胃癌组织中α连接素的表达与临床意义

本实验应用免疫组织化学染色法 ,在 38例人类胃癌术后标本上进行α连接素 (α ｃａｔｅｎｉｎ)抗体染色 ,探讨其表达与胃癌组织学特征及侵袭转移的关系。资料和方法1.材料 :38例新鲜胃癌标本取自 1997年 10月～ 1998年 2月上海长征医院的手术患者 ,其中男 2 8例 ,女 10例。年龄 2 5～ 83岁 (平均 5 4岁 )。所有患者术前均未进行任何抗肿瘤治疗。标本采集后用 15 %甲醛溶液固定。2 .方法 :应用免疫组织化学ＡＢＣ染色法。标本石蜡包埋 ,切片 ,厚度 4微米。加入兔抗人α ｃａｔｅｎｉｎ单抗 (美国Ｓｉｇｍａ公司产品 ,工作浓度 1:2 0 0 0 ) 37…     

垂体瘤侵袭性与细胞增殖周期核抗原Ki-67表达的关系

我们通过采用免疫组织化学方法检测细胞增殖周期核抗原Ｋｉ 67在垂体瘤中的表达 ,分析其与垂体瘤侵袭性的关系 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.一般资料 :经颅或经蝶垂体瘤手术患者 42例 ,其中男 2 6例 ,女 16例 ,年龄 14～ 5 4岁 ,平均 (3 4 .7± 10 .9)岁 ,以上手术标本均经福马林固定 ,石蜡包埋 ,5 μｍ连续切片 ,相邻切片行苏木素 伊红染色及免疫组织化学染色。正常垂体腺取自非垂体内分泌疾病死亡的尸体解剖标本 2例。2 .免疫组织化学染色 :主要试剂 :小鼠抗人Ｋｉ 67单克隆抗体为武汉博士德生物工程有限公司代理提供的Ｓｉｇｍ…     

胃癌中Syndecan-1、CD44V6的表达及其临床意义

我们应用SP免疫组织化学方法,研究12 4例胃癌标本石蜡切片的Syndecan 1和CD44V6表达情况,旨在探讨它们对胃癌进展程度和对预后的影响。一、材料与方法1.组织材料:收集本院1986～1996年间手术切除的胃癌标本12 4例,均经甲醛固定,石蜡包埋,每例选择有代表性的组织蜡块进行连续切片,分别供苏木素 伊红(HE)染色和SP免疫组织化学染色。2 .临床资料:本组12 4例胃癌中,男性94例,女性3 0例;年龄2 5～79岁,平均年龄5 6.5岁;按WHO1997年胃癌分类标准:乳头状腺癌2 2例,管状腺癌5 5例,低分化腺癌3 1例,印戒细胞癌10例,黏液腺癌6例;高、中分化癌83…     

胃癌与细胞周期调控因子p16、细胞周期素D1和Rb关系的研究

本研究旨在应用免疫组织化学方法检测细胞周期调控因子 ｐ16、细胞周期素 (ｃｙｃｌｉｎ)Ｄ1和Ｒｂ的表达水平 ,并探讨其间的相关性及其与胃癌生物学行为的关系。一、材料与方法1.方法 :胃癌及癌旁正常组织来自手术切除标本 ,离体 30ｍｉｎ内取样 2份 ,福马林固定后常规操作 ,4μｍ厚连续切片 4张。 2张置普通玻片上 ,备作苏木精 伊红 (ＨＥ)染色和 ｐ16免疫组织化学 ;另外 2张置涂有防脱片剂ＡＥＰＳ的玻片上 ,煮沸修复抗原后作ｃｙｃｌｉｎＤ1和Ｒｂ免疫组织化学标记。采用ＡＢＣ法 ,选用预实验中已知阳性切片为阳性对照 ,用磷酸盐缓冲液 …     

骨肉瘤血管形成评价方法的比较

目的 :比较并评价骨肉瘤中血管形成的不同标记方法。方法 :分析 33例骨肉瘤患者的石蜡包埋标本 ,采用FⅧRAg与CD34单克隆抗体进行免疫组织化学染色标记血管内皮细胞 ,40 0倍显微镜下计数 3个视野 ,取其平均值。结果 :CD34单克隆抗体比FⅧRAg单克隆抗体识别更多血管 (平均值 /mm2 :CD34=138;FⅧRAg =98)。CD34单克隆抗体染色的血管数与FⅧRAg单克隆抗体染色的血管数具有显著的相关性 (P <0 .0 1) )。结论 :研究结果显示抗CD34是一种比FⅧRAg单克隆抗体更能准确反映骨肉瘤血管形成的免疫组织化学方法     

Wnt信号通路调控细胞癌变的分子开关:T细胞因子

Wnt信号通路在调控胚胎发育和决定细胞命运方面具有重要作用。T细胞因子 (TCF)是Wnt信号通路中的关键信号分子 ,最初是作为淋巴转录因子被克隆发现 ,近来研究表明 ,T细胞因子家族成员在多种发育和分化过程中起关键的转录调节作用 (转录激活或转录抑制 ) [1] 。当缺乏Wnt信号时 ,TCF与转录抑制因子如Groucho蛋白、cAMP效应元件 (CREB)结合蛋白 (CBP)及C末端结合蛋白 (CtBP)结合 ,抑制靶基因的转录表达 ;然而 ,Wnt信号激活后 ,TCF与Wnt通路信号分子 β 连环蛋白 (β catenin)结合则发挥其转录激活功能。随着研究的深入 ,T细胞因…     

雌激素通过氯通道影响骨质疏松的研究进展

骨质疏松是一种严重损害老年人的疾病,而氯通道可以驱动成骨细胞的矿化、调节精细骨结构。研究发现,雌激素可激活氯通道并参与骨形成功能,提示氯通道可能是雌激素调节骨形成的重要靶点。Wnt信号通路在调节骨形成中发挥关键作用,实验表明雌激素可激活Wnt信号通路,抑制或下调Cl C-3氯通道阻断Wnt信号通路的激活,提示Cl C-3氯通道可能通过调控Wnt信号途径介导雌激素促进骨形成。该文就氯通道、雌激素及Wnt信号通路与骨质疏松关系的研究进展作一综述。     

肿瘤转移消失蛋白在直肠癌组织中的表达

肿瘤转移消失( MIM)蛋白又称肿瘤转移抑制(MTSS1)蛋白,与多种肿瘤的生长转移过程密切相关[1].本研究旨在观察MIM蛋白在直肠组织中的表达,并分析其对直肠癌的临床意义. 一、材料与方法 1.病理标本及免疫组织化学染色:直肠癌组:143例,直肠腺瘤组:14例,直肠正常组织:37例.MIM抗体(兔多克隆抗体)及二抗购白美国eBioscience公司.采用LAB VISION 2D全自动免疫组织化学染色仪,Elivision二步法进行染色. 2.结果判定:胞膜及胞质被染成棕黄色为阳性反应.以染色强度和阳性百分比的乘积＞3分为免癌反应阳性.     

Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤EMT现象中的作用研究进展

Wnt信号通路在胚胎发育和肿瘤的发生及转移中起着重要的作用,近年来研究发现,Wnt信号传导通路同肿瘤转移早期的EMT现象密切相关,Wnt信号转导途径可直接或间接影响EMT相关蛋白和EMT的诱发因素,本文对Wnt信号通路在肿瘤EMT发生诱导中的作用进行综述.     

胰腺癌新生血管密度和血管内皮生长因子表达的研究

我们采用免疫组织化学染色及形态半定量方法对胰腺癌标本中的微血管密度 (ＭＶＤ)标记后定量计数和血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)表达强度进行研究 ,结果报道如下。一、材料与方法我院 1980～ 1997年术前未经抗肿瘤治疗的胰腺癌切除标本 3 1例 ,常规石蜡包埋 ,4μｍ切片 ,苏木素 伊红染色 ,按分化程度病理分型 ,ＴＮＭ分期。胰腺癌旁组织 15例 ,正常胰腺组织 7例作为对照。免疫组织化学染色采用链菌素亲生物素 过氧化物酶标免疫组织化学染色技术 (Ｓ Ｐ)法。标记血管内皮细胞兔抗人第Ⅷ因子相关抗原 (Ｆ8 ＲＡ )及免疫ＩｇＧ多抗血管内皮生…     

细胞周期素D1、p16、Rb蛋白在骨肉瘤中的表达及其意义

我们应用免疫组织化学方法 ,检测43例骨肉瘤和 15例骨软骨瘤手术标本中细胞周期素Ｄ1(ｃｙｃｌｉｎＤ1)、ｐ16、Ｒｂ蛋白的表达 ,探讨 3种基因表达在骨肉瘤发生发展中的意义 ,现报道如下。一、材料和方法1.标本 :中国医科大学附属第一、二医院骨科 1986～ 1998年手术切除骨肉瘤标本 43例 ,按细胞相对分化程度分为 :高分化 9例 ,低分化 34例。良性骨软骨瘤 15例。全部 5 8例标本均不伴有其他部位肿瘤。均经体积分数为10 %甲醛常规固定、脱水透明、石蜡包埋。经常规苏木精 伊红 (ＨＥ)染色 ,重新确诊分级后 ,进行免疫组织化学染色。2 .主要试…     

上皮钙粘合素和连环素在胃癌中的表达及其意义

近年国内外学者发现上皮钙粘合素 (Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ ,Ｅ ｃｄ)、α 连环素 (α ｃａｔｅｎｉｎ ,α Ｃ)和 β 连环素 (β ｃａｔｅｎｉｎ ,β Ｃ)在多种肿瘤中表达下降或缺失[1 3] 。我们应用免疫组化法研究胃癌、胃不典型增生和远癌组织中Ｅ ｃｄ、α Ｃ和 β Ｃ表达及其临床意义。材料与方法1.标本 :收集我院 1990年 6月至 1993年 6月胃癌根治手术标本 48例 ,男 32例 ,女 16例 ,年龄 2 0～ 6 9岁 ,平均 5 1 2岁 ;其中低分化癌 2 8例、中高分化癌 2 0例 ;ＰＴＮＭ分期Ⅰ期13例 ,Ⅱ期 13例 ,Ⅲ期 2 2例。另取 15例远癌 (距癌 >3ｃｍ)胃…     

急性缺血再灌注小鼠肾损伤修复过程中Wnt-β-catenin信号的表达

目的 观察急性肾损伤（AKI）后恢复过程中肾组织内Wnt-β-catenin信号分子表达的分布及变化, 探讨Wnt-β-catenin信号通路在AKI修复过程中的作用。 方法 (1)应用BAT-gal转基因报告鼠建立急性肾缺血再灌注损伤（IRI）模型, 在IRI后1 d断尾取血,并于IRI后第2和7天处死报告鼠取血并收集肾脏标本。肾组织切片行PAS染色观察肾病理改变及X-gal-LTL(近曲小管标记物)、X-gal-NKCC2（髓袢标记物）、X-gal-DBA（集合管标记物）免疫荧光组织化学双重染色,观察Wnt-β-catenin信号的分布、表达与变化。(2)应用野生型小鼠建立IRI模型,于IRI后第2、5、7天处死小鼠获取肾脏标本用Western 印迹方法检测Wnt4及其共同受体低密度脂蛋白受体相关蛋白6（Lrp6）的表达水平。 结果 IRI小鼠肾损伤后第2天,PAS结果显示损伤肾脏的肾小管上皮细胞排列紊乱,可见明显的肾小管上皮细胞脱落及基底膜裸露,管腔内可见脱落的细胞和细胞碎片;7 d时小鼠肾小管上皮细胞损伤面积较2 d时明显缩小。X-gal染色显示第2天损伤的肾脏皮质和外髓质层中可见少数肾小管出现Wnt信号的表达,间质中Wnt信号的反应较高,第7天与第2天比较,Wnt信号表达明显增强。Western印迹结果显示,Wnt4于IRI后2 d增高,第5、7天亦较第2天明显增高;其共同受体磷酸化Lrp6代表激活的Wnt-β-catenin信号,在IRI 2 d后明显增高,而在无损伤成鼠肾组织中未检测到。免疫双染提示主要是近曲小管和髓袢的上皮细胞对Wnt信号通路应答。 结论 急性肾损伤时Wnt-β-catenin信号通路被激活,可能参与了肾小管上皮细胞的修复机制。     

N-cadherin、 β-连环素在肝癌组织中的表达及与Wnt信号途径的关系

目的 观察肝癌(HCC)中N-cadherin分子是否调控β-连环素(β-catenin)的表达及Wnt信号途径的活化。方法 免疫组织化学分析64例肝癌组织中N-cadherin及β-catenin的表达及相互关系。调控肝癌细胞株HCCLM3、SMMC-7721中N-cadherin表达并检测β-catenin的表达及Wnt信号途径的活化。结果 64例肝癌中,N-cadherin表达缺失34例;β-catenin在细胞膜上表达,无细胞核内聚集,且13例细胞膜表达缺失;细胞膜上β-catenin表达缺失与N-cadherin表达缺失呈正相关(P＜0.05)。下调HCCLM3细胞或上调SMMC-7721细胞中的N-cadherin表达导致细胞膜上β-catenin表达减弱或增强,但均未导致Wnt信号途径的活化。结论 在肝癌中,N-cadherin表达与细胞膜上β-catenin的表达水平呈正相关,但N-cadherin分子并不参与Wnt信号途径的调控。     

上皮型钙黏蛋白复合体在胃癌中的表达及其意义

上皮型钙黏蛋白(EC)是一种钙依赖性的细胞间黏附分子,其相对分子质量为12 0×10 3 ,可与相邻上皮细胞的EC结合形成一黏附结构。β连接素(92×10 3 )可与EC的胞内羧基端结合,α连接素(10 2×10 3 )则结合到β连接素的氨基端,从而将EC连接到细胞内的肌动蛋白细胞骨架上[1] 。为探讨EC复合体与人胃癌的分化、浸润、转移间的相互关系及其在胃癌发生发展中的作用,我们采用免疫组织化学技术观察EC复合体在胃癌组织中的表达。一、材料与方法1.材料:5 8例胃癌术后标本取自2 0 0 0年1月～2 0 0 1年12月武汉大学人民医院的手术患者,并取10例距癌…     

猪脱细胞真皮基质通过激活Wnt/β-连环蛋白信号通路对大鼠角质形成细胞细胞周期蛋白D1的表达的影响

目的:探讨猪脱细胞真皮基质(pADM)对大鼠角质形成细胞细胞周期蛋白(Cyclin) D1的影响及其机制。方法:体外培养原代大鼠角质形成细胞,免疫组织化学鉴定原代角质形成细胞;实验分组：对照组、pADM组、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路激动剂SKL2001组、pADM+Wnt/β-catenin信号...     

骨肉瘤重要信号通路的遗传学研究

 目的 通过微阵列-比较基因组杂交（microarray-based comparative genomic hybridization,aCGH）方法检测人骨肉瘤基因组的拷贝数异常,探讨并验证骨肉瘤重要信号通路的遗传学异常及其在骨肉瘤发生、发展中的作用。方法 应用aCGH检测10例新鲜骨肉瘤标本的基因拷贝数变化,然后利用基因和基因组京都百科全书通路分析方法（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）确定骨肉瘤有关信号通路的基因改变,并采用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH）和免疫组织化学染色（Immunohistochemistry, IHC）等方法进行验证。结果 对10例骨肉瘤标本的aCGH数据进行KEGG通路分析发现33条信号通路的分子有明显的基因拷贝数改变,20条信号通路的分子存在明显的基因扩增,如血管内皮生长因子（VEGF）和mTOR通路;13条信号通路的分子存在明显的基因缺失,如Wnt和Hedgehog通路。另外,还发现与细胞-细胞-基质相互作用相关的信号通路也存在明显的遗传学改变,如CAMs和紧密连接信号通路存在基因扩增、黏着连接通路存在基因缺失。通过荧光原位杂交的方法证实VEGF信号通路中的VEGFA基因明显扩增,通过免疫组织化学染色方法证实骨肉瘤中VEGFA蛋白高表达,并且与微血管密度紧密相关。结论 骨肉瘤信号通路的遗传学改变涉及VEGF、mTOR、Wnt、Hedgehog、CAMs、紧密连接、黏着连接信号通路及其他26条信号通路,这些信号通路的遗传学改变可能与骨肉瘤的发生、发展有关,为骨肉瘤针对特定信号通路的靶向治疗提供了有力的分子遗传学依据。     

先天性巨结肠症Wnt10b基因表达及其临床意义

目的 分析Wnt10b基因在先天性巨结肠症(HD)中的表达,探讨其在HD发生中的意义.方法 收集2003年至2010年中国医科大学附属盛京医院经病理检查证实的散发性HD狭窄段和正常段组织标本各60例.采用HE染色和免疫组织化学染色方法检测标本中Wnt10b的表达情况;再用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blot从其基因和蛋白水平检测HD中Wnt10b的表达情况,并对其表达进行定量与比较分析.数据采用独立样本t检验.结果 经HE染色检测,60例患儿HD诊断明确,标本符合本研究要求.Wnt10b在HD狭窄段肠壁的肌间和黏膜下细胞胞质内呈强阳性反应,而在HD正常段肠壁的肌间和黏膜下细胞胞质内表达呈弱阳性或阴性;经免疫组织化学染色检测Wnt10b在HD狭窄段蛋白阳性面积百分率为0.061％±0.014％,正常段为0.006％±0.005％,两者比较,差异有统计学意义(t=2.955,P＜0.05).经qRT-PCR检测,Wnt10b在HD狭窄段肠管中mRNA相对含量为23.5±1.6,高于正常段肠管中的13.1±1.7(t=1.687,P＜0.05);60例患儿的HD狭窄段肠管组织标本中Wnt10b mRNA高表达者45例,低表达者15例.经Western blot检测,Wnt10b在HD狭窄段肠管中蛋白相对表达量为35.2±2.3,高于正常段肠管中的19.1±1.3(t =2.046,P＜0.05);60例患儿的HD狭窄段肠管组织标本中Wnt10b蛋白高表达者43例,低表达者17例.结论 Wnt10b mRNA与蛋白在HD肠管组织中的异常表达,与HD的发生有密切关系,可能在先天性消化道畸形的肠道发育中起一定作用.     

原癌基因C-erbB-2 在胃癌组织中表达的研究

近年的研究认为，ＣｅｒｂＢ２原癌基因在人体多种恶性肿瘤中的增强表达与预后呈正相关，但在胃癌的研究中尚未明确。我们利用ＣｅｒｂＢ２原癌基因产物Ｐ１８５单克隆抗体，通过ＳＰ免疫组织化学染色法，检测１３３例胃粘膜各种病变细胞及正常细胞ＣｅｒｂＢ２的表达，旨在明确ＣｅｒｂＢ２原癌基因在胃癌发生发展过程中所起的作用和在胃癌细胞中的表达特征及其与预后的关系。一、材料与方法１．材料来源：胃癌标本９３例、癌旁不典型增生８例、肠上皮化生组织１２例均取自我院普外科１９９３～１９９６年手术切除之标本…     

膀胱移行细胞癌中p53突变、Bcl-2的表达及其临床意义

我们应用免疫组织化学法检测石蜡包埋的膀胱癌标本中Ｂｃｌ 2和ｐ53这两种基因的表达 ,探讨在膀胱癌中Ｂｃｌ 2和ｐ53表达与细胞凋亡及病理参数的关系。一、材料和方法1 .标本来源 :62例膀胱癌患者 ,其中男 49例 ,女 1 3例 ,年龄 37～ 76岁 ,平均52岁。甲醛固定石蜡包埋的标本切成 5μｍ厚 ,置入经多聚赖氨酸处理过的载玻片中。典型切片用常规苏木素伊红(ＨＥ)染色分析。肿瘤分类采用国际抗癌协会 (ＵＩＣＣ)ＴＮＭ分期法。2 .免疫组织化学 :所有免疫组织化学试剂盒均由武汉博士德公司提供。切片常规脱蜡水化后、体积分数为 3 %过氧化氢 1 0…