中国人遗传性高铁血红蛋白血症NADH-细胞色素b5还原酶基因L72P突变

目的：鉴定导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ）的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）基因突变类型，探讨ＲＣＭ发病的分子基础。方法：逆转录－聚合酶链反应产物直接测序和ｃＤＮＡ克隆测序分析先证者的ｂ５Ｒ编码基因；限制性酶切分析其基因组ＤＮＡ。结果：发现一例ＲＣＭ患者ｂ５Ｒ基因第７２密码子存在新的错义突变（ＣＴＣ→ＣＣＣ）。结论：该突变导致ｂ５Ｒ蛋白第７２位亮氨酸被脯氨酸替换（Ｌ７２Ｐ）是该先证者致病的分子基础；进一步证实Ⅰ型ＲＣＭ患者的ｂ５Ｒ基因突变多发生在近５′端部分。     

NADH—细胞色素b5还原酶电泳测定法

目的：为了在我国建立一种新的ｂ５Ｒ酶活性测定方法。方法：利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）结合ｂ５Ｒ酶活性染色对正常人及五个ＲＣＭＩ型家族的先证者和杂合子红细胞的ｂ５Ｒ酶活性进行测定。结果：正常人及杂合子轿红蛋白带后的出现一蓝色区带,正常人的蓝色带比杂合子深,而五个先证者未见此蓝色条带。结论：此法简单、快速,可作为遗传高因红蛋白血症（ＲＣＭ）的筛选实验。     

细胞色素b5还原酶缺陷的分子生物学研究最新进展

遗传性高铁血红蛋白血症主要由NADH-细胞色素b5还原酶(Cytb5R)缺陷引起。膜结合型和胞浆可溶型cytb5R由定位于22号染色体的同一基因编码。多种突变类型可导致该基因编码有缺陷的酶蛋白。本文就目前有关NADH-细胞色素b5还原酶蛋白特性与基因结构特点,基因突变与酶缺陷机制,以及可能建立的基因诊断方法等研究现状作一综述。     

NADH—细胞色素b5还原酶缺陷的实验室诊断进展

高铁血红蛋白含量测定、酶活力测定和电泳测定是最早用于诊断遗传性高铁血红蛋白血症的实验室方法，但对杂合子不易检出。放射免疫测定、酶联免疫测定和免疫印迹技术可对ｂ５Ｒ进行定量测定，并有助于了解ｂ５Ｒ在细胞内的分布。基因诊断技术能够检测出引起ｂｓＲ缺陷的基因突变位点，淡阐明ＲＣＭ为发病机制提供可靠的依据。     

遗传性高铁血红蛋白血症分子诊断方法的研究

目的 探讨遗传性高铁血红蛋白血症的分子诊断方法。方法 采用RT-PCR和PCR产物直接测序法,对3例遗传性高铁血红蛋白血症患者细胞色素b5还原酶(b5R)cDNA编码区序列进行分析。通过基因组DNA的PCR-限制性酶切或PCR-序列测定,验证cDNA策略所检出的突变。结果 患者A的b5R cDNA在第527位碱基呈T/C杂合状态,第608位碱基呈G/A杂合状态;患者B的b5R cDNA在第170位碱基和第179位碱基均呈G/A杂合状态;患者C的b5R cDNA在第608位碱基呈G/A杂合状态,第791位碱基呈C/T杂合状态。基因组DNA策略与cDNA策略所得结果一致。结论 建立了遗传性高铁血红蛋白血症的分子诊断方法,并在3例患者中发现了3个以复合杂合子形式存在的、新的b5R基因突变。     

PCR—RFLP检测NADH—细胞色素b5还原酶缺陷基因杂合子突变

目的；分析导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶基因突变类型，方法：ＰＣＲ扩增５ｂ还原酶基因第３和第４外显子；限制性片断长度多态分析扩增产物。结果：发现患者家系成员存在第５７密码子杂合子突出。结论：ＲＦＬＰ－ＰＣＲ可望成为遗传性高铁血红蛋白症的基因诊断方法之一。     

双抗体夹心ELISA测定人红细胞NADH—细胞色素b5还原酶含量

为测定人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）含量，建立了以兔抗ｂ５Ｒ抗体为包被抗体，ｂ５Ｒ单抗为显示抗体的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。利用此法，首次测得中国正常成人（ｎ＝３０）红细胞胞浆的ｂ５Ｒ含量为２５．６３±８．５４ｎｇ／ｍｇＨｂ。新生儿、遗传性高铁血红蛋白血症患者及其家族半合子成员的红细胞胞浆ｂ５Ｒ含量均低于正常成人水平，甚至低至测不出。结果证实，ｂ５Ｒ酶蛋白量减少是新生儿和遗传性高铁血红蛋白血症患者红细胞ｂ５Ｒ活性降低的机制之一。     

中国人遗传性高铁血红蛋白血症二个家系所见Gytb5R基因Arg^57…

目的：探明遗传性高铁血红蛋白血症ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ）缺陷的分子机制。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，克隆３个遗传性高铁血红蛋白血症家系Ｃｙｔｂ５Ｒ９２１ｂｐ的ｃＤＮＡ编码序列，并用限制性酶切ＰＣＲ产物分析３个家系的基因组ＤＮＡ。结果：２个家系存在Ａｒｇ＾５７→Ｇｌｎ突变，３个家系均未发现Ｇｌｕ＾２２２→ｇｌｙ突变。结论：Ａｒｇ＾２２２→Ｇｌｎ突变是中国人民     

中国人遗传性高铁血红蛋白血症二个家系所见 Cytb5R 基因 Arg~(57)→Gln 突变

目的：探明遗传性高铁血红蛋白血症ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ）缺陷的分子机制。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，克隆３个遗传性高铁血红蛋白血症家系Ｃｙｔｂ５Ｒ９２１ｂｐ的ｃＤＮＡ编码序列，并用限制性酶切ＰＣＲ产物分析３个家系的基因组ＤＮＡ。结果：２个家系存在Ａｒｇ５７→Ｇｌｎ突变，３个家系均未发现Ｇｌｕ２２２→Ｇｌｙ突变。结论：Ａｒｇ５７→Ｇｌｎ突变是中国人遗传性高铁血红蛋白血症的致病原因之一。     

一种新的NADH-细胞色素b5还原酶基因点突变

目的　为了查明中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ） 患者的ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５ 还原酶（ｂ５Ｒ） 基因突变类型,探讨ＲＣＭ 发生的分子机制。方法　从已报道的１ 例ＲＣＭⅠ型患者的外周血白细胞中提取ＲＮＡ,应用逆转录聚合酶链反应法（ＲＴＰＣＲ） 扩增了ｂ５ＲｃＤＮＡ（９２１ ｂｐ）,测定其ｂ５ＲｃＤＮＡ的全部编码序列。结果　ｂ５ＲｃＤＮＡ基因的第２０３ 位密码子存在（ＴＧＣ→ＴＡＣ）Ｃｙｓ→Ｔｙｒ 的错义突变。经基因组ＰＣＲ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ） 分析证实该突变并非ＰＣＲ过程中的错配。结论　Ｃｙｓ２０３ →Ｔｙｒ 是ＲＣＭ 的一种新的基因突变类型     

Missense mutation Leu72Pro located on the carboxyl terminal amphipathic helix of apolipoprotein C-II causes familial chylomicronemia syndrome

BACKGROUND: Chylomicronemia syndrome can be caused by 2 autosomal recessive disorders - lipoprotein lipase (LPL) deficiency and apolipoprotein C-II (apo C-II) deficiency. METHODS: We described 2 siblings with chylomicronemia syndrome of a consanguineous family. To determine the molecular basis of chylomicronemia syndrome in this family, we performed direct DNA sequencing of the LPL and APOC2 genes of the proband. RESULTS: A novel homozygous mutation, Leu72Pro, in the APOC2 gene was found in both siblings whereas their parents were carriers. No LPL mutations were detected in the siblings. Apo C-II contains 3 amphipathic alpha helices; the C-terminal alpha helix is composed of residues 64 to 74. Substitution of residue 72 from a helix former leucine to a helix breaker, proline, is predicted to change the secondary structure of the C-terminal helix and subsequently alter the interaction between apo C-II and LPL. CONCLUSIONS: To our knowledge, Leu72Pro is the first missense mutation identified in the C-terminal of apo C-II. The result is consistent with the current biochemical and structural findings that the C-terminal helix of apo C-II is important for activation of LPL.     

一个遗传性全白甲中国家系FZD5、LOC729607基因突变分析

背景：遗传性全白甲是一种少见的常染色体显性遗传病，其致病基因目前尚未发现。目的：对一个中国汉族遗传性全白甲家系的2个候选基因进行突变筛查检测，研究遗传性全白甲的分子遗传基础。设计、时间及地点：候选基因突变筛查检测，于2007—01／06在中国人类基因组北方研究中心实验室完成。材料：搜集一遗传性全白甲家系患者静脉血，制备基因组DNA。方法：采用定位候选克隆法，在已经定位的致病基因区域内，选择FZD5，LOC729607基因进行突变筛查。应用PCR扩增、PCR产物直接测序的方法检测和对比遗传性全白甲家系内3例患者和一个正常人候选基因的外显子区及邻近内含子区域碱基顺序，并将测序结果与NCBI数据库内标准系列对比。主要观察指标：检测和对比遗传性全白甲家系内患者和正常人候选基因的外显子区及邻近内含子区域碱基顺序，并将测序结果与NCBI数据库内标准系列对比，发现患者、正常人、标准系列碱基顺序的差异，分析这些差异的意义。结果：FZD5基因exon706位碱基A→G：LoC729607基因exon5下游51661位缺T，exon6上游57257位C→T，exon7上游71187位AG杂合。所检测到的变异在家系中患者和正常人中都存在，在NCBI数据库中能查到相应的位点，是单核苷酸多态。结论：在FZD5（frizzled5），LOC729607基因编码区域及邻近非编码区域中未发现遗传性全白甲家系的致病突变。     

1例新基因突变导致的Ⅰ型遗传性血色病报道

目的对1例临床诊断遗传性血色病基因的患者及家属成员的遗传性血色病相关蛋白(HFE)基因进行检测。方法检测患者及家属成员血清铁蛋白(SF),血清铁(SI)等水平,从外周血单个核细胞中提取DNA,多聚酶联反应(PCR)扩增Ⅰ(HFE,原发性血色病)、Ⅱ(HJV,青少年型血色病)、Ⅲ(TfR2,转铁蛋白受体2相关血色病)型遗传性血色病相关基因的25个外显子及外显子邻近处的内含子,直接测序检测突变。结果患者SF、SI、总铁结合力、未饱和铁明显升高。HFE基因第3号内含子5′端第5碱基处出现T→C错义突变(为纯合子,IVS3+5T→C)。其家属成员中还发现2例纯合子和4例杂合子。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型外显子未发现突变。结论该突变可能是遗传性血色病发病的分子生物学基础。     

Concentration of NADH-cytochrome b5 reductase in erythrocytes of normal and methemoglobinemic individuals measured with a quantitative radioimmunoblotting assay.

The activity of NADH-cytochrome b5 reductase (NADH-methemoglobin reductase) is generally reduced in red cells of patients with recessive hereditary methemoglobinemia. To determine whether this lower activity is due to reduced concentration of an enzyme with normal catalytic properties or to reduced activity of an enzyme present at normal concentration, we measured erythrocyte reductase concentrations with a quantitative radioimmunoblotting method, using affinity-purified polyclonal antibodies against rat liver microsomal reductase as probe. In five patients with the "mild" form of recessive hereditary methemoglobinemia, in which the activity of erythrocyte reductase was 4-13% of controls, concentrations of the enzyme, measured as antigen, were also reduced to 7-20% of the control values. The concentration of membrane-bound reductase antigen, measured in the ghost fraction, was similarly reduced. Thus, in these patients, the reductase deficit is caused mainly by a reduction in NADH-cytochrome b5 reductase concentration, although altered catalytic properties of the enzyme may also contribute to the reduced enzyme activity.     

马凡综合征FBN1基因的一个全新突变

目的：检测1例马凡综合征（MFS）患者的原纤维蛋白-1（FBN1）基因，探讨其基因突变。方法：利用聚合酶链反应（PCR），对1例符合“根特标准”的MFS患者FBN1基因65个外显子中的9个（24～32）进行扩增，并直接测序。结果：在该MFS患者的第24外显子检测到新突变3069G〉T．该突变以往无报道。结论：该患者FBNI基因第24外显子存在点突变3069G〉T，可能为该MFS患者的发病原因。     

Adipose fatty acid composition in a case of generalized deficiency of cytochrome b5 reductase in congenital methemoglobinemia with mental retardation

The fatty acid composition of the triglyceride in adipose tissue in a case of generalized deficiency of cytochrome b5 reductase in congenital methemoglobinemia with mental retardation was analyzed and compared with age-matched controls. The proportions of linoleic acid, linolenic acid and arachidonic acid were decreased to less than half of normal level. There was a decrease in total unsaturated fatty acids and an increase in palmitic acid. These results revealed an undeveloped pattern of fatty acid composition in adipose tissue in the patient.     

A new mutation in the CSB gene in a Chinese patient with mild Cockayne syndrome

Cockayne syndrome (CS) is a rare autosomal recessive genetic disease characterized by growth failure and progressive neurological degeneration. Here we report a mild form of CS patient who was homozygous for the C526T transition resulting in a new nonsense mutation, which converts Arg176 to a stop codon.