CD47在炎症反应中的作用

CD47（IPA）是一种广泛分布于多种细胞上的跨膜蛋白,最初因可以和整合素αvβ3相互作用而被发现的,其在多种组织和细胞中起作用,包括抑制树突状细胞（DC）及中性粒细胞迁移、调节整合素、活化血小板以及促进神经轴突生长等。CD47还可以和巨噬细胞表面抑制性受体SIRPα或血小板反应素（TSP-1）相互作用而控制炎症反应。最近很多报道指出CD47通过和多种炎症／免疫细胞相互作用在炎症反应、免疫功能及一些炎性疾病中起着重要的作用,在临床治疔及一些药物研制方面也起着一定的指导作用。     

HDACi诱导B细胞淋巴瘤表达CD47分子机制研究

研究探讨B细胞淋巴瘤中组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor, HDACi)调控CD47表达及相关分子机制。课题组对小鼠B淋巴瘤细胞系A20进行不同剂量和不同时间长度的广谱HDACi (Vorinostat,SAHA)处理后,流式细胞术检测细胞表面CD47分子表达水平。随后用TRIzol法提取经SAHA处理的小鼠和人源B淋巴瘤细胞系样本中总mRNA,检测CD47转录水平。为进一步研究HDACi调控CD47表达的分子机制,课题组采用染色质免疫共沉淀法检测H3K4ac、H3K9ac和H3K27ac与CD47 DNA启动子区域的结合情况。最后在SAHA和BRD4特异性抑制剂JQ1的联合处理下,通过流式细胞术检测淋巴瘤细胞中CD47表达水平变化。研究发现CD47的蛋白质水平及mRNA水平均与SAHA处理时间和作用剂量呈正相关性。而在CD47启动子区域,H3K4、H3K9和H3K27的乙酰化水平在SAHA处理后都有显著提高。此外,SAHA和JQ1的联合使用能够显著抑制SAHA单独作用时对CD47的上调。以上结果说明SAHA通过增强CD47启动子区域所结合组蛋白的乙酰化水平,促进基因的转录表达,上调了CD47的mRNA和蛋白质水平,而抑制BRD4可以逆转SAHA对CD47的上调作用。     

移植物抗宿主病小鼠肝脏及异体CD8+ T细胞趋化因子和趋化因子受体表达分析

为探讨趋化因子及其受体介导的效应性细胞迁移在移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)发生发展中的重要作用,采用次要组织相容性抗原异配的GVHD小鼠模型,应用流式细胞分选术(FACS)、实时荧光定量聚合酶链反应等方法,分析GVHD靶器官和异体CD8+T细胞趋化因子及受体的表达。肝脏高表达干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、干扰素诱导的T细胞趋化因子(ITAC)、γ干扰素诱生单核因子(MIG)、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-1α/β等趋化因子。异体CD8+T细胞上则高表达CXC趋化因子受体(CXCR)3和CC趋化因子受体(CCR)5。随着肝脏趋化因子的表达增加,异体CD8+T细胞迁移浸润的数量也增高。因而趋化因子及异体CD8+T细胞上趋化因子受体的特异对应关系,促使大量异体CD8+T细胞迁移浸润并造成肝脏损伤。     

CD47-SIRPα在人类红细胞老化与吞噬过程中的作用

探讨CD47-SIRPα在人类红细胞衰老与吞噬过程中的作用。采用Western blot检测体外4℃和37℃保存红细胞(RBC)及老化过程中红细胞膜上CD47的表达量;用单核细胞单层分析试验(monocyte monolayer assay,MMA)观察人THP-1单核细胞系对不同年龄段红细胞和CD47抗体F(ab’)2端封闭红细胞的吞噬情况及Western blot检测THP-1细胞上SIRPα磷酸化情况。结果发现,无论是在体内老化还是体外老化过程中,红细胞膜上CD47的表达量均出现显著下降趋势,随着保存时间的延长,CD47的表达量最大可下降82.64%(4℃保存情况下);THP-1细胞对不同年龄段红细胞的吞噬情况存在差异性,更易吞噬年老红细胞,吞噬率为35.32%,对年轻红细胞的吞噬率为13.72%(n=7,P<0.02);对新鲜红细胞的吞噬率为2.22%,对CD47抗体F(ab’)2端封闭红细胞的吞噬率为31.51%(n=7,P<0.02);吞噬不同年龄段红细胞后,THP-1细胞上磷酸化SIRPα量不同,与吞噬年轻红细胞相比,吞噬年老红细胞后,磷酸化SIRPα的量下降了57.12%。表明人类红细胞的老化与吞噬过程和CD47-SIRPα相互作用存在密切关系。     

miR-34a靶向CD47对弥漫性大B细胞淋巴瘤SU-DHL-2细胞生物学行为的影响

目的：探究miR-34a靶向CD47对弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞生物学行为的影响。方法：体外培养人DLBCL细胞SU-DHL-2,随机分为对照组、miR-34a mimics阴性对照组、miR-34a mimics组,CCK-8和流式细胞术分别测定各组SU-DHL-2细胞活力、凋亡率;细胞划痕和Transwell侵袭实验检测SU-DHL-2细胞迁移、侵袭能力;qRT-PCR检测SU-DHL-2细胞miR-34a和CD47 mRNA表达;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、上皮-间质转化（EMT）相关蛋白Vimentin、E-cadherin和CD47蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-34a对CD47的靶向调节关系。结果：与对照组相比,miR-34a mimics组SU-DHL-2细胞凋亡率、miR-34a表达、E-cadherin及Bax蛋白表达明显升高（P<0.05）,细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数、CD47 mRNA表达及CD47、Vimentin、Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.05）,miR-34a mimics阴...     

整合素相关蛋白CD47在不同疾病中的研究进展

整合素相关蛋白CD47是一种介导细胞与其外部环境连接的跨膜载体,在信号传导过程中发挥重要作用。文章通过查阅国内外的相关文献报道,剖析CD47的分子结构,概括CD47的生理功能,重点就CD47在血液病、肿瘤、炎性疾病、破骨细胞及器官移植中的表达及作用进行归纳综述,同时分析CD47的临床应用及其发展方向,旨在为相关工作者提供参考。     

三氧化二砷诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡

目的探讨三氧化二砷对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法用三氧化二砷处理HO8910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解,以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果在三氧化二砷作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变,亚G1峰出现,S+G2~M期细胞所占比例组明显增高。结论三氧化二砷能诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞增殖。     

CD14介导凋亡细胞清除的研究进展

CD14是一种膜锚着糖蛋白,可作为内毒素的主要受体,激活巨噬细胞释放前炎症因子,引发炎性级联反应.另一方面,CD14作为巨噬细胞识别清除凋亡细胞的受体之一,介导凋亡细胞的非炎性清除.     

树突状细胞与趋化因子的研究进展

趋化因子可分为４个亚家族，其中Ｃ－Ｃ家族的成员最多，不同家族的趋化因子具有不同的结构及功能特点，趋化因子受体属于Ｇ蛋白偶联受体超家族，是一含有７个疏水性穿膜区段的单链受体，大多数趋化因子受体能结合同一个亚家族中多个成员，ＤＣ表达高水平ＣＣＲ１，ＣＣＲ２和ＣＣＲ５，以及ＣＸＣＲ１，ＣＸＣＲ２和ＣＸＣＲ４，这些受体通过结合相应的趋化因子诱导ＤＣ的趋化反应，在ＤＣ的迁移过程中起重要作用，ＤＣ表达的趋化因     

趋化因子在树突状细胞和T细胞迁移活化中的作用和意义

趋化因子是机体内一群能使细胞发生趋化运动的细胞因子，通过与表达于细胞表面的趋化因子受体结合而发挥其生物学作用。树突状细胞是一种专职的抗原递呈细胞。树突状细胞的成熟和功能与趋化因子和其受体介导的体内迁移密切相关，从而有效的将抗原递呈给初始T细胞并使之活化和分化，发挥其调节免疫应答的作用。     

单核／巨噬细胞表达CD40和CD40L及其在疾病中的作用

单核，巨噬细胞具有重要的生物学功能，参与机体非特异性免疫防御、特异性免疫应答和免疫调节。单核细胞表达CD40和CD40L，其在单核，巨噬细胞的功能中发挥重要的作用。CD40系统是细胞间重要的信号传导途径，通过相互作用可以促进各种细胞因子、趋化因子、金属基质蛋白酶产生、一氧化氮分泌，促使细胞逃逸凋亡、促进单核细胞分化为树突细胞等。单核细胞上异常表达CD40，CD40L在肾脏疾病、自身免疫性疾病、败血症和心血管疾病等发生发展中起重要作用。     

CD47及其配体在肿瘤免疫治疗中的研究进展

CD47是一种广泛表达的免疫调节蛋白, 通过与信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα, SIRPα)、血小板反应素-1(thrombospondin-1, TSP1)和整合素等配体结合, 调节细胞的迁移和吞噬活性, 在维持免疫系统动态平衡中发挥重要作用。CD47在各类癌症中的过度表达往往与临床不良预后相关。封闭CD47可以抑制实体瘤及血液系统恶性肿瘤的生长, 并提高常规化放疗及其他靶向治疗的疗效。文章就CD47在肿瘤增殖、侵袭及转移中的关键信号和相关靶向治疗进行综述, 阐述了CD47与其配体在肿瘤进展中的作用及CD47相关药物的研究现状。     

人卵巢癌细胞HLA分子与其相关基因表达的研究

目的：探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系。方法：采用Western blot，免疫组化和流式细胞术，检测卵巢癌细胞中HLA分子表达，以RT-PCR技术，分子卵巢癌细胞TAP，LMP和MHCⅡ类分子反式激活蛋白（CⅡTA）基因表达。结果：被检测的11株卵巢癌细胞中，HLA-I类分子异常的表达率达为45%，而HLA-I类分子表达的异常与TAP1，TAP2，LMP2和LMP74种基因表达的异常有关，卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-Ⅱ类分子的表达与CⅡTA基因的表达一致。组成性或诱导性表达CⅡTA基因的肿瘤细胞，经IFNγ作用后，其HLA-I，-Ⅱ类分子的表达增强；而诱导后仍不表达CⅡTA基因的肿瘤细胞，其HLA分子的表达无增强作用。结论：卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷，是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素。提示CⅡTA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-Ⅰ，-Ⅱ类分子的表达。     

CD4+CD25+调节性T细胞对氧化型低密度脂蛋白活化的巨噬细胞功能的影响

目的 研究CD4+CD25+调节性T细胞对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)激活的巨噬细胞功能的影响及其机制.方法 磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞,在oxLDL作用下,将巨噬细胞分别与CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞共培养48 h.采用流式细胞术检测巨噬细胞HLA-DR、CD86的表达;ELISA检测上清液MCP-1、MMP-9、TNF-α、TGF-β和IL-10细胞因子的表达;采用Griess反应测定NO生成量,RT-PCR测定iNOS表达.结果 与对照组比较,CD4+CD25+T细胞可显著抑制oxLDL激活的巨噬细胞HLA-DR及CD86的表达、减少NO生成、抑制iNOS mRNA表达和促炎细胞因子生成.结论 调节性T细胞可促使oxLDL激活的巨噬细胞由具有促炎表型的M1型向具有抗炎表型的M2型转化.     

趋化因子在树突状细胞和T细胞迁移活化中的作用和意义

趋化因子是机体内一群能使细胞发生趋化运动的细胞因子 ,通过与表达于细胞表面的趋化因子受体结合而发挥其生物学作用。树突状细胞是一种专职的抗原递呈细胞。树突状细胞的成熟和功能与趋化因子和其受体介导的体内迁移密切相关 ,从而有效的将抗原递呈给初始T细胞并使之活化和分化 ,发挥其调节免疫应答的作用。     

PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体对小鼠淋巴细胞迁移及分泌趋化因子的影响

目的探讨不同浓度的PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体对Balb/c小鼠淋巴细胞迁移及分泌趋化因子的影响,初步了解这3种刺激剂与小鼠淋巴细胞迁移功能之间的关系。方法通过研磨法分离Balb/c小鼠脾脏淋巴细胞,用不同浓度的PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体分别刺激培养淋巴细胞,收集细胞上清,用Traswell法测定细胞上清对淋巴细胞迁移率的影响;ELISA法检测细胞上清中趋化因子XCL1、CCL4、CCL5、CCL3、IL-16、IL-8及CCL20的水平。结果 PHA组各个浓度刺激下淋巴细胞的迁移率和对照组无明显差异;ConA组的刺激浓度为20μg/ml时,其对应的淋巴细胞迁移率明显高于对照组;CD3ε单抗组,其浓度分别为2.5、10μg/ml时,对应的淋巴细胞迁移率明显高于对照组。在各个刺激组中,ELISA测得的多种趋化因子水平在总体上存在明显差异。结论 ConA及CD3ε单克隆抗体分别刺激小鼠淋巴细胞后,其分泌趋化因子的功能发生了明显的改变,这些趋化因子影响着小鼠淋巴细胞的迁移功能。趋化因子XCL1、CCL4、CCL5、CCL3的水平明显高于对照,说明这几个因子在淋巴细胞迁移中起到重要的作用。根据实验结果初步推荐CD3ε单抗可以作为小鼠淋巴细胞迁移试验中的首选阳性对照,次选为ConA。     

表阿霉素和抗CD47抗体联合治疗乳腺癌的体外实验研究

目的：探索表阿霉素（Epirubicin,EPI）和抗CD47抗体对乳腺癌的联合治疗策略。方法：表阿霉素处理乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231后,流式和免疫荧光检测细胞膜表面钙网织蛋白（ Calreticulin,CRT）和CD47分子的表达情况;乳腺癌细胞经表阿霉素处理后,在含抗CD47或抗CRT抗体的培养基中与从人外周血分离出的树突状细胞（ Dendritic cells , DC）共培养,观察肿瘤细胞被DC吞噬的情况。结果：未经化疗药处理的MCF-7和MDA-MB-231细胞膜上不表达CRT,高表达CD47;表阿霉素能诱导CRT从胞内转位到细胞膜上,并降低细胞膜上的CD47的表达;联合应用表阿霉素和抗CD47抗体可明显增强DC对乳腺癌细胞的吞噬。结论：表阿霉素能诱导CRT膜转位,增强DC细胞识别;联合表阿霉素与抗CD47抗体可进一步增强DC对肿瘤细胞的清除。 CRT的膜转位和CD47分子可能共同介导DC对乳腺癌细胞的吞噬。本研究可为乳腺癌化疗和CD47抗体的联合治疗提供新的实验依据。