活血益气药对异丙肾上腺素引起大鼠心肌肥厚的保护作用

目的：观察活血益气药对异丙肾上腺素（isoprotereno,Iso）致大鼠心肌肥厚的抑制作用。方法：腹腔注射Iso,建立大鼠心肌肥厚模型。药物干预4周后,测量大鼠左心室重量指数（LVMI）,ELISA法检测大鼠心肌组织中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量。结果：与模型组比较,活血益气药和通心络能降低大鼠LVMI,抑制心肌组织中AngⅡ和TNF-α的产生。结论：活血益气药对Iso引起的大鼠心肌肥厚具有一定的改善作用。     

沉默信息调节因子1小干扰RNA诱导前列腺癌细胞PC3细胞凋亡

摘要:目的　观察沉默信息调节因子1（SIRT1）小干扰RNA（siRNA）对前列腺癌细胞PC3细胞生长增殖、DNA合成、细胞凋亡和Bcl-2和Bax蛋白的表达变化,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的可能机制。方法　体外培养PC3细胞,分空白对照组（mock组）,转染阴性对照组（scramble siRNA组）和SIRT1 siRNA转染组;Western blot检测PC3细胞中SIRT1的干涉效能;MTT法测定PC3细胞的增殖率;BrdU掺入法测定DNA合成;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测PC3细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果　与对照组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1蛋白表达降低（P＜0.01）,PC3细胞的增殖和DNA合成明显受抑制（P＜0.01）,细胞凋亡比例增加（P＜0.01）,Bcl-2蛋白表达减少,Bax的表达增加。结论　下调SIRT1的表达抑制细胞增殖和DNA合成,诱导前列腺癌PC3细胞发生凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2和Bax的蛋白表达相关。     

MCHR1基因沉默对3T3-L1细胞诱导分化的影响

摘要:目的　运用RNA干扰技术沉默黑色素浓集激素受体1（Melanin-Concentrating Hormone Receptor 1,MCHR1）基因的表达,观察其对3T3-L1细胞诱导分化的影响,为肥胖症的基因治疗提供新思路。方法　用含绿色荧光蛋白的重组载体sh-MCHR1,通过脂质体法转染3T3-L1细胞。细胞诱导分化的同时用黑色素浓集激素（Melanin-Concentrating Hormone,MCH）干预,并在不同时点对脂滴进行油红O染色。采用RT-PCR以及Western blot分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ,PPAR γ）、CCAAT/增强子结合蛋白-α（CCAAT/ Enhancer-Binding Protein α,C/EBPα）和脂肪酸结合蛋白2（adipocyte protein 2,ap2）mRNA和蛋白的表达。结果　重组载体sh-MCHR1成功转染;与阴性转染组相比,sh-MCHR1转染组d 10后,油红O 染液相对OD510值显著下降（P＜0.05）;PPARγ、C/EBPα和ap2 mRNA的表达量分别在d 6、d 8和d 8后显著下降（P＜0.05）;3者蛋白的表达量均在d 8后显著下降（P＜0.05）。结论　shRNA沉默MCHR1基因可减缓3T3-L1细胞诱导分化,其可能通过抑制PPARγ、C/EBPα和ap2的表达而实现。     

重组腺病毒Ad-EGFP-mdr-1转染大鼠骨髓细胞模型的构建

目的 构建转染多药耐药基因-1 （multidrug resistance gene-1,mdr-1）的骨髓细胞.方法 将重组腺病毒Ad-EGFP-mdr-1转染大鼠骨髓细胞.RT-PCR法和Western blot法检测mdr-1 mRNA及蛋白的表达水平 柔红霉素排出试验检测转染mdr-1基因后的骨髓细胞有无功能表达.结果 骨髓细胞病毒转染率为30.14%,存活率为89.25%,转染后骨髓细胞mdr-1的mRNA及蛋白质水平都存在功能性表达,导入的mdr-1表达产物P-gp有药物外排泵功能.结论 转染mdr-1的大鼠骨髓细胞模型的成功构建,为进一步研究肿瘤的多药耐药提供实验基础.     

安立生坦对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化保护作用及机制研究

目的观察安立生坦对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化保护作用及机制。方法将24只健康成年雄性wistar大鼠随机分为对照组、模型组以及安立生坦组各8只,对照组予以背部注射生理盐水+胃灌生理盐水,模型组予以背部皮下注射异丙肾上腺素+胃灌生理盐水,安立生坦组予以背部皮下注射异丙肾上腺素+胃灌安立生坦,3组大鼠均每天进行一次,连续处理4周后处死大鼠,比较3组大鼠心肌组织结构、心功能及细胞因子水平及TGF-β1/Smad信号传导通路表达情况。结果模型组大鼠LvIDd和LvIDs较对照组大鼠明显增加,FS和EF较对照组明显降低,而安立生坦组大鼠LvIDd、LvIDs较对照组明显有所升高(P<0.05)。模型组大鼠血AngⅡ、TGF-β1、ET-1、Hyp水平及心肌组织内Hyp含量均显著高于对照组和安立生坦组(P<0.05),而安立生坦组血AngⅡ、TGF-β1、ET-1、Hyp水平及心肌组织内Hyp含量较对照组稍高,但比较差异间均无统计学意义(P>0.05)。与对照组大鼠比较,模型组大鼠TGF-β1和Smad2表达水平明显上升,而Smad7表达水平明显下降,与模型组大鼠相比较,安立生坦组大鼠TGF-β1和Smad2表达水平明显下降,但Smad7表达水平明显上升(P<0.05),而安立生坦组大鼠TGF-β1、Smad2和Smad表达水平与对照组大鼠比较无差异(P>0.05)。结论安立生坦可有效抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化和改善其心功能,可作为临床上抵抗心肌纤维化治疗的重大靶点,考虑原因可能为通过影响血管生成因子以及调控TGF-β1/Smad信号转导通路的表达来达到效果。     

siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:研究siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用原理及caspase途径在此过程中的作用。方法:应用流式细胞法及RT-PCR检测沉默NFBD1对人肝癌HepG2细胞凋亡及凋亡基因组表达水平的影响。MTT法检测NFBD1 siRNA对HepG2细胞的抑制作用。结果:转染48 h后,转染组与阴性对照组和空白组相比,NFBD1mRNA表达明显减弱,转染组NFBD1 mRNA较空白组相对下降74.75%;HepG2细胞组中促凋亡基因Bc1-xl表达减少,Bid及caspase-3表达量增加(P<0.05)。MTT结果显示NFBD1 siRNA能明显抑制HepG2细胞增殖,抑制率达到92.131±0.893%。流式法检测结果显示转染组细胞凋亡明显高于阴性对照组和空白组。结论:NFBD1可通过改变Bc1-xl/Bid的表达比,激活caspase-3来诱导HepG2细胞凋亡。     

沉默PLIN1基因与异丙肾上腺素对3T3-L1脂肪细胞脂解的机制探究

目的 研究沉默PLIN1基因与异丙肾上腺素(ISO)联合作用对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响及机制探讨。方法 sh-PLIN1干扰载体成功转染后,以浓度为10μM的ISO处理3T3-L1脂肪细胞。采用油红O进行脂滴染色,观察脂滴形态;采用酶学方法测定甘油三酯(TG)和甘油含量,了解细胞脂解情况;采用Western-Blot法检测脂肪细胞中围脂滴蛋白A(PLIN1A)、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)和其磷酸化蛋白(p-HSL)的表达水平;双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞中环磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)的浓度。结果 与空白组比较,ISO+sh-PLIN1组和ISO组脂滴变小,TG含量降低,甘油含量升高,有统计学意义(P<0.01)。同时,ISO+sh-PLIN1组和 sh-PLIN1组中ATGL 表达量均升高,有统计学意义(P<0.05)。ISO+sh-PLIN1转染组和ISO组中HSL、p-HSL、cAMP及 PKA 的表达量均上调(P<0.05)。结论 ISO促进脂解作用可能是cAMP/PKA通路介导,增加HSL和p-HSL的表达量来实现,而cAMP/PKA信号通路不能介导沉默PLIN1的促脂解作用。     

腺病毒介导的人CD40配体基因抑制裸鼠卵巢癌生长的实验研究

[目的]探讨重组腺病毒人CD40配体基因(Ad-hCD40L)对卵巢癌的治疗作用.[方法]建立卵巢癌裸鼠动物模型,检测腺病毒介导的人CD40配体基因对肿瘤生长的抑制作用.[结果]瘤内注射Ad-hCD40L明显抑制裸鼠卵巢癌生长,Tunel法检测和HE染色肿瘤组织石腊切片观察调亡细胞明显增多,并可见大量肿瘤细胞坏死.[结论]腺病毒介导的人CD40配体基因抑制裸鼠肿瘤生长,增强诱导肿瘤细胞调亡,为卵巢癌的基因治疗提供了新的途径.     

应用RT-PCR方法检测腺病毒介导的nm23-H1基因在A549细胞中的表达

目的:应用RT-PCR方法检测腺病毒介导的nm23-H1基因在A549细胞中的表达。方法:制备nm23-H1重组腺病毒并感染人类肺腺癌A549细胞系,用RT-PCR方法检测A549细胞内nm23-H1基因表达量的变化。结果:RT-PCR结果显示,实验组和对照组的A549细胞nm23-H1/β-actin值分别为0.82和0.51(P<0.05)。结论:重组腺病毒载体Adeno-nm23-H1成功介导了A549细胞内nm23-H1基因表达量的上调,为进一步研究nm23-H1抑制肿瘤转移分子机制及基因治疗奠定了基础。     

A族链球菌感染小鼠巨噬细胞初期大量诱生SOCS-1蛋白的机制研究

摘要:目的　本研究利用A族链球菌（GAS）感染小鼠巨噬细胞,来分析SOCS-1的表达情况,以此探索GAS进行免疫逃逸的可能机制。方法　同时培养RAW264.7巨噬细胞和C57小鼠骨髓巨噬细胞（BMDMs）,以感染复数（MOI）100∶1加入对数生长期GAS及经热灭活处理的GAS（70℃加热处理60 min）刺激RAW264.7及BMDMs巨噬细胞1 h,弃去细菌后,继续培养2,4,6,8,10 h,分别收集细胞,通过RT-PCR及Western blot 方法检测JAK/STAT通路的活化及SOCS-1的表达情况。结果　GAS感染RAW264.7及BMDMs细胞4 h后p-STAT1的水平明显高于热灭活组（P＜0.05）,6 h达到高峰,8 h后开始降低;同时,两组细胞SOCS-1基因的表达,GAS组4 h开始明显升高,6 h达到高峰,8 h开始降低;而热灭活GAS组SOCS-1基因在感染后6 h后开始升高,且升高的幅度明显小于GAS组（P＜0.05）。SOCS-1蛋白在GAS感染后6 h可以检测到,而热灭活GAS刺激细胞10h检测不到SOCS-1的表达。结论　GAS感染小鼠初期通过快速活化JAK/STAT通路引起SOCS-1的表达,以此来逃避机体的免疫攻击。     

甘氨酸对果糖饮食诱导大鼠肠源性内毒素血症的 保护作用

摘要:目的　探讨果糖饮食致大鼠发生肠源性内毒素血症（IETM）时,肠黏膜屏障、肠型碱性磷酸酶（IAP）的变化及甘氨酸的保护机制。方法　采用10%的果糖溶液喂养大鼠复制IETM模型,同时给予甘氨酸干预。分别于2月、4月末处死动物,检测血浆内毒素（LPS）及肠组织IAP水平;H&E及Gomori染色检测肠肠黏膜屏障变化与IAP表达,分析LPS与IAP的相关性。结果　与对照组相比,模型组2月、4月血浆LPS水平明显升高（P＜0.01）,肠组织IAP表达明显降低（P＜0.01）,肠黏膜屏障发生损伤;甘氨酸干预对上述变化有明显改善作用（P＜0.05）;LPS与IAP水平负相关（rs＝0.66,P＜0.05）。结论　果糖饮食致大鼠肠黏膜屏障损伤是发生IETM的原因之一;甘氨酸通过促进肠IAP表达,减轻肠黏膜屏障损伤可明显改善IETM。     

人参皂苷对肿瘤坏死因子-致心肌肥大抑制作用

目的 探讨人参皂苷Rg1对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的乳鼠心肌细胞肥大保护作用及机制。方法 以原代培养乳鼠心肌细胞为模型,应用TNF-α 100 μg/L诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度人参皂苷Rg1对心肌肥大影响;用Lowry法测定心肌细胞蛋白含量,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测心肌细胞心房钠尿肽（ANP）和 Toll 样受体4（TLR4）mRNA表达,Western blot法检测心肌细胞 TLR4 和抑制蛋白-κBα（IκBα）蛋白含量。结果 与对照组比较,模型组细胞蛋白含量、ANP、TLR4 mRNA 和蛋白表达均增加（P<0.01）,IκBα 蛋白表达减少（P<0.01）;与模型组比较,30 μmol/L人参皂苷心肌细胞蛋白含量[（19.76±1.09）μg]、ANP mRNA 表达（0.609±0.001）、TLR4 mRNA含量（0.899±0.001）和TLR4蛋白含量（0.46±0.03）表达均降低（P<0.05）;IκBα 蛋白含量（0.70±0.09）升高（P<0.05）;人参皂苷Rg1能有效抑制 TNF-α 诱导的心肌肥大。结论 人参皂苷Rg1对TNF-α诱导的乳鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与TLR4/核转录因子-kB（NF-kB）信号通路有关。     

TIEGsiRNA对AGEs介导肾小管上皮细胞PAI-1表达的影响

目的观察TIEG基因沉默对AGEs介导肾小管上皮细胞PAI-1表达的影响。方法以pshRNA-copGFP-lentivector作为载体,构建含有TIEG基因的慢病毒载体psiRNA-TIEG,转染至正常大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E),然后给予AGEs刺激24 h和48 h,采用Western blot方法测定PAI-1蛋白的表达水平。结果 AGEs以时间依赖方式上调NRK52E细胞TIEG mRNA和PAI-1蛋白表达。TGF-β1中和抗体可有效降低AGEs刺激NRK52E细胞48 h后PAI-1的表达水平(1.150±0.089vs0.707±0.015,P<0.05)。TIEGsiRNA转染后可显著下调AGEs刺激NRK52E细胞48 h后TIEG mRNA表达水平(0.852±0.019vs0.448±0.028,P<0.01),及PAI-1蛋白表达水平(0.396±0.042vs0.245±0.063,P<0.05)。结论 TIEG基因沉默能有效抑制AGEs诱导NRK52E细胞PAI-1的表达。     

1-溴丙烷对两种雄性大鼠肝脏毒性的研究

目的研究1-溴丙烷对两种雄性大鼠的肝脏毒性及谷胱甘肽S-转移酶(GST)在肝脏解毒代谢中的作用。方法将18只Fischer344大鼠和18只Wistar大鼠分别随机分为两组,一组给予新鲜空气,一组给予1000ppm1-溴丙烷,每天8h,连续暴露4周。通过血浆的生化指标和病理切片对肝脏的功能和形态进行了评价。利用化学比色法和实时定量PCR法对肝脏中的GST的活力和基因表达水平进行测量。结果1-溴丙烷暴露可引起两种大鼠体重的下降及肝脏重量的上升;病理发现肝脏中央静脉周围的肝细胞出现空泡样改变,血浆中CK、ALT和TBIL和DBIL等指标上升明显;两种大鼠肝脏细胞胞浆的GST活力增强,Fischer344大鼠微粒体GST的活力也增强;肝脏组织的GSTmRNA表达水平升高。结论1-溴丙烷暴露对两种雄性大鼠具有肝脏毒性,GST在1-溴丙烷的肝脏解毒代谢中可能起到较重要作用。     

输注活化Th1细胞诱发孕鼠子痫前期的实验研究

目的:探讨给孕鼠输注活化Th1细胞建立孕鼠子痫前期模型的可行性及其机制。方法:孕鼠组及未孕鼠组共接受2次Th1细胞输注。孕期检测血压以及尿蛋白,观察肾脏改变,流式细胞术分析CFSE标记Th1细胞的分布情况,并检测子宫细胞Th1/Th2细胞因子表达变化。结果:①在输注Th1细胞后孕鼠组与对照组相比其收缩压显著增高,差异有统计学意义(P<0.01);②妊娠第14天检测孕鼠24 h尿蛋白定量为(1.54±0.56)g/L,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);③HE和PAS染色显示,输入Th1细胞孕鼠组出现肾脏病变;④CFSE标记Th1细胞在血液、蜕膜及肾脏中均有分布,其荧光强度值以蜕膜中最高;⑤输注Th1细胞的孕鼠子宫淋巴细胞TNF-α以及IL-12的表达率较输注PBS的孕鼠显著提高,差异有统计学意义(P<0.05)。此外子痫前期小鼠子宫淋巴细胞IL-4和IL-10的表达率显著提高。结论:输注活化的Th1类细胞可以诱导孕鼠特异性的产生典型的子痫前期样症状,通过这一方法建立的小鼠模型是合适的子痫前期模型。其发生机制与母胎界面Th1/Th2细胞因子平衡紊乱有关。     

WIF-1、SFRP-1在环磷酰胺致大鼠神经管畸形中神经上皮细胞表达的变化

目的:通过检测WIF-1和SFRP-1在环磷酰胺(CP)致大鼠神经管畸形(NTDs)中神经上皮细胞的表达及表达的变化,研究CP对胎鼠神经上皮细胞Wnt信号通路的影响,探讨NTDs发生的分子机制,为NTDs的预防、基因治疗提供理论依据。方法:将SD孕鼠随机分为实验组和对照组,分别于妊娠13天8～9时一次性腹腔注射CP(15 mg/kg)和等量的生理盐水。分别于给药后8、12、24 h处死孕鼠,剖腹取出胎鼠,用10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋、连续切片。应用免疫组织化学方法检测WIF-1与SFRP-1在神经管神经上皮细胞的表达及其变化。结果:①WIF-1免疫组化显示,给药后8 h,实验组WIF-1阳性细胞分布与对照组相似(P>0.05);给药后12 h,实验组WIF-1阳性表达增强(P<0.05);给药后24 h,实验组与对照组相比,神经管背侧、顶板区WIF-1阳性表达明显增强(P<0.01)。②SFRP-1免疫组化显示,SFRP-1在实验组和对照组各个时间段均有阳性表达,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:①WIF-1在神经上皮细胞表达增强与CP致NTDs密切相关。②SFRP-1在神经上皮细胞表达的改变未发现与CP致NTDs有相关性。③Wnt信号通路异常与CP致NTDs密切相关。