三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马神经细胞内游离钙的影响

目的 研究三七总皂甙(panax notoginseng saponins,PNS)对吗啡戒断大鼠海马神经细胞内[Ca2+]i的影响,探讨PNS缓解吗啡戒断症状的可能机制.方法 应用剂量递增法大鼠皮下注射吗啡及腹腔注射纳络酮建立吗啡躯体依赖及催促戒断模型.在给予吗啡的同时分别以PNS 100、200、400 mg/kg对大鼠灌胃,记数大鼠的体质量变化和跳跃次数以确定模型建立是否成功,采用流式细胞术测定其海马神经细胞内[Ca2+]i浓度.结果 ①PNS呈剂量依赖性抑制戒断大鼠体质量减轻和跳跃的发生,②慢性吗啡作用可以使海马神经细胞内[Ca"]i明显升高;纳络酮可迅速下词这种异常增高的[Ca2+]i;PNS则可增加纳络酮催促戒断大鼠海马神经细胞内[Ca2+]i,且呈剂量依赖性.结论 PNS可能通过调节神经细胞内[Ca2+]i,抑制吗啡依赖大鼠催促戒断症状的发生.     

三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马磷酸化CREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响

目的:研究三七总皂甙(PNS)对吗啡依赖及纳络酮催促戒断大鼠海马组织CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响,探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制. 方法:应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡建立吗啡躯体依赖模型,采用腹腔注射纳络酮建立催促戒断模型,大鼠在给予吗啡的同时,采用4种不同剂量PNS进行灌胃. 采用Western blot和电泳迁移率改变分析法(EMSA)分别观察PNS对吗啡依赖及戒断大鼠海马组织总CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响. 结果:①不同剂量PNS组、吗啡成瘾(MOR)组及纳络酮催促戒断(NAL)组大鼠海马组织总CREB蛋白表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05);②MOR组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值略高于对照组(P>0.05),NAL组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值明显高于对照组和MOR组(P<0.01);③PNS可以剂量依赖性的抑制纳络酮催促戒断所引起的pCREB蛋白表达增高和CREB/DNA结合活性的增强. 结论:PNS可以剂量依赖的抑制吗啡成瘾及纳络酮催促戒断诱导的大鼠海马组织CREB磷酸化和CREB/DNA结合活性的增强.     

针刺对吗啡戒断大鼠一氧化氮的影响

目的：观察针刺对吗啡戒断大鼠体内一氧化氮（NO）的影响。方法：复制吗啡戒断大鼠模型。采用放射免疫法测定血液和脑组织中一氧化氮合酶（NOS）和NO的含量。结果：吗啡戒断大鼠血液和脑组织NOS和NO含量增加,针刺足三里穴后血清NO和NOS下降,与对照组比较差异显。结论：针刺通过抑制NOS活力与NO生成,在改善吗啡戒断症状过程中起到良性调节作用。     

流式细胞术测定参附注射液对吗啡依赖神经细胞内Ca^2＋浓度的影响

目的 观察参附注射液对吗啡依赖人神经母细胞瘤细胞SK－N－SH胞内Ca^2 浓度的影响,探讨其戒毒作用的细胞机制。方法 建立吗啡依赖神经细胞模型,Fluo-3着染细胞后,应用流式细胞仪测定参附注射液对神经细胞内Ca^2 浓度的影响。结果 参附注射液中、高剂量组神经细胞内Ca^2 浓度显著升高,纳洛酮催促引起的细胞内Ca^2 的降低抑制。结论 参附注射液可通过调节细胞内Ca^2 浓度发挥其戒毒作用。     

影响大鼠吗啡依赖和戒断反应的实验因素

在饮水中溶入硫酸吗啡，逐日提高吗啡浓度，ＳＤ大鼠在饮入吗啡后第１０天产生明显的吗啡依赖。而同样方法饮入盐酸吗啡效果较差。每日皮下注射盐酸吗啡或硫酸吗啡１周后，纳洛酮催瘾下的戒断症状均明显强于口服饮入硫酸吗啡鼠。慢性吗啡处理大鼠戒断状态下心血管功能受麻醉、药物依赖性程度及吗啡给入途径的影响；清醒动物纳洛酮催瘾时血压升高、心率加快；戊巴比妥麻醉下血压降低、心率减慢，而且自饮吗啡成瘾鼠麻醉状态下的降压窦     

去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠戒断症状的影响

目的 观察侧脑室注射去甲肾上腺素(NE)及其α受体阻断剂酚妥拉明对吗啡成瘾大鼠戒断症状的影响方法按剂量逐日递增原则，1日3次皮下注射盐酸吗啡注射液，连续注5天，建立吗啡成瘾大鼠模型。用微量注射的方法侧脑室注入NE及酚妥拉明，观察其对戒断症状的影响。结果 侧脑室注射NE可明显地减轻吗啡成瘾大鼠的大部分戒断症状，酚妥拉明可阻断NE的抑制作用。结论 酚妥拉明可阻断NE对吗啡戒断反应的抑制作用，表明中枢神经系统的α受体参与调制吗啡成瘾大鼠戒断症状的产生。     

吗啡依赖大鼠模型的戒断行为学比较

目的　研究吗啡依赖大鼠模型建立方式和催促戒断给药剂量对戒断强度的影响及其相互关系。方法　对两种常用吗啡依赖大鼠模型在不同剂量纳洛酮催促戒断后，观察戒断体征及体重减轻来评估戒断强度。结果　两组方法均成功建立了大鼠吗啡依赖。5日法（吗啡总剂量380mg     

吗啡依赖大鼠模型的戒断行为学比较

目的　研究吗啡依赖大鼠模型建立方式和催促戒断给药剂量对戒断强度的影响及其相互关系。方法　对两种常用吗啡依赖大鼠模型在不同剂量纳洛酮催促戒断后,观察戒断体征及体重减轻来评估戒断强度。结果　两组方法均成功建立了大鼠吗啡依赖。5日法（吗啡总剂量380mg.kg－1）模型大鼠在2mg.kg－1和4mg.kg－1纳洛酮催促剂量下戒断强度无显著性差异（P＞0.05）。12日法模型（吗啡总剂量1365mg.kg－1）戒断强度随纳洛酮剂量增加显著上升（P＜0.01）,但仅在4mg.kg－1纳洛酮催促剂量时显著高于5日法模型。结论　应根据不同的实验要求,选择适当的吗啡依赖模型的建立方法,并结合实验条件判定结果。     

吗啡依赖和戒断大鼠脊髓内NA能神经元变化的研究

目的探讨慢性吗啡处理及戒断后大鼠脊髓内NA能神经元的形态变化.方法24只雄性SD大鼠随机分为吗啡依赖组、吗啡戒断组和生理盐水对照组,每组8只.依赖组大鼠以腹腔注射吗啡方法建立吗啡依赖模型.戒断组大鼠在依赖模型建立后于腹腔注射纳洛酮5 mg/kg诱导戒断症状,对照组大鼠注射等量生理盐水.注射24 h后取脑和脊髓作冰冻切片.利用免疫组化方法检测各组大鼠脊髓及LC内NA能神经元的变化.结果正常组LC内DBH阳性细胞数为(98±17),吗啡依赖组和戒断组LC内DBH阳性细胞数分别为(212±20)和(229±27),明显高于正常组(P＜0.01),但平均灰度值无明显差异.慢性吗啡处理后脊髓前角DBH阳性神经元数量增多,染色加深,后角和侧角新增加大量阳性神经元,吗啡依赖组和戒断组DBH阳性神经元增加具有极显著意义(P＜0.01).结论慢性吗啡处理和戒断引起LC和脊髓内NA能神经元增多,提示NA与吗啡依赖和戒断的形成有关,其可能是吗啡依赖及戒断的分子机制之一.     

吗啡戒断对大鼠空间学习及反应学习的影响

目的 观察在经历特定剂量吗啡前期用药后的停药状态下,大鼠空间学习和反应学习过程的改变.方法 在前期用药阶段,戒断组及持续给药组皮下注射吗啡5 mg·kg-1·d-1,连续6 d,盐水组在相同时间注射生理盐水,之后,各组进行水迷宫空间学习任务或反应学习任务.在训练期间,戒断组和盐水组每天注射盐水,持续给药组连续给药.结果 空间学习任务中,在训练第3轮,各组正确率分别为戒断组[(97.0±6.0)%]、持续给药组[(79.9±20.1)%]、盐水组[(61.0±20.6)%],戒断组显著高于盐水组( P <0.01 post-hoc LSD test),重复测试显示,戒断组空间学习显著优于盐水组( P <0.05),在空间反向任务中,戒断组表现亦显著优于盐水组.反应学习任务及反应反向学习任务中,各组间差异无显著性.结论 本研究提示在吗啡戒断状态下大鼠空间学习过程增强.     

三七总皂苷对脑缺血大鼠神经血管单元的影响

目的观察三七总皂苷对脑缺血再灌注后大鼠神经血管单元(NVU)的影响,进一步探讨三七总皂苷在脑缺血中作用特点。方法 Wistar大鼠60只随机分为对照组(20只),假手术组(20只)和三七总皂苷组(20只),每个组又按再灌注后24h、7d分为2个亚组,每个亚组大鼠10只。制作右大脑中动脉阻断(MCAO)再灌注模型后,三七总皂苷组大鼠立即腹腔注射三七总皂苷,以后每日1次直至相应时间点,对照组在相同时间内腹腔注射同体积的生理盐水。采用Longa法进行神经功能缺损评分,免疫组织化学染色法检测层黏连蛋白(Laminin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核抗原(NeuN)蛋白表达。结果再灌注后24h,三七总皂苷组和对照组大鼠神经功能缺损均比术后2h加重,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。再灌注后7d,三七总皂苷组和对照组大鼠神经功能缺损评分均有改善,但三七总皂苷组大鼠神经功能缺损评分改善比对照组明显,差异有统计学意义(P<0.05)。再灌注后24h,三七总皂苷组和对照组均有NeuN、GFAP和Laminin蛋白表达,三七总皂苷组比对照组增多,但两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。再灌注后7d,对照组NeuN、GFAP和Laminin蛋白的表达增多,三七总皂苷组明显增多,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);假手术组NeuN、GFAP和Laminin蛋白表达无明显变化。结论三七总皂苷促进脑缺血后NVU组分神经元、胶质细胞和微血管的修复,在脑梗死中具有多靶点、多方位作用特点。     

三七总皂甙对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2/Bax的影响

[目的]探讨三七总皂甙对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。[方法]复制在体大鼠原位单肺缺血再灌注模型,随机分:假手术对照组(C组)、肺缺血再灌注组(IR组)与三七总皂甙干预组(PNS组),每组10只。实验结束时取左肺组织观察细胞凋亡指数(AI)、Bcl-2和Bax的蛋白表达、肺组织湿干重比(W/D)、肺泡损伤率(IAR)及肺组织超微结构的改变。[结果]IR组肺组织Bcl-2和Bax的蛋白表达、AI、W/D及IAR均显著高于C组(均P0.01),超微结构呈明显损伤性变化。PNS组与IR组相比,肺组织Bax的蛋白表达显著下降(P0.01),Bcl-2的蛋白表达及Bcl-2/Bax的比值显著上调(均P0.01),AI、W/D及IAR也显著降低(均P0.01),超微结构损伤较轻。[结论]三七总皂甙可能通过提高Bcl-2/Bax的比值而减轻肺组织细胞凋亡,对缺血再灌注肺发挥积极的保护作用。     

肝硬化患者血小板钙离子浓度变化及机制研究

目的　探讨肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i 和甘氨脱氧胆酸 (GDCA)对血小板 [Ca2 + ] i 的影响。方法　荧光分光光度法测定肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i,以Fura2 /Am负载血小板 ,用甘氨脱氧胆酸作为处理因素 ,观察加入甘氨脱氧胆酸前后及不同浓度 ,不同时间 ,血小板 [Ca2 + ] i的变化。结果　①肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i明显高于对照组 (P <0 0 1) ,上消化道出血组明显高于无出血组 (P <0 0 1)。②静息状态血小板 [Ca2 + ] i 为 5 8 74± 5 45 (n =3 ) ,在血小板处于无Ca2 +情况下 ,加入GDCA终浓度为 10 0 μmol/L时 ,随时间的延长血小板 [Ca2 + ] i 显著增加 ;GDCA终浓度分为 0、5 0、10 0、15 0、2 0 0 μmol/L时血小板 [Ca2 + ] i 随浓度增加而显著增加。血小板在有Ca2 + 环境下 (Ca2 + 终浓度为 1 3mmol/L) ,加入GDCA后 ,血小板 [Ca2 + ] i 随作用时间和GDCA浓度的增加而显著增加。结论　肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i 显著增加。GDCA能诱导血小板外Ca2 + 内流和内贮Ca2 + 释放 ,并与GDCA浓度和作用时间有关。肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i 可能与胆汁淤积所致胆汁酸增加有关     

肺纤维化大鼠肺微血管内皮细胞[Ca2+]i变化及其机制探讨

目的:研究肺纤维化(PF)大鼠肺微血管内皮细胞内的Ca2 变化,探讨其在PF中的作用机制.方法:SD大鼠20只,随机分为PF组和对照组,每组10只动物,按5 mg/kg体质量分别气管滴注博莱霉素及等量生理盐水,取外周肺组织原代培养肺微血管内皮细胞,利用激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内[Ca2 ]i及中电导钙激活钾通道蛋白1(IKca1)表达,计算机图像分析免疫细胞化学法IKca1的表达.结果:激光扫描共聚焦显微镜检测PMVECs内[Ca2 ]i:PF组为(166.56±24.17)明显高于对照组(95.79±13.51),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).间接免疫荧光法检测IKca1表达:PF组为(679.29±206.98)明显低于对照组(958.75±188.84),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01);免疫细胞化学检测IKca1表达:PF组(169.08±14.81)明显低于对照组(189.78±13.73),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:PF时,肺微血管内皮细胞[Ca2 ]i过载,其发生机制可能与IKca活性异常有关.     

氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞内游离钙浓度的影响

目的:观察氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡和胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法:取新生2~3 d W istar大鼠T11~L6脊髓背角星形胶质细胞,原代纯化培养。将细胞随机分为:对照组(C组),谷氨酸组(G组),氯胺酮组(K组),余下3组为谷氨酸+不同浓度氯胺酮组(标记为GK1~GK3组),培养30 m in后取各细胞检测[Ca2+]i,再培养48 h检测星形胶质细胞凋亡率。结果:与C组比较,G组细胞发生了大量凋亡(P<0.01),[Ca2+]i显著升高(P<0.01);与G组比较,GK2组细胞凋亡率和[Ca2+]i明显降低(P<0.05),GK3组细胞凋亡率和[Ca2+]i显著降低(P<0.01)。结论:适量氯胺酮通过抑制细胞内钙超载显著抑制了谷氨酸诱导星形胶质细胞凋亡。     

aFGF对肺腺癌AGZY—83A细胞株TPK,PKC活性及Ca^2＋浓度的影响

目的：观察ａＦＧＦ与细胞膜上特异受体结合后引起的细胞内信号转导途径，探讨ａＦＧＦ导致细胞增殖的机理。方法：以不同浓度的ａＦＧＦ处理ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞，利用［γ－３２Ｐ］ＡＴＰ掺入外源性底物的方法测定受体的酪氨酸蛋白激酶活性（ＴＰＫ）及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性；用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为荧光指示剂测定［Ｃａ２＋］ｉ。结果：随着ａＦＧＦ浓度增加，ＴＰＫ及ＰＫＣ活性随之升高。当ａＦＧＦ浓度为１．１２μｇ／ｍｌ时ａＦＧＦ处理组的ＴＰＫ是对照组的４倍；膜ＰＫＣ活性也是对照组的４倍，胞浆ＰＫＣ活性是对照组的１．７５倍。［Ｃａ２＋］ｉ是对照组的３倍。结论：该细胞株中ａＦＧＦ受体具有ＴＰＫ活性。ＴＰＫ激活后进一步促进蛋白质和酶磷酸化，而使ＰＫＣ活性及［Ｃａ２＋］ｉ升高，即ＰＫＣ和Ｃａ２＋是ＴＰＫ的下游信号分子，进一步促进ｃ－ｆｏｓ、ｊｕｎ基因表达增加，导致细胞增殖     

不同浓度染铅大鼠海马神经元Ca_(2 )浓度与LTP关系的研究

目的 :探讨铅对大鼠海马神经元 Ca2 浓度的影响及其与长时程增强 (L TP)的关系。方法 :断乳后 Wistar大鼠自由饮用不同浓度醋酸铅溶液 (0 .0 15 % ,0 .10 % ,0 .15 % ) ,建立慢性染铅动物模型。高频刺激 (HFS)海马区诱发长时程变化后 ,分离海马神经元 ,测定 [Ca2 ]i。结果 :各染铅组大鼠海马神经元 [Ca2 ]i与对照组比较均明显增高(P <0 .0 5 ) ;血铅浓度 (3.2 8± 0 .88) μm ol/ L 以上时海马 L TP产生率下降 ,三染铅组 PS幅值均降低 ,L TP阴性组 [Ca2 ]i 明显高于 L TP阳性组 (P <0 .0 5 )。结论 :慢性染铅可使 HFS后大鼠海马神经元 [Ca2 ]i 升高 ,损害海马区 L TP的在体诱导 ;铅致 L TP发生率下降与海马神经元 [Ca2 ]i 增高有关     

一种新的同时测定大鼠心肌细胞内Ca2＋和pH的方法

目的 建立一种同时测定单细胞内Ｃａ＾２＋和ｐＨ的方法。方法 大鼠单个心室肌细胞内同时负载Ｃａ＾２＋和ｐＨ敏感性荧光指示剂ｉｎｄｏ－１和ＳＮＡＲＦ－１,用荧光显微镜法测定细胞内Ｃａ＾２＋和ｐＨ的变化,并建立了测定条件和两种指示剂的细胞内标准曲线。结果 室温下将１０μｍｏｌ／Ｌ的ｉｎｄｏ－１－ＡＭ和５μｍｏｌ／Ｌ的ＳＮＡＲＦ－１－ＡＭ载入细胞内,两种指示剂单负载和以负载时荧光强度和荧光比没有明显不同,     

三七及三七花总皂苷对斑马鱼模型促血管新生作用的研究

目的：观察三七及三七花总皂苷对斑马鱼模型促血管新生作用的影响。方法：选择正常健康转基因斑马鱼及内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（VRI）诱导血管损伤转基因斑马鱼两种模型,分别予25、50、100μg/ml的三七（根）总皂苷（PNS）和三七花总皂苷（SanqiF）干预处理,观察两者在不同浓度下对斑马鱼肠下静脉血管（SIVs）和节问血管（ISVs）生长的影响。结果：在正常健康转基因斑马鱼模型上,SanqiF比PNS拥有更为优势的促血管新生的效果,前者出现了明显的SIVs区域出芽现象,并呈浓度依赖性;在VRI损伤模型中,三七花总皂苷也展示了更为有效的保护和恢复ISVs和SIVs血管的效果。结论：在斑马鱼模型上,三七花总皂苷和三七（根）总皂苷均有促血管新生和保护血管的效果,三七花总皂苷效果更为明显。