中药单体调控AMPK/mTOR通路介导自噬防治糖尿病肾脏病的研究进展

糖尿病肾脏病（DKD）是糖尿病患者最典型的微血管并发症之一,是导致终末期肾病的重要原因,其发病机制尚未完全阐明,可能主要与血流动力学效应、遗传因素、肾脏炎性损伤、氧化应激、自噬失调、代谢紊乱等密切相关。因其发生机制复杂,临床上尚无特异性防治措施。腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素哺乳靶蛋白（mTOR）信号通路是参与自噬调节的一个经典通路,可通过激活自噬途径达到治疗DKD的效果。近年来,中药单体因其能够直接作用于靶向细胞,自噬靶点等优势在DKD的防治中扮演着重要角色,受到国内外学者的广泛关注。目前,相关研究人员对DKD的发生发展及药物干预治疗DKD中的病理生理机制做了大量研究,结果发现AMPK/mTOR通路在疾病的发展过程中发挥着重要作用,中药单体通过调控AMPK/mTOR信号通路的活性进而影响自噬途径,减轻氧化应激、炎症和细胞外基质的过度聚集,促进自噬小体的生成,从而改善肾脏的损伤。该文将主要从AMPK/mTOR信号通路介导自噬与DKD的关系及中药单体通过AMPK/mTOR通路介导自噬治疗DKD的作用机制作一综述,以期为临床防治DKD提供丰富地理论依据及思路。     

当归芍药散对MAFLD大鼠AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路的调节作用

目的：观察当归芍药散对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)大鼠腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路的调控作用，探讨其对MAFLD大鼠的治疗作用及机制。方法：60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组(多烯磷脂酰胆碱胶囊，0.144 g·kg^-1)及当归芍药散低、中、高剂量组(2.44、4.88、9.76 g·kg^-1)。采用高脂饲料连续喂养8周后，各用药组给予相应药物治疗4周。给药结束后，收集血清和肝组织用于后续实验检测。结果：与正常组比较，模型组大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝组织TC、TG、游离脂肪酸(FFA)的含量或活性均显著升高(P<0.01)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著降低(P<0.01)，肝组织磷酸化(p)-AMPK、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)Ⅱ、Beclin1和ULK1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),p-mTOR和...     

古方黄芪散调控AMPK/mTOR自噬信号通路改善肝脏脂肪变性的机制

目的：基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨古方黄芪散调节自噬减轻小鼠肝脏脂肪变性改善非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制。方法：通过数据库收集黄芪散主要化学成分及NAFLD相关靶点,对交集靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析、构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并进行体内实验验证。雄性C57BL/6J小鼠60只,适应性喂养1周后随机分为正常组、模型组、二甲双胍组(0.25 g·kg^-1)、黄芪散低、高剂量组(0.5、1 g·kg^-1,每组12只。采用高脂饮食(HFD)诱导小鼠NAFLD模型,造模的同时灌胃给药13周,每天1次。通过检测随机血糖、血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和肝脏中TG含量;称量肝脏湿重并计算肝指数;采用苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色、透射电子显微镜(TEM)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western ...     

基于AMPK/mTOR自噬通路探讨芍药苷保护溃疡性结肠炎小鼠的作用机制

目的 探讨芍药苷通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）自噬通路对溃疡性结肠炎（UC）小鼠的保护作用机制研究。方法 自由饮用4%葡聚糖硫酸钠（DSS）建立UC小鼠模型，56只BALB/c雄性小鼠，随机分为模型组、AMPK抑制剂组（20 mg·kg^-1）、芍药苷（50 mg·kg^-1）+抑制剂（20 mg·kg^-1）组、芍药苷高剂量组（50 mg·kg^-1）、中剂量组（25 mg·kg^-1）、低剂量组（12.5 mg·kg^-1）药物干预7 d后，通过比较小鼠体质量、疾病活动指数（DAI）变化和苏木素-伊红（HE）染色结果判断芍药苷对UC的保护作用。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平，免疫荧光检测结肠中微管相关蛋白1轻链3（LC3）的含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中AMPK、mTOR蛋白及其磷酸化蛋白p-AMPK、p-mTOR，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测AMPK、mTOR、Beclin1、LC3和p62的mRNA表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠体质量下降、DAI评分升高、结肠出现严重的病理学损伤，炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量上升（P<0.01），LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平下调，p-mTOR/mTOR蛋白水平上调（P<0.01）；AMPK、LC3的mRNA表达水平下调，mTOR、p62的mRNA表达上调（P<0.01）。与模型组和芍药苷+抑制剂组比较，经芍药苷治疗后小鼠体质量上升、DAI评分降低、结肠组织病理损伤减轻，炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量下降（P<0.05），LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平上调，p-mTOR/mTOR蛋白水平下调（P<0.01），AMPK、Beclin1、LC3的mRNA表达水平上调，mTOR、p62的mRNA表达下调（P<0.01），抑制剂组小鼠结肠组织病理损伤严重，各项指标趋势与芍药苷高剂量组完全相反。结论 芍药苷可通过激活AMPK/mTOR信号通路，增强自噬，减轻UC小鼠的炎症损伤，从而起到保护作用。     

基于Akt/mTOR及ERK/mTOR信号通路探究活心丸对心肌肥大大鼠自噬的影响

目的 基于蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)/mTOR信号通路探究活心丸对心肌肥大大鼠自噬的影...     

左、右归丸调控AMPK/mTOR信号通路促进绝经后骨质疏松症大鼠骨形成的研究

目的:研究左、右归丸对绝经后骨质疏松症(PMOP)大鼠骨髓腺苷酸活化蛋白激酶A(MPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响,并基于该信号通路探讨左、右归丸对PMOP大鼠骨形成的作用.方法:将60只2月龄未生育雌性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、左归丸组、右归丸组、补佳乐组,采用去卵巢方法建立P...     

基于mTOR通路探讨中医药调控心肌缺血/再灌注损伤中自噬的研究进展

自噬是广泛存在于真核细胞中用以维持细胞稳态的一种降解途径,在多种心血管疾病尤其是心肌缺血/再灌注损伤的发生、发展中起着重要的调控作用,是治疗心血管疾病的新靶点.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路是自噬调控的诸多信号通路中的下游,在心血管疾病自噬过程中起重要作用,可调控心脏自噬,促进自噬流以改善心脏功能.中医药治疗心...     

中医药通过mTOR途径调节细胞凋亡与自噬的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种进化保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其生物学功能主要是参与细胞的增殖、生长及分化,从而调节机体的代谢过程。诸多国内外研究表明,mTOR是细胞凋亡及自噬信号转导通路的交汇点,营养、药物及氧化应激等多种刺激均可通过mTOR介导的信号通路对细胞的凋亡和自噬起到关键性的调控作用。目前,诸多研究已经证明,mTOR信号通路的改变与多种人类疾病的发病机制密切相关,如癌症、代谢紊乱(肥胖和2型糖尿病)、心血管和神经退行性疾病、与年龄有关的疾病和卵泡发育障碍等。近年来,越来越多的医家以该通路为切入点,以细胞凋亡和自噬为研究载体,研究了中医药对细胞凋亡和自噬的调节。其中包括中药单体、中成药、中药复方以及针灸等药物及物理疗法调控凋亡及自噬的实验研究。本文从mTOR信号通路入手,探讨了mTOR与细胞凋亡及自噬的关系,综述了中医药经mTOR途径调节细胞凋亡与自噬的最新进展,为中医药在该领域的深入研究提供了思路与参考。今后,中医药领域仍可以mTOR信号通路为依托,在中医基础理论的指导下对细胞凋亡和自噬的时效关系进行探索,为中医药在机体的作用机制提供新的现代医学的理论支持和作用靶点。     

蒲公英萜醇通过mTOR信号通路诱导乳腺癌细胞自噬

目的:体外研究蒲公英萜醇对乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响,并探讨相关作用机制。方法:体外培养乳腺癌MCF-7细胞,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测蒲公英萜醇(12. 5,25,50,100,200μmol·L-1)对MCF-7细胞增殖的影响;采用吖啶橙(AO),免疫荧光染色和透射电镜观察蒲公英萜醇对乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响;应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蒲公英萜醇用药后细胞自噬相关蛋白表达以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的变化情况。结果:MTT比色法结果显示,蒲公英萜醇组可抑制MCF-7细胞的增殖能力;吖啶橙染色结果显示,与空白组比较,蒲公英萜醇组MCF-7细胞内酸性溶酶体增加;透射电镜观察到用药组细胞内出现明显的自噬体结构;蒲公英萜醇用药后,荧光显微镜下可见MCF-7细胞中出现较多的微管相关蛋白1轻链3(LC3)绿色荧光分布; Western blot结果显示,与空白组比较,蒲公英萜醇可上调LC3-Ⅱ和酵母Atg6同系物(Beclin-1)蛋白表达水平,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高(P 0. 05,P 0. 01);加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后与蒲公英萜醇组比较,3-MA+蒲公英萜组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低(P 0. 05)。蒲公英萜醇用药后可显著下调细胞内p-mTOR和磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白(p-4EBP1)蛋白表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:蒲公英萜醇能够诱导MCF-7细胞发生自噬,其机制可能与抑制mTOR信号通路有关。     

电针“肠病方”对急性溃疡性结肠炎大鼠结肠自噬及AMPK/mTOR信号通路的影响

目的：观察电针“肠病方”对溃疡性结肠炎（UC）大鼠自噬水平和腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其治疗UC的作用机制。方法：雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和电针组,每组8只。采用自由饮用5%葡聚糖硫酸钠溶液7 d复制UC大鼠模型。电针组予双侧“天枢”“上巨虚”和“中脘”电针治疗,每次20 min,每日1次,连续3 d;西药组予美沙拉嗪悬液（200 mg/kg）灌胃,每日1次,连续3 d。观察并记录各组大鼠一般情况,记录粪便形态并进行隐血试验以评估疾病活动指数（DAI）;HE染色法观察大鼠结肠形态及病理变化;ELISA法检测血清白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF-α）、IL-10的含量;荧光定量PCR法检测结肠组织自噬标志物微管相关蛋白3B(LC3B)、p62 mRNA的表达水平;Western blot法检测结肠组织中p62蛋白表达量及LC3BⅡ/LC3BⅠ、p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR比值。结果：与空白组比较,模型组大鼠一般情况较差,结肠黏膜屏障破坏,炎性细胞浸润,腺体萎缩或消失,隐...     

基于mTOR通路和自噬探讨香菇多糖改善脓毒症小鼠肺损伤的作用机制

目的 探讨香菇多糖对脓毒症肺损伤小鼠自噬的影响及作用机制。方法 将C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组、香菇多糖（100 mg/kg）组、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通路激活剂MHY1485(10mg/kg)组、香菇多糖+MHY1485组,每组15只。除假手术组外,其他组均按照盲肠结扎穿孔法构建脓毒症模型。造模成功后,给予相对药物进行干预,假手术组和模型组ip等体积的生理盐水。末次给药24 h后,检测小鼠右肺中叶肺组织湿质量/干质量;ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;苏木素-伊红（HE）染色法检测肺组织病理变化;透射电子显微镜（TEM）观察肺组织中自噬小体的形成;Western blotting检测肺组织Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3)、mTOR、磷酸化mTOR(...     

丹参酮ⅡA通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进人喉癌Hep-2细胞凋亡和自噬的研究

目的 研究丹参酮ⅡA对人喉癌Hep-2细胞凋亡和自噬的影响,并基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路探讨其可能作用机制。方法 分别以不同浓度丹参酮ⅡA(0,2,4,8,16,32μmol/L)干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞48 h, CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算半抑制浓度(IC50)作为后续实验药物浓度。取对数生长期人喉癌Hep-2细胞,设空白组、丹参酮ⅡA组、丹参酮ⅡA+IGF-1(PI3K激活剂)组、丹参酮ⅡA+LY294002(PI3K抑制剂)组,各组给予相应干预48 h后,CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法、GFP-LC3荧光质粒转染法检测细胞增殖抑制率、凋亡率和自噬体形成情况,Western blot法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达情况。结果 丹参酮ⅡA对Hep-2细胞增殖抑制作用呈现...     

益气活血养阴清热方对糖尿病肾病大鼠肾组织自噬信号通路AMPK/mTOR/ULK1的影响

目的:观察益气活血养阴清热方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织损伤及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/UNC-51样激酶1(ULK1)(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路的影响,探讨其治疗DN的可能作用机制,为临床应用益气活血养阴清热方治疗DN提供客观的理论依据。方法:将90只SPF级雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常对照组和造模组,分别给予普通饲料、高糖高脂饲料喂养。6 w后造模组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立DN模型,模型制备成功后随机分为模型对照组、益气活血养阴清热方7.7、15.3、30.6 g/kg组、厄贝沙坦0.017 g/kg组。给药后检测大鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿蛋白(24 h-UTP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量;HE染色、Masson染色、碘酸六胺银(PASM)染色观察肾组织病理变化;透射电镜观察肾组织超微结构变化;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin 1)表达水平;Western blot法检测大鼠肾组织AMP...     

基于AMPK/mTOR/ULK1信号通路介导的自噬探讨芪黄益气摄血方治疗免疫性血小板减少症模型小鼠的作用机制

目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1（AMPK/mTOR/ULK1）信号通路介导的自噬探讨芪黄益气摄血方治疗免疫性血小板减少症（ITP）模型小鼠的作用机制。方法 50只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、芪黄益气摄血方高、低剂量组和强的松组,每组10只。采用豚鼠抗小鼠血小板血清（APS）腹腔注射方法,建立ITP小鼠模型;注射APS后的第8天,各组分别灌胃给药,连续14 d。检测外周血血小板计数（PLT）和血红蛋白（Hb）浓度变化;分离脾脏、胸腺组织,称质量,计算脏器指数;取胸骨做骨髓涂片,显微镜下进行骨髓巨核细胞分类;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清血小板生成素（TPO）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、γ干扰素（IFN-γ）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测脾脏AMPK、mTOR、ULK1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）、p62 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脾脏AMPK、p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠外周血PLT计数、Hb及TPO水平明显下降（P<0.05,P<0.01）,脾脏和胸腺指数显著升高（P<0.01）,骨髓产板巨核细胞数显著减少（P<0.01）,血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平显著升高（P<0.01）,而IL-10、TGF-β₁水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,芪黄益气摄血方高、低剂量组及强的松组显著增加模型小鼠PLT计数、TPO水平（P<0.01）,明显降低脾脏和胸腺指数（P<0.05,P<0.01）,明显增加骨髓产板巨核细胞数（P<0.05,P<0.01）,明显降低血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平（P<0.05,P<0.01）,明显提高IL-10、TGF-β₁水平（P<0.05,P<0.01）;与芪黄益气摄血方低剂量组比较,芪黄益气摄血方高剂量组和强的松组在改善PLT计数、细胞炎性因子水平方面呈现不同程度的显著性差异（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠脾脏AMPK、LC3、Beclin1 mRNA和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达均明显上调（P<0.05,P<0.01）,mTOR、ULK1、p62 mRNA和p-mTOR、p-ULK1、p62蛋白表达水平明显下调（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,芪黄益气摄血方高、低剂量组及强的松组可明显下调脾脏AMPK、LC3、Beclin1 mRNA和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,同时明显上调mTOR、ULK1、p62 mRNA和p-mTOR、p-ULK1、p62蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）。结论 芪黄益气摄血方可能通过调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路抑制自噬的过度发生,从而调节免疫失耐受,发挥治疗ITP作用。     

痰瘀同治方对缺氧复氧诱导心肌细胞AMPK-mTOR自噬信号通路的影响及机制

目的研究痰瘀同治方对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞自噬的影响及AMPK-mTOR信号通路在其中可能发挥的作用。方法体外培养H9C2心肌细胞,随机分为空白对照组、H/R模型组(缺氧10 h后复氧2 h)、痰瘀同治方组、血府逐瘀汤组及栝蒌薤白半夏汤组,各组给予相应方剂肠吸收液18 mg/m L孵育2 h后H/R处理。电镜下观察细胞自噬体结构,检测细胞上清液中LDH释放量和SOD活性,蛋白免疫印迹测定细胞内LC3、Beclin-1、P-AMPK和P-mTOR蛋白表达。结果心肌细胞缺氧复氧后自噬体形成并增多。与空白对照组比较,H/R模型组心肌细胞LDH含量、LC3及Beclin-1蛋白表达量增加,p-AMPK表达增强,SOD活性下降且p-mTOR表达减弱(P0.05,P0.01)。与H/R模型组比较,各中药组干预后均能降低LDH、Beclin-1表达,痰瘀同治方组与血府逐瘀汤组可同时提高SOD活性,抑制LC3高表达(P0.05,P0.01)。同时痰瘀同治方组与血府逐瘀汤组可下调p-AMPK水平,并上调p-mTOR蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论缺氧复氧可激活心肌细胞AMPK-mTOR信号通路,从而诱导自噬过度表达加重心肌损伤,痰瘀同治方可通过调控AMPK-mTOR信号通路、抑制自噬而起到心肌保护作用。     

“通督启神”法电针对APP/PS1双转基因小鼠皮层区AMPK、mTOR表达的影响

目的 观察“通督启神”法电针对阿尔茨海默病(alzheimer’s disease, AD)小鼠空间学习记忆能力和前额叶区腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate (AMP)-activated protein kinase, AMPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)表达的影响,探讨其在线粒体自噬过程中的作用机制和对AD的治疗作用。方法 将30只6月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、电针组和电针+抑制剂组,以10只相同遗传背景的C57BL/6小鼠作为空白对照组。采用Morris水迷宫观察各组小鼠的行为学变化;免疫组化法观察各组小鼠前额叶区AMPK、mTOR表达情况;蛋白质印迹法(western blot, WB)检测各组小鼠前额叶区AMPK、mTOR表达水平。结果 (1)应用重复测量和组间效应方差分析,在隐蔽平台试验中,电针组逃避潜伏时间低于模型组(P<0.05)和电针+抑制剂组(P<0.05),模型组与电针+抑制剂组比较无明显差异;(2)在空间探索试验中,电针组穿...     

基于AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路探讨左归降糖通脉方对AGEs合并缺糖缺氧星形胶质细胞炎性损伤的影响

目的 探讨左归降糖通脉方对糖基化终末产物（AGEs）合并缺糖缺氧（OGD）损伤后星形胶质细胞（AS）的影响及干预机制。方法 使用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）确定AGEs作用浓度及OGD时间,选择左归降糖通脉方（ZGJTTMP）含药血浆的作用浓度;将星形胶质细胞随机分为空白组、模型（AGEs+OGD）组、ZGJTTMP组、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂（Compound C）组、AMPK激动剂（AICAR）组、ZGJTTMP+AICAR组,倒置显微镜下观察各组细胞形态结构,CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;电镜下观察各组细胞内自噬小体的数目,免疫荧光染色法观察各组细胞中微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达情况,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞LC3、p62、磷酸化（p）-AMPK、AMPK、磷酸化（p）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、mTOR、磷酸化（p）-UNC-51样激酶1（ULK1）、ULK1蛋白的表达情况。结果 选择AGEs 200 mg·L^-1合并OGD 6 h作为最适造模条件,5%作为ZGJTTMP含药血浆的最佳作用体积分数。倒置显微镜下见造模后细胞受损严重,ZGJTTMP组与Compound C组细胞损伤得到明显改善;ELISA结果示模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量显著增加（P<0.01）,ZGJTTMP组与Compound C组炎症因子含量显著下降（P<0.01）;电镜下可见模型组细胞内自噬小体数目明显增多,免疫荧光结果示LC3荧光表达面积显著增加（P<0.01）,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内自噬小体数目明显减少,LC3表达面积显著减少（P<0.01）;Western blot结果显示,与空白组比较,模型组细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高（P<0.01）,p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著下降（P<0.01）,与模型组比较,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著下降（P<0.01）,p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著升高（P<0.01）。结论 ZGJTTMP对AGEs合并OGD炎性损伤的星形胶质细胞具有保护作用,这一作用是通过抑制了AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路的激活,从而抑制了自噬的过度表达实现的。     

黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡

目的：探讨黄芪甲苷对鼻咽癌细胞自噬与凋亡的影响及潜在分子机制。方法：在体外实验中,通过单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透射电镜观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对鼻咽癌细胞自噬的影响。在体内实验中,建立裸鼠移植瘤模型后采用免疫荧光法(IF)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组别中自噬和凋亡情况的变化及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化。结果：与空白组比较,不同浓度AS-Ⅳ(5、10、20μmol·L^-1)作用于5-8F细胞后,各AS-Ⅳ组的自噬荧光强度均明显增强,其中,干预24 h,各AS-Ⅳ组的自噬荧光表达最强,10μmol·L^-1AS-Ⅳ组的荧光表达最明显;与空白组比较,透射电镜下自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)诱导5-8F细胞内出现较多自噬体;3-甲基腺嘌呤(3-MA)作为自噬抑制剂,透射电镜下并未观察到5-8F细胞内有自噬体的形成;AS-Ⅳ10μmol·L^-1组细胞内结构和细胞膜完整、清楚,可见自噬体形成;与空白组比较,AS-Ⅳ各组的肿...     

中药通过mTOR信号通路调节线粒体自噬与凋亡治疗慢性肾脏病研究进展

慢性肾脏病是多种病理因素在数月或数年内引起的肾脏功能和结构的不可逆损伤,目前尚无特效药。mTOR信号通路是细胞内合成与分解代谢的枢轴,参与调节细胞自噬与凋亡,对肾脏细胞的稳态及能量代谢过程至关重要。目前许多以调控mTOR信号途径为目标的科学研究正在从分子生物学角度阐释多种慢性病的机制。大量临床研究表明中药治疗慢性肾脏病效果显著,且中药对mTOR信号途径及其下游的线粒体自噬与凋亡具有调控作用,而自噬-凋亡平衡体现出的“以平为期”与中医“和”思想相应。本文以此为切入点,对现有中药复方、单味药及提取物通过mTOR调节线粒体自噬与凋亡防治慢性肾脏病的研究进行综述,旨在为mTOR信号通路能否作为中药发挥作用的靶点提供理论依据。     

中药调控mTOR信号通路治疗缺血性脑卒中的研究进展

缺血性脑卒中（IS）是临床上较为常见的一类严重的脑血管疾病。针对其缺血损伤发生机制,通过静脉溶栓以恢复血流仍是临床上最主要最有效的治疗手段,但因静脉溶栓存在增加出血风险、治疗窗口狭窄、禁忌证多等弊端,使其在临床的应用受到限制。在未达到完全有效复流的同时,对缺血脑组织进行有效保护事关IS预后。研究发现,改善IS导致的脑损伤存在诸多通道机制,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路就是其中之一。中医在治疗IS,尤其在改善缓解患者症状和提高生活质量方面,具有丰富的干预手段和独特优势。在IS发病后,中医药尽早介入其治疗、康复和预防复发的全过程可以充分发挥中西医协同治疗优势,保证患者获益最大化,对IS后的神经功能和运动功能恢复具有重要临床意义。诸多研究表明,中药干预手段通过调控激活mTOR信号通路,以干预和调节细胞自噬、抑制神经细胞凋亡、抑制氧化应激和炎症反应等方式有效减轻IS导致的脑损伤,对实现脑保护、改善IS预后具有积极作用,为IS的防治提供了新的治疗策略和思路。该文基于此,对mTOR信号通路在IS发病中的作用机制及近年来中药调控mTOR信号通路治疗IS的研究进展进行综述,以期为IS的中医药治疗提供新的治疗思路和系统的科学参考。