SARS患者特异性SARS-CoV抗体变化的观察

目的　研究SARS患者特异性SARS CoV抗体IgG、IgM动态变化规律 ,探讨机体感染SARS CoV后免疫应答的可能模式及流行病学意义 ,为科学的防治SARS提供理论依据。方法　ELISA测定北京地区最早感染SARS CoV的 3条传播链的SARS患者 4 7例 ,12 4份血清中SARS CoV特异性抗体IgG、IgM。其中 ,山西链 9人 ,13份血清 ;香港链 31人 ,84份血清 ;北京链 7人 ,2 7份血清。结果　 3条传播链SARS患者IgM阳性率 73% ,IgG阳性率 86 %。IgM最早于发病第 6天出现 ,阳性率高峰在病程 2～ 3周 ;持续时间短 ,1月后 6 0 %患者IgM逐渐阴转。IgG最早也可在发病第 6天出现 ,阳性率高峰在病程 3～ 4周 ,3月后IgG抗体阳性率减少。机体感染SARS CoV后 ,抗体出现有 3种模式。结论　机体感染SARS CoV后 ,近 90 %患者可出现特异性IgG ,病程 3～ 4周阳性率最高 ;特异性IgM抗体在病程2～ 3周阳性率最高 ,但多数只持续 2 0～ 30d。特异性IgG抗体表现 3种免疫应答模式。     

不同人群血清SARS冠状病毒抗体检测及其意义

目的　通过对不同人群SARS冠状病毒IgG抗体 (SARSCoVIgG)检测 ,明确该抗体对SARS的诊断意义。方法　采用酶联免疫法 (EIA)、间接荧光法 (IFA)和免疫印迹法 (WB)检测抗 SARSCoVIgG。结果　对 117例临床确诊为SARS患者的 336份系列血清检测表明 ,SARS病人血清抗 SARSCoVIgG最早于发病后第 9天阳转 ,其阳性率随病程延长而上升 ,于发病后 5～ 9、10～ 14、15～ 19、2 0～2 4和 2 5d以上抗 SARSCoVIgG阳性率分别为 12 .5 % (1/8)、73.9% (17/2 3)、91.5 % (43/47)、96 .6 %(5 7/5 9)和 10 0 % (198/198)。应用EIA初筛 12 2 3名非SARS人群 (包括 36 7名在SARS病房工作 1个月以上的医务人员 ,4 3名在生活中与临床确诊的SARS病人有密切接触史者 ,以及 813例未暴露于SARSCoV人群 ) ,其中 2 8名为抗 SARSCoVIgG弱阳性 (A <0 .5 ) ,但用 2种IFA和WB检测均为阴性 ,说明EIA初筛为假阳性。结论　应用EIA检测抗SARSCoVIgG有助于中晚期SARS病人的诊断。对EIA初筛为抗 SARSCoVIgG弱阳性的标本 (A <0 .5 ) ,应用其他方法如IFA和WB检测 ,以排除假阳性。     

SARS患者康复期血清特异性抗体效价检测

目的：SARS患者康复期血清特异性抗体的效价。方法：采用间接酶联免疫法和双抗原夹心法。结果：SARS患者康复期血清特异性抗体IgG水平在住院第5周达最高值，IgM水平在住院第3周达到最高值。SARS患者康复期血清IgG水平是IgM的1～7倍。住院5～7周的SARS康复期患者，其血清特异性抗体检测阳性率达100％。结论：SAPS患者康复期血清特异性抗体水平在住院第5周达到最高值，其阳性检出率达100％。     

动态监测SARS患者SARS病毒IgG抗体及其意义

目的 :动态监测SARS患者SARS病毒IgG抗体并探讨其意义。方法 :采用间接酶联免疫吸附法检测早期、恢复期SARS患者以及出院后第一次和第二次SARS随访者 ,一线未患SARS医护人员 ,健康体检者血清中SARS病毒IgG抗体。结果 :SARS不同时期和不同人群IgG抗体阳性数有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。在疾病早期 ,IgG抗体阳性率 84.6% ,恢复期以后均为 10 0 % ;一线未患SARS医务人员阳性率 3 9.4% ,健康体检者无阳性。结论 :SARS病毒IgG抗体产生较早 ,可用于流行病学调查和血清学诊断     

SARS病毒抗体的检测及其应用

为了解SARS患者血清抗体产生的规律 ,我们用间接免疫荧光法 (IFA)和酶联免疫吸附试验 (ELISA)对广州市第八人民医院的 4 3例住院治疗的SARS患者和 10例正常人的双份血清进行SARS抗体检测 ,同时比较了IFA和ELISA法的特点。10例正常人双份血清的SARS病毒IgM和IgG抗体均阴性。 4 3例SARS患者 ,其中 34例检出IgM占 79.1%。 37例检出IgG占 86 .10 %。SARS病毒IgG抗体的阳性率高于IgM。结果显示 ,发病的同时机体便可检测到SARS抗体IgM最迟离起病时间最长 (33d)的血清也能检测到 ,但也有患者发病第 9、2 3及 30天的第二份…     

SARS患者45例临床分析

目的：探讨45例SARS的诊断和治疗方法。方法：对45例SARS病人的临床特点、治疗效果进行了分析。结果：45例均以高热起病，近距离接触过传染源，潜伏期2～15天，45例患者中曾伴有呼吸困难、干咳、乏力、肌肉酸痛。患者随病情进展在进展高峰期肺部X线表现，其中累及两侧肺野为38人，占84．4％，呈实质性病变为31人，占68．9％，死亡为6例，占13．3％。常规抗感染治疗无效，中毒症状明显和肺部阴影扩散时，及时应用持续气道正压通气(EPAP)和皮质激素可有效控制病情发展。结论：该病传染性强，主要经呼吸道传播，常规抗感染治疗无明显效果。肺部阴影增多和呼吸困难加重时。及时应用CPAP和皮质激素是有效的治疗方法。     

传播链和非传播链SARS患者中SARS冠状病毒抗体的分布及变化规律

目的　探讨人体对SARS CoV血清抗体反应及分布规律。方法　对 30 1例临床诊断病例的血清标本 (其中传播链上的病例 15 8例 ,非传播链病例 14 3例 ) ;采用北京华大GBI生物技术有限公司生产的间接ELISA试剂 ,进行SARS CoVIgG抗体的检测 ,部分病例还进行了SARS CoVIgM的检测。结果　传播链涉及 15条 ,最多涉及 4代 ,各条链的SARSIgG抗体阳性率为 85 70 %～ 10 0 .0 0 % ,总阳性率为 94 30 % (14 9 15 8)。SARS病例数随代数增加而减少。但各代间IgG阳性率的差异无显著意义 ;χ2 =5 11,P >0 0 5。非传播链病例的血清抗体阳性率为 12 5 9% (18 14 3)。与传播链的阳性率比较 ,两者间的差异有显著意义 ;χ2 =199 6 4 ,P <0 0 0 1。在发病后的 0～ 7d、8～ 14d、15～ 2 1d、2 2～ 30d内 ,SARS CoVIgG的累计阳性率分别为 16 6 7%、4 0 0 0 %、70 0 0 %、93 10 % ;然后进入平台期 ,并可以维持 6个月以上。在发病 7d内 ,SARS CoVIgM的累计阳性率为 16 6 7% ,8～ 14d时 ,已有 5 5 17%的标本IgM抗体阳转 ,在 2 1～ 30d时 ,抗体阳性率达高峰 (86 96 % ) ,以后迅速下降。结论　SARS感染后 ,94 %的感染者可产生IgG抗体。检测该抗体可以作为临床核实诊断的依据。SARS CoVIgG抗体在 7d时可能检出 ,一般在 4周达     

甘肃省SARS抗体血清流行病学调查

目的 了解甘肃省严重急性呼吸综合征(SARS)患者、密切接触者和正常人群血清SARS冠状病毒特异性IgG抗体水平。方法 利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测SARS病毒IgG抗体水平。检测对象包括甘肃省9例SARS患者的急性期和(或)恢复期系列血清，l109例直接护理SARS患者的医生、护士、实验室检测人员、疾控人员和曾与患者有接触的人员以及978例正常人血清。结果 9例临床诊断病例SARS冠状病毒特异性IgG抗体中6例为阳性，疾病恢复后12个月血清抗体仍为阳性；密切接触者1例特异性IgG抗体阳性；正常人3例特异性IgG抗体阳性。结论 病例抗体阳性符合临床诊断，密切接触者和正常人的抗体阳性数较低，提示可能不存在隐性感染。     

SARS病毒N蛋白特异性单链抗体的筛选

目的 利用大容量人源性SARS单链抗体库筛选N蛋白的特异性单链抗体。方法利用RT-PCR的方法克隆了SARS病毒的N蛋白基因，克隆入原核表达载体pBV220，在大肠杆菌DH5a中进行表达并经离子交换色谱纯化后得到了纯度达95％以上的N蛋白，然后以此蛋白包被25cm^2组织培养瓶，对SARS单链抗体库进行先松弛，后严谨的筛选、富集，进行4轮筛选后对所筛的抗体进行ELISA鉴定。结果经过4轮的筛选、富集，得到了1株高亲和力的N蛋白单链抗体N18。结论在对SAILS疾病的早期检测或筛查、SARS病毒的生活周期及发病机理的研究中N18将起到重要的作用。     

广东2003年末SARS患者冠状病毒抗原抗体动态特征分析

目的分析SARS-IgG、SARS-IgM、核壳蛋白-IgG抗体和核壳蛋白抗原的变化特点并探讨其意义。方法采用酶联免疫方法对2003年末至2004年初新发4例SARS病人的系列血清进行上述4项的滴度检测。结果在病人较早期的血清中可以检测到核壳蛋白抗原，随着抗体水平的升高，抗原含量迅速下降。抗体E升下降快，在最高水平维持时间短，并且除第1例外，其余3例的抗体滴度均小于1：100，核壳蛋白抗体变化规律与总的IgG抗体一致，但滴度更低。结论抗体变化规律与前次流行不同，抗体水平变化快，应注意及时采集标本。抗原检测可作为一种实验室诊断依据。核壳蛋白抗体可考虑用于早期诊断。     

冠状病毒感染细胞抗原片法检测SARS患者血清中特异性抗体

目的：检测SAILS患者血清中特异性抗冠状病毒抗体及其滴度变化，协助临床确诊SAILS。方法：用本次爆发SAILS患者鼻腔抽吸液分离的冠状病毒感染新生恒河猴肾细胞，制备抗原片，用间接免疫荧光法检测患者体内急性期和恢复期血清中的抗冠状病毒抗体。结果：汕头地区7例SAILS患者血清内均有特异性抗冠状病毒抗体，且恢复期抗体滴度比急性期的滴度增高4倍以上。结论：用冠状病毒感染细胞抗原片对怀疑感染SAILS的患者血清进行特异性抗体检测，可协助临床确定SAPS的诊断。     

Generation and characterization of human monoclonal neutralizing antibodies with distinct binding and sequence features against SARS coronavirus using XenoMouse

Passive therapy with neutralizing human monoclonal antibodies (mAbs) could be an effective therapy against severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV). Utilizing the human immunoglobulin transgenic mouse, XenoMouse, we produced fully human SARS-CoV spike (S) protein specific antibodies. Antibodies were examined for reactivity against a recombinant S1 protein, to which 200 antibodies reacted. Twenty-seven antibodies neutralized 200TCID(50) SARS-CoV (Urbani). Additionally, 57 neutralizing antibodies were found that are likely specific to S2. Mapping of the binding region was achieved with several S1 recombinant proteins. Most S1 reactive neutralizing mAbs bound to the RBD, aa 318-510. However, two S1 specific mAbs reacted with a domain upstream of the RBD between aa 12 and 261. Immunoglobulin gene sequence analyses suggested at least 8 different binding specificities. Unique human mAbs could be used as a cocktail that would simultaneously target several neutralizing epitopes and prevent emergence of escape mutants.     

抗SARS冠状病毒中和活性单克隆抗体的筛选及其结合位点分析

目的 建立能分泌具有中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体（McAb）细胞株，制备有中和活性的抗SARS-CoV MeAb，用于SARS-CoV感染的早期特异诊断和进行SARS-CoV结构蛋白的功能研究。方法 用灭活纯化sARS-c0V（BJ01株）免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合技术，建立能稳定分泌SAILS病毒MeAb的杂交瘤细胞系，然后用中和试验进一步筛选分泌具有中和活性的抗SARS-CoV MeAb细胞株。利用SARS-CoV的S和N蛋白的不同长度肽段通过EusA鉴定McAb的特异结合区域，分析S和N蛋白不同区域诱导产生抗体的能力和特性。结果 建立了12株能稳定分泌抗SARS-CoV McAb的杂交瘤细胞株，间接免疫荧光法检测抗体效价在1：320～1：20 480之间，其中6株具有较好的中和SARS-CoV的能力。具有中和活性的McAb中，3株是针对S蛋白的，2株是针对N蛋白的。其中抗S蛋白的中和抗体活性比抗N蛋白的中和抗体活性高，另外1株可能是针对SARS-CoV的其他结构蛋白的。进一步对6株抗S蛋白的McAb的特异抗原结合表位分析，发现其中3株结合位点在S蛋白第12～311氨基酸之间，2株在第310～535氨基酸之间，后者中和效价高于前者，另1株是针对S2蛋白的，SARS病毒的受体结合区正位于第310～535氨基酸这一区段。具有中和活性的McAb通过间接免疫荧光、ELISA、酶标免疫组化法和胶体金方法对SARS病毒进行检测，都显示出高度的特异性和良好亲和力。结论 成功制备了具中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体，并分别测定了McAb对S蛋白和N蛋白的特异抗原结合活性，初步确定了S蛋白的中和表位。为今后SARS病毒的特异诊断、结构蛋白的功能分析和重组疫苗的研制奠定了较好的基础。     

严重急性呼吸综合征患者相关病毒的随访监测及意义

目的 随访监测确诊SARS患者,研究SARS-CoV、新型呼肠病毒和脊髓灰质炎病毒在患者体内的存在状况及与SARS的可能相关性.方法 采集8例SARS患者痊愈2年后的咽拭子、唾液（或痰液）、尿液、血清及连续3天的粪便标本,用RT-PCR的方法分别扩增SARS-CoV、呼肠病毒和脊髓灰质炎病毒;采用ELISA的方法检测患者血清中的SARS-CoV抗体和脊髓灰质炎病毒IgG抗体.结果 8例患者中有4例的粪便中脊髓灰质炎病毒RNA阳性,均为Sabin 1毒株,在5′端非编码区的第480nt及VP1蛋白编码区的第2795nt两个重要的减毒位点上均发生了回复突变;SARS-CoV和新型呼肠病毒均阴性.对照组标本中均未检测到上述三种病毒.3例随访患者血清中SARS-CoV抗体阳性;4例患者血清中脊髓灰质炎IgG抗体阳性.25例健康体检者的血清中SARS-CoV抗体均阴性,其中23例的血清中脊髓灰质炎病毒抗体阳性.结论SARS患者痊愈2年后的血清中特异性脊髓灰质炎病毒抗体与健康人有显著差异,其粪便标本中仍有较高的脊髓灰质炎病毒阳性率,而且病毒核酸在两个重要的减毒位点上均发生了回复突变.     

抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

目的 制备抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体并研究其初步应用。方法 用基因重组N蛋白免疫小鼠，取免疫后的鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选分泌抗SAPS病毒N蛋白单克隆抗体细胞株。将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对抗体进行纯化，分析纯化抗体的相对亲和力。选择亲和力较高的抗体制备检测SARS病毒抗原的酶联免疫诊断试剂，并对其敏感性和特异性进行分析。结果 共获得11株单克隆抗体细胞株，其中3株单抗与N蛋白具有较高的亲和力，4株纯化单抗与N蛋白反应很弱，其余4株单抗介于两者之间。用亲和力较高的单抗制备检测SARS病毒抗原的诊断试剂，其敏感性可达31PFU／ml，而且与其他呼吸道病毒无交叉反应。结论 该试剂特异性较好，可用于SARS病毒抗原的检测，其敏感性仍需用临床急性期样品进行评价。     

严重急性呼吸综合征患者IgG抗体的研究

目的　探讨血清特异性IgG抗体检测对严重急性呼吸综合征 (SARS)临床诊断的意义及影响因素。方法　用华大公司研制的SARS冠状病毒抗体 (IgG)酶联免疫试剂盒 ,对部分住院SARS患者的血清进行IgG抗体检测 ,统计分析不同年龄、性别和激素使用患者的SARS特异性抗体的产生情况。结果　在确诊的 12 1例患者中 ,IgG抗体阳性率为 71 1% ,年龄 <15岁、15～ 5 9岁和 6 0岁以上的患者 ,阳性检测率分别为 6 0 0 %、70 2 %和 85 7% ,差异无显著意义 (P =0 76 6 ) ;使用激素和不使用激素的患者 ,阳性率分别为 70 6 %和 72 4 % (P =0 84 ) ;病重和病情较轻患者的阳性检测率分别为78 1%和 6 7 4 % (P =0 4 93) ;男性和女性患者检测率均为 71 1%。结论　SARS特异性IgG抗体检测的敏感性有待进一步提高 ,IgG抗体的产生与性别、年龄、病情轻重和激素的使用无显著性关系。     

影响严重急性呼吸综合征患者临床预后的早期预测因素研究

目的 探寻影响严重急性呼吸综合征(SARS)患者临床预后的早期预测因素。方法 选取20例SARS死亡患者及40例治愈出院患者作为研究对象，收集发病早期临床资料及转归情况，应用多元Logistic回归及Cox比例风险模型分析早期预测因素。结果 单因素分析显示：临床恶化患者与预后良好患者之间在年龄、合并慢性疾病、心肌酶、血氧指标、淋巴细胞计数5方面差异有显著意义；多因素Logistic回归表明：高龄(P=0．009)及较低淋巴细胞计数(P=0．004)与临床恶化密切相关；Cox比例风险分析表明：在40例痊愈患者中淋巴细胞计数较低者(P=0．003)住院时间较长。结论 高龄、淋巴细胞计数下降与临床恶化关系密切，可用于预测SARS患者的临床预后。     

严重急性呼吸综合征自身免疫指标的初步研究

目的　探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者是否存在着自身免疫现象,寻找患者体内异常出现的抗自身组织器官的抗体。方法　随机选取2 7例SARS患者及18例健康献血员对照血清同时应用免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗胃壁细胞抗体(PCA)、抗心肌抗体(HRA) ,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗肝肾微粒体抗体(LKM)及抗线粒体M2亚型抗体,同时利用猴肺组织基质片应用免疫荧光法定位血清中的SARS相关抗体的靶细胞。结果　2 7例SARS患者中有3例ANA阳性、1例SMA阳性、1例AMA阳性、1例LKM阳性、其余均为阴性;18例献血员中有1例ANA阳性、1例AMA阳性,其余均为阴性。统计分析表明SARS患者与献血员间各项自身抗体阳性率差异均不具有统计学意义。在2 7例SARS患者血清中有2 6例在肺组织细小支气管柱状上皮细胞的腔面尖端呈现强阳性荧光信号,献血员中有5例,统计分析表明两者阳性率差异有统计学意义。结论　SARS患者未出现抗肺外组织、器官的自身抗体。患者血清中出现了抗肺组织的自身抗体,定位于细小支气管柱状上皮细胞。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白特异性单克隆抗体(McAb)，为SARS的快速诊断及致病机制的研究提供实验材料。方法 用纯化的重组SARS-CoVN蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合和亚克隆后获得分泌针对N蛋白的杂交瘤细胞株，用Western blot和间接免疫荧光法检测这些细胞株分泌的单克隆抗体特异性，并将N蛋白分3段表达初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。结果 通过细胞融合和3轮克隆化，筛选出分泌抗N蛋白的6个杂交瘤细胞株。Western blot及免疫荧光显示，获得的McAb可与SARS-CoVN蛋白及SARS-CoV发生特异性反应，有4个细胞株分泌的抗体的识别位点位于N蛋白N端，2个位于C端。结论 获得了SARS-CoV特异性单克隆抗体并进行了初步定位，可用于SARS的早期诊断及致病机制研究。