靶向纳米微泡下高强度聚焦超声增效的声像图相关函数的应用研究

摘要：目的探讨在靶向纳米微泡条件下,用高强度聚焦超声(HIFU)辐照后,声像图相关函数与HIFU辐照发生凝固性坏死的关
系,以提高监控超声的判断灵敏度。方法60只双侧第二乳腺建模成功的VX2移植性肿瘤兔随机分为90 W,120 W,150 W组,
每组20只,采用HIFU定点辐照,辐照时间统一为3 s,辐照左侧肿瘤时注射微泡造影剂,右侧作对照,观测靶区辐照前后声像图
变化和灰度值变化,并对靶区声像图进行相关函数运算,比较灰度判别方式与相关函数判别方式的准确性与灵敏性。结果对
120个样本进行辐照前后声像图相关函数分析,总判对率为83.3%,高于灰度判对率68.3%,其差异有明显统计学意义（P<0.05）;
同一辐照条件下,微泡组坏死样本声像图相关函数平均值低于对照组,其差异有统计学意义（P<0.05）。结论运用相关函数分析
辐照前后靶区声像图,较灰度评价,其准确性、灵敏性更高,能有效提高HIFU疗效。
     

载siRNA微泡实现肿瘤治疗与疗效评估一体化的可行性分析

目的探讨利用载小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）的脂质微泡超声造影剂实现恶性肿瘤基因治疗与疗效评估
一体化的可行性。方法以异质性组装法制备载siRNA的脂质微泡,并用动态光散射法检测其直径大小和表面电位。通过激
光共聚焦显微镜观察红色荧光标记的siRNA在瘤内的分布。针对抗凋亡基因sirtuin 2（SIRT2）设计siRNA,通过在体实验研究
载siRNA微泡在超声辐照下的肿瘤基因沉默效果。在用载siRNA微泡治疗肿瘤的同时,以超声造影技术观察肿瘤治疗效果。
结果siRNA微泡的直径为400.7±30.5 nm,表面带弱正电（+8.8±0.8 mV）。siRNA微泡协同超声辐照能高效地将siRNA递送到
肿瘤细胞胞浆内,有效沉默肿瘤组织中的SIRT2基因,诱导肿瘤凋亡,明显减缓肿瘤的生长速度。超声造影检查结果提示,载
siRNA微泡具有良好的超声显像效果,能在治疗过程中实时评估肿瘤的血供情况。结论新型载siRNA的脂质微泡超声造影剂
在活体上能对肿瘤进行基因沉默治疗,同时观察肿瘤治疗效果,实现恶性肿瘤基因治疗与疗效评估的一体化。
     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及MAPK1/3和MMP-8表达的影响

目的探讨气体信号分子硫化氢（H2S）对糖尿病大鼠心肌纤维化及MAPK1/3和MMP-8蛋白表达的影响。方法40只SD
大鼠随机分为4组：正常对照组、糖尿病大鼠组（STZ组）、硫化氢干预糖尿病大鼠组（STZ+H2S组）和硫化氢干预正常大鼠组（H2S
组）。用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）（40 mg/kg）建立糖尿病大鼠模型;对照组每天腹腔注射生理盐水;STZ+H2S组与H2S组每天
腹腔注射硫氢化钠（H2S供体）溶液（100 μmol/kg）,8周后处死大鼠,HE染色观察心肌纤维病理形态学变化,Western blot法检测
Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白的表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠心肌组织胶原含量明显升高,心肌间质纤维
化,Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;糖尿病大鼠经硫化氢干预后大部分心肌纤维呈平行排列,
结构清晰,间质有少量疏松结缔组织,Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平明显下调（P<0.05）,而非糖尿病硫化氢干预
组心肌纤维化程度及心肌组织Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平较对照组均无明显差异（P>0.05）。结论H2S可改
善糖尿病大鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制MAPK1/3/MMP-8信号通路有关。
     

微泡增强的超声空化增加兔睾丸组织伊文思蓝浓度的研究

目的：探讨微泡增强的超声空化增加睾丸组织的药物浓度的可行性。方法18只雄性8月龄性成熟新西兰兔随机分为空白对照组（C）、单纯微泡组（MB）、治疗超声组（TUS）、超声联合微泡辐照组（MEUS）4组,每组各9个。MB组给予静注微泡造影剂0.1 mL／kg ;TUS组给予超声辐照5 min;MEUS组给予静注微泡造影剂0.1 mL／kg的同时超声辐照5min;每组在治疗前5min均经耳缘静脉注射2％伊文思蓝（EB）2.5 mL／kg;治疗后1 h取各组睾丸组织制备组织匀浆测量 EB 浓度。结果 MEUS组兔睾丸组织内 EB 浓度高于其他各组（P＜0.05）,差异有统计学意义。结论微泡增强的超声空化可以明显提高睾丸组织内EB浓度。     

不同强度运动对大鼠关节软骨缺损早期修复和MMP-3、TIMP-1表达的影响

目的比较不同强度运动对大鼠髌股关节软骨缺损早期修复及血清基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、基质金属蛋白酶抑制
剂-1（TIMP-1）表达的影响。方法将24 只雄性SD大鼠建立双侧髌股关节全厚软骨缺损模型,后随机分为4 组：安静对照组
（SED）、低强度运动组（LIR）、中强度运动组（MIR）、高强度运动组（HIR）,后3组施行跑台运动6周。于实验前、后分别用ELISA
法测定血清MMP-3、TIMP-1浓度,并计算实验后TIMP-1/MMP-3浓度比值。实验后切开关节行大体观察评分,软骨缺损处组
织分别予蕃红O-固绿、甲苯胺蓝染色行组织学观察、O’Driscoll组织评分。结果（1）组织学切片显示：SED组软骨缺损处类透
明软骨填充,LIR组、MIR组均为纤维组织覆盖,HIR组软骨下骨破坏;大体评分与O’Driscoll组织评分：SED组均高于3运动组
（P<0.05）,HIR 组最低;（2）MMP-3、TIMP-1 浓度：实验前4 组MMP-3、TIMP-1 浓度差异无统计学意义（P>0.05）;实验后4 组
MMP-3、TIMP-1 浓度均明显高于实验前（P<0.05）,组间差异有统计学意义（P<0.05）,运动组MMP-3 浓度均高于SED组（P<
0.05）;（3）TIMP-1/MMP-3浓度比值：SED组明显高于3运动组（P<0.05）,HIR组最低,LIR与MRI组居中。结论中、低强度运动
均抑制大鼠髌股关节全厚软骨缺损的早期修复,高强度运动破坏软骨下骨,MMP-3、TIMP-1表达与运动相关,TIMP-1/MMP-3
值与软骨修复的程度一致。     

不同脉冲高强度聚焦超声辐照方式损伤离体灌注猪肝的实验研究

目的比较不同脉冲高强度聚焦超声（HIFU）辐照方式损伤离体灌注猪肝靶区临近含较大血管时的损伤情况,为临床应用
提供依据。方法建立离体猪肝经肝动脉和门静脉的体外循环灌注模型,在B超引导下选择直径为4 mm血管,于血管方向离管
壁3 mm位置给予相同剂量PHIFU辐照。实验组选择脉冲波,对照组用连续波,辐照结束后观察声通道血管及靶区损伤情况,
并取血管与靶区处组织送病理检查。结果PHIFU相同剂量辐照声通道内含4 mm大血管后,实验组和对照组的声通道血管均
未见损伤,两组凝固性坏死体积比较存在差异（P<0.05）,实验组坏死体积大于对照组。声通道血管进行HE染色、血管弹力纤维
和胶原纤维染色显示没有损伤,实验组和对照组没有差别（P>0.05）。结论当靶区临近含有较大血管时,脉冲辐照能够提高
HIFU治疗效率,有效的形成损伤,且不会损伤血管。
     

相关函数法用于监控脉冲高强度聚焦超声治疗的准确性研究

目的探讨脉冲高强度聚焦超声（PHIFU）治疗过程中超声监控的准确性,提高PHIFU治疗中超声判断组织坏死的灵敏
度。方法采用定点辐照牛肝组织的方法,按治疗剂量设定为A组（2000 J）和B组（1440 J）,A、B两组再根据占空比不同分为A1
组：100 W连续波辐照20 s,A2组：100 W占空比50%的脉冲波辐照40 s,A3组：100 W占空比40%的脉冲波辐照50 s;B1组：120
W连续波辐照12 s,B2组：120 W占空比50%的脉冲波辐照24 s,B3组：120 W占空比40%的脉冲波辐照30 s。观察各组辐照后
超声图像出现灰度变化,并对辐照前后图像进行相关函数分析,比较灰度变化与相关函数二者对坏死判断的准确性。结果超
声图像灰度增强用于判断PHIFU辐照后损伤的判对率仅为51%,相关函数法判对率可达到85%,明显高于超声灰度增强的方
法。结论PHIFU 辐照损伤的监控不能仅依赖于超声图像灰度变化,相关函数法能够更为准确、灵敏的判断PHIFU 所致的
组织损伤。
     

动脉瘤夹闭术对蛛网膜下腔积血量的影响

目的研究动脉瘤夹闭术（并清除部分脑池内的淤血块）对不同Fisher分级患者的蛛网膜下腔积血量及脑血管痉挛程度的
影响。方法SAH患者依Fisher Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分成3组,每组分为试验亚组和对照亚组进行比较;另将同期未破裂动脉瘤行夹闭
术的患者做为未破裂手术组与Fisher Ⅰ组对照亚组比较。所有患者均在发病后第3、7、13 天取脑脊液检测氧合血红蛋白
（OxyHb）浓度和TCD检测大脑中动脉（MCA）血流速度。结果（1）未破裂手术组与Fisher I组对照亚组比较：未破裂手术组的
OxyHb浓度在第3 天显著增高,MCA血流速度在第3、7 显著性增高（P<0.05）;（2）试验组与对照组比较：OxyHb浓度在Fisher
Ⅰ、Ⅱ级的第3天显著增高（P<0.05）,但在Fisher Ⅲ 级的第7、13天显著降低（P<0. 05）;MCA血流速度在Fisher I级第3、7天和
Fisher Ⅱ级的第7天显著增高（P<0.05）,但Fisher Ⅲ级第7、13天显著降低（P<0.05）;（3）MCA血流速度与脑脊液中OxyHb浓度
呈正相关（P<0.05）。结论对于Fishe Ⅰ、Ⅱ级SAH动脉瘤患者,术后反而积血增多并加重了脑血管痉挛;对于Fisher Ⅲ级SAH
动脉瘤患者,术后积血减少并部分缓解脑血管痉挛,有积极的临床意义。
     

冻干法制备VEGFR2靶向超声微泡体外寻靶及显影实验

目的 采用冻干法制备血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）靶向超声造影剂,并评价其体外寻靶能力及超声显影效果。方法 冻干法制备生物素化微泡,将链霉亲和素及VEGFR2单克隆抗体依次连接至生物素化微泡,构建VEGFR2靶向超声微泡。采用免疫荧光染色法验证链霉亲和素及大鼠抗小鼠VEGFR2单克隆抗体与微泡的结合情况。观察及检测VEGFR2靶向超声微泡的形态、大小及分布。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)至对数期,分3组,分别为非靶向超声微泡组（加入非靶向微泡1×107个）、抗体预饱和+VEGFR2靶向微泡组（加入过量的VEGFR2抗体孵育后,再加入VEGFR2靶向超声微泡1×107个）及VEGFR2靶向超声微泡组（加入VEGFR2靶向超声微泡1×107个）,比较各组微泡与细胞的结合情况。采用自制体外循环装置并采集超声图像,检测VEGFR2靶向超声微泡体外显影能力。结果 通过免疫荧光染色法的验证,链霉亲和素及大鼠抗小鼠VEGFR2单克隆抗体可与生物素化微泡结合构建VEGFR2靶向超声微泡。VEGFR2靶向微泡光学显微镜下呈圆形,大小一致且分布均匀,平均直径为（1.31±0.93） μm。显微镜下见非靶向微泡组HUVEC周围可见少量微泡结构,抗体预饱和+VEGFR2靶向超声微泡组HUVEC周围几乎无微泡结构,VEGFR2靶向超声微泡组HUVEC周围可见较多微泡结构存在。在超声增强模式下自制微泡显影效果良好,随造影时间延长无明显衰减。结论 冻干法可制备VEGFR2靶向超声造影剂,在体外实验中具有良好的寻靶能力且超声辐照下可显影。     

MCP-3对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-1、VCAM-1、TF/TFPI及其凋亡的影响

目的研究单核细胞趋化因子-3（MCP-3）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达ICAM-1、VCAM-1、TF、TFPI 及其凋亡
的影响。方法分离、培养人脐静脉内皮细胞,分别给予0~3.0 ng/ml的MCP-3进行干预,确定MCP-3对HUVECs的最适作用
浓度,以此浓度干预HUVECs,在MCP-3 加药之前1 h 分别给予MCP-3 抗体（20 ng/ml）、PI3K抑制剂LY-294002（5 mmol/ml）
处理细胞,MCP-3 作用24 h 后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western blot 分别检测干预后的ICAM-1、VCAM-1、TF、
TFPI 的表达。模拟病理状态,用ox-LDL 干预HUVECs与空白组对照,24 h 后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western
Blot 分别检测各组MCP-3 表达情况。最后,用MCP-3 及MCP-3+CCR2 拮抗剂RS102895（6μmol/L）分别干预HUVECs,作用
24、48 h 分别检测HUVECs凋亡率及caspase3 的表达,并与空白对照组比较。结果MCP-3 对HUVECs的最适作用浓度为
0.3 ng/ml（P<0.05）;MCP-3 可诱导HUVECs 细胞中ICAM-1、VCAM-1、TF 表达的增加,同时可抑制TFPI 表达（P<0.05）;
MCP-3 抗体和LY-294002 可分别拮抗、抑制此作用（P<0.05）;ox-LDL 可上调HUVECs表达MCP-3（P<0.05）;作用24、48 h 后
MCP-3 可明显诱导HUVECs凋亡,CCR2 抑制剂可拮抗此作用。结论ox-LDL 可诱导HUVECs表达MCP-3,MCP-3 可诱导
HUVECs凋亡,且可能部分通过PI3K信号通路影响HUVECs功能。
     

超声介导自制白蛋白微泡和声诺维对体外报告基因转染效率的比较研究

目的:探讨超声介导微泡破裂法促进外源基因的安全转移的方法,为临床上肿瘤等疾病的基因治疗研究提供新的思路。方法:以绿色荧光蛋白基因为标记基因,以人大肠癌细胞株SW480为靶细胞,分别以自制白蛋白微泡和声诺维(SonoVue)微泡作为载体,通过超声介导微泡破裂法促进绿色荧光蛋白GFP基因在人大肠癌细胞株的定向转染,以激光共聚焦显微镜来定性和半定量观察GFP在靶细胞的表达情况,以椎虫蓝染色法检测超声作用于细胞的安全性。结果:当超声的强度为0.75W/cm2,作用时间为40s时,对细胞比较安全;自制白蛋白微泡和声诺维微泡的浓度为10%时,分别达到最佳的基因转染效率,两者无显著性差异,但后者的相对表达强度较高。结论:超声介导微泡破裂法促进外源基因的转移是一种比较安全而有效的基因转染方法。     

携自杀基因微泡转染卵巢癌细胞株SKOV_3的超声参数及转染效率

目的:探究超声介导携Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶(hsv1tk)自杀基因微泡转染SKOV3细胞的超声参数及转染效率.方法:超声在不同微泡浓度与辐照时间(8,15,30,60s间隔1s)组合下辐照SKOV3细胞,MTT法筛选最适辐照时间和微泡浓度.将实验分成6组分别进行以下处理:超声辐照组,脂质体+超声辐照组,脂质体+微泡+超声辐照组,微泡+超声辐照组,裸质粒组(阴性对照),脂质体组(阳性对照).用裸质粒及脂质体处理后分别转染pcDNA3.1-EGFP/hsv1tk质粒;采用荧光显微镜、流式细胞技术分别定性和定量检测各组转染效率;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测hsv1tk基因的表达.结果:MTT检测在超声强度0.5W/cm2,频率1MHz,微泡浓度0.56×1011个/L,辐照时间8s间隔1s条件下,超声辐照微泡转染对细胞活性无明显抑制.经此条件转染后荧光显微镜下可观察到脂质体+微泡+超声辐照组的绿色荧光强度最强;流式细胞技术检测表明,微泡+超声辐照组转染效率为(11.74±0.19)%,比超声辐照组(2.19±0.22)%高,而脂质体+微泡+超声辐照组(25.62±0.08)%均高于其他各组(P<...     

硫化氢通过抑制炎性细胞因子及氧化应激保护大鼠骨骼肌缺血再灌注的心肌损伤

目的研究外源性硫化氢对大鼠骨骼肌缺血再灌注的炎性细胞因子和氧化应激的影响,探讨其对骨骼肌缺血再灌注后心
肌损伤的具体保护机制。方法雄性Wistar 大鼠31 只,随机分为4 组①正常对照组（c 组,8 只）;②缺血再灌注组（ischemia
reperfusion, IR组,8只）：应用止血带结扎双下肢构建大鼠骨骼肌缺血再灌注模型,缺血4 h再灌注4 h;③NaHS组（8只）和PPG
组（7 只）：在上述骨骼肌缺血再灌注的模型中,分别于缺血前及再灌注前腹腔注射NaHS 14 μmol/kg、炔丙基甘氨酸（PPG）
50 mg/kg。观察4 组大鼠心肌组织病理、肌酸激酶同工酶（CK-MB）以及血浆和心肌髓过氧化物酶（MPO）、肿瘤坏死因子-α
（TNF-α）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（T-SOD、CuZn-SOD）的变化。以免疫组化法观察心肌细胞TNF-α的表达。结果与c
组比较,IR组血浆CK-MB明显上升,血浆及心肌MPO、MDA水平明显上升,T-SOD、CuZn-SOD水平明显下降（P<0.05）,与IR
组比较,NaHS干预后血浆CK-MB明显降低,同时,血浆及心肌MPO、MDA水平明显下降,T-SOD、CuZn-SOD水平明显上升
（P<0.05）;PPG组上述指标同IR组没有明显改变（P>0.05）。心肌TNF-α免疫组化可见IR组心肌胞浆棕色染色颗粒较正常对照
组明显增多,NaHS干预后后心肌胞浆棕色染色颗粒明显减少。结论给予H2S的供体NaHS可以通过降低中性粒细胞浸润及前
炎症细胞因子激活、抑制氧化应激反应对骨骼肌缺血再灌注的心肌损伤发挥保护作用。
     

氢气对高氧致肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用

目的探讨氢气对高浓度氧导致的早产大鼠肺泡型Ⅱ上皮细胞（AECⅡ）氧化应激性损伤的影响。方法将分离培养的原
代AECⅡ随机分为空气对照组、高氧对照组、空气+氢气组、高氧+氢气组。空气组和高氧组分别暴露在21%和95%氧气中,空
气+氢气组和高氧+氢气组细胞置于富氢培养基中。各组均于24 h后光镜观察细胞形态改变,采用四甲基偶唑氮蓝（MTT）法检
测各组细胞增殖能力,JC-1荧光探针法检测各组细胞线粒体膜电位（△Ψ）变化,化学比色法测定细胞上清丙二醛（MDA）含量
和超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果与空气对照组比较,空气+氢气组各项指标均无显著差异,高氧对照组细胞的增殖活性明
显受到抑制,细胞的△Ψ明显降低,MDA含量显著增高,SOD活性明显降低。氢气干预后,与高氧对照组相比,细胞的增殖活性
和SOD活性均有所升高,△Ψ有所恢复,MDA含量显著下降（P<0.05）。结论氢气可显著减轻高氧导致的早产鼠AECⅡ的氧化
损伤,提高细胞抗氧化能力,稳定细胞△Ψ,减弱高氧对细胞的增殖抑制效应。
     

Effect of ultrasound exposure on sonicated microbubbles stability

The study of intlavenous myocedal coneest echocedo~ (IVMCE) is a hot topic in the Pursuit ofcoronap healt disease, and much achievement has beenmade in ash ultheound etwpment development and cont. .[if ~t agent improvement. Most colltrsst opllts such asMiunex, Ophson etc. are pIDduced by sonication, andcan be used as echogenic bacers of blood flow in WMCE.SOme studies have suggested, however, that the ndcrobubbles exposed to ultrasound are Open to mpture[']. Ihan effort to detendne the o…     

替莫唑胺诱导大鼠脑胶质瘤C6细胞caspase非依赖的程序性死亡

目的观察替莫唑胺对大鼠脑胶质瘤C6细胞程序性死亡的诱导效应,并探讨可能的分子机制。方法观察不同浓度替莫
唑胺在不同时间点处理大鼠脑胶质瘤大鼠脑胶质瘤C6细胞系,MTT法观察抑制率并筛选出最优的作用时间和作用浓度。应
用400 μg/ml替莫唑胺处理细胞24 h,通过HE染色、Hochest、Western blot、Tunnel、免疫组化观察替莫唑胺对大鼠脑胶质瘤C6
细胞系的程序性死亡的诱导效应。结果MTT法、HE染色、Hochest和Tunnel结果显示替莫唑胺对大鼠脑胶质瘤C6细胞具有
凋亡诱导效应;免疫组化和Western blot结果显示促凋亡蛋白Bax表达水平上调,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达的下调。未发现主要
的caspase蛋白的表达变化。结论替莫唑胺对脑胶质瘤C6细胞具有凋亡诱导效应,而这种效应可能是通过caspase非依赖途径
完成的。
     

超声联合一氧化氮微泡对大鼠心肌组织的生物学效应

目的:本研究旨在探讨超声联合一氧化氮(NO)微泡的作用对大鼠心肌组织局部基质衍生因子-1(SDF-1)的影响,及其对心肌组织作用的安全性?方法:将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,每组8只?第1?2?3组分别经尾静脉输入1 ml的NO微泡?普通脂质微泡以及PBS,并采用频率为1 MHz?强度为1 W/cm2的超声辐照大鼠心前区,辐照时间为10 min;第4组为空白对照组?4 h后每组处死4只大鼠,留取心肌组织进行HE染色,观察局部的炎症反应情况;同时留取血清标本用于检测肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白I(TnI)的含量?1周后处死剩余大鼠,取心肌组织进行RT-PCR和Western blot分别检测SDF-1的基因及蛋白相对表达量?结果:辐照4 h后留取心肌组织行HE染色显示各组均可见少量炎性细胞浸润,组间没有明显差异;血清学指标检测显示,第1组与第2组血清CK和LDH高于第3组和第4组,且差异有统计学意义(P < 0.05);第1组血清TnI低于第2组,但高于第3组和第4组,且差异有统计学意义(P < 0.05);辐照1周后留取的心肌组织行RT-PCR和Western blot分析结果均显示第1组SDF-1相对表达量最多,各组间进行两两比较,差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:超声联合NO微泡辐照大鼠心肌组织,与内含全氟显气体的普通脂质微泡一样,对心肌组织无明显破坏;但能使大鼠心肌组织SDF-1表达增加,其程度高于应用超声联合普通脂质微泡,因此,NO微泡应用于干细胞归巢将优于目前普通脂质微泡?     

贝前列素钠对高糖条件下大鼠系膜细胞细胞外基质代谢的影响

目的探讨前列环素类似物贝前列素钠（BPS）对高糖条件下大鼠系膜细胞细胞外基质代谢的影响及其可能的机制。方法
将实验分为对照（NG）组、高糖（HG）组和高糖联合不同浓度BPS组（0.5、1、2、5 μmol/L）。体外培养系膜细胞,收集24、48 h时细
胞培养上清液,Elisa法测转化生长因子β1（TGFβ1）、纤维连接蛋白（FN）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白的表达;提取细胞总
蛋白,免疫印迹法测Smad3磷酸化蛋白的表达。结果与NG组相比,HG培养24及48 h细胞TGFβ1、FN蛋白表达均显著增加
（P<0.01）,MMP-2蛋白表达量显著下降（P<0.01）;细胞培养24、48 h后,与HG组相比,HG+1 μmol/L BPS组、HG+2 μmol/L BPS
组及HG+5 μmol/LBPS组细胞TGFβ1蛋白表达量均显著降低（P<0.01）;HG+2 μmol/L BPS组、HG+5 μmol/L BPS组细胞FN蛋
白表达量均显著降低（P<0.01）;HG+2 μmol/L BPS组及HG+5 μmol/L BPS组细胞MMP-2蛋白表达量均显著增加（P<0.05）;HG
组细胞Smad3 磷酸化蛋白表达较NG组显著增加（P<0.01）;与HG组相比,HG+2 μmol/L BPS组与HG+5 μmol/L BPS组细胞
Smad3蛋白磷酸化水平显著下降（P<0.05）。结论BPS可能通过抑制TGFβ1/Smad3通路活性对高糖条件下系膜细胞ECM代谢
起到了保护性的调节作用。
     

内毒素血症大鼠心肌组织miRNA差异表达

目的分析内毒素又称脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）血症大鼠心肌组织miRNA表达谱变化,探讨miRNA在内毒素血
症心肌损伤中的作用。方法20只雄性SD大鼠随机分为对照组（n=10）和LPS组（n=10）。LPS组腹腔注射LPS 10 mg/kg,对照
组腹腔注射等量生理盐水。24 h后颈脱臼处死大鼠,取心肌组织。Real-time PCR检测TLR4、TNF-α、IL-1β表达水平,透射电镜
观察其超微结构变化。miRNA芯片筛选心肌组织中差异表达的miRNA,Real-time PCR验证候选miRNA实际表达水平。结
果LPS组大鼠心肌组织TLR4、TNF-α、IL-1β表达明显升高,心肌细胞发生胞质空泡,线粒体水肿、结构破坏等超微结构改变。
芯片技术及Real-time PCR 证实LPS 组大鼠心肌组织中miR-194-3p,miR-344a-3p,miR-465-3p,miR-501-5p,miR-3596c,
miR-185-3p,miR-877显著上调,miR-208b-3p,miR-547-3p,miR-141-3p,miR-28-5p,miR-3585-5p显著下调。结论内毒素血症
大鼠心肌组织中发现的这些差异表达miRNA可能与其心肌损伤发生有关。