雷帕霉素抑制门静脉高压症大鼠肠系膜血管新生

目的:研究雷帕霉素对门静脉高压症大鼠肠系膜血管新生的抑制作用,并探讨其机制。方法 :采用部分静脉结扎制备门静脉高压症模型。将雄性SD大鼠随机分为假手术对照组、假手术干预组、手术对照组和手术干预组。术后1周起,假手术干预组和手术干预组给予2 mg/(kg·d)雷帕霉素腹腔注射,持续2周,而假手术对照组和手术对照组给予同等剂量二甲基亚砜腹腔注射。病理学和血液动力学分别评估肠系膜血管新生和门静脉压力。Western印迹法测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和m TOR信号通路标志物P-核糖体蛋白S6激酶(P-P70S6K)和P-真核细胞翻译启始因子4E结合蛋白1(P-4E-BP1)的表达。结果:术后3周,部分门静脉结扎大鼠脾脏肿大,肠系膜血管新生和门静脉压力显著增高(P<0.01);VEGF、P-P70S6K和P-4E-BP1的相对表达量也明显增高(P<0.01)。雷帕霉素干预2周后,有效改善脾脏肿大,抑制肠系膜血管新生和降低门静脉压力(P<0.01),下调VEGF蛋白表达量、P-P70S6K和P-4E-BP1的相对表达量(P<0.01)。结论:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路活化促进门静脉高压症大鼠肠系膜血管新生,雷帕霉素阻断该通路,可抑制肠系膜血管新生,降低内脏血流高动力循环。     

mTOR/P70S6K信号通路活化在肝硬化门静脉高压症中意义的实验研究

目的 探讨mTOR/P70S6K信号通路在早期肝硬化门静脉高压症中的活化状态,证实mTOR信号通路的激活参与肝硬化门静脉高压症的发病,并探讨其可能机制.方法 本实验采用胆道结扎离断制备大鼠肝硬化门静脉高压症模型.雄性SD大鼠20只随机分为假手术组和模型组.通过组织病理学、形态学和血流动力学评估肝纤维化、炎症、和门静脉压力.采用RT-PCR和Western blot法分别测定肝纤维化标志物PC-αⅠ、α-SMA、TGFβ1及PDGF基因的转录和mTOR信号通路标志物P70S6K和磷酸化的P70S6K(P-P70S6K)的表达.结果 模型组大鼠胆道结扎离断3周后,P-P70S6K表达量明显增高而总蛋白P70S6K无显著差异,同时HSCs和胆管细胞活化增殖显著,肝脏促纤维化基因明显上调,间质胶原合成增加.结论 mTOR/P70S6K信号通路主要以磷酸化功能状态参与肝硬化门静脉高压症的形成,阻断该通路可能成为肝硬化门静脉高压症治疗的新靶向.     

mTOR抑制剂雷帕霉素对早期肝硬化门静脉高压症大鼠的治疗作用

目的:研究雷帕霉素阻断mTOR信号通路在早期肝硬化门静脉高压症中的治疗作用,并探讨其可能机制。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组和模型干预组。采用胆道结扎离断3周制备早期肝硬化门静脉高压症模型,模型干预组于术后1周给予雷帕霉素[2 mg/(kg·d)]腹腔注射2周。通过组织病理学、形态学和血流动力学评估肝纤维化和门静脉压力。应用RT-PCR测定肝纤维化基因PC-α_1、α-SMA、TGFβ_1和PDGF的转录,采用Western印迹法测定mTOR信号通路标志物P70S6K和磷酸化P70S6K(p-P70S6K)的表达。结果:模型组大鼠肝内胆管细胞和α-rSMA阳性细胞活化增殖显著,肝脾明显增大,门静脉压力也显著增高;肝脏促纤维化基因明显上调,prP70S6K蛋白表达量明显增高;而雷帕霉素通过阻断mTOR信号通路显著改善了肝功能、肝纤维化、门静脉压力及脾肿大。结论:mTOR信号通路是早期肝硬化门静脉高压症形成的重要调控机制,阻断该通路可能成为早期肝硬化门静脉高压症治疗的新靶点。     

雷公藤甲素对PAN致足细胞损伤中mTOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响

目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)刺激体外培养的足细胞24 h建立模型。细胞增殖检测试剂盒(CCK-8法)检测不同浓度雷公藤作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率。后将足细胞随机分组:(1)对照组;(2)PAN组(PAN组,PAN 50μg/ml);(3)TP组(PAN 50μg/ml+TP 10 ng/ml),予以相应刺激24 h。采用实时荧光定量PCR检测足细胞m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt、synaptopodin mRNA表达量,western blot检测足细胞p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K、p-Akt、synaptopodin蛋白表达量。结果:(1)CCK-8结果显示,PAN造成足细胞损伤时加入浓度为3、10 ng/ml雷公藤甲素浓度均使足细胞活性上升,10 ng/ml时作用最明显(均P0.05)。(2)PAN增加m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达量,减少synaptopodin mRNA及蛋白表达水平(均P0.05)。(3)雷公藤甲素共处理细胞后,m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达水平明显下降,而synaptopodin mRNA及蛋白表达水平明显升高(均P0.05)。结论:雷公藤甲素可能通过抑制m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路,减轻足细胞损伤。     

门静脉高压症apelin/APJ信号活化的实验研究

目的:探讨apelin/APJ信号在门静脉高压症的激活状态以及门静脉高压症的过程是否有apelin/APJ信号的活化,并提出其可能的机制。方法:采用部分门静脉结扎(partial portal vein ligation,PPVL)及胆道结扎离断(bile duct ligation,BDL)两种方法制备SD大鼠不同特点的门静脉高压症模型。通过大体观察、血流动力学、病理学及免疫组织化学评估门静脉压力和apelin/APJ信号在肠系膜的激活。结果:两种模型组大鼠门静脉压力均比相应假手术组高。两种模型肠系膜血管新生明显,其侧支循环大量开放。BDL组和PPVL组大鼠肠系膜组织APJ和apelin蛋白与各自假手术组相比均有升高。结论:apelin/APJ信号可能在门静脉高压症形成过程中有重要作用。     

血管内皮生长因子在门静脉高压大鼠消化道中的表达

检测血管内皮生长因子 (VEGF)在门静脉高压大鼠消化道中的表达 ,以探讨VEGF在门静脉高压消化道病变中的作用。将雄性SD大鼠随机分成实验组与对照组 ,每组 10只。实验组行门静脉两步法结扎加左肾上腺静脉结扎以建立门静脉高压模型 ;对照组为假手术组。应用免疫组化S P染色法检测VEGF在食管下段、胃体、空肠和结肠处的表达。结果示实验组门静脉压力皆较对照组明显升高 ;实验组及对照组中VEGF在胃体部表达强度较同组食管下段、空肠、结肠处增强 ;实验组中VEGF在胃体部表达较对照组增强 ,食管下段、空肠、结肠处无明显增强。提示VEGF在大鼠消化道中的表达不一致 ,VEGF的升高可能在门静脉高压大鼠胃黏膜病变中起一定作用     

热休克蛋白90在门静脉高压大鼠肠系膜血管中的表达

目的研究门静脉高压症时肠系膜血管热休克蛋白90(HSP90)的表达。并对其表达定位。方法SD大鼠分为实验组和假手术组，用门静脉部分结扎法制作门静脉高压模型。4周后取肠系膜血管组织，采用免疫组织化学技术、免疫印迹(Westernblot)、逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法在蛋白及mRNA水平测定门静脉高压大鼠肠系膜血管HsPg0的表达。结果门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达增强，且保持在蛋白及mRNA水平上的一致。HSP90不仅在血管内膜而且还在血管平滑肌层有明显的表达。结论HSP90可能参与了门静脉高压内脏血管病变的形成，从而为进一步揭示门静脉高压内脏血管病变的发病机制提供了新的思路。     

PEG-CAT改善门静脉高压症全身高动力循环的实验探索

目的 研究聚乙二醇过氧化氢酶（polyethylene glycol-catalase,PEG-CAT）对肝硬化门静脉高压症大鼠脏器血流动力学的影响,并探明活性氧产物在肝硬化门静脉高压症治疗中的作用。方法 实验分为正常大鼠（正常组,共6只）、CCl4诱导的肝硬化门静脉高压症大鼠（门静脉高压组,共7只）以及PEG-CAT处理的门静脉高压症大鼠（PEG-CAT组,共6只）。采用插管法测动脉及门静脉压力,彩色微球法检测心出量及内脏器官血流变化,过氧化氢检测试剂盒检测小肠及肠系膜过氧化氢含量变化,并用Western blotting 测小肠及肠系膜血管形成标志物VEGF、VEGFR2及CD31蛋白表达。结果 （1）门静脉压力：与正常组比,门静 脉高压组和PEG-CAT组明显升高（P＜0.05）,但后两组差异无统计学意义（P＞0.05）;（2）脏器血流：与正常组比,除胰腺及结肠血流无明显差别外（P＞0.05）,实验组其他各内脏血流均显著升高（P＜0.05）,PEG-CAT干预则能显著降低上述各内脏血流量;（3）过氧化氢含量：与正常组比,门静脉高压组小肠及肠系膜中过氧化氢含量显著升高（P＜0.05）,在PEG-CAT干预后其含量显著降低（P＜0.05）,但与正常组比无统计学差异（P＞0.05）;（4）使用PEG-CAT降低组织过氧化氢含量后,VEGF、VEGFR2及CD31三种蛋白表达均显著降低（P＜0.05）。结论 CCl4致肝硬化门静脉高压症大鼠小肠及肠系膜过氧化氢含量增高,从而导致VEGF、 VEGFR2及CD31蛋白表达增加及门静脉血流阻力减少和血流量增加。PEG-CAT干预虽不能降低门静脉压力,但可显著降低门静脉血流量。这一实验结果肯定了过氧化氢在肝硬化门静脉高压症内脏高血液动力状态形成 中的作用,并为以降低内脏组织过氧化氢含量为宗旨的肝硬化门静脉高压症临床治疗提供了初步实验依据。     

激活Akt/mTOR/p70S6K信号通路对大鼠脊髓损伤后神经再生的影响

目的:探讨激活蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)/p70核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)信号通路对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经再生及神经功能恢复的影响,为促进SCI修复提供分子学机制依据。方法:72只雌性SD大鼠建立轻型SCI模型后随机均分为激活组(Act组,SCI+ATP)、对照组(Con组,SCI+生理盐水)、阻断组(Int组,SCI+ATP+雷帕霉素);24只大鼠仅打开椎板、不损伤脊髓,为假手术组(Sham组)。分别于术后1d、3d、7d、14d采用BBB运动功能评分评价各SCI组大鼠经不同治疗后的神经功能,并采用Western blot检测各组在术后各时间点脊髓组织中Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、p70S6K、p-p70S6K、Nestin、Neu N蛋白表达情况,免疫组化检测各组在术后各时间点的Nestin和Neu N表达情况。结果 :各SCI组术后1d BBB评分为3~5分,之后逐渐增加,术后1d和3d各组间BBB评分无显著性差异(P0.05),Act组在SCI后7d和14d时的BBB评分明显高于Con与Int组(P0.05)。各SCI组在术后各时间点脊髓组织中Akt、m TOR及p70S6K磷酸化水平均明显高于Sham组(P0.05),Act组的磷酸化水平在术后各时间点均明显高于Con组及Int组(P0.05),术后7d时磷酸化水平增高最为显著(P0.01)。各SCI组大鼠在术后各时间点的Nestin表达水平均高于Sham组(P0.05),Act组的表达水平较Con组、Int组显著性增高(P0.05)、Nestin阳性细胞数显著性多于Con组与Int组(P0.05)。各SCI组在术后各时间点的Neu N表达均显著性低于Sham组(P0.01),各SCI组Neu N的表达在术后1d、3d无显著性差异(P0.05);Act组在术后7d和14d时的Neu N表达水平明显高于Con组及Int组(P0.05),Neu N阳性细胞数明显多于Con组与Int组(P0.05)。结论:激活Akt/m TOR/p70S6K信号通路可显著增加SCI后Nestin及Neu N的表达,促进SCI后神经恢复和功能改善,此信号通路是治疗SCI的重要干预环节。     

补正续骨丸对去卵巢大鼠骨量及其相关骨折的作用机制研究

目的探索中药复方补正续骨丸对去卵巢大鼠骨量及相关骨折的影响。方法雌性大鼠卵巢切除法(OVX)造PMOP模型,分组给药6周后DXA行大鼠股骨BMD检测; HE染色测量股骨骨小梁密度; ELISA检测法检测大鼠血清中P1NP、β-CTX; Western blot法检测大鼠股骨中4EBP-1、p70S6K蛋白表达;同时比较不同处理组大鼠骨折愈合时间及相同时间骨痂密度,观察补正续骨丸对OVX大鼠骨折愈合时间及骨痂密度的影响。结果补正续骨丸可增加OVX大鼠股骨BMD、减少骨小梁断裂、降低去卵巢大鼠血清中β-CTX水平、抑制mTOR1信号通路中p70S6K、4EBP1的蛋白表达,补正续骨丸可促进OVX大鼠骨折处骨痂密度增加及减少骨折愈合时间。结论中药复方补正续骨丸通过抑制mTOR1信号通路中p70S6K、4EBP1蛋白的表达抑制骨吸收、促进OVX大鼠骨折的愈合。     

门静脉高压症大鼠食管胃底侧枝循环形成机制研究

目的 观察缺氧诱导因子(HIF)-1α和血管内皮生长因子(VEGF)在门静脉高压症大鼠贲门及周围组织血管的表达,探讨其在门静脉高压症食管胃底侧枝循环形成机制中的作用.方法 对肝前型门静脉高压症模型组80只和假手术对照组20只的贲门及周围组织行HIF-1α和VEGF免疫组织化学染色,测定其表达并进行相关性分析.结果 肝前型门静脉高压大鼠模型术后30 d小网膜组织内出现小静脉血管内皮细胞的细胞质和细胞核内出现阳性反应的棕黄色颗粒,术后60 d食管胃底组织肌层及黏膜下层新生静脉血管内皮细胞的细胞质和细胞核内出现阳性反应的棕黄色颗粒.对照组呈阴性或弱阳性.差异有统计学意义(P《0.05).结论 HI-1α和VEGF过度表达可能在门静脉高压食管胃底侧枝循环形成中起重要作用.     

活性氧调控可溶性环氧化物水解酶表达增高在门静脉高压症大鼠体内的实验研究

目的 明确活性氧（reactive oxygen species,ROS）是否可在肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境中调控可溶性环氧化物水解酶（soluble epoxide hydrolase,sEH）表达,验证sEH对这一疾病模型肠系膜血管中肌源性反应的影响。方法 利用多道生物分析仪分别测定正常对照组大鼠、实验对照组大鼠（四氯化碳处理）及NAPDH抑制剂夹竹桃麻素（apocynin,Apo）干预的处理组大鼠门静脉压力;免疫印迹分析3组大鼠肠系膜动脉组织sEH、ROCK及p-moesin蛋白表达水平的变化;血管灌流系统测定各组大鼠肠系膜动脉血管的肌源性反应。多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 （1）正常对照组、实验对照组和Apo处理组大鼠平均门静脉压力分别为（6.5±0.9）mmHg（1 mm Hg=0．133 kPa）、（15.9± 1.6）mmHg和（10.6±1.2）mm Hg,肝硬化门静脉高压症大鼠经Apo处理后,门静脉压力显著降低（P＜0.05）。 （2）与正常对照组比较,实验对照组大鼠肠系膜组织sEH蛋白表达水平明显增高（P＜0.05）,p-moesin表达显著降低（P＜0.01）,但Apo处理组sEH蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,p-moesin表达回复,但仍与正常对照组存在显著差异（P＜0.05）。（3）肌源性收缩在实验对照组大鼠显著降低（P＜0.05）,经过Apo干预后,肌源性收缩改善,血管恢复收缩活性。结论 四氯化碳致肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境sEH表达增高,与活性氧含量相关。使用NAPDH特异性抑制剂去除活性氧后,sEH表达减低,血管肌源性反应恢复,提示在肝硬化门静脉高压症中限制sEH作用可作为缓解氧化应激外的另一治疗方向。     

门静脉高压形成中内源性硫化氢体系的变化及其对一氧化氮/一氧化氮合酶途径的影响

目的 研究新型气体信号分子硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)在大鼠门静脉高压形成中的作用以及对内源性一氧化氮(nitric oxide,NO)/一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)体系的调节作用,以深入探讨H2S在大鼠门静脉高压形成中的病理生理意义.方法 将30只健康SD大鼠随机分为4组:正常组(5只),假手术组(5只),部分门静脉结扎(partly portal vein ligation,PPVL)组(10只)及PPVL+NaHS组(10只).模型制作14 d后,分别测定各组大鼠的门静脉压力(portal venous pressure,PVP)和平均动脉压力(systemic mean arterial pressure,MAP);采用免疫组织化学方法榆测大鼠肝脏中胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)和NOS蛋白表达情况,RT-PCR方法检测肝脏中CSE和NOS mRNA表达情况.结果 术后14 d,假手术组和正常组各项检测指标未见显著差异.与正常组比较,PPVL组PVP明显增高(P＜0.01),MAP下降(P＜0.05);外源件给予H2S的供体-NaHS后,与PPVL组比较,PPVL+ NaHS组PVP进一步增高(P＜0.05),MAP进一步下降(P＜0.05).CSE、NOS3在各组大鼠的肝脏中均有表达.与正常组比较,PPVL组CSE蛋白及mRNA表达增加(P＜0.05);外源性给予NaHS后,其表达则进一步增加(P＜0.05).NOS2在正常组和假手术组未见明显表达,部分门静脉结扎后,大鼠肝脏中可见NOS2蛋白及mRNA表达,外源性给予NaHS后,其表达降低(P＜0.05).但是,NOS3蛋白及mRNA表达在各组之间无显著差异.结论 H2S参与了门静脉高压的形成与发展,外源性给予NaHS可以加重门静脉高压,内源性H2S的高水平可以抑制NOS的生成.     

佐剂关节炎大鼠滑膜血管新生与PTEN/PI3K/AKT信号传导通路的关系

目的:观察佐剂关节炎大鼠滑膜PTEN/PI3K/AKT通路及缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达,探讨类风湿关节炎血管新生的机制。方法:30只大鼠随机分成正常对照组和模型对照组,模型对照组采用弗氏完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型。造模成功后第19天,采用酶联免疫吸附法检测大鼠HIF-1α、VEGF、微血管密度(MVD)的表达,采用Western Blotting检测滑膜PTEN、PI3K、AKT蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高,血清MVD、VEGF、HIF-1α表达及滑膜PI3K、AKT升高,PTEN降低。相关性分析显示,PI3K、HIF-1α与MVD呈正相关,VEGF、AKT与足趾肿胀度呈正相关,PTEN与关节炎指数呈负相关。HIF-1α与VEGF呈正相关,PI3K与AKT呈正相关,PTEN与PI3K、AKT、VEGF呈负相关。结论:佐剂关节炎大鼠滑膜PTEN/PI3K/AKT通路表达失调是引起滑膜血管新生的机制之一。     

TNF-α及VEGF在大鼠食管静脉曲张形成中的表达及意义

目的　探讨TNF α及VEGF在门静脉高压食管静脉曲张大鼠食管局部的表达及意义。方法　 6 0只雄性SD大鼠按编号法随机分为两组 ,每组 30只。实验组行门静脉两步法结扎加左肾上腺静脉结扎制备食管静脉曲张模型。应用免疫组化SP法检测模型制作后 7d、14d及 2 1dTNF α、VEGF及PCNA在大鼠食管下段中的表达 ,并与对照组比较。结果　实验组不同时相的门静脉压力均较相应对照组明显升高 (P<0 .0 1) ,且实验组不同时相食管下段黏膜下血管数目及血管横截面积明显大于对照组 (P<0 .0 1) ;与相应对照组比较 ,TNF α、VEGF的表达在术后 2 1d明显增强 (P<0 .0 1) ,而PCNA的表达在术后 14d和术后 2 1d明显增强 (P<0 .0 1)。结论　在门静脉高压大鼠食管静脉曲张形成中 ,VEGF可能在食管静脉曲张维持和发展阶段起一定作用 ,TNF α可能参与食管黏膜的损伤反应。     

一氧化氮降低肝硬化门静脉高压症血管收缩反应性的实验研究

目的 探讨NO在肝硬化门静脉高压症血管收缩反应中发挥作用的机制,特别是NO与RhoA/ROCK通路间的相互作用机制.方法 分别测定正常大鼠(正常对照组,5只)、CCl4诱导的肝硬化门静脉高压症大鼠(实验对照组,6只)和经L-NAME处理的门静脉高压症大鼠(L-NAME处理组,6只)外周血和肠系膜动脉NO含量;利用血管灌流系统测定上述3组大鼠肠系膜微动脉对去甲肾上腺素的反应;Westernblot分别检测3组大鼠肠系膜动脉NO-cGMP-PKG通路和RhoA/ROCK相关蛋白表达水平的变化.多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,肠系膜微动脉对去甲肾上腺素反应性的变化通过量-效曲线表示,运用非线性回归法,计算出EC50值.结果 (1)正常对照组、实验对照组和L-NAME处理组大鼠平均门静脉压力分别为(6.2±0.9)mm Hg(1mm Hg =0.133 kPa)、(13.9±1.7)mm Hg和(16.6±1.3)mm Hg,3组比较,差异有统计学意义(F=94.4,P＜0.05).(2)正常对照组、实验对照组和L-NAME处理组大鼠平均血清NO浓度分别为(43±5)μmol/L、(82±16) μmol/L和(45±9)μmol/L,3组比较,差异有统计学意义(F =24.77,P＜0.05);L-NAME处理组大鼠平均NO浓度明显低于实验对照组(P＜0.05).(3)正常对照组、实验对照组和L-NAME处理组大鼠肠系膜动脉平均NO含量分别为(236±41) μmol/g、(407±82) μmol/g和(216 ±42) μmol/g,3组比较,差异有统计学意义(F =20.29,P＜0.05);L-NAME处理组大鼠肠系膜动脉平均NO含量明显低于实验对照组(P＜0.05).(4)与实验对照组大鼠比较,L-NAME处理组大鼠的离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素剂量反应曲线左移,但未达到正常对照组大鼠反应曲线水平,正常对照组、实验对照组和L-NAME处理组大鼠EC50分别为6.458×10-7 mol、9.546×10-7 mol和7.494×10-7 mol,L-NAME处理组与其余两组比较,差异有统计学意义(=2.726,3.112,P＜0.05).(5)与正常对照组比较,实验对照组大鼠肠系膜动脉eNOS蛋白和p-VASP蛋白表达水平明显增高(P＜0.05),但L-NAME处理组eNOS和p-VASP蛋白表达水平显著降低,但仍高于正常对照组(P＜0.05).3组大鼠肠系膜动脉PKG-1、ROCK-1和p-moesin蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05).(6)去甲肾上腺素刺激后,正常对照组和L-NAME处理组大鼠肠系膜动脉ROCK-1的活性显著上升,而实验对照组无变化.结论 CCl4致肝硬化门静脉高压症大鼠肠系膜动脉NO含量增高,影响缩血管物质诱导ROCK激活;L-NAME降低肠系膜动脉壁内NO的含量,改善了RhoA/ROCK信号通路传递障碍,促使缩血管物质诱导ROCK激活,但不影响ROCK蛋白表达水平的变化.     

肝硬化门静脉高压症患者肠系膜微动脉收缩反应变化及RhoA/ROCK通路的研究

目的 研究肝硬化门静脉高压症（PHT）患者肠系膜微动脉对去甲肾上腺素收缩反应性的变化,探讨PHT内脏血管低反应的机制,以及RhoA/ROCK通路改变所产生的作用机制。方法 取2010年1月至2011年6月在我院普外科或肝移植科手术治疗的患者,PHT组7例,非PHT组8例。术中测门静脉压力,取空肠旁第三级肠系膜血管,利用血管灌流系统测定肠系膜微动脉对去甲肾上腺素的反应,运用Western blotting法测定RhoA/ROCK通路中相关蛋白量的表达以及活性的改变。结果 PHT患者的离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素剂量反应曲线右移,EC50高于非PHT患者（P＜0.01）;与非PHT患者相比较,肝硬化PHT患者的肠系膜动脉RhoA蛋白量无明显变化（P＞0.05）,但是ROCK-1蛋白量和活性却明显降低（P＜0.01）。结论 肝硬化PHT患者肠系膜动脉对缩血管物质的反应性降低,RhoA/ROCK信号通路受损参与了该反应。     

过氧化氢在门静脉高压症大鼠侧支循环建立中的作用

目的探讨过氧化氢(H2O2)对胆总管结扎诱导的肝硬化门静脉高压症(PHT)大鼠门体侧支循环形成的影响机制。方法胆总管结扎诱导的肝硬化PHT大鼠和假手术组大鼠每天一次腹腔分别注射浓度为10 000 U/kg聚乙二醇过氧化氢酶(PEG-catalase)或生理盐水,共8 d。测定大鼠肠系膜组织H2O2含量,利用彩色微球技术测定门体分流率及相应血流动力学指标。检测大鼠肠系膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)及VEGF受体-2(VEGFR-2)蛋白含量。结果肝硬化PHT组大鼠门静脉压力、肠系膜组织H2O2水平及门体分流程度明显高于对照组大鼠。PEG-catalase处理使PHT大鼠门体分流率明显下降,VEGF及VEGFR-2蛋白水平明显降低,内脏高血流动力循环得到明显改善。结论 H2O2在肝硬化PHT内脏高动力循环形成过程中发挥重要作用,这和VEGF介导的血管增生有关。     

VEGF、SP、CGRP及PCNA在门脉高压大鼠结肠黏膜中的表达

目的：探讨血管内皮生长因子、P物质、降钙素基因相关肽及增殖细胞核抗原在门脉高压大鼠黏膜中的表达及其意义。方法：20只SD大鼠随机分为两组，实验组大鼠行门静脉两步结扎加左肾上腺静脉结扎，对照组为假手组；应用免疫组化方法检测VEGF、SP、CGRP及PCNA在大鼠结肠黏膜中的表达情况。结果：实验组SP、CGRP及PCNA较对照组表达增强，VEGF无明显变化。结论：SP、CGRP可能参与门脉高压大鼠结肠黏膜局部病变。     

左、右归丸通过调节AMPK/mTOR通路抑制大鼠股骨成脂化的实验研究

目的基于AMPK/m TOR信号通路初步探讨左、右归丸对绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporsis,PMOP)大鼠成脂分化的调节机制。方法将60只雌性SD大鼠随机分为空白组(KB)、假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、左归丸组(ZGW)、右归丸组(YGW)、补佳乐组(BJL)。除KB、SHAM组外,其余大鼠均摘除双侧卵巢,SHAM组大鼠摘除双侧卵巢周围等量脂肪,灌胃12周。应用数字化全身骨密度仪检测大鼠右侧股骨骨密度(bone mineral density,BMD),应用实时荧光定量PCR法检测大鼠右侧股骨PPARγ、AMPK、m TORC1 mRNA的表达,采用Western blot法检测大鼠右侧股骨PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ蛋白的表达以及AMPKα、m TOR蛋白磷酸化水平。结果左、右归丸能明显升高PMOP大鼠右侧股骨BMD(P0.01),降低大鼠股骨成脂相关mRNA与蛋白的表达(P0.01或P0.05),降低AMPK mRNA的表达与蛋白磷酸化水平(P0.01),升高m TORC1 mRNA的表达与蛋白磷酸化水平(P0.01或P0.05);与ZGW组相比,YGW组PMOP大鼠右侧股骨BMD没有明显差异(P0.05),股骨成脂分化相关mRNA与蛋白的表达明显升高(P0.01),且AMPK mRNA的表达明显升高(P0.01),m TORC1 mRNA的表达与蛋白磷酸化水平降低(P0.01或P0.05)。结论左、右归丸通过AMPK/m TOR通路改善了PMOP大鼠股骨成脂分化过度,其作用机制可能与调节AMPK、m TOR mRNA的表达与蛋白磷酸化水平有关。