病,是由于基因突变导致血红蛋白的a或β珠蛋白链生成障碍引起的血液系统疾病.目前,造血干细胞移植(HSCT)是唯一可以治愈地中海贫血的方法.但是,由于受到HSCT供者与患者人类白细胞抗原(HLA)相合程度的限制,以及HSCT后的移植排斥与移植相关不良反应等并发症与预处理方案相关,因此选择合适的造血干细胞供体与预处理方案,对提高HSCT治疗地中海贫血的疗效至关重要.笔者拟就无关供者HSCT、亲缘供者HSCT、脐血移植(UCBT)及预处理方案的研究现状与研究进展进行综述.     

HLA半相合造血干细胞移植的研究进展

异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)是目前治疗多种恶性血液系统疾病、免疫缺陷性疾病以及某些遗传代谢性疾病的最有效手段。人类主要组织相容性抗原(HLA)相合的亲缘相关或无关供是allo-HSCT最合适的供。然而，仅有25％～30％的患能找到HLA相合的亲缘供；在无关人群中找到相合供的概率是1／5万-1／10万，甚至更低。若进行HLA半相合HSCT，则有90％的患能够找到供，可为更多需接受移植治疗而无HLA相合供的患带来福音。     

深圳汉族人群HLA-Cw,-DQB1基因座等位基因的多态性

背景:HLA复合体是极其复杂的遗传系统,对其多态性的研究在法医学个体识别和亲权鉴定、群体遗传学、移植免疫、疾病相关等医学领域有重要的应用价值。目的:了解HLA-Cw,-DQB1基因座的等位基因在深圳汉族人群中的分布规律。设计、时间及地点:样本基因型的统计学分析,于2007-01/2008-06深圳市血液中心免疫遗传研究室完成。材料:样本来自中国造血干细胞捐献者资料库深圳地区志愿捐献者,使用EDTA-K2抗凝管采集外周血。方法:采用聚合酶链式反应-序列测定方法对深圳地区226名无关供者HLA-Cw,-DQB1基因座的2,3外显子进行序列测定与分析。等位基因频率采用直接计数法计算,Hardy-Weinberg平衡检验采用x2检验。主要观察指标:样本HLA-Cw,-DQB1基因座的基因型。结果:226个样本中共检测到25个Cw等位基因。其中Cw*0102,Cw*0702的频率最高(0.1881),其他频率较高的等位基因依次为Cw*0304,Cw*0302,Cw*0401及Cw*0801,Cw*0303,Cw*0602。该位点基因型观察值与期望值经χ2检验符合Hardy-Weinberg平衡定律(x2=116.00,...     

HLA—Cw配型与异基因造血干细胞移植后GVHD关系的临床初探

目的探讨HLA-Cw配型在异基因造血干细胞移植中与GVHD的发生和复发的关系。方法对HLA6个位点（A、B、DR／DQ）全相合的同胞供者9例异基因外周血干细胞移植和10例脐带血移植进一步进行HLA-Cw配型,分析HLA-Cw配型与GVHD发生的关系。结果16例HLA-Cw相合者,共植入15例（94％）,其中Ⅰ-Ⅱ度急性GVHD发生11例（69％）,Ⅲ度急性GVHD2例（12．5％）,慢性GVHD15例（94％）,无复发病例。在HLA—Cw不相合3例中,2例发生Ⅲ度GVHD并且早期死亡,1例早期复发。在HLA—Cw配型相合与不相合两组间,急性Ⅰ～Ⅱ度及Ⅲ度GVHD的发生其差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论HLA—Cw配型相合供体造血干细胞移植有利于减少植入后急性GVHD发生及复发,提示HLA-Cw位点配型在造血干细胞移植,尤其是异基因移植中具有重要意义。     

115例汉族骨髓供者HLA-Cw位点基因多态性的研究

目的调查汉族骨髓供者中常见的HLA-Cw等位基因.方法对115例骨髓捐献者采用PCR-SSP方法进行HLA-Cw低分辨和高分辨分型.结果 115例汉族骨髓捐献者中,HLA-Cw位点基因频率分布由高至低依次为Cw*03(0.259 8)、Cw*01(0.214 2)、Cw*07(0.197 8)、Cw*08(0.115 4)、Cw*12(0.058 2)、Cw*14(0.039 9)、Cw*15(0.039 9)、Cw*06(0.039 9)、Cw*04(0.030 9);进一步检测到16种等位基因,其中Cw*010 1、Cw*030 4、Cw*030 2、Cw*040 1、Cw*060 2、Cw*070 2、Cw*080 1、Cw*120 2、Cw*140 2、Cw*150 5、Cw*150 2为对应抗原最为常见的等位基因.结论本研究在DNA水平上,提供了中国汉族人群中HLA-Cw位点基因分布频率及常见等位基因资料.     

HLA—Cw基因测序分型的研究

目的建立HLA-Cw位点测序分型技术,以用于无关供/受者HLA-Cw基因配型等基础应用研究。方法对HLA-Cw位点的第2和第3外显子,设计、合成一对PCR引物和4条测序引物,探索最佳的PCR反应体系和扩增条件,采用PCR引物扩增HLA-Cw基因的第2、第3外显子和第2内含子,扩增产物经纯化后作为测序模板,进行4个测序反应,产物经酒精/EDTA/NaAc法纯化,用ABIPrismTM3100测序仪电泳检测,相关的分析软件分析HLA基因型。检测分型结果的可靠性采用基因型已知的U-CLA国际HLA室间质控的DNA样本进行验证。结果检测6例UCLA国际HLA室间质控的DNA样本,HLA-Cw等位基因型与UCLA公布的结果完全一致。结论本文的HLA-Cw基因测序分型方法准确、可靠,具有广泛的应用前景。     

高强度聚焦超声制备小鼠(H_(22))肝癌固化瘤苗免疫性的实验研究

目的　对比研究经高强度聚焦超声 (HIFU)及经 6 5℃高温水浴 1小时处理后制成的固化瘤苗的细胞免疫效应。方法　将小鼠H2 2 肝癌细胞分别用HIFU及 6 5℃高温水浴 1小时处理 ,制成固化瘤苗 ,并将两种方法制得的瘤苗同时接种于不同的小鼠 ,以抵抗同源H2 2 癌细胞 1.0× 10 7/ml攻击 ,比较其抑瘤率和 6周内生命延长率。结果　经HI FU处理制成的瘤苗其抑瘤率和 6周内生命延长率均显著高于经高温水浴法制得者 (P <0 .0 0 5 )。结论　HIFU瘤苗组具有明显优于高温瘤苗组的细胞免疫效应 ,HIFU是一种制备肿瘤疫苗的好方法     

肝癌肝移植术前和术中癌细胞血行转移与肿瘤分化、微血管侵犯相关性研究

目的:探讨检测血播散肝癌细胞内AFP-mRNA评估肝癌肝移植术前和术中微转移与肿瘤分化、微血管侵犯的相关性。方法:采用RT-PCR联合荧光标记探针杂交法定量检测30例血清AFP阳性肝癌肝移植患者术前、术中血播散肝癌细胞内AFP-mRNA,病理分析肿瘤分化程度及微血管侵犯。结果:30例肝癌肝移植术前与术中肺动脉、外周动脉、外周静脉、门静脉血中播散肝癌细胞内AFP-mRNA阳性率以及拷贝数有显著差异(P<0.05);术前、中肿瘤播散组与无肿瘤播散组的微血管侵犯有显著差异(P<0.01);术前肿瘤播散组与术前无肿瘤播散组肿瘤分化无显著差异(P>0.05);术中肿瘤播散组与术中肿瘤无播散组肿瘤分化有显著差异(P<0.01)。结论:RT-PCR联合荧光标记探针杂交法能够检测到肝癌患者血液中播散肿瘤细胞,并且以肺动脉血阳性率最高;肝移植手术过程可以引起肿瘤细胞播散,且与肿瘤分化、微血管侵犯相关。     

HLA-Cw位点低分辨基因分型"纯合子"的等位基因特性研究

目的 研究HLA-Cw位点低分辨基因分型"纯合子"的等位基因特性,为临床移植配型提供精确资料.方法 在43例血缘关系造血干细胞移植(HSCT)供受者中,对中国最常见的低分辨基因分型Cw*03和Cw*07的"纯合子"个体采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)高分辨基因分型方法 进行等位基因定型,并采用自主研制的三维结构匹配软件系统(HLA StrucMark version1.0)对其等位基因产物进行三维结构匹配,以预测不同分辨率分型结果 对移植物抗宿主病(GVHD)发生的影响.结果 低分辨基因分型Cw*03、Cw*07"纯合子"个体的高分辨基因分型结果 显示Cw*03及Cw*07的纯合子分别为14%和43%,其余均为Cw*03及Cw*07杂合子个体.可见其低分辨基因分型易造成供受者问等位基因的错配;在有家系校正的情况下,标本的低分辨模糊结果 可以通过家系遗传分析来校正定型;在无家系校正的情况下,应通过高分辨基因分型来确定等位基因,三维结构差异分析则显示这些错配有可能造成HSCT后GVHD的发生.结论 当低分辨基因分型结果 只出现Cw位点"纯合子"时,有家系的标本应当以家系分型结果 校正定型,无家系校正的标本应当用高分辨基因分型方法 进行核实,从而为临床移植提供准确的配型报告,以防止无关供-受者HSCT后因等位基因错配而引起的严重GVHD.     

海洛因依赖者免疫功能变化的研究

目的:研究海洛因依赖者免疫功能的变化及机制。方法:采用APAAP法、3HTdR掺入法,检测50例海洛因依赖者外周血T细胞亚群、IL-2R+细胞数和白介素-2(Interleukin-2,IL-2)水平;采用红细胞C3b受体花环(RBC-C3bRR)、红细胞免疫复合物花环(RBC-ICR)、粘附增强因子活性(RFER)及抑制因子活性(RFIR)试验,观察海洛因依赖者红细胞免疫功能的变化。结果:海洛因依赖者外周血T细胞总数(56.6±3.4)、IL-2R+细胞数(15.0±4.2)及血清IL-2水平(33±7)与对照组比较显著降低(P<0.01),而CD4+细胞(40.5±3.2)和CD4+/CD8+比值(1.65±0.18)与对照组比较显著升高(P<0.01)。海洛因依赖者RBC-C3bRR(15.3±2.1)、RFER(71.4±8.5)与对照组比较明显下降(P<0.01),而RBC-ICR(4.8±1.2)、RFIR(28.1±4.7)与对照组比较显著则明显升高(P<0.01)。结论:长期吸食海洛因可降低人体免疫功能。     

胎盘间充质干细胞研究进展

近年来，随着人们对间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)生物学特性及功能的深入研究，已成功地从人骨髓、外周血、肌肉、脂肪、脐血、羊水及胎儿组织中分离并鉴定出MSC。胎盘作为胚胎发育中维系母体和胎儿氧气及营养物质交换的重要暂时性器官，由起源于细胞滋养层和胚外中胚层的胎儿丛密绒毛膜和母体子宫基蜕膜共同组成，无论从解剖结构还是在发育行为上，都包含了较为幼稚的胚胎及趋于成熟的成体干细胞成分；胎盘在胎儿娩出后即完成使命，成为“废弃”物，对其研究不会涉及伦理道德问题，因此目前已成为寻找人类间充质干细胞新来源及提高临床应用效果的研究热点。本文就胎盘MSC的来源、分离、特征及可能的应用前景作一综述。     

化学去细胞尿道在大鼠皮下的埋置

背景：有研究提出了移植排斥反应的实质是受者免疫系统对供者移植物抗原的免疫应答反应。目的：验证化学萃取去细胞处理对同种异体尿道移植抗原性的影响。方法：取SD大鼠尿道共20根，每段长1 cm。其中10根采用化学去细胞法处理大鼠尿道的免疫原性成分，使其成为去细胞尿道；另外10根不做去细胞处理为新鲜尿道。在10只Wistar大鼠背部皮下植入去细胞尿道，另取10只大鼠背部皮下植入新鲜同种异体尿道。6周后取材行大体和组织学检查。结果与结论：20只Wistar大鼠在皮下埋植尿道后均无自嗜肢体现象，切口愈合良好，饮食正常，无溃疡发生。6周后取材大体观察可见去细胞尿道周围有组织膜形成，而新鲜尿道未见组织膜形成。苏木精-伊红染色可见去细胞尿道逐渐被吸收，被平滑肌组织取代，并可见大小不等血管长入去细胞尿道内，部分有形成血窦的倾向；对照组尿道未见吸收，未见血管长入。提示化学去细胞尿道在大鼠体内逐渐形成类似正常尿道的组织材料，说明化学去细胞同种异体尿道移植的抗原性明显降低，可替代正常尿道海绵体组织。