TGF-β1 对大鼠同种肢体移植免疫耐受的作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠同种肢体移植免疫耐受的作用.方法:20只成年雄性SD大鼠作为受体(对照组和实验组各10只),20只雄性Wister大鼠作为供体.建立大鼠肢体移植模型后,对照组术后注射安慰剂,实验组注射TGF-β114 d,动态监测术后肢体存活情况、皮肤排斥反应病理评分、血清IL-2、IL-10水平.结果:实验组较对照组移植肢体排斥反应出现时间延长、存活时间长,皮肤排斥反应程度轻(P＜0.01);术后3 d、5d、7 d、9 d、11d血清IL-2水平均低于对照组(P＜0.01),IL-10水平均高于对照组(P＜0.01).结论:肢体移植后经TGF-β1干预,细胞因子谱由Th1向Th2转换,提示建立了免疫耐受,但这种耐受是不完全和暂时的.     

mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导大鼠肝移植免疫耐受

目的 探讨mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导肝移植术后免疫耐受的可行性及其可能机制.方法 选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠20只为异基因肝移植受体,随机分为mdr-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组(A组)和单纯肝移植组(B组).雌性Wistar大鼠10只为同基因肝移植受体(C组).比较A、B两组大鼠肝移植术后1周生存率、生存状况、生存时间,以及移植肝脏的病理变化.结果 C组大鼠生存时间均达60 d以上,A组为(31.2±4.9)d,明显高于B组[(12.1±4.7)d],差异有统计学意义(P<0.05).B组病理组织切片可见中、重度急性排斥反应,肝内单核细胞浸润较为明显,主要集中在汇管区;A组移植肝内组织损伤程度明显减轻;C组基本无排斥反应,接近正常肝组织.结论 mdr-1基因骨髓造血干细胞可明显减轻大鼠肝移植后免疫排斥反应.     

冷冻异体骨加TGF-β1和bFGF复合移植修复骨缺损的研究

目的　观察重组TGF - β1和bFGF在经冷冻处理的同种异体骨移植修复骨缺损过程中促进骨愈合的作用。 方法　以家兔作为实验动物 ,修复桡骨 1.2cm缺损。冷冻处理后的异体骨加纤维蛋白载体携带bFGF和TGF - β1移植作为实验组 (A组 ) ,自体桡骨移植 (B组 )和单纯异体骨移植 (C组 )作为对照组。术后不同时间拍摄X线片 ,同位素骨扫描计数分析和HE染色组织切片观察和扫描电镜观察。结果　X线检查自体移植较异体移植提前愈合 ,同位素扫描计数分析 2周后A和B组明显优于C组 ,并有显著差异 (P <0 .0 1)。组织学观察异体移植骨切片可见明显的髓腔内诱导成骨相。结论　TGF - β1和bFGF能明显促进异体移植修复骨缺损中的骨愈合过程     

大鼠肝移植自发性免疫耐受的研究

目的建立大鼠肝移植自发性免疫耐受模型，初步了解其移植后的免疫学变化。方法按Kamada的双管套法，选用近交系Lewis（LEW）、Wistar Furth（WF）大鼠进行原位全肝移植，术后动态观察宿主的肝功能和肝脏病理变化。另外，观察移植后不同时期，宿主植入供体同源的心脏后的免疫耐受情况。结果LEW→WF肝移植后血清谷丙转氨酶（ALT）及总胆红素（TB）的峰值在术后第4天，ALT在2周内、TB在4周内基本恢复到正常范围内；但肝脏炎症细胞的浸润则在第2周最为明显。通过再移植供体心脏的方法提示宿主对供体的特异性免疫耐受是移植2周后建立的。结论该组合早期虽存在急性排斥反应，但术后不需给予免疫抑制剂，可以自然克服这种损害而长期生存，属自发性免疫耐受模型。     

肝移植免疫耐受的研究现状

肝移植是治疗终末期肝病的最好手段。人们在努力提高临床技能的情况下,在不断寻求提高肝移植后的免疫耐受方法。本文对肝移植耐受的机制和诱导产生耐受的方法作一综述。     

同种异体移植免疫耐受的研究进展

随着器官移植免疫学、供受体HLA配型等研究的深入发展,及新型免疫抑制剂的发明、应用,多种器官移植相继获得成功并已成为这些器官终末期疾病的有效治疗手段.但器官移植后需长期乃至终生应用免疫抑制剂,除沉重的经济负担外,还将造成明显的感染和恶性肿瘤发病率和死亡率升高,且迄今对慢性移植排斥尚无有效的控制方法.解决这些难题最终的理想措施是诱导受体建立针对供体移植物的特异性免疫耐受.以下将从T细胞免疫耐受诱导和维持的机制对其进展作一综述.     

TGF-β1联合IGF-1诱导hAMSC向韧带成纤维细胞分化的效应研究

目的 探讨TGF-β1联合IGF-1诱导人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cell,hAMSC)向韧带成纤维细胞分化的效应和相关分子表达水平。方法 分离培养第3代hAMSC,过表达TGF-β1(Ad-TGF-β1)和IGF-1(Ad-IGF-1)腺病毒转染细胞后,将细胞分为空白对照组、IGF-1组、TGF-β1组和TGF-β1+IGF-1组,使用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测韧带成纤维细胞相关基因表达情况,使用细胞免疫荧光观察TGF-β1联合IGF-1对hAMSC向韧带成纤维细胞分化的特异性标志因子包括Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ),Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ),腱调蛋白(tenofovir,TNMD)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)在基因和蛋白表达水平改变。结果 培养至第3代,hAMSC贴壁生长,呈长梭状、漩涡形态;TGF-β1和IGF-1过表达腺病毒转染第3代hAMSC 24h后;PCR结果显示,使用TGF-β1+Ad-IGF-1诱导第3代hAMSC后第7天时,韧带成纤维细胞相关基因包括COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、FN、TNMD的mRNA表达水平显著高于其他各组(P<0.05);细胞免疫荧光染色结果显示Ad-TGF-β1转染细胞联合IGF-1诱导第3代hAMSC后,第7天与第3天比较,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平显著高于其他各组。结论 体外通过使用腺病毒,高表达TGF-β1与IGF-1,可显著增强诱导hAMSC向韧带成纤维细胞分化,并且韧带成纤维细胞相关基因和蛋白水平表达明显增强。     

犬同种异体原位肝移植实验研究与临床肝移植1例报告

目的：探讨犬原位肝移植技术和临床肝移植术中及围手术期的处理方法，以及滚压式转流泵应用的可行性。方法：在滚压式转流泵进行静脉－静脉转流的情况下，者１５例犬同种异体原位肝移植实验研究，并为１例原发性肝癌患者施行同种异体原位肝移植，对术中及围手术期发生的各种问题进行研究和处理。     

小剂量FK506作用下同种脾组织移植诱导大鼠原位肝移植术后免疫耐受的机制

目的:观察小剂量FK506作用下同种脾组织移植对大鼠肝移植术后免疫耐受的影响,探讨其可能的机制.方法:实验分5组(每组大鼠8只),同种肝移植组(A组)以纯系雄性Lewis大鼠为供体、雌性BN大鼠为受体进行同种原位肝移植;同种肝移植 小剂量FK506治疗组(B组)于肝移植术后口服途径给予小剂量FK506(0.25 mg/kg);同种肝脾联合移植组(C组)于肝移植同时移植供体脾脏;同种肝脾联合移植 小剂量FK506治疗组(D组)于肝脾联合移植后口服途径给予小剂量FK506;异体脾组织移植组(E组)于同种原位肝移植同时移植第三品系大鼠脾脏组织,术后进行小剂量FK506治疗.观察各组的存活期,并分析受体脾脏T淋巴细胞对同种抗原的反应性、嵌合体的形成情况以及肝脏病理变化.结果:与其他各组相比,C组大鼠的存活期明显延长;其受体T细胞同种抗原反应性明显降低;受体脾脏中供体阳性细胞明显升高(P＜0.01),且在60 d后受体脾脏中供体阳性细胞仍然较高;肝脏病理分析也未见明显排斥反应.结论:小剂量FK506作用下同种脾脏移植能明显诱导受体大鼠原位肝移植术后嵌合体的形成,降低受体T细胞对同种抗原的反应性,促进免疫耐受.     

血管生成素抑制TGF-β1诱导的Smad2的活化

目的从Smad信号通路途径探讨血管生成素(angiogenin,Ang)对HeLa细胞的促增殖作用机制。方法用不同浓度的重组人Ang刺激HeLa细胞,用蛋白质印迹实验(Western blotting)检测p-Smad2、Smad2的表达情况以及检测TGF-β1刺激的状态下,过表达或低表达Ang Smad通路的变化。MTT法检测TGF-β1对HeLa细胞增殖的作用,mRNA及蛋白水平检测TGF-β1对Ang表达的影响。结果 Ang能够抑制Smad2的磷酸化。过表达Ang时TGF-β1促进的Smad2的磷酸化也受到抑制,而敲低Ang的表达后促进了TGF-β1诱导的Smad2的磷酸化。TGF-β1能够抑制HeLa细胞增殖,但不影响Ang的表达。结论Ang与TGF-β1对HeLa细胞增殖的作用可能与Smad信号通路相关,并且Ang能够抑制TGF-β1诱导的Smad2的活化。     

10例猕猴同种异体原位肝移植手术操作体会

本文总结了１０例猕猴供体手术和供体肝的制取操作，１０例猕猴受体的全肝切除与原位肝移植的手术操作，提出了每一步步骤的操作要点和心得体会，为进一步开展同种异体原位肝移植研究人员的训练与技术探索作准备．     

TGF-β1在香烟诱导的实验性仓鼠肺动脉高压中的作用

目的 该组实验旨在观察TGF-β1在香烟诱导的肺动脉高压(PAH)发病中的表达变化,从而探讨其在PAH发病机制中的作用.方法 ①将20只雄性仓鼠随机分为对照组和香烟暴露组.香烟暴露组仓鼠暴露于香烟烟雾中4个月建立肺动脉高压模型,对照组仓鼠暴露于新鲜空气.②免疫组织化学染色法和Westernblot分析方法检测肺组织TGF-β1蛋白表达;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测TGF-β1在肺组织中mRNA的表达.结果 香烟暴露4个月诱导了肺组织TGF-β1的表达升高.与对照组相比,香烟暴露诱导的PAH肺组织中TGF-β1的mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05).结论 慢性香烟暴露在引起肺小动脉的重构和炎症反应的同时,还可刺激TGF-β1的表达增加,表明TGF-β1在香烟诱导PAH病变发生、发展中起作用.     

转化生长因子-β1诱导小鼠足细胞凋亡实验研究

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）是否能诱导小鼠足细胞株凋亡以及诱导凋亡的途径。方法（1）体外培养小鼠足细胞株;（2）应用不同浓度（10^-1～104ng／L）TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡;（3）10^3ng／LTGF-β1诱导不同时间（12、24、48h）后观察足细胞凋亡情况;（4）采用流式细胞仪检测AnnexinV、Caspase3;（5）实时定量PCR及Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、Smad2、Smad3、Smad7mRNA及蛋白质的表达情况。结果（1）小鼠足细胞在不同浓度（10^-1～10^4ng／L）TGF-β1刺激下,细胞凋亡率明显高于正常对照组（均P〈0.05）;（2）随着TGF-β1浓度增加、凋亡时间增加,足细胞凋亡率增高（P〈0．05）;p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达增加;TGF-β1 103ng／L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24h为最佳诱导凋亡时间;（3）与正常对照组比较,10^3ng／LTGF-β1诱导后Caspase3阳性细胞比率显著增加（P〈001）．p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7蛋白质表达亦显著增加（P〈0．01）。结论TGF-β1能诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。TGF-β1通过Smad通路、p38MAPK通路以及线粒体通路诱导小鼠足细胞凋亡。     

TGF-β1与膀胱癌发生发展的相关研究

目的探讨转化生长因子（transforming growth factor betal，TGF-β1）与膀胱癌发生发展的的相关性．方法采用免疫组化S—P法分别检测40例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱粘膜组织中TGF-β1的表达情况．结果TGF-β1在膀胱癌Ⅳ级中的表达水平明显高于膀胱癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级及正常膀胱粘膜组织（P〈0．05）．表浅性膀胱癌（Ta-T1期）与浸润性膀胱癌（T2-T4期）中TGF-β1的表达差异无统计学意义（P〉0．05）．结论TGF-β1的高水平表达是高度恶性表型膀胱癌的一个重要指标，但与膀胱癌临床分期的关系不大．     

TGF-β1及其受体mRNA在哮喘大鼠肺组织中的表达

目的研究哮喘大鼠肺组织中TGF-β1及受体TGF-βRⅠ、TGF-β RⅡmRNA的表达水平,以了解TGF-β1在哮喘中的作用及其受体对其作用的调节机制.方法将30只成年雌性SD大鼠分为正常对照组,单纯致敏组和哮喘模型组,采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射法复制大鼠哮喘模型,利用RT-PCR法检测肺组织中TGF-β1、TGF-βRⅠ及TGF-βRⅡmRNA的表达水平.结果TGF-β1mRNA的表达水平致敏组与正常组相比增加(70.21±11.68 vs 53.07±10.27,P＜0.05),哮喘组与正常组相比显著增加(114.14±16.57 vs 53.07±10.27,P＜0.01),TGF-β R Ⅰ mRNA的表达水平在致敏组和哮喘组相当,均较正常组下调(83.21±11.52 vs 100.14±16.13,85.76±12.95 vs 100.14±16.13,P＜0.05).TGF-βRⅡmRNA的表达水平致敏组与正常组相比有下降(89.04±9.23 vs 103.05±11.46,P＜0.05),哮喘组与正常组相比则显著下降(56.53±7.34 vs 103.05±11.46,P＜0.01).结论TGF-β1可能作为一个抗炎因子在哮喘的变应性炎症前阶段及炎症过程中起着重要作用,TGF-β RⅠ、TGF-β RⅡ的表达水平在哮喘组和致敏组的下降说明TGF-β1信号通路在哮喘的变应性炎症中和炎症前阶段的活化程度,TGF-βRⅡ表达水平在哮喘组的显著下降则显示TGF-β1信号通路可能被下调从而抑制其抗炎作用的发挥.     

TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的：本研究旨在明确转化生长因子β1(TGF-β1)诱导鼠肝细胞凋亡与caspase-3及caspase-8的关系。方法：通过50％CCl4腹腔注射，用8W时间诱发BALB／c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGF-β1(5ng／ml)诱导的凋亡，利用1．5％的琼脂糖凝胶电泳观察：DNA梯形条带，应用DNA荧光染料Hoechst 33342对正常肝细胞进行了染色，并在荧光显微镜下观察比较caspase-3和caspase-8在TGF-β1诱导的凋亡中的作用。结果：胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为95．2％。正常肝细胞予以TGF-β1处理后，应用1．5％的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF-β1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现，其凋亡率明显高于未处理组，分别为58．76％和18．03％，两组具有明显的差别。但凋亡可以被caspase-3和caspase-8抑制剂阻止。结论：硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF-β1诱导的凋亡，提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF-β1通过caspase-8和caspase-3的活化诱导鼠肝细胞产生凋亡。     

TGF-β1在胃癌中的表达

目的研究TGF-β1在胃癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组织化学Envision二步法对68例胃癌及30例正常胃黏膜组织的TGF-β1进行检测,分析对比检测结果。结果 TGF-β1胃癌组织中表达明显高于正常胃组织,两者之间比较具有显著性差异（P〈0.05）。结论 TGF-β1的表达与癌细胞分化程度、浸润程度以及淋巴结转移有关,TGF-β1的表达检测对胃癌的早期诊断与判断预后有重要意义。     

Study on VEGF, bFGF and TGF-β1 in the Endometriumof Norplant Users

Objective To investigate the relationship between abnormal uterus bleeding and en dometrium vascular endothelial growth factor (VEGF), basic fibroblast growth factor (bFGF) as well as transforming growth factor-β1(TGF-β1) expressions among Nor plant users. Materials & Methods Thirty-six endometrium samples from Norplant users with nor mal and abnormal bleeding were studied morphologically and immunohistochemically for VEGF, bFGF and TGF-β1 expression. Six normal samples of proliferate endome tria were studied as control. Results In the Norplant users, the characteristics of endometrium changed and glands decreased in numbers. The VEGF expression in epithelium and vascular en dothelium was lower in those with abnormal uterine bleeding. However, no difference was detected on bFGF and TGF-β1 expression. Conclusion The decline of VEGF expression may relate to the abnormal uterine bleed ing in Norplant users.     

人乳癌组织中TGF-β1的表达

目的：探讨人乳癌组织中TGF-β1的表达与临床病理分期的关系。方法：应用免疫组织化学S-P法检测不同乳腺组织（导管原位癌12例;浸润性乳癌50例,包括髓样癌5例,黏液癌4例,浸润性导管癌41例;正常乳腺组织15例）中TGF-β1的表达（癌组织按TNM分期,0～Ⅰ期17例,Ⅱ～Ⅲ期45例）。结果：正常乳腺和乳癌组织中TGF-β1的表达差异有统计学意义（P=0．041）;在0～Ⅰ期与Ⅱ～Ⅲ期乳癌组织之间及有腋淋巴结转移和无腋淋巴结转移组织之间差异也有统计学意义（P分别为0．026,0．018）;但在不同组织学分级乳癌组织间其表达差异无统计学意义（P=0．538）。结论：TGF-β1有助于判断乳癌患者的临床病理分期并对腋淋巴结有无微转移灶做出评估,进而指导外科治疗。     

牛磺酸对TGF-β1诱导的人RPE细胞凋亡的抑制作用

目的:研究牛磺酸对TGF-β1诱导体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的抑制效应及其机制。方法:体外原代培养正常RPE细胞。设置正常对照组(无药物处理);损伤组(1μg/L TGF-β1处理RPE细胞);牛磺酸保护组(10 mmol/L和20 mmol/L牛磺酸预先处理RPE细胞后再加入1μg/L TGF-β1)。利用流式细胞仪检测RPE凋亡率;RT-PCR检测RPE细胞Fas mRNA表达情况;通过Fur-2/AM测量细胞内游离钙离子浓度。结果:TGF-β1能够诱导RPE细胞凋亡,细胞Fas mRNA表达明显增高,而且细胞内钙离子浓度升高;牛磺酸可以显著地降低TGF-β1诱导的RPE细胞的凋亡率,呈浓度依赖性,Fas mRNA的表达随细胞内钙离子浓度的降低而减少。结论:牛磺酸可以抑制TGF-β1所致体外培养RPE细胞的凋亡;其作用机制可能与降低细胞内钙离子浓度进而影响Fas通路发挥诱导细胞凋亡效应有关。