抗蓝氏贾第鞭毛虫单克隆抗体的制备和特性研究

用体外培养的四川株蓝氏贾第鞭毛虫滋养休免疫BAIB/c小鼠,以免疫脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,共获得3个分泌抗蓝氏贾第鞭毛虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这些McAb经鉴定均属lgG_1亚类。选取活性最强的1E_2株McAb对不同贾第虫株进行抗原定位的测定,由IFA显示,该McAb与四川株和山东株滋养休的后1/3表面呈现荧光反应,但与澳大利亚株滋养体表面不显荧光,表明国内株与国外澳大利亚株滋养体表膜抗原存在株间差异。     

单克隆抗体抗贾第虫作用的研究

应用体外纯培养的贾第虫滋养体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和常规杂交瘤细胞技术，制备特异的抗贾第虫单克隆抗体（１Ｅ２，１Ｇ５），以其与贾第虫滋养体相互作用，均发现具有明显的抗贾第虫效果，生长抑制率分别为３５％和６３．４％；将此单抗加入正常培养液中，其含量与抑制率呈现明显的剂量反应关系，相关系数分别为０．９７６４和０．８９８７；单抗经滋养体吸收后，对贾第虫的生长抑制作用消失；经补体灭活前后的豚鼠血清对单抗的抑制作用无影响。     

抗蓝氏贾第鞭毛虫药物研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia Stile,1915,亦称G．intestinalis或G．duodenalis,简称贾第虫）,是一种厌氧的（anaerobic）寄生性原生生物。其生活史包括滋养体（trophozoite）和包囊（cyst）两个发育阶段。前者为虫体的致病期（或营养和繁殖期）,寄生于人和某些哺乳动物小肠内导致以腹泻和消化不良为主要症状的蓝氏贾第鞭毛虫病（giardiasis,简称贾第虫病）;后者为感染期（或静止期）,     

蓝氏贾第鞭毛虫感染率及家庭聚集性分析

蓝氏贾第鞭毛虫是重要的致病寄生虫，以腹泻为主要症状。我们调查了山东省３５个县（市，区）的８５３８３例，平均感染率为４．８４％，以５－９岁儿童感染率为高，随年龄增高而下降。经对其中１８８４４个农村家庭采用二项分布拟合法进行家庭聚集性分析，结果显示该虫具有明显的家庭聚集现象。     

蓝氏贾第鞭毛虫病毒研究进展

自从1972年Mattern等首次在溶组织阿米巴的某些虫株中发现病毒样粒子后，人们相继在阴道毛滴虫、蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）、艾美尔球虫、巴贝斯虫及利什曼原虫等原虫中发现特异性双链RNA病毒，目前原虫病毒已成为寄生虫学研究的热点。蓝氏贾第虫病毒（Giardia lainblia virus，GLV）是继阴道毛滴虫病毒发现后确认的第2个原虫病毒，GLV的发现为贾第虫病的诊断与防治、原虫与病毒及宿主间相互关系的研究提供了新的方向。     

蓝氏贾第鞭毛虫的基因及基因型

蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)是一种多鞭毛的单细胞真核生物,其滋养体寄生在人体的小肠,引起以腹泻为主的贾第虫病(giardiasis)。本病世界范围的感染率约为30%,我国感染率各地区不等,约在1%～20%左右(平均约2.54%)。目前,贾第虫病已被列为全世界危害人类健康的十种主要寄生虫病之一[1]。贾第虫在生物进化上处于特殊地位(属“源真核生物”)。随着分子生物学研究技术的发展,国内外学者对本虫的基因及基因型研究不断深入,本文就近年来这方面的研究综述如下。     

蓝氏贾第鞭毛虫特异性细胞骨架蛋白——贾第素研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫具有由微管、微丝和骨架蛋白构成的高度发达的细胞骨架系统.近年来,贾第虫的细胞骨架与其致病力的密切关系已经得到证实.在参与细胞骨架构成的众多蛋白质中,特异性细胞骨架蛋白——贾第素是其中重要的成分之一.对贾第素的研究不仅可为贾第虫细胞骨架的研究增添新的知识和研究资料,还可为贾第虫病的致病机制及抗贾第虫药物靶点的选择提供实验依据.     

蓝氏贾第鞭毛虫α-19贾第素的单克隆抗体制备与亚细胞定位研究

目的 制备蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)α-19贾第素的特异性抗体,并通过免疫荧光对该贾第素的亚细胞定位进行鉴定。方法 经PCR获得α-19贾第素编码区片段,双酶切将目的 片段连入原核表达载体pET-28a(+)-α-19,重组载体转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE及 Western blot验证表达情况;采用设计的合成抗原肽免疫小鼠经细胞融合和筛选制备特异性单克隆抗体,分别用贾第虫滋养体裂解物和α-19贾第素重组蛋白Western blot验证抗体特异性和结合力,选择特异性最好的单克隆抗体通过免疫荧光技术对α-19贾第素的亚细胞定位进行观察。结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-19,经SDS-PAGE及 Westernblot分析显示重组载体在大肠杆菌中表达出相对分子量约49 kD的重组蛋白,与理论值相符;Western blot显示单克隆杂交瘤细胞株α-19-3-7-3-5分泌的抗体结合力和特异性俱佳,可用于定位研究;免疫荧光定位结果表明α-19贾第素主要位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。结论 制备了α-19贾第素的特异性单克隆抗体,免疫荧光显示α-19贾第素定位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。     

蓝氏贾第鞭毛虫潜在致病机制初探

蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)是一种常见的人兽共患寄生性原虫,由其导致的贾第虫病已被世界卫生组织列为危害人类健康的10种主要寄生虫病之一。近年来,贾第虫病的危害日益受到重视,然而贾第虫导致腹泻的致病机制尚不明确,可能与其细胞骨架蛋白、虫体分泌物、L-精氨酸代谢以及表面抗原变异、免疫学改变等多种因素有关,该文对与贾第虫致病机理相关的研究作一综述。     

蓝氏贾第鞭毛虫河北株的分离及其基因型研究

目的 探讨河北承德地区蓝氏贾第鞭毛虫包裹大小与基因型的关系。方法 对河北承德地区进行贾第虫流行病学调查,分离出3株贾第虫（CH2,CH3、CH4）。用PCR技术对此3虫株DNA进行tim基因扩增和序列测定,并与GenBank登记虫株比较和用DNAstar软件处理。结果 此3株贾第虫株的基因型属2型（JH型）。结论 该地区贾第虫包囊形态之大小,与基因型并无直接关系。     

蓝氏贾第鞭毛虫染色体核型初步观察

目的初步观察蓝氏贾第鞭毛虫细胞分裂过程中典型凝集染色体的形成及其数目。方法用改良TYI-S-33培养基培养贾第虫滋养体。在结束培养前4h弃去旧培养基,加入事先预热的含有秋水仙素(终浓度为0.2μg/ml)的新鲜培养液。低渗处理55min,用甲醇∶冰醋酸(体积比=3∶1)固定液固定。收集细胞、滴片、Giemsa染液染色,光学显微镜观察结果。结果获得了较好的染色体分裂相。贾第虫染色体的数目多数为2n=8条。50个细胞分裂相中,有35个为8条染色体,10个为9条染色体,5个为10条染色体。染色体微小呈小杆状,有时成对,形态相同。结论蓝氏贾第鞭毛虫在分裂过程中形成典型的凝集染色体,染色体数目为2n=10条。     

蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建

目的构建蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素(α-8 giardin)特异性锤头状核酶-GCV重组载体。方法采用RNA draw软件对蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素基因序列(GenBank登录号为AY781323)的二级结构进行模拟分析,按照G∶C比例和锤头状核酶设计原则,选取合适的核酶切割靶点,设计特异性锤头状核酶(H8)序列,并将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,获得α-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体(pGCV634/H8/1423)。将载体线性化体外转录产物电击转染至贾第虫滋养体细胞内。提取转染后24 h的各组虫体总RNA,并以其为模板采用RT-PCR验证转染效果及对靶mRNA的切割效果。结果成功设计、合成了蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素mRNA锤头状核酶序列(H8),将其与犬贾第虫病毒载体(GCV)连接,成功构建了pGCV634/H8/1423;RT-PCR实验结果表明,重组载体pGCV634/H8/1423转染贾第虫细胞后24 h可检测到核酶RNA的存在,并实现了对α-8贾第素mRNA高效、特异的切割作用。结论构建的pGCV634/H8/1423能有效转染至贾第虫细胞内,并在其细胞内对α-8贾第素基因...     

蓝氏贾第鞭毛虫遗传多样性研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫是全球危害人类健康的重要寄生性原虫之一。由于该虫宿主包括几乎所有脊椎动物,虫种的基因型和表现型变异较大,因而其宿主特异性及人畜共患传播问题尚未完全解决。近年来,贾第鞭毛虫病的广泛流行已引起人们对其遗传多样性的关注。基于PCR的分子鉴定方法及多种分子标志的应用使得对贾第鞭毛虫种群的遗传结构有了更多了解。该文就蓝氏贾第鞭毛虫遗传多样性的研究进展作一综述。     

蓝氏贾第鞭毛虫的细胞骨架蛋白

蓝氏贾第鞭毛虫是一种重要的肠道致病性原虫,其致病力与细胞骨架密切相关。贾第虫具有高度发达的细胞骨架系统,包括8根鞭毛、1个腹吸盘、中体和funis等,主要由微管蛋白、肌动蛋白、动力蛋白、贾第素及其相关蛋白组成。该文就贾第虫细胞骨架及相关蛋白的结构和功能作一综述。