非小细胞肺癌pl6/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况,探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与ｐ１６基因紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点,对１７例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析,用甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ, ＭＳＰ）检测 ｐｌ６基因启动子区 ＣｐＧ岛甲基化状况,用免疫组织化学法检测Ｐ１６蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明,在１３例Ｄ９Ｓ１７４８位点存在多态性的肿瘤ＤＮＡ中有 ９例（６９ ．２％）发生了杂合性缺失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ, ＬＯＨ）。 ＭＳＰ的结果显示,有 ７０． ６％（１２／１７）的肿瘤组织存在ｐ１６启动子区的异常高甲基化。在本研究中,８２．４％（１４／１７）的肿瘤组织可以检测出一种或两种ｐ１６基因的异常改变。对此１７例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示,有 １３例 Ｐ１６蛋白表达阴性,其中 ９２ ３％（１２／１３）存在一种或两种ｐ１６基因的异常改变。免疫组化结果与ｐ１６基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因,ｐ１６在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明,ｐ１６基因失表达是非小细胞肺癌     

非小细胞肺癌p16基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ｐ１６基因突变的情况,本研究应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织中ｐ１６基因外显子２的突变情况,现将结果报告如下。１　材料与方法２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织及同一病例非肿瘤肺组织均为住院病例手术切除标本,并经病理证实。按常规方法提取ＤＮＡ。ＰＣＲ反应在ＰＥ９６００热循环仪中进行,扩增ｐ１６基因第２外显子,引物序列：　　ＰＳ１：５′－ＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣ－３′ＰＳ２：５′－ＴＣＴＧＡＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧ－３′循…     

原发性非小细胞肺癌的P~(16)基因变异

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术，对２７例原发性非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的癌组织标本进行了Ｐ１６基因外显子２的缺失和突变的检测。结果发现６例基因缺失和３例基因突变，且Ｐ１６基因的变异多发生在ＮＳＣＬＣ的晚期。结论Ｐ１６基因的变异在ＮＳＣＬＣ的形成和发展中起重要作用。     

原发性非小细胞肺癌的P^16基因变异

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术，对２７例原发性非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的癌组织标本进行了Ｐ＾１６基因外显子２的缺失和突变的检测，结果发现６例基因缺失和３例基因突变，且Ｐ＾１６基因的变异多发生在ＮＳＣＬＣ的晚期。结论Ｐ＾１６基因的变异在ＮＳＣＬＣ的形成和发展中起重要作用。     

白血病中肿瘤抑制基因p16的缺失和突变研究

目的探讨肿瘤抑制基因ｐ１６在几种类型白血病中的改变及其频率。方法对７７例原发性白血病及非霍奇金淋巴瘤标本分别采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，ＰＣＲ┐ＳＳＣＰ的方法检测缺失及点突变。结果Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交发现ｐ１６基因异常共１１例，其中纯合缺失７例，异常重组片段４例，ＳＳ┐ＣＰ发现ｐ１６第三外显子异常泳动带６例，是否为突变有待测序证实。结论ｐ１６基因改变主要集中在急性淋巴细胞性白血病，占４７．７％（９／１９），提示这一肿瘤抑制基因在淋巴细胞发生恶性变的机制中起一定作用     

中国人肺癌p16基因失活的研究

目的：分析研究中国人肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况，探讨该基因在肺癌发生、发展中的作用。方法：对２６例临床切除的原发性肺癌标本分别用甲基化特异性ＰＣＲ（ＭＳＰ）以及限制性内切酶－ＰＣＲ法检测了ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因５’启动子区及第一外显子区ＣｐＧ岛甲基化的情况，选取与ｐ１６紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点进行微卫星不稳定性分析，同时对其中１７例病例的肿瘤及癌旁组织标本用双色ＦＩＳＨ分析ｐ１６基因丢失情况，并用免疫组织化学法检测了ｐ１６蛋白表达。结果：用ＭＳＰ检测到５０％（１３／２６）的标本存…     

P16基因及其蛋白异常表达与肺腺癌病期及转移的关系

目的 探讨ｐ１６基因及其蛋白异常表达与肺腺癌病期及转移的关系。方法 肺癌手术标本采用免疫组化ＡＢＣ法分析ｐ１６蛋白的表达,其结果与ｐ１６基因第２外显子多聚酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结果进行对比。胸水中肺腺癌细胞采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析。结果（１）７４例肺腺癌和７６例肺鳞癌中ｐ１６蛋白阳性表达率分别率为４７．３％和４７．４％。二组间无显著差异（Ｐ〉０．０５）。但肺腺癌ｐ１６蛋白阴     

肺癌细胞p16基因蛋白,PNA和DNA三水平的同步检测研究

为了解ＭＴＳ１／ｐ１６基因在人肺癌细胞株中的表达情况。应用免疫组化、ＰＣＲ及ＰＣＲ－ＳＳＣＰ与原位杂交技术。发现肺巨细胞癌细胞Ｐ１６蛋白表达异常，但ｍＲＮＡ和ＤＮＡ水平检测正常，而肺鳞癌细胞三水平均未检测到异常改变。提示没类型的肺肿瘤细胞Ｐ１６基因表达程度不一致，且Ｐ１６基因因翻译水平的调控异常可能参与了Ｐ１６基因功能产物的表达调节。     

卵巢癌ras及p16基因异常表达的临床研究

目的：探讨ｒａｓ癌基因及ｐ１６抑癌基因与卵巢癌生物学行为的关系。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组化法及聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，检测了３６例卵巢癌，２０例卵巢良性肿瘤及１０例正常卵巢ｒａｓ、ｐ１６基因及表达状况。结果：卵巢癌及对照组ｒａｓ癌基因无突变及缺失。卵巢癌ｒａｓ ｐ１６基因阳性表达８０．６％，卵巢良性肿瘤仅有２５％弱阳性表达，正常卵巢阴性表达，Ｐ〈０．０１，Ｐ〈０．００１     

白血病p16基因失活及其临床意义

目的：探讨ｐ１６基因失活对白血病发病及预后的关系。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）与ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ测序技术,甲基化检测技术。结果：ｐ１６基因的失活形式主要以缺失和甲基化为主。ｐ１６基因缺失与急性淋巴细胞白血病的发生密切相关,甲基化则主要发生在髓系白血病。结论：ｐ１６基因结构发生变化在高危白血病患者中比较多,ｐ１６基因的检测对于疾病的治疗及判断预后有着重要的意义。     

EFFECTS OF p16INK4 GENE ON CHEMOSENSITIVITY OF HUMAN GLIOMA U251 CELL LINE TO TENIPOSIDE

P16INK4 is an important anti-oncogene discovered recently. It served as a negative cell cycle regulator which specifically binds to and inactivates cyclin-dependent kinase (CDK4). In a lot of primary tumors and tumor cell lines, p16INK4 was found lost or mutated, especially in 7l%-82% of human gliomas.[1,2] In our work, we transfected P16INK4 into human glioma U25l cell line which has homozygous deletion of P16INK4. It was found that P16INK4 could decrease the growth rate of U251, bu…     

原发性非小细胞肺癌p16基因的丢失研究

原发性非小细胞肺癌ｐ１６基因的丢失研究＊钟晓松１许凯黎１廖美琳２丁嘉安３关赛芳１周瑾目的近年文献报道在不同来源的肿瘤细胞中发现ｐ１６基因（系抑癌基因）出现高频率缺失，本文探讨非小细胞肺癌的发生与ｐ１６丢失的关系。方法收集上海地区６２例原发性非小细胞肺...     

垂体腺瘤p16抑癌基因免疫组化和原位杂交的检测及与PCNA共表达的研究

研究良性肿瘤垂体腺瘤中ｐ１６抑癌基因的改变和可能的作用机制。方法用免疫组化和原位杂交技术研究ｐ１６在垂体腺瘤中的表达及其与临床病理的关系;并结合反映细胞增殖活性的指标ＰＣＮＡ的改变,以进一步了解ｐ１６在垂体腺瘤发生、发展过程中可能作用的分子机理。结果ｐ１６基因在垂体腺瘤中不发生缺失,而是存在不同程度的表达增强,其免疫组化阳性百分率的高低与肿瘤的大小、侵袭性、复发密切相关;ｐ１６的表达与ＰＣＮＡ呈高度正相关。结论ｐ１６、ＰＣＮＡ反映垂体腺瘤细胞的增殖活性,可能对临床预后有提示意义。     

HPV16,HPV18感染及p53,p21基因突变与胃癌预后研究

目的：了解胃癌组织中ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７８的感染及Ｐ５３、Ｐ２１基因突变是否存在协同致癌作用及其与胃癌患者的预后的关系。方法：采用聚合酶链（ＰＣＲ）技术,检测６４例胃癌组织标本中人乳头瘤病毒１６、１８型感染,并采用免疫组化Ｓ－Ｐ法对胃癌Ｐ５３、Ｐ２１基因突变进行检测。结果：ＨＰＶ１６阳性率为４３．７５％,ＨＰＶ１８阴性;Ｐ５３基因突变率为４６．８７％;Ｐ２１阳性表达为５３．１２％。三项同时发生率     

p16基因对脑胶质瘤细胞作用的实验研究

目的 探索ｐ１６基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及ｐ１６基因在脑胶质瘤临床诊断、治疗中的应用前景。方法 采用脂质体转染的方法,将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞株Ｕ２５１、Ｃ６,筛选阳怀克隆。同时以空载体质粒ｐＣＤＮＡ３为对照,免疫组化检测ｐ１６基因表达,用ＭＴＴ 测定瘤细胞生长曲线及对转染的瘤细胞在裸鼠体内形成瘤块的变化进行分析。结果 转染ｐ１６基因的Ｕ２５１、Ｃ６细胞有外源ｐ１６基因的整合     

肝细胞癌p16基因甲基化及其对mRNA表达的影响

目的:探讨肝细胞癌p16基因甲基化状态和对mRNA表达的影响。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法和逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)分别检测了25例肝细胞癌及其相应的癌旁组织p16基因甲基化和mRNA表达状况。结果:25例肝细胞癌组织中检出13例甲基化,甲基化率为52.0%,相应的癌旁组织有6例甲基化,甲基化率为24.0%;25例肝细胞癌组织中,mRNA表达10例(表达率40.0%),相应的癌旁组织其mRNA表达19例(表达率76.0%),肝细胞癌组织和癌旁组织的甲基化率及mRNA表达,两者之间差异有显著性。结论:p16基因甲基化是肝细胞癌频发事件,p16基因甲基化导致mRNA表达缺失,p16基因甲基化检测可作为肝细胞癌分子诊断标志。     

肝癌细胞中定向表达p16基因的腺病毒载体的构建及其活性表达

目的：克隆AFP启动子和p16基因全长cDNA,构建在肝癌细胞中定向表达p16基因的腺病毒载体,研究p16基因表达对肝癌细胞的影响。方法：采用分子生物学技术手段,克隆AFP启动子和p16基因全长cDNA,将其插入腺病毒载体质粒中,并在293细胞中重组出携带p16基因的腺病毒AdAFP-p16。Western Blot检测p16基因在肝癌细胞中的特异性表达。细胞病变效应（CPE）观察p16基因表达对肝癌细胞生长的抑制作用。结果：AdAFP-p16能够介导p16基因在肝癌细胞中特异性表达,而对正常细胞中p16的表达没有影响;p16基因表达能够特异性抑制肝癌细胞的生长。结论：采用AFP启动子可以实现p16基因的肝癌细胞中定向而特异性表达,提高基因表达产物在肿瘤局部的浓度,有利于提高治疗效果。     

食管癌组织中p16基因突变及其产物表达的研究

目的 探讨ｐ１６基因变异及其产物表达与食管癌生物学行为的关系。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ方法检测了林县食管癌标本中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因１、２外显子的突变和缺失情况。并用免疫组化方法检测其产物表达情况。结果 在４７例标本中,３例出现了突变,其中第１外显子１例,第２外显子２例,突变率为６．４％（３／４７）。有１２例出现纯合性缺失,缺失率率２５．５％,其叫变异率为３１．９％。免疫组经染色显示,     

INK4系列抑癌基因在白血病中纯合子缺失的实验研究

目的：探讨p16基因家族失活与白血病发生、发展及预后的关系。方法：PCR检测p16、p15、p18、p19基因在白血病中纯合子缺失。结果：p16、p15基因外显子1在AL组纯合子缺失率分别为22．37％、17．05％,在ALL组为45．95％、32．43％,在ANLL组均为5．88％;在CML的慢性期均为0。p16、p15基因外显子2在AL组纯合子缺失率分别为12．5％、5．68％;在ALL组为24．32％、10．81％;在ANLL组为3．92％、1．96％;在CML和对照组二者均无缺失。p18、p19基因外显子1在AL组纯合子缺失率分别为1．14％、0;在ALL组分别为2．70％、0;在ANLL和对照组均无缺失。结论：p16、p15基因纯合子缺失在AL的发生频率较高,ALL缺失率明显高于ANLL,复发一LLL组基因失活率最高。p16、p15基因纯合子缺失是AL,尤其是ALL的发病重要因素之一。p18、p19基因在AL组中几乎未见纯合子缺失。在ALL中,p16纯合子缺失率高于p15纯合子缺失率。两个基因的纯合子缺失常伴随存在。在ANLL中,p16、p15基因的纯合子缺失均少见。