抑制端粒酶活性能增加胃癌细胞对顺铂的敏感性

肿瘤细胞存在多药耐药现象和化疗药物的毒副作用是影响肿瘤化疗效果的主要原因。新近研究表明 ,表达于绝大多数肿瘤细胞而不表达于正常体细胞的端粒酶与化疗敏感性有关[1,2 ] 。在我们既往研究工作的基础上 ,我们观察了反义人端粒酶ＲＮＡ(ｈＴＲ)转染的ＳＧＣ 790 1胃癌细胞在端粒酶活性受抑制后对常用化疗药物顺铂敏感性的变化 ,探索胃癌联合化疗的新途径。一、材料与方法1 细胞培养 :人胃癌细胞系ＳＧＣ 790 1和反义人端粒酶ＲＮＡ转染的ＳＧＣ 790 1细胞 (790 1 ａｈＴＲ) [3] 均培养于含 10 %灭活的小牛血清、10 0 μｇ/ｍｌ链霉素、10…     

化疗药对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性的影响

目的研究常用化疗药物对人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１端粒酶活性的影响．方法利用端粒重复扩增实验（ＴＲＡＰ）结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,测定ＳＭＭＣ７７２１细胞经过几种化疗药物（顺铂、阿霉素、丝裂霉素、５ＦＵ）不同浓度和时间作用后端粒酶活性的变化．结果当各种药物大剂量处理细胞４ｈ后再祛除药物培养２０ｈ后,顺铂对酶的活性完全抑制,丝裂霉素有部分抑制,阿霉素和５ＦＵ无抑制作用;而未经２０ｈ再培养则无作用;小剂量药物处理细胞５ｄ,其结果同大剂量相似．结论顺铂和丝裂霉素对人肝癌ＳＭＭＣ７７２１细胞端粒酶活性有抑制作用,可能与药物的作用机制有关．     

苦参素注射液联合顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参素注射液(MI)联合顺铂(DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响。方法分别采用MI、顺铂及MI联合顺铂干预SMMC-7721细胞。TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR法检测c-myc、bcl-2和bax mRNA表达,二步法免疫组化检测c-myc、bcl-2和bax蛋白表达。结果苦参素组、顺铂组和联合用药组细胞凋亡率显著上升,与对照组(不干预)比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合用药具有单纯相加或协同作用;联合用药组的细胞凋亡率显著增加,bax mRNA和蛋白表达显著升高,c-myc、bcl-2 mRNA和蛋白表达显著减少,与DDP单药组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论苦参素注射液联合顺铂具有单纯相加或协同诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用,其机制可能与bax基因表达上调和c-myc、bcl-2基因表达下调有关。     

应用顺铂后肝癌细胞超微结构的研究

目的 了解经顺铂化疗后肝癌细胞的超微结构的变化。方法 运用透射电镜观察经顺铂化疗细小切除的肝细胞癌的形态学特征的改变。结果 细胞表面微绒毛消失。细胞接触松弛,细胞较缩小,碎裂,胞质空虚,均质网膜表面核糖体减少或缺少,糖原颗粒减少,线粒体空泡化或出现絮状物,并见凋亡小体。结论 经后化疗后的肝癌细胞的超微结构形态学改变符合程序性细胞死亡的过程。说明顺铂能地肝癌细胞发生调亡。     

利用中效原理观察苦参素、氟尿嘧啶对人肝癌细胞株QGY的相互作用

一、材料与方法 １．材料：人肝癌细胞株ＱＧＹ培养在１０％小牛血清ＲＰＭＩ １６４０培养液中备用。５－氟尿嘧啶（５一Ｆｕ）使用时配成３．０７５、１．５３８、０．７６９、０．３８４、０．１９２ ｍｏｌ／Ｌ；苦参素使用时配成３４．４７０、１７．２３５、８．６１７、４．３０９、２．１５４ ｍｏｌ／Ｌ ５个浓度。 ２．ＭＴＴ法检测药物效应：设试剂对照组、药物试验组及肿瘤细胞对照组。将ＱＧＹ制成５ ± １０４个／ｍｌ的细胞悬液，每孔２００μｌ，加入９６孔板。分别按以下方式进行观察：（１）单用及两药合用时效应：将两种…     

顺铂对食管癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 研究顺铂对食管癌细胞周期和端粒酶活性的影响，为其临床应用提供理论依据。方法 用2μg/ml顺铂处理食管癌EC9706细胞，流式细胞仪分析细胞周期的改变，TRAP—ELISA法检测细胞端粒酶活性的改变。结果 顺铂可使食管癌细胞阻滞于S期，诱导细胞凋亡；同时降低食管癌端粒酶活性。结论 顺铂对食管癌有治疗作用，端粒酶活性可作为观察食管癌化疗疗效的一个指标。     

奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的影响

奥沙利铂(Oxaliplatin，L-OHP)是第三代铂类化合物，其化学名为左旋反式二氨环己烷草酸铂，国际通用名为草酸铂。临床前研究表明该药对人和鼠多种肿瘤细胞均有抑制作用，且对各种顺铂耐药的肿瘤细胞株无交叉耐药。研究通过抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的影响，为奥沙利铂应用于肝细胞癌的临床治疗提供理论依据。     

搏癌丸对人肝癌Hep-G2细胞端粒酶活性的影响

目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌细胞Hep-G2端粒酶活性的影响。方法:采用药物血清和细胞药理学方法,观察10％搏癌丸药物血清作用Hep-G2细胞48h后对端粒酶活性的影响。结果:人肝癌细胞Hep-G2细胞经10%搏癌丸药物血清培养48h后,其端粒酶活性被显著抑制(抑制率为66.6%),与无药血清对照组比较,有显著性差异,P<0.05。结论:搏癌丸能显著抑制端粒酶活性。     

PD98059提高HBx+HepG2对顺铂的敏感性

细胞外信号调节激酶(ERK)级联是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路中的重要一员，与细胞增殖、分化、凋亡关系密切。乙型肝炎病毒(HBV)x(HBx)基因是一种致肝癌的重要因子，能激活肝细胞内ERK通路，从而影响细胞生物学特性。本实验通过稳定表达HBx的HepG2细胞(HBx^ HepG2)对顺铂以及顺铂联合MAPK／ERK激酶(MEK)特异性抑制剂PD98059敏感性差异的研究，探讨PD98059提高HBx^ HepG2对顺铂敏感性的作用机制。     

Smac基因过表达联合顺铂对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Smac基因过表达联合顺铂对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用脂质体介导的转染方法 ,将重组质粒pcDNA3.1+hSmac导入人肝癌细胞株SMMC-7721中,采用Western blot和流式细胞术检测转染前后Smac蛋白表达情况.转染24 h后分别加入终浓度为5、15、25 μg/ml的顺铂诱导细胞凋亡.采用四甲基偶氮唑盐比色法检测癌细胞的增殖抑制作用,吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法和膜联蛋白V/碘化丙啶双染标记流式细胞术检测细胞凋亡. 结果 Westernblot和流式细胞术检测结果证实转染后Smac蛋白表达明显增加(P＜0.01).与空白对照相比,Smac基因过表达可抑制癌细胞增殖,促进凋亡(P＜0.01).而且给予顺铂处理后,与空白对照组相比,细胞生长抑制率随剂量增加而显著上升,且转染Smac的细胞生长抑制率较相应未转染Smac的细胞明显升高(P＜0.01).吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法和流式细胞术检测显示,转染Smac加顺铂处理组较单纯顺铂处理组细胞凋亡明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).这表明Smac基因过表达可增强顺铂对肝癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用. 结论 促凋亡基因Smac可在肝癌细胞中过表达,抑制癌细胞的增殖和促进凋亡;而且过表达的Smac基因可增强癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,这为研究Smac在癌细胞凋亡过程中的调控作用以及肝癌化学治疗效果的改善提供了实验基础.     

人ZEB1基因真核表达载体的构建及其对肝癌细胞株HepG2增殖凋亡的影响

目的：探讨ZEB1基因与肝癌的关系,进一步揭示ZEBl基因在肝癌发生发展过程中的作用。方法：利用基因重组技术构建pCI-neo-ZEB1真核表达载体：脂质体介导转染技术转染肝癌细胞系HepG2。采用WesternBlot技术检测重组质粒的转染效率,CCK8比色法测定重组质粒转染对HepG2细胞体外增殖能力的影响,流式细胞术检测重组质粒转染后HepG2细胞凋亡率。结果：重组质粒经Nhel和Xbal双酶切、测序与ZEBl基因序列一致;利用脂质体介导将pCI-neo-ZEB1重组质粒转染HepG2细胞株,经WesternBlot技术检测ZEB1基因在蛋白水平稳定高表达;与对照组比较,人HepG2细胞株转染pCI-neo-ZEB1真核表达载体后细胞增殖能力增强,细胞凋亡率明显降低。结论：成功构建重组质粒Pci-neo-ZEB1并转入肝癌细胞株HepG2后,细胞增殖能力增强,凋亡减少。     

TSA对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及FHIT表达的影响

目的观察曲古抑菌素A（TSA）的体外抗人肝癌HepG2细胞作用及机制。方法取人肝癌HepG2细胞培养至对数生长期后随机分为TSA组、对照组、空白组,TSA组加入TSA至终浓度分别为125、250、500、1 000、2 000nmol/L,对照组加入等量二甲基亚砜（DMSO）,空白组只加培养基、无细胞,每组设6个复孔,作用24~72 h后MTT比色法测定HepG2细胞增殖抑制率（IR）,倒置显微镜和电镜观察HepG2细胞形态变化,TUNEL法检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测脆性组氨酸三联体（FHIT）基因表达,Western blot检测FHIT蛋白表达。结果与对照组相比,TSA组IR随TSA浓度增加和作用时间延长而增加（P〈0.05）,透射电镜下TSA组HepG2细胞出现凋亡早期改变;与对照组比较,TSA组细胞凋亡率升高,FHIT mRNA及蛋白表达增强（P均〈0.01）。结论 TSA体外能有效抑制肝癌细胞株HepG2生长并促进其凋亡,机制可能为上调FHIT表达。     

Tamoxifen induces suppression of cell viability and apoptosis in the human hepatoblastoma cell line HepG2 via down-regulation of telomerase activity.

BACKGROUND/AIMS: Antiproliferative action of tamoxifen in the estrogen receptor-alpha-negative human hepatoblastoma cell line HepG2 was investigated. METHODS: HepG2 cells, seeded at different densities (4000-36 000 cells/cm(2)), were incubated with tamoxifen (1, 10, or 20 microM) or the telomerase inhibitor 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT) (0.6-3.0 mM) up to 72 h. Cell viability was assessed (MTT-test), flow cytometric analysis was performed, and telomerase activity was measured (telomeric repeat amplification protocol assay). RESULTS: Ten or 20 microM tamoxifen induced a reduction of cell viability. Basically reduction of viability was related to an increase in the fraction of G0/1-phase. When tamoxifen was present at higher concentration (20 microM) or at low cell density (4000/cm(2)) an additional increase of the rate of apoptotic cells occurred with a delay, aggravating the effect of tamoxifen on cell viability substantially. When apoptosis was induced a significant suppression of telomerase activity preceded regularly. Direct inhibition of telomerase activity with AZT resulted in a decrease of cell viability and apoptosis. CONCLUSION: The tamoxifen-induced reduction of cell viability in HepG2 cells depends on drug concentration and cell density and is due to cytostatic and cytocide effects. The latter may be mediated by a down-regulation of telomerase activity.     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞株端粒酶活性作用的实验研究

观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞株的作用。用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与肝癌细胞株共同孵育一定时间后,观察细胞形态变化、细胞DNA含量的发布,测定端粒酶活性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚2倍体凋亡峰;端粒酶活性抑制,端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,抑制端粒合成,从而抑制肝癌细胞的生长。     

乙型肝炎病毒X基因下调miR-192对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X基因(HBx)通过调节人肝癌细胞株HepG2中miR-192的表达而抑制其凋亡的机制.方法 设立3个细胞组:稳定转染HBx基因的HepG2细胞(HepG2/HBx),稳定转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞(HepG2/pcDNA3.1)以及未作转染的HepG2细胞.用流式细胞术分析3个细胞组的凋亡率差异,用Taqman探针荧光定量PCR检测3组细胞中miR-192的表达水平.转染miR-192后,用流式细胞术检测HepG2细胞凋亡率的变化,同时用SYBR Green荧光定量PCR和Western blot检测细胞中p53、PUMA表达的变化.计量资料均数的比较用单因素方差分析.结果 HepG2/HBx细胞的凋亡率为2.37％±0.35％,较HepG2/pcDNA3.1、HepG2细胞(11.46％±0.69％、12.50％±0.66％)明显降低(F=171.722,P＜0.01).miR-192表达在HepG2/HBx细胞中为49.1％±5.9％,较HepG2/pcDNA3.1、HepG2细胞(98.0％±8.9％,100％)也明显下调(F=14.319,P＜ 0.05).转染miR-192后HepG2细胞的凋亡率(15.74％±1.17％)较转染相应阴性对照的HepG2细胞的凋亡率(10.74％±1.15％)显著升高(F=18.415,P＜0.05),同时,p53、PUMA基因在mRNA (953:1.68±0.12比0.90±0.09,F=43.115,P＜0.05 ; PUMA:1.66±0.10比0.98±0.06,F=22.541,P＜0.05)和蛋白质水平(p53:3.07比1,PUMA:2.13比1)的表达均显著上升.结论 miR-192促进HepG2细胞凋亡,HBx通过下调miR-192抑制HepG2细胞凋亡.