Corilagin抗PAF诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究Corilagin抗血小板活化因子（PAF）损伤人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的保护作用及其机制．方法用PAF损伤HUVEC,采用MTT法测定Corilagin对HUVEC活性的影响;以Fura-2／AM荧光探针负载细胞,用双波长荧光分光光度法测定HUVEC细胞内游离钙离子浓度;用ELISA法测定培养的细胞上清液中t-PA、PAI-1含量的变化．结果1μmol／L的PAF刺激内皮细胞2h后,可明显降低HUVEC的吸光度值,细胞内钙离子浓度升高,PAI-1含量明显升高,t-PA含量无明显变化;50～200μmol／L的Corilagin可升高PAF引起HUVEC吸光度值的降低,呈浓度依赖性显著降低HUVEC内游离钙浓度;Corilagin明显抑制PAF诱导的PAI-1分泌增高,对t-PA水平无明显影响．结论Corilagin对PAF诱导的HUVEC损伤具有保护作用,其机理可能与降低细胞内钙离子浓度、抑制PAI-1产生、调节t-PA／PAI-1平衡密切相关．     

HPLC法分离与检测20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3

20(R)-人参皂苷Rg3是我国21世纪批准的第一个中药单体新药，拥有完全自主知识产权。实验与临床研究表明，人参皂苷Rg3具有抑制肿瘤细胞的增殖、浸润，对抗肿瘤细胞的转移，促进肿瘤细胞凋亡，提高机体免疫能力等作用。目前对于20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3的抗肿瘤作     

20（S）-人参皂苷Rg3抗异丙肾上腺素诱导心肌缺血作用

[目的]研究20（S）-人参皂苷Rg3抗心肌缺血作用及其机制.[方法]随机将50只Wistar大鼠分成5组,即空白对照组（CON）,异丙肾上腺素组（ISO）,20（S）-人参皂苷Rg3（5、10、20 mg/kg）组.各组大鼠灌胃给予相应药物,除CON外其余各组大鼠皮下注射盐酸异丙肾上腺素（20 mg/kg）制备心肌缺血模型.末次注射异丙肾上腺素2h后麻醉大鼠,取血检测血清中肌酸激酶（creatine kinase,CK-MB）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力,取大鼠左心室制备匀浆后检测心肌组织超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidas,GSH-Px）活性、总抗氧化能力（total antioxygencapabilit,T-AOC）及丙二醛（malonaldehyd,MDA）含量.[结果]与CON组相比,ISO组血清CK-MB、LDH活力明显增高.与ISO组比较,20（S）-人参皂苷Rg3（5,10,20 mg/kg）可显著降低血清CK-MB、LDH活力;与CON组比较,ISO组SOD活性、GSH-Px活性及T-AOC降低,MDA含量增高;与ISO组相比,20（S）-人参皂苷Rg3（5、10、20 mg/kg）可显著提高SOD活性、GSH-Px活性及T-AOC,降低MDA含量.[结论]20（S）-人参皂苷Rg3具有抗心肌缺血作用,其作用机制与清除自由基和抗脂质过氧化有关.     

20(R)-人参皂甙Rg3对K562/ADM细胞凋亡诱导的研究

目的 :探讨抗癌药物 2 0 (R) -人参皂甙Rg3(2 0 (R) -GinsenosideRg3)对肿瘤细胞凋亡的诱导。方法 :采用人红白血病耐阿霉素 (adriamycin ,ADM)细胞株K5 6 2 /ADM细胞作为实验模型 ,用ADM作阳性对照。结果 :MTT法细胞毒实验显示 ,Rg3对K5 6 2 /ADM细胞的IC 5 0为 10 4 9± 0 30 μg/ml;流式细胞仪法测定该细胞与浓度为 1 0 μg/ml(无毒剂量 )和 5 0 μg/ml(低毒剂量 )的Rg3共同培养 4 8h的细胞凋亡率分别为 3 39± 0 2 5 %和 9 36± 0 6 1% ;电镜下 ,可见凋亡的K5 6 2 /ADM细胞及凋亡小体。结论 :Rg3具有较强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,其诱导强度与其浓度呈正相关 ,对作用时间有依赖性。     

20（R）-人参皂苷Rg 3对人乳腺癌细胞自噬作用的影响

目的：观察20(R)-人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞（MCF-7）自噬作用的影响,并探讨20(R)-人参皂苷Rg3诱导MCF-7自噬作用的最佳剂量。方法人乳腺癌细胞株分为20(R)-人参皂苷Rg3实验组及空白对照组。采用MTT法观察20(R)-人参皂苷Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并依据计算出的IC50值确定20(R)-人参皂苷Rg3的有效浓度。结果当20(R)-人参皂苷Rg3浓度在37.5～600.0mg/L时,MCF-7细胞的生长抑制率最高,并随其浓度的增加而增大,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。在荧光显微镜下观察到细胞所含自噬泡明显增多,说明20(R)-人参皂苷Rg 3可诱导乳腺癌细胞自噬。蛋白质印迹法检测结果显示：LC 3蛋白,特别是LC 3-I 的表达量与细胞自噬程度呈正相关,随着20(R)-人参皂苷Rg 3干预浓度的增大,LC3-I和LC3-I蛋白表达量亦明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论20(R)-人参皂苷Rg3能显著抑制MCF-7细胞的增殖,且呈现良好的剂量、时间依赖性;20(R)-人参皂苷Rg 3有诱导MCF-7细胞自噬作用。     

人参皂苷Rg3和PEG-PLGA-Rg3纳米微粒对人血管内皮细胞侵袭和微管形成能力的影响

目的 观察人参皂苷Rg3(Rg3)和PEG-PLGA-Rg3纳米缓释微粒(Rg3-N)在体外对人血管内皮细胞侵袭和微管形成能力的影响,并比较两者之间的差异.方法 选用EA.hy926人血管内皮细胞株,通过transwell法、tube formation法观察Rg3和Rg3-N对其侵袭和微管形成能力的影响,比较两者作用的差异,并通过实时定量PCR法、Western blot法检测E-钙黏素(E-cad)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)等相关基因和蛋白表达来探索其内在分子机制.结果 Rg3和Rg3-N处理可使EA.hy926细胞的侵袭能力和微管形成能力显著下降(P ＜0.05);Rg3和Rg3-N处理后VEGF的蛋白和基因表达未受明显影响,MMP-9和E-cad的表达显著降低,各组均未检测到HIF-1α蛋白的表达.结论 Rg3和Rg3-N可抑制内皮细胞的侵袭能力和微管形成能力,这些作用可能是通过抑制E-cad和MMP-9的表达来实现的;PEG-PLGA纳米载体包埋Rg3能提高其在体外抗EA.hy926细胞侵袭和微管形成的能力.     

HPLC法测定西洋参茎叶总皂苷降解物中20(S)-人参皂苷Rg3的含量

西洋参 Panax quinquefolium L.为五加科人参属植物 ,根部入药。 1 998年尹建元等从野山参茎叶皂苷中首次分离得到人参皂苷 Rg3 [1] 。 2 0 0 2年孟勤等从西洋参叶中首次分离得到人参皂苷 Rg3 [2 ] 。人参皂苷 Rg3 具有明显抑制乙酰胆碱刺激牛肾上腺素嗜铬细胞分泌儿茶酚胺的作用 [3 ] ,并且人参皂苷Rg3 毒性小 ,生物活性强 ,是很具有开发价值的天然活性成分 ,但人参皂苷 Rg3 在自然界存在甚少。为了获得大量人参皂苷 Rg3 ,我们采用西洋参茎叶提纯总皂苷并制备二醇组皂苷[4] ,再将二醇组皂苷进行降解制备人参皂苷 Rg3 。本实验采用 HPL…     

超高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量

目的建立超高效液相色谱（UPLC）法测定三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量。方法采用ACQUITY BEH C18（2.1 mm×50 mm,1.7μm）色谱柱;流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速为0.4 mL·min^-1;检测波长为203 nm;柱温为35℃;进样体积为2μL。结果三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1分别在0.116 8～1.168μg、0.123 6～1.236μg、0.030 0～0.300μg范围内与相应峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率分别为100.1%、99.3%、99.9%,RSD值分别为0.4%、0.6%、1.0%（n=6）。结论较之HPLC法,UPLC法在不影响分离效果的情况下可大大提高三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的分析速度,改善分析效果;同时可减少溶剂的消耗。UPLC法可作为替代传统HPLC法的一种更为方便、快捷、可靠的方法。     

人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用

目的：探讨人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导的雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用,阐明人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3对生殖功能保护作用的相关机制,为其深入开发提供实验依据。方法：28只清洁级雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组（400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg1+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg3+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1 DBP）和联合组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1DBP）,每组7只。DBP溶于玉米油于每天上午灌胃给药,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3溶于生理盐水于每天下午皮下注射给药,每天各给药1次,连续给药35 d。采用WLJY-9000型精子质量检测系统检测各组小鼠的精子密度、精子活力和总畸形率,HE染色观察小鼠睾丸组织病理形态表现,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠血清中睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）水平,采用免疫荧光法检测睾丸组织缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达水平。结果：与模型组比较,联合组小鼠睾丸脏器系数明显升高（P<0.05）,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠精子密度和精子活力明显升高（P<0.01）;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠血清中T和LH水平明显升高（P<0.01）,FSH水平明显降低（P<0.01）,小鼠睾丸组织中Cx43蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。HE染色,模型组小鼠睾丸组织生精上皮较薄,管腔中生精细胞严重脱落;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组和人参皂苷Rg3+DBP组小鼠睾丸组织生精上皮变厚,管腔中脱落细胞较少;联合组小鼠睾丸组织生精上皮结构完整,各级生精细胞排列规则,腔内精子丰富。析因分析,人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3可致小鼠精子活力（F=6.704,P=0.016）、血清中T水平（F=4.912,P=0.036）和睾丸组织中Cx43蛋白表达水平（F=6.937,P=0.018）升高。结论：人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3单独使用及人参皂苷Rg1与人参皂苷Rg3联合使用,可提高精子密度和精子活力,使小鼠血清中T和LH水平升高,FSH水平降低,减轻小鼠生殖功能损伤,其作用机制可能与上调Cx43表达水平发挥生精保护作用有关,可抑制DBP所致的生殖功能损伤,且人参皂苷Rg1与Rg3联合使用表现为协同作用。     

20(R)-人参皂甙Rg3抗肿瘤作用机制的研究进展

人参皂甙Rg3为近年从人参(ginseng)根的浸出液中分离出的一种有效成分,其具有抑制肿瘤细胞转移的作用[1]。20(R)人参皂甙Rg3是日本学者北川勋于1980年首先制备出,并确定其分子式的[2]。20(R)人参皂甙Rg3是从红参(栽培人参经晒干或烘干再蒸制而成)中微量提取的,其提取率仅为0.00     

尿酸对人脐静脉内皮细胞增殖及PAI-1分泌的影响

目的探讨尿酸（UA）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖及纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）分泌的影响,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法用MTT比色法观察不同浓度UA（0、2、4、8、16mg／dL）作用24h对HUVECs增殖的影响;用ELISA方法评价不同浓度UA（0、2、4、8、16mg／dL）作用HUVECs 24h及8mg／da UA作用HUVECs 1、3、6、12、24h对细胞培养液中PAI-1的影响。结果UA呈剂量依赖性抑制内皮细胞增殖,8、16mg／dL UA组与对照组（0mg／dLUA）比较均有统计学意义（P〈0．01）。UA诱导HUVECs分泌PAI-1呈浓度依赖性增加,8、16mg／dL UA组与对照组比较均有统计学意义（P〈0．01）;UA诱导HUVECs分泌PAI-1亦呈时间依赖性,与1h比较,3、6、12、24h均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论UA抑制HUVECs增殖,诱导HUVECs分泌PAI-1,这可能与高尿酸血症致动脉粥样硬化作用机制有关。     

黄芪注射液对烟碱损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

观察黄芪注射液对烟碱损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及分子机制.方法 MTT法检测烟碱、黄芪对HUVEC细胞生长的影响,硝酸还原酶法检测总NO水平、化学比色法检测HUVEC细胞总NOS水平、酶联免疫法检测ET-1的水平. 结果烟碱作用后的HUVEC细胞总NO水平和总NOS水平均降低显著(P＜0.01),而...     

Effects of QDTMT on Anoxic Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Objective To find the protective mechanisms of Qidantongmai tablet （QDTMT） to anoxic vascular endothelial cells. Methods Cells were got from infant umbilical cord for primary culture, then they were identified by morphologic characteristics. The prepared serum of QDTMT were added to passage HUVEC. According to different treatment factors, endothelial ceils were divided into three groups： normoxic control, hypoxia control and QDTMT group. The proliferation of HUVEC was observed in MTT. The apoptosis rate of HUVECs was observed in FCM assay. The change of cell ultrastructure was also investigated with transmission electron microscope. Using immunofluorescence microscope, the cellular distribution of VEGFR2 was examined in hypoxic HUVECs. Results There were the characteristic factor VⅢ positive signal in cultured HUVECs. The MTT showed that QDTMT promoted the proliferation of HUVEC in hypoxic condition, （P〈0.05）. The FCM assay showed that the apoptosis rate of hypoxic HUVECs was higher than that of normoxic control, but the apoptosis rate was higher in normal saline group than that of QDTMT group （P〈0.05）. It was found that the early endosome structure in QDTMT group. The VEGFR2 expression level of HUVECs was higher in QDTMT group than that of normal saline group. Conclusion In hypoxia condition, improving the expression of VEGFR2 may be one of the endothelial protective effects of QDTMT.     

20(S)-人参皂苷Rg3抑制肿瘤生长的作用

目的：观察20(S)-人参皂苷Rg3的抗肿瘤生长的作用并探讨其机制。方法：通过B16黑色素瘤实体瘤模型、MTT法观察Rg3对B16黑色素瘤生长的作用,采用新生血 管计数实验、流式细胞术检测Rg3对肿瘤组织血管生成及细胞周期的影响。结果：实体瘤模型中,不同浓度Rg3各组瘤重明显低于对照组（P<0.01）,且Rg3组肿瘤周围的血管数也明显少于对照组（P<0.01）。体外实验中,MTT法见Rg3抑制B16黑色素细胞的生长,其IC₅₀为（7.76±0.46）mg·L^-1,并且Rg3可阻滞B16黑色素瘤细胞于G0/G1和S期,使G₂/M期细胞数明显减少。 结论：Rg3抑制B16黑色素瘤的生长,其机制可能是通过抑制肿瘤内血管生成及阻滞肿瘤细胞进入分裂期来发挥作用的。     

ox-HDL_3对人脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的:探讨氧化高密度脂蛋白3(ox-HDL3)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤作用。方法:体外培养HU-VECs与不同浓度(50~200mg/L)ox-HDL3共孵育,用普通光镜和荧光显微镜分别观察HUVECs形态及核形态的变化,用噻唑兰(MTT)比色法检测细胞存活状况。结果:ox-HDL3使内皮细胞数目减少,形态改变;Hoechst 33258染色后可见大量的细胞核浓缩呈高亮度蓝色荧光的凋亡细胞;MTT结果显示,细胞存活率下降,且呈剂量依赖性。结论:ox-HDL3可导致内皮细胞受损,从而促进动脉粥样硬化的发生发展。     

梓葛冻干粉针剂对人脐静脉内皮细胞体外缺血再灌注模型损伤的保护作用

目的:研究中药单体组方梓葛冻干粉针剂对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外缺血再灌注模型损伤的保护作用。方法:体外培养HUVECs,采用氧糖剥夺(Krebs液)方法建立缺氧-复氧模型以模拟体内缺血再灌注损伤。分为正常组、模型组、尼莫地平组、梓葛低、中、高剂量组,复氧时正常组及模型组给予生理盐水,余组给予相应的药物干预后,测定细胞活力、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)释放量;分析细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果:与正常组相比,模型组A值、SOD活性显著性降低(P<0.05);MDA和NO含量以及LDH释放量均显著性升高(P<0.05),Caspase-3和Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著下降,Bcl-2/Bax显著降低(P<0.01)。与模型组比较,梓葛低剂量组A值显著升高(P<0.05);梓葛低、中剂量组MDA和LDH含量显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01);梓葛低剂量组NO含量显著降低(P<0.05);梓葛冻干粉针剂的各剂量组SOD活性均显著提高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2/Bax均显著提高(P<0.05,P<0.01);梓葛中、高剂量组Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:梓葛冻干粉针剂可显著拮抗缺氧-复氧对人脐静脉内皮细胞的损伤,其机制与抑制细胞自由基的产生、提高抗氧化能力及调节凋亡相关蛋白表达密切相关。     

人脐静脉内皮细胞的研究和应用

血管内皮细胞在人体多种生理和病理过程中发挥重要作用,一直以来都是研究的热点。其中使用最广泛的当属人脐静脉内皮细胞,然而就其各种亚系细胞有何特点和优劣,国内尚未见报道。现通过总结原代人脐静脉内皮细胞、延长寿命的脐静脉内皮细胞系、永生化的脐静脉内皮细胞系等在医学研究领域的应用和进展,对不同种类之间优势和局限性进行比较,从而更好地指导实际运用。     

人脐静脉内皮细胞的培养与鉴定

目的研究人脐静脉内皮细胞的体外培养方法,并进行细胞鉴定。方法胰蛋白酶灌流消化法收集人脐静脉内皮细胞,加入DMEM/F12混合培养基,37℃5%CO2培养箱中培养,观察细胞形态及生长状况,近融合时消化传代培养。采用形态学观察和CD34免疫组化法进行细胞鉴定。结果原代培养的人脐静脉内皮细胞约于24h完全贴壁,4~5d后融合成单层铺路石样结构。CD34染色证实培养的细胞是人脐静脉内皮细胞。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得大量连续传代扩增的人脐静脉内皮细胞。     

平阳霉素对体外培养的脐静脉内皮细胞损伤的研究

目的：在体外研究平阳霉素（ＰＹＭ）对人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的作用。方法：在体外培养的ＨＵＶＥＣ中加入不同浓度的ＰＹＭ，培养０．５ｈ及１ｈ后取贴壁细胞及培养液进行研究。结果：⑴作用１ｈ后，２５μｇ·ｍｌ１以上浓度组均可见细胞多数收缩，随浓度增高，细胞脱落增多。⑵随药物浓度、作用时间增加，培养液中ＬＤＨ活性及细胞杀伤率明显升高。结论：ＰＹＭ对ＨＵＶＥＣ损伤具有剂量和时间依赖性。防止局部注射药物流失可能是治疗海绵状血管瘤的关键。