肝细胞移植实验及临床应用研究

肝细胞移植 (ＨＣＴ )是 2 0世纪 70年代发展起来的一项细胞工程技术 ,和原位肝移植 (ＬＴ)相比 ,ＨＣＴ具有移植技术简单、供体肝细胞保存方便、价格相对低廉和一个供体可以给多个受体提供肝细胞等诸多优点。此外 ,肝细胞在体外还可进行基因修饰 ,是一个良好的基因治疗载体。目前 ,ＨＣＴ已成为继ＬＴ后又一治疗肝衰竭和肝先天性代谢障碍疾病的一种有效治疗措施 ,越来越引起广大学者的研究兴趣。一、肝细胞的分离、体外培养与保存2 0世纪 60年代末肝细胞无损伤高纯度分离奠定了ＨＣＴ的研究基础。首先把肝实质用酶消化后获得了无损伤肝细胞…     

肝细胞移植的研究进展

由于肝脏供源的有限和肝移植 (ｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ,ＬＴ)本身的复杂性 ,使一种简便有效且对机体影响较小的技术———肝细胞移植 (ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ,ＨＣＴ)在近年得到很大发展。ＨＣＴ较ＬＴ具有以下优点 :①一个供体可以给多个受体提供细胞 ;②移植技术简单 ;③即使移植失败 ,对受体的影响也十分微小。因此 ,ＨＣＴ有更广泛的发展前景。一、肝细胞植入的部位1.腹腔内移植 :腹腔内移植具有易操作、腹腔内空间大、营养物质和代谢产物的交换表面积大等优点。尽管如此 ,此种方法也…     

细菌内构建复制缺陷型人肝细胞生长因子重组腺病毒及其对胎肝细胞细胞周期的影响

利用ＡｄＥａｓｙ系统的细菌内同源重组机制构建以ＣＭＶ驱动并同时表达绿色荧光蛋白 (ＧＦＰ)的人肝细胞生长因子 (ＨＧＦ)复制缺陷型重组腺病毒 (ＡｄＨＧＦ) ,体外感染胎肝细胞 ,初步研究其对肝细胞细胞周期的影响 ,为基因治疗技术和肝细胞移植联合应用于肝纤维化治疗研究提供新的途径。将质粒 ｐＵＣＨＧＦ扩增、酶切获得ＨＧＦｃＤＮＡ片段后插入腺病毒穿梭载体质粒 ｐＡｄＴｒａｃｋ ＣＭＶ的ＣＭＶ启动子的下游 ,构建重组穿梭载体ｐＡｄＴｒａｃｋ ＣＭＶ ＨＧＦ ,ＰｍｅⅠ酶切线性化后与骨架载体ＡｄＥａｓｙ 1在细菌ＢＪ5 183内同…     

半相合淋巴细胞输注治疗急性白血病研究进展

供体淋巴细胞具有移植物抗白血病 (ＧＶＬ)效应 ,而ＧＶＬ效应主要由异体Ｔ细胞介导。目前 ,半相合供者淋巴细胞输注 (ＤＬＩ)已成为治疗异基因造血干细胞移植 (ａｌｌｏ ＨＳＣＴ)后慢性髓细胞白血病(ＣＭＬ)复发的最有效方法 ,并逐渐用于其他恶性血液病ａｌｌｏ ＨＳＣＴ后复发的治疗 ,取得了令人瞩目的效果 ,应用范围逐渐扩展到ａｌｌｏ ＨＳＣＴ的非复发并发症和未经骨髓移植预处理患者的过继免疫治疗。而半相合ＤＬＩ治疗急性白血病成为本领域研究的热点。本文对半相合ＤＬＩ治疗的效应机制 ,临床应用的并发症以及时机、剂量等方面的研…     

自身免疫病——造血干细胞病

造血干细胞移植(ＨＳＣＴ)治疗血液病合并自身免疫病时,在血液病缓解的同时免疫病也好转或缓解。最直接的证据来自非霍奇金淋巴瘤(ＮＨＬ)合并系统性红斑狼疮(ＳＬＥ)或类风湿关节炎(ＲＡ)用金制剂治疗引起的再生障碍性贫血患者,ＨＳＣＴ后ＳＬＥ或ＲＡ病情改善[1]。这促使血液学家和风湿病学家开始了用ＨＳＣＴ治疗严重自身免疫病的尝试。在风湿病中治疗较多的有ＲＡ、ＳＬＥ、硬皮病及其他免疫病如多发性硬化(ＭＳ)等。目前临床应用较多的是自体(同基因)和异体(异基因)ＨＳＣＴ,前者方便、死亡率低、不发生移植物抗宿主病(ＧＶＨＤ);而后…     

乙型肝炎病毒嗜肝性机制研究进展

乙型肝炎病毒 (ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ,ＨＢＶ)属嗜肝脱氧核糖核酸病毒 (ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ)。其吸附、入侵肝细胞 ,是感染肝细胞并引起病变的第一步 ,也是ＨＢＶ嗜肝性的原因之一 ,人们对ＨＢＶ吸附肝细胞的机制进行了长期大量的研究 ,现将有关内容综述如下 :1　ＨＢＶ与肝细胞受体直接结合研究初期 ,许多学者[1,2 ] 成功地以ＨＢＶ颗粒感染肝癌细胞系ＨｅｐＧ2 细胞 ,推测 ｐｒｅＳ1和 ｐｒｅＳ2 蛋白可以直接与肝细胞结合。Ｎｅｕｒａｔｈ等利用人工合成多肽方法 ,对 ｐｒｅＳ1及 ｐｒｅＳ2 的决定簇进行分析 ,通过…     

暴发型肝炎肝细胞凋亡的阻断治疗研究

国外学者认为肝细胞凋亡在暴发型肝炎 (ＦＨ )发生中具有重要作用 ,并为此进行了大量的实验研究 ,旨在为ＦＨ的防治探索新方法。目前用来阻断肝细胞凋亡的方法涉及半胱氨酸基天冬氨酸特异性蛋白酶 (ｃａｓｐａｓｅｓ)抑制剂、抗氧化剂、细胞因子、基因转染、中草药及其它多肽分子与化学制剂。一、维持能量及氧化还原状态平衡近年的研究认为 ,线粒体跨膜潜能 (△Ψｍ)下降、线粒体膜通透性转变 (ＭＰＴ)、线粒体内ＡＴＰ及还原型谷胱甘肽 (ＧＳＨ )含量充足是细胞凋亡的决定因素。Ｈｅｎｔｚｅ等[1] 以ＧＳＨ的底物佛尔酮清除谷胱甘肽 ,可以…     

重视肝细胞生长因子的研究

肝细胞生长因子的研究是近年研究的热点。现将国际上有关研究近况简介如下，希望能引起国内学者的重视。一、ＨＧＦ与其他因子　目前将能促进肝细胞生长的因于分成两类，一类是非特异性肝细胞生长刺激因子，包括表皮生长因子（ＨＧＦ）、胰高糖素－胰岛素（Ｇ－Ｉ）、类胰岛素生长因子（ＩＧＦ－Ⅰ、Ⅱ）、血小板源性生长因子，（ＰＤＧＦ）、前列腺素（ＰＧＥ）、雌激素及纤维连接蛋白（Ｆｎ）等；另一类是特异性肝细胞生长刺激物质（ＨＳＳ）及新近发现的肝再生增强因子（ＡＬＲ）。然而，最近研究表明，ＨＧＦ并非特异性因子；其他两种因…     

近年来我国内分泌学的研究进展

国内对垂体前叶激素表达的调控及其与免疫的关系、垂体瘤的发病机制等方面作了深入研究。90年代初期,西安学者发现在人的垂体前叶有Ｐ物质、降钙素基因相关肽及甘丙肽(ｇａｌａｎｉｎ)等肽类神经支配,它们来自下丘脑。免疫电镜观察到这些神经纤维与促肾上腺皮质激素(ＡＣＴＨ)和生长激素(ＧＨ)细胞有典型的突触联系,表明这些神经纤维可能直接参与垂体前叶功能的调节。在基因表达调控方面北京学者将大鼠ＰＯＭＣ基因调控序列(-480～ 63)与真核表达载体ＰＧＬ2Ｂａｓｉｃ构建几个重组体,转染大鼠垂体ＡＣＴＨ瘤细胞株(ＡｔＴ20),发现ＰＯＭＣ…     

肝癌患者肝炎病毒感染背景分析

为了解肝癌高发区启东地区乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)、丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)、丁型肝炎病毒 (ＨＤＶ )与庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ )感染对肝癌发生的意义 ,我们采用血清流行病学调查的方法对10 0例肝癌患者的ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ和ＨＧＶ血清学标志进行测定 ,结果报道如下。材料与方法一、研究对象10 0例肝癌患者均为近期连续住院患者 ,42例经外科手术 ,组织学诊断为肝细胞肝癌 ,5 8例由临床、ＡＦＰ、Ｂ超和 (或 )ＣＴ确诊。血清于入院时采集 ,保留 1.5ｍｌ于 -30°Ｃ冰柜中并进行统一检测。二、检测方法(一 )ＨＢｓＡｇ检测　单克隆ＥＬＩＳ…     

肿瘤坏死因子α对肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的研究肿瘤坏死因子（ＴＮＦ α）对肝星状细胞（ ＨＳＣ）结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ, ＣＴＧＦ）表达的影响。方法用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注, Ｎｙｃｏｄｅｎｚ一步密度梯度离心法分离正常大鼠 ＨＳＣ,并用 ＴＮＦ α,转化生长因子β １（ＴＧＦ β１）处理细胞;应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）技术分别观察不同培养时期的ＨＳＣ中的ＣＴＧＦ的表达。结果 ＴＮＦα, ＴＧＦβ１均诱导ＨＳＣ的ＣＴＧＦ表达; １０μｇ／Ｌ浓度的 ＴＮＦα作用 ６ｈ,没有观察到 ＨＳＣ表达 ＣＴＧＦ;作用 ２４ ｈ后,检测到有 ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ的表达。 ＴＧＦ β１在 １μｇ／Ｌ浓度作用 ６ｈ后,即可诱导 ＨＳＣ的 ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达。结论 ＴＮＦ α可诱导 ＨＳＣ的 ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达,可能是其参与早期肝纤维化形成的作用机理之一。     

肝硬化及原发性肝癌患者血清胰岛素样生长因子-Ⅱ、TNF和IL-6水平的研究

胰岛素样生长因子Ⅱ (ＩＧＦ Ⅱ )是由肝细胞合成分泌的一种单链多肽 ,与生长激素关系密切 ,是促进多种组织细胞生长的多肽因子。为探讨肝硬化 (ＨＣ)及原发性肝癌 (ＰＨＣ )患者ＩＧＦ Ⅱ、肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ)和白介素 6 (ＩＬ 6 )与肝病发生及发展的关系 ,我们测定了 42例ＨＣ ,30例ＰＨＣ患者血清ＩＧＦ Ⅱ、ＴＮＦ及ＩＬ 6水平 ,现报道如下。材料与方法一、研究对象ＨＣ组 42例 ,男 30例 ,女 12例 ,年龄 2 6～ 6 5岁 ;ＰＨＣ组 30例 ,男 2 2例 ,女 8例 ,年龄 2 8～ 70岁。两组患者均经Ｂ超、ＣＴ、ＭＲＩ及有关血清标记免疫、分析指…     

混合庚型肝炎病毒感染对慢性乙型肝炎患者HBV复制的影响

研究表明 ,庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ )与乙型肝炎病毒(ＨＢＶ)混合感染的现象常见。然而混合ＨＧＶ感染对ＨＢＶ复制影响的研究 ,报道较少。我们应用逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法对 2 2 3例慢性乙型肝炎 (ＣＨＢ)患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测 ,并采用定性、定量ＰＣＲ技术、免疫组织化学 (免疫组化 )技术等对ＨＧＶＲＮＡ阳性与阴性患者进行了对比研究。材料与方法一、研究对象2 2 3例ＣＨＢ均为 1997～ 1999年间收治的住院患者 ,其中男 16 9例 ,女 5 4例 ,平均年龄 33.3岁 ,其中ＨＧＶＲＮＡ阳性患者 37例、阴性患者 186例 ,两…     

肝癌和癌旁肝组织胰岛素样生长因子-Ⅱ及其受体的免疫电镜研究

近来的研究表明 ,胰岛素样生长因子 Ⅱ (ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒⅡ ,ＩＧＦ Ⅱ )的过量表达与肝细胞癌 (简称肝癌 )的形成有关[1～ 3 ] 。乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)已被确认为肝癌的重要致癌因子 ,但其致癌机制尚未阐明。我们选取存在ＨＢＶ ＤＮＡ整合的肝癌和癌旁肝组织为主要研究对象 ,应用胶体金免疫电镜技术 ,通过对ＩＧＦ Ⅱ及其受体 (ＩＧＦ ⅡＲ)在各种肝组织中超微结构定位观察和定性分析的对比研究 ,旨在探讨ＨＢＶ ＤＮＡ整合与ＩＧＦ Ⅱ和ＩＧＦ ⅡＲ自分泌生长刺激机制在肝癌癌变形成过程中的关系 ,…     

可溶性白细胞介素-2受体、CD+25细胞与急性移值物抗宿主病关系的研究

目的　研究造血干细胞移植期（ＨＳＣＴ）细胞因子及受体水平的变化、免疫重建与急性移植物抗宿主病（ａＧＶＨＤ）的关系,以探讨临床预测ａＧＶＨＤ的指标。方法　２２例ＨＳＣＴ患者,采用双夹心ＥＬＩＳＡ动态监测血清细胞因子及受体白细胞介素－６、白细胞介素－８、干扰素－γ、肿瘤坏死因子－ａ、可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平的变化、流式细胞仪检测移植后淋巴细胞亚群ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６９＋细胞的重建。结果 ２２例患者均获得造血重建,６例发生Ｉ度ＧＶＨＤ,４例发生Ⅲ－Ⅳ度ＧＨＶＤ。ｓＩＬ－２Ｒ在ａＧＶＨＤ发生组于移植后第２周上升,第３周达峰值,Ⅲ－Ⅳ度ＧＶＨＤ峰值为（４２０．３±５９．８）Ｕ／Ｌ,Ｉ度ＧＶＨＤ峰值为（２２１．５±３８．８）Ｕ／Ｌ,早于ａＧＶＨＤ的症状出现,与疾病的严重程度显著相关,随症状的缓解而下降。其他细胞因子水平的变化与ａＧＶＨＤ的发生无明显关系。ＣＤ２５＋细胞的升高与ｓＩＬ－２Ｒ一致。结论分析移植后患者血清细胞因子水平的变化及免疫重建可以预测ａＧＶＨＤ的发生,ｓＩＬ－２Ｒ、ＣＤ２５＋细胞在ａＧＶＨＤ发生之前明显上升,是预测ａＧＶＨＤ的指标。     

肝细胞生长因子基因及其表达

肝细胞生长因子（ＨＧＦ）不仅对肝细胞有生长刺激作用，是最强的促肝实质细胞增殖的生长因子，而且还具有其它各种生理功能，因而引起了众多学者的关注，把ＨＧＦ作为肝病学分支中的生长因子进行研究。本文就ＨＧＦ的基因及其表达作一介绍。一、ＨＧＦ基因结构及分布ＨＧＦ基因全长约７０ｋｂ，有１８个外显子和１７个内含子，位于人第７染色体长臂７ｑ２１．１位置。从人类ＨＧＦ基因转录的ｍＲＮＡ有４种：６．３ｋｂ、３．１ｋｂ、２、３ｋｂ和１．５ｋｂ。６．３ｋｂ和３．１ｋｂ的基因序列是一样的，只是３＇非编码区的ＤＮＡ长短不一…     

肝细胞生长因子在心血管疾病中的作用

肝细胞生长因子 (Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ,ＨＧＦ)又称扩散因子 (Ｓｃａｔｔｅｒｆａｃｔｏｒ) ,1982年Ｓｔｒａｉｎ等首先报道从血小板提取出来。一年后相继有报道从人血清 ,兔血清及急性肝衰竭病人血浆中提取到。因其对体外培养的肝细胞具有强大的促有丝分裂作用故而得其名。目前已知ＨＧＦ来源于间质细胞 ,其受体是原癌基因Ｃ ｍｅｔ(Ｃ ｍｅｔｐｒｏｔｏｎｃｏｇｅｎｅ)的产物 ,广泛分布于上皮细胞。已有研究证明[1] ,内皮细胞和系膜细胞 ,平滑肌细胞均可分泌ＨＧＦ ,同时又均可表达ＨＧＦ其受体Ｃ ｍｅｔ。ＨＧ…     

醛脱氢酶基因转移介导的环磷酰胺耐受性研究

醛脱氢酶基因 (ＡＬＤＨ1)能氧化环磷酰胺 (ＣＴＸ)的中间代谢产物醛磷酰胺 ,形成无毒的羧基磷酰胺 ,发挥对ＣＴＸ的解毒作用。我们利用逆转录病毒介导ＡＬＤＨ1转染人造血细胞系Ｋ5 6 2 ,体外实验观察ＡＬＤＨ1基因转移过表达与ＣＴＸ耐受程度间的关系。一、材料和方法1.主要试剂 :Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ转染试剂购自ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司 ;4 氢过氧化ＣＴＸ(4 ＨＣ)由美国Ｄｕｋｅ大学癌症研究中心ＳｕｓａｎＬｕｄｅｍａｎ博士惠赠 ;Ｇ4 18、总ＲＮＡ试剂ＴＲＩｚｏｌ、Ｍ ＭＬＶ逆转录酶为ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ…     

肝细胞生长因子与肝癌

肝细胞生长因子（ＨＧＦ）是促进肝细胞增殖最强的细胞因子。以往有报道，ＨＧＦ并不诱发肝癌甚至可抑制肝癌，因而认为ＨＧＦ在肝炎的治疗上大有前途。肝癌可由肝腺瘤等癌前病变经过基因突变累积而成，而后者则多见于慢性肝炎与肝硬化。在肝炎、肝硬化和肝癌患者均可见血ＨＧＦ增加。这可能因肝细胞坏死引致ＨＧＦ合成增加，肝细胞损伤使ＨＧＦ清除减少所致。ＨＧＦ是否促进癌前肝细胞增殖，在肝癌发生中的作用及ＨＧＦ是否能用于慢性肝病的治疗至关重要。本文就这一领域的研究状况作一介绍。一、ＨＧＦ对肝癌的影响有人检测包括肝癌在内的…     

肝细胞生长因子与肝纤维化

肝细胞生长因子（ＨＧＦ）是肝细胞的强有力的增殖因子，１９８９年两个研究小组几乎同时克隆出了ＨＧＦｃＤＮＡ。以后发现ＨＧＦ的作用并不限于促进肝细胞的再生，还可以抑制肝细胞的损害，改善脂肪肝，甚至还有阻止肝纤维化的作用。因此，ＨＧＦ有望作为难治性慢性肝炎和肝硬化的治疗药物。本文介绍近年来迅速开展的有关ＨＧＦ抑制肝纤维化的分子细胞学方面的研究，并以此推测ＨＧＦ的作用机制。一、ＥＣＭ与星状细胞１９６０年在研究肝纤维化的病理组织学时，发现胶原是细胞外基质（ＥＣＭ）的主要成分，主要沉积于肝细胞与肝窦的间隙即…