miR-199a-3p调控c-kit/ERK通路在电针关元穴治疗神经源性尿潴留大鼠的作用机制

目的：探讨miR-199a-3p调控c-kit/细胞外信号调节激酶（ERK）通路在电针关元穴治疗神经源性尿潴留中的作用机制。方法: 采用改良脊髓横断法建立神经源性尿潴留大鼠模型60只，通过随机数表法平均分为5组：模型组、电针组、miR-199a-3p antagomir（抑制剂）组、miR-199a-3p antagomir阴性对照组、电针+miR-199a-3p antagomir组，另选取SD大鼠12只，设为假手术组，使用药物分组干预处理后，检测大鼠尿动力学，比较各组膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力；肌条实验检测大鼠逼尿肌兴奋性，比较各组肌条自发性收缩频率；HE染色检测各组大鼠膀胱组织病理形态改变；试剂盒测定各组大鼠血清炎性细胞因子环氧化酶（COX-2）、白细胞介素（IL-18）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）水平；实时荧光定量（qRT-PCR）实验检测各组大鼠膀胱组织miR-199a-3p与c-kit mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法检测各组大鼠膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白表达水平。结果：与假手术组相比，模型组大鼠膀胱组织呈现严重病理损伤改变，膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力、血清COX-2、IL-18及iNOS水平显著升高（P＜0.05），肌条自发性收缩频率、膀胱组织miR-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白p-ERK/ERK、c-kit表达水平显著降低（P＜0.05）。与模型组、电针+miR-199a-3p antagomir组分别相比，电针组大鼠膀胱组织病理损伤均减轻，膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力、血清COX-2、IL-18及iNOS水平均降低（P＜0.05），肌条自发性收缩频率、膀胱组织miR-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白p-ERK/ERK、c-kit表达水平均升高（P＜0.05）；miR-199a-3p antagomir组大鼠膀胱组织病理损伤均加重，膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力、血清COX-2、IL-18及iNOS水平均升高（P＜0.05），肌条自发性收缩频率、膀胱组织miR-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白p-ERK/ERK、c-kit表达水平均降低（P＜0.05）。与模型组相比，miR-199a-3p antagomir阴性对照组大鼠各指标水平无显著差异（P＞0.05）。结论：电针关元穴可通过上调miR-199a-3p表达而抑制c-kit/ERK通路激活，减轻神经源性尿潴留大鼠膀胱组织炎症损伤，增强逼尿肌兴奋性，修复其膀胱功能，改善大鼠尿潴留症状。     

骶神经根磁刺激对神经源性膀胱大鼠膀胱尿流动力学及M3受体表达的影响

目的探讨骶神经根磁刺激对神经源性膀胱大鼠膀胱尿流动力学及M3受体表达的影响。方法60只雌性成年SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、磁刺激组,每组20只。模型组、磁刺激组采用脊髓横断切除法建立神经源性膀胱动物模型。造模成功后,磁刺激组给予磁刺激治疗1次/d,连续治疗8周。8周后,麻醉大鼠行膀胱尿流动力学测定,处死大鼠取膀胱逼尿肌组织行组织学及超微结构观察,并检测M3受体表达水平。结果磁刺激组膀胱最大容量、膀胱顺应性均高于模型组（均P＜0.05）,漏尿点压力低于模型组（P＜0.05）;而磁刺激组与正常组上述3个参数比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）。磁刺激组膀胱逼尿肌组织HE染色可见浆膜下组织中度充血、水肿,有轻度单核巨噬细胞浸润,并有少量成纤维细胞增生,但黏膜上皮细胞形态及排列较模型组接近正常;在透射电镜下可见逼尿肌细胞表面平滑,细胞间隙稍宽,排列尚均匀,胞质内线粒体结构较完整。磁刺激组大鼠膀胱逼尿肌组织中M3受体表达水平明显高于正常组、模型组（均P＜0.05）;而模型组与正常组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论骶神经根磁刺激对神经源性膀胱大鼠的膀胱功能有一定的改善作用,可能与膀胱逼尿肌组织中M3受体表达水平升高有关。     

PBOO对豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞形态结构的影响

目的探讨豚鼠膀胱流出道梗阻（PBOO）对膀胱卡哈尔间质细胞（ICC）形态结构的影响。方法建立雌性豚鼠PBOO模型。并根据尿动力学检测结果将模型分为PBOO后逼尿肌不稳定（DO）组和PBOO后逼尿肌稳定（DS）组,以假手术组作为对照,饲养4周后取膀胱组织,制成全层组织铺片和冰冻组织切片,c-kit免疫荧光染色分别观察各组膀胱肌层和黏膜下ICC的形态和分布情况。结果PBOO4周后,DO组豚鼠膀胱出现排尿频率、排尿压力的增加（n=12,P〈0.05）,并且观察到明显的储尿期膀胱不稳定收缩。对照组、DS组和DO诅豚鼠膀胱均观察到c-kit染色阳性且呈典型长梭形有突起的ICC,主要分布于平滑肌肌束间和黏膜下层;在DO组豚鼠的膀胱中c-kit染色阳性的ICC分支突起增加且互相连接呈网络状,而在对照组和DS组中ICC呈散在分布,细胞之间联系较松散。结论在PBOO所致DO豚鼠膀胱中ICC发生了形态和结构的变化,相互之间连接呈网络状,ICC的形态和结构的变化可能是逼尿肌不稳定的重要发病基础。     

逼尿肌反射亢进和逼尿肌无反射大鼠膀胱Cajal间质细胞数量变化

目的观察脊髓损伤后大鼠逼尿肌反射亢进和逼尿肌无反射膀胱Cajal间质细胞(ICC)数量变化,探讨膀胱逼尿肌功能改变和ICC的可能关系。方法40只大鼠随机分为正常组、膀胱造瘘组、逼尿肌反射亢进组和逼尿肌无反射组,每组10只。制作大鼠骶髓和骶髓上损伤模型,尿动力学检查证实膀胱出现逼尿肌反射亢进和逼尿肌无反射后,取膀胱组织行免疫组织化学染色,激光共聚焦显微镜观察ICC数量变化。结果各组膀胱ICC数量比较:正常组与膀胱造瘘组比较差异无统计学意义(P>0.05);逼尿肌反射亢进组明显高于正常组和膀胱造瘘组,差异有统计学意义(P<0.05);逼尿肌无反射组明显低于正常组和膀胱造瘘组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脊髓损伤后大鼠膀胱功能改变可能与ICC数量变化有关。     

慢性非细菌性前列腺炎大鼠膀胱ICC样细胞改变的实验研究

[目的]研究慢性前列腺炎膀胱ICC样细胞 (interstitial cells of Cajal-like cells)数量和分布变化,及其与慢性前列腺炎膀胱功能异常的关系.[方法]建立免疫性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型,免疫荧光化学法检测逼尿肌组织c-kit表达阳性细胞的分布.[结果]对照组膀胱ICC样细胞呈条状,排列有序,相互间的连接完整;模型组ICC样细胞数较正常组明显增多,荧光强度明显降低(P＜0.05),呈散点状,排列紊乱,细胞间的连接散乱中断.[结论]慢性前列腺炎膀胱功能异常可能与其ICC样细胞的数量增加及排列紊乱有关.     

牵张负荷对大鼠膀胱ICCs细胞数量及c-kit表达的影响

目的 探讨牵张负荷条件对膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)数量及c-kit蛋白表达变化的影响,阐明牵张负荷对膀胱ICCs细胞兴奋性的调控作用.方法 构建大鼠不稳定逼尿肌模型,以光镜计数及免疫组化法检测牵张负荷下逼尿肌稳定组和逼尿肌不稳定组与正常对照组膀胱ICCs细胞数量及酪氨酸激酶受体(c-kjt)在蛋白水平表达的差异.结果 逼尿肌稳定组和逼尿肌不稳定组ICCs细胞数量与c-kit表达量较正常对照组均有增高(P＜0.01),逼尿肌不稳定组较稳定组升高显著(P＜0.01).结论 牵张负荷对ICCs细胞有调控作用;ICCs细胞数量及c-kit表达增多可能是其机制之一.     

电针治疗对完全性骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠尿流动力学和脊髓组织中CyclinD1、Ngn1的影响*

目的 观察电针治疗完全性骶上脊髓损伤（SSCI）后神经源性膀胱（逼尿肌反射亢进）大鼠的效果, 探讨电针基于Wnt/β-catenin 信号通路调控脊髓组织中CyclinD1、Ngn1 mRNA 及蛋白的表达及其促进模型大 鼠排尿功能恢复的作用机制。方法 SD雌性SPF级大鼠60只,随机分为假手术组12只和模型组48只。模型组 大鼠手术致完全性SSCI,采用BBB 评分和尿流动力学对大鼠模型进行评价。术后2 周,将模型复制成功的大鼠 再次随机分为模型对照组、电针组和电针对照组,每组12只。电针组在大椎穴、次髎穴（次髎穴隔日左右更替）用 电针治疗;电针对照组亦于相同时间在大椎穴、次髎穴远脊柱侧（次髎穴用法同上）1 cm处为针刺点,进行电针治 疗。电针参数采用疏密波（疏波10 Hz/9 s,密波50 Hz/5 s）,留针20 min,强度以针刺处出现规律性抽动为宜,1 次/d,连续1周。末次电针治疗后各组大鼠行尿流动力学检测,采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学 法检测大鼠脊髓组织中Cyclin D1、Ngn1 mRNA及蛋白表达。结果 ①尿流动力学：与假手术组比较,其他3组 大鼠膀胱基础压力和膀胱最大压力升高,膀胱最大容量和膀胱顺应性降低;模型对照组和电针对照组大鼠膀胱 漏尿点压力升高（P <0.05）。与模型对照组比较,电针组大鼠膀胱基础压力、膀胱最大压力和膀胱漏尿点压力降 低,膀胱最大容量和膀胱顺应性升高（P <0.05）。与电针组比较,电针对照组大鼠膀胱基础压力、膀胱最大压力和 膀胱漏尿点压力升高,膀胱最大容量和膀胱顺应性降低（P <0.05）。②Cyclin D1 mRNA 及蛋白：与假手术组比 较,其他3 组Cyclin D1 mRNA 及蛋白表达升高（P <0.05）;与模型对照组比较,电针组Cyclin D1 mRNA 及蛋白 表达升高（P <0.05）;与电针组比较,电针对照组Cyclin D1 mRNA 及蛋白表达降低（P <0.05）。③Ngn1 蛋白：与 假手术组比较,模型对照组和电针对照组Ngn1蛋白表达降低（P <0.05）;与模型对照组比较,电针组Ngn1蛋白表 达升高（P <0.05）;与电针组比较,电针对照组Ngn1蛋白表达降低（P <0.05）。④Ngn1 mRNA：与假手术组比较, 其他3组Ngn1 mRNA表达下降（P <0.05）;与模型对照组比较,电针组Ngn1 mRNA表达升高（P <0.05）;与电针 组比较,电针对照组Ngn1 mRNA表达降低（P <0.05）。结论 电针大椎穴、次髎穴对完全性SSCI后神经源性膀 胱（逼尿肌反射亢进）大鼠尿流动力学具有明显改善作用,其作用机制可能是通过Wnt/β-catenin 信号通路调控 Cyclin D1、Ngn1 mRNA及蛋白表达,促进脊髓内源性神经干细胞的增殖和活化而实现。     

电针关元穴对脊髓损伤后尿潴留模型大鼠逼尿肌兴奋性的影响

目的 观察电针关元穴对急性脊髓损伤后尿潴留模型大鼠逼尿肌兴奋性的影响.方法 将健康成年雌性SD大鼠80只,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针关元穴治疗组,每组20只.采用重物坠击法建立急性脊髓损伤后尿潴留大鼠模型,穴位电针治疗10次,每天1次,治疗结束后行离体逼尿肌最小收缩张力和收缩频率的测定.结果 与正常组和假手术组相比,模型组逼尿肌最小收缩张力增高,收缩频率减慢(P＜0.05);正常组和假手术组比较,无明显统计学差异(P＞0.05);与模型组相比,针刺组最小收缩张力明显降低,收缩频率增加(P＜0.05).结论 电针关元穴可以降低尿潴留大鼠逼尿肌的最小收缩张力并提高其收缩频率;电针治疗神经源性尿潴留的机制可能是通过提高逼尿肌兴奋性、增加膀胱收缩能力、改善逼尿肌的收缩频率,从而到达膀胱排尿功能的重建.     

济川煎对"泻剂结肠"大鼠的治疗效果及作用机制研究

目的 了解济川煎对"泻剂结肠"大鼠的治疗效果,并探讨其作用机制。方法 于2012年9月,选取健康成年无特定病原体（SPF级）SD大鼠48只,36只经大黄酸混悬液灌胃法制作大鼠"泻剂结肠"动物模型,然后随机分为模型组、聚乙二醇组及济川煎组各12只;余未经造模处理的12只为对照组。对照组和模型组采用0.9%氯化钠溶液灌胃,聚乙二醇组采用聚乙二醇4000水溶液灌胃,济川煎组采用济川煎水煎液灌胃。检测并比较4组大鼠的粪便干湿重比、首粒黑便排出时间,以及结肠组织酪氨酸激酶受体的干细胞因子受体(c-kit)和其配体干细胞因子（SCF）的mRNA、蛋白表达水平。结果 济川煎组大鼠的粪便干湿重比低于模型组、聚乙二醇组,差异有统计学意义（P＜0.05）;而与对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。聚乙二醇组大鼠的粪便干湿重比高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;而与模型组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。济川煎组大鼠的首粒黑便排出时间长于对照组,短于模型组和聚乙二醇组,差异有统计学意义（P＜0.05）。聚乙二醇组大鼠的首粒黑便排出时间长于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;而与模型组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。济川煎组大鼠c-kit、SCF的mRNA和蛋白表达水平高于模型组、聚乙二醇组,差异有统计学意义（P＜0.05）;而与对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。聚乙二醇组大鼠c-kit、SCF的mRNA和蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;而与模型组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 济川煎可提高"泻剂结肠"大鼠的结肠动力,软化粪便,治疗效果较好,其机制可能与修复SCF/c-kit信号通路有关。     

电针“次髎”穴对逼尿肌反射亢进大鼠骶髓排尿中枢VR1表达的影响

目的：探讨电针次髎对逼尿肌反射亢进的效应及作用机理。方法：成年雌性SD大鼠44只,脊髓横断术后纳入37只,分为手术后电针组16只、手术后模型组16只、正常组（假手术组）5只,电针组于大鼠出现尿失禁后给予电针双侧次髎,20Hz连续波每日1次,每次2h,共治疗14次,模型组、正常组不治疗,3组均于首次治疗前、末次治疗结束后进行尿流动力学检测,于末次疗后用免疫组化染色法观察辣椒素受体VR1表达的情况。结果：逼尿肌反射亢进大鼠（电针组和模型组）的最大膀胱内压升高（P〈0.05）,最大膀胱顺应性降低（P〈0.05）,骶髓排尿中枢VR1表达增多（P〈0.05）。治疗后,电针组的最大膀胱内压明显降低（P〈0.05）,与正常组无显著差异（P〉0.05）;模型组的最大膀胱内压亦明显降低（P〈0.05）,但与正常组有显著差异（P〈0.05）。疗后电针组的最大膀胱顺应性明显升高（P〈0.05）,模型组的最大膀胱顺应性无明显变化（P〉0.05）。疗后电针组骶髓排尿中枢VR1表达比模型组少,比正常组多,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：电针＂次髎＂穴能抑制脊髓横断大鼠的膀胱活动过度状态,可以降低骶髓排尿中枢VR1的表达,表明C纤维活动减弱,这可能是电针＂次髎＂治疗逼尿肌反射亢进的机制之一。     

大鼠不稳定膀胱中ICCs细胞中HCN蛋白表达的变化

目的 研究HCN离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel,HCN)蛋白在膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)中的表达及在不稳定膀胱ICCs细胞中表达的变化,探讨ICCs细胞兴奋性变化与逼尿肌不稳定(detrusor instability,DI)的关系.方法 ①将30只大鼠随机分为正常对照(10例),逼尿肌稳定组(DS,n=12),逼尿肌不稳定组(DI,n=8):大鼠尿道近端结扎,建立膀胱出口梗阻(bladder outlet obstruction,BOO)模型.②对各组进行HCN和c-kit免疫荧光双标,确定HCN蛋白是否在ICCs细胞上存在及HCN表达的变化.③以Western blot法检测HCN蛋白表达量的变化.结果 ①免疫荧光双标显示,在c-kit阳性的ICCs细胞膜上,有HCN抗原的表达,c-kit阴性细胞未见HCN表达;与正常组相比,DI组、DS组HCN蛋白表达增加.②Western blot检测显示,与正常组相比,DI组、DS组的HCN表达增高,DI组增高显著(P＜0.01).结论 大鼠膀胱ICCs细胞可表达HCN通道蛋白,且DI膀胱ICCs细胞HCN通道明显增多,由此导致的ICCs细胞兴奋性增高可能在DI发生中起重要作用.     

电针对骶髓损伤后神经源性膀胱大鼠凋亡相关因子Bcl-2、Bax 的影响

目的 观察电针次髎、中极、三阴交穴对骶髓损伤后神经源性膀胱（逼尿肌无反射型）大鼠膀胱组织中B 淋巴细胞蛋白-2（bcl-2）及Bcl 相关X 蛋白（bax）表达的影响,以探讨电针治疗该病的可能机制.方法 将SD 雌性大鼠40只,随机抽取10 只为空白组,其余造模成功后随机分为模型组、电针穴位组和电针对照点组,每组10 只.术后第15 天起电针穴位组、电针对照点组分别施以每日1 次治疗,治疗7 次后取膀胱组织行Elisa 法检测bcl-2 及bax 在膀胱组织中的表达.结果 电针治疗后各组膀胱逼尿肌组织中,模型组、电针穴位组和电针对照点组bcl-2 及bax 表达均较空白组高（P〈0.01）,电针穴位组和电针对照点组bcl-2 表达较模型组升高（P〈0.01）,bax 表达较模型组降低（P〈0.01）,且电针穴位组疗效明显优于对照点组（P〈0.01）.结论 电针次髎、中极、三阴交穴可提高骶髓损伤后NB 大鼠膀胱组织中bcl-2的表达、抑制bax 的表达.电针对骶髓损伤后神经源性膀胱的治疗作用可能是通过促进bcl-2、抑制bax 的表达以部分抑制膀胱平滑肌细胞凋亡,从而保护受损膀胱逼尿肌组织.     

钩藤碱治疗膀胱过度活动的实验研究

目的:探讨钩藤碱对膀胱过度活动(overactive bladder,OAB)的治疗作用。方法:将60只SD大鼠随机分为4组,每组15只。假手术组不予任何处理;OAB组:给予手术处理,制备大鼠OAB模型;钩藤碱干预组:对OAB大鼠给予腹腔注射钩藤碱(5 ml.kg-1);生理盐水干预组:对OAB大鼠给予腹腔注射生理盐水(5 ml.kg-1)。各组分别进行尿流动力学检测和逼尿肌肌条的电生理学指标测定。结果:与OAB组和生理盐水干预组对比,钩藤碱干预组膀胱最大容量、膀胱充盈压和漏尿点压减小,收缩频率和动力指数(MI)降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:钩藤碱对OAB有治疗作用。     

阳明腑实证大鼠小肠神经-ICC网络形态学损伤和下法施治研究

目的：观察阳明腑实证大鼠小肠神经-Cajal 间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICC）-平滑肌细胞网络的形态学变化,探讨阳明腑实证胃肠运动障碍的产生机制及下法的作用机制。方法成年Wistar大鼠100只,雌雄不限,随机分成3组,对照组20只;阳明腑实证模型组40只;大承气汤治疗组40只。存活大鼠取上段小肠10．0 cm组织制作肠肌层全厚组织标本,进行c-Kit和乙酰胆碱转运体（VAChT）/一氧化氮合酶（nNOS）免疫荧光双标记染色后用于激光扫描共聚焦显微镜检测、分析。结果（1）共聚焦显微镜检测ICC网络：与对照组相比,模型组大鼠小肠ICC数量明显减少（P＜0．01）,ICC突触的数量减少,相互间的连接不连续,完整的网络样结构消失,细胞荧光强度减弱（P＜0．01）。（2）共聚焦显微镜检测肠神经-ICC网络：与对照组相比,模型组胆碱能/氮能神经数目明显减少（P＜0．01/P＜0．01）,神经网结构紊乱,彼此间的连接减少,神经网络的荧光强度减弱（ P＜0．01/P＜0．01）;ICC与肠神经纤维两者间失去紧密连接,肠神经-ICC网络的完整结构受到破坏。（3）治疗组较模型组ICC数量明显恢复（P＜0．01）,网络样结构的完整性有所恢复,与模型组比较细胞荧光强度明显增强（P＜0．01）。胆碱能神经/氮能神经纤维数目明显增加（P＜0．01）,神经网络结构再次好转,彼此间的网络连接的完整性恢复明显,神经网络的荧光强度增加（P＜0．01）,ICC与肠神经纤维间的连接接近正常,ICC-肠神经网络结构恢复明显。结论阳明腑实证大鼠小肠ICC和神经网络受到破坏。大承气汤治疗后小肠胆碱能/氮能神经和ICC数量恢复,肠神经-ICC网络结构得到改善。     

电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱最大容量和组织形态的影响

目的 通过观察电针对骶上脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后神经源性膀胱大鼠的膀胱最大容量、组织形态学的影响,了解电针治疗骶上SCI后神经源性膀胱的部分机制.方法 制作骶上SCI后神经源性膀胱大鼠模型,电针大鼠“次髎”、“中极”、“三阴交”三穴,采用尿流动力学、HE染色观察电针对骶上SCI后神经源性膀胱大鼠的膀胱最大容量、膀胱组织形态的影响.结果 膀胱最大容量检测结果显示：造模后第14天即治疗前1天模型组、针刺穴位组、针刺对照点组之间差异无统计学意义（P＞0.05）;治疗7d后,针刺穴位组、针刺对照点组高于模型组,差异有显著统计学意义（P＜0.01）;针刺穴位组、针刺对照点组治疗前后比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,模型组与7d前比较,差异有显著统计学意义（P＜0.01）.说明造模后大鼠膀胱最大容量呈下降趋势,电针治疗可明显改善膀胱最大容量使其趋于稳定.HE染色结果显示：电针可减轻膀胱组织形态病理损害程度,且针刺穴位组效果优于针刺对照点组.结论电针骶上SCI后神经源性膀胱大鼠“次髎”、“中极”、“三阴交”三穴可明显改善膀胱最大容量的稳定性,减轻膀胱组织病理损害程度,从而抑制膀胱逼尿肌亢进,恢复膀胱功能.     

老年大鼠膀胱排尿功能及平滑肌细胞表型变化

目的探讨老年大鼠膀胱排尿功能及平滑肌细胞表型变化。方法选取3、24月龄SD大鼠各8只,采用膀胱穿刺测压法行膀胱排尿功能检测,Masson染色法检测膀胱组织胶原纤维占比。采用酶消化法分离培养8周龄SD大鼠膀胱平滑肌细胞（BSMC）,构建复制性衰老细胞模型,观察细胞形态及表型变化。结果与3月龄组比较,24月龄组大鼠膀胱内残余尿量（RUV）明显升高,而排尿率（VE）、最大排尿压力（MVP）均明显降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。Masson染色可见3月龄组大鼠逼尿肌排列整齐,胶原纤维较少,而24月龄组大鼠膀胱组织中逼尿肌纤维排列紊乱、松散,胶原纤维较多;24月龄组大鼠膀胱组织胶原纤维占比明显高于3月龄组（P＜0.05）。在倒置显微镜下观察,随着细胞代数的增长,细胞从原来的细长梭形变为宽大畸形,α平滑肌肌动蛋白、肌间线蛋白表达均明显减少（均P＜0.05）,但Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达均明显增加（均P＜0.05）。结论老年大鼠存在膀胱排尿功能减退及胶原比例失衡等,衰老所致BSMC表型转化可能是其中的病理、生理机制之一。     

牵张负荷对大鼠膀胱Cajal间质细胞超微形态及c-kit基因表达影响

目的 通过研究膀胱Cajal间质细胞(Interstitial cells of cajal,ICCs)超微形态及c-kit基因水平变化,阐明牵张负荷对膀胱Cajal细胞兴奋性的调控作用.方法 结扎膀胱颈,构建大鼠膀胱出口部分梗阻致逼尿肌过度活动模型,通过扫描电镜方法观察牵张负荷条件下逼尿肌过度活动组与正常对照组膀胱ICCs细胞超微形态变化,观察牵张负荷条件下逼尿肌稳定组和逼尿肌过度活动组与正常对照组膀胱ICCs细胞酪氨酸激酶受体(c-kit)在基因水平表达差异.结果 逼尿肌过度活动组ICCs细胞形态和c-kit基因水平表达最较正常对照组有明显改变(P＜0.01).结论 牵张负荷对ICCs细胞有调控作用,可能的作用机制在于改变ICCs细胞形态及上调c-kit表达.     

2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌中膜结合型前列腺素E2合酶1的表达及意义

目的探讨2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌中膜结合型前列腺素E2合酶1（mPGES-1）的表达及意义。方法将36只雌性SD大鼠随机分成糖尿病组与对照组,每组18只。使用链脲佐菌素（STZ）建立2型糖尿病大鼠动物模型。造模成功后12周,观察并比较两组大鼠一般生理体征;在光镜下观察膀胱逼尿肌组织HE染色结果,在透射电镜下观察组织超微结构变化,采用免疫组化法检测组织中mPGES-1表达水平,并使用前列腺素E2（PGE2）酶联免疫试剂盒检测24h尿液中PGE2含量,所得结果进行组间比较。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠终末体重明显降低（P＜0.05）,终末血糖、膀胱湿重和24h尿量均明显增加（均P＜0.05）。与对照组比较,糖尿病组大鼠在光镜下可见逼尿肌肌束结构排列紊乱,肌束间隙变宽;在透射电镜下可见逼尿肌细胞间距变宽,胞质内线粒体肿胀破裂呈空泡状。糖尿病组大鼠24h尿液PGE2含量、膀胱逼尿肌组织中mPGES-1表达水平较对照组均明显下降（P＜0.05）。结论2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌组织中mPGES-1表达水平及尿液PGE2含量均明显降低,可能与糖尿病性膀胱病的进展有关。     

钙激活钾通道基因和蛋白水平在膀胱逼尿肌不稳定中的表达

目的观察膀胱逼尿肌不稳定（DI）中钙激活钾通道（BKCa）基因和蛋白水平变化,探讨BKCa在DI发生机制中的作用。方法通过膀胱出口部位梗阻法建立大鼠DI模型,取其膀胱平滑肌,提取总RNA和总蛋白,以β-actin为内参,分别采用定量PCR和WesternBlot化学发光法检测BKCa通道基因和蛋白水平。结果 DI组大鼠膀胱平滑肌BKCa通道基因和蛋白水平均明显下降,与对照组相比,DI组mRNA水平相对量（与内参照基因β-actin）由0.35±0.12（n=15）下降到0.21±0.09（n=12）,两组比较有显著性差异（P〈0.05）,BKCa通道蛋白水平相对量（与内参照蛋白β-actin）0.41±0.08（n=15）下降到0.23±0.06（n=12）,两组相比有显著性差异（P〈0.01）。结论 BKCa在膀胱逼尿肌不稳定时发生明显改变,可能参与了大鼠膀胱DI的发生,调控DI时BKCa通道活性可以作为治疗DI的靶点之一。     

不稳定逼尿肌中ICCs细胞与逼尿肌收缩的关系

目的 研究不稳定逼尿肌中ICCs细胞的数量、分布形式的变化及其功能改变对逼尿肌肌条收缩的影响,初步探讨ICCs细胞与逼尿肌不稳定的关系.方法 近端尿道结扎法建立大鼠不稳定膀胱模型.分别于正常及不稳定膀胱的相同部位剪取3 mm×4 mm逼尿肌组织进行免疫荧光组织化学法检测c-kit阳性细胞的表达及分布情况;再于相同部位剪取2 mm×7 mm肌条进行收缩特性测定实验,并检测c-kit受体阻断剂对收缩的影响.结果 不稳定逼尿肌中c-kit阳性细胞的数量较正常逼尿肌明显增多(P＜0.05);正常逼尿肌中c-kit阳性细胞以散在分布为主,不稳定逼尿肌中以细胞网络形式存在;不稳定逼尿肌肌条的收缩频率和收缩幅度显著高于正常膀胱(P＜0.05);加入Glevic后,不稳定逼尿肌肌条的收缩幅度显著减弱(P＜0.05),频率无显著差异(P＞0.05).结论 不稳定膀胱中ICCs细胞的数量明显增加,主要以细胞网络的形式存在;不稳定逼尿肌肌条收缩幅度和频率明显增高,但其收缩幅度可以被Glevic削弱,提示ICCs与逼尿肌不稳定的发生有密切关系.