美洲大蠊配方颗粒特征图谱方法建立

目的:为了全面反映美洲大蠊配方颗粒所含多种组分,建立美洲大蠊配方颗粒特征图谱测定方法,指导、控制美洲大蠊配方颗粒内在质量.方法:依托高效液相色谱仪,运用梯度洗脱的分析方法,建立了美洲大蠊配方颗粒特征图谱测定方法.结果:美洲大蠊配方颗粒特征图谱中呈现7个特征峰,标定了尿嘧啶、酪氨酸、次黄嘌吟、肌苷4个特征峰.结论:美洲大...     

美洲大蠊化学成分及药理作用研究进展

随着近几年人们对动物药研究的关注,美洲大蠊已成为少数几种动物药研究开发的热点昆虫之一,以其为主原料的产品已有多个开发成功。本研究就美洲大蠊的主要化学成分和药理作用研究情况进行综述,为对其进行进一步研究开发提供参考。     

美洲大蠊的药用研究进展

美洲大蠊（Periplaneta americana）属昆虫纲,蜚蠊目,蜚蠊科,俗称蟑螂。蟑螂在地球上已经生存了3.5亿年,是世界上生命力最强、最古老、至今繁衍最成功的昆虫类群之一。广泛分布于热带、亚热带地区,全世界发现并记录的种类约3000佘种,中国蟑螂种类记载已超过500余种,但其中被开发利用的仅有几种,美洲大蠊就是颇具代表性的一种。     

美洲大蠊化学成分的研究

目的研究美洲大蠊Periplaneta americana L.化学成分。方法美洲大蠊90%乙醇提取物采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到16个化合物,分别鉴定为亮氨酸(1)、尿嘧啶(2)、乙酰胺(3)、缬氨酸(4)、γ-氨基丁酸(5)、丙三醇(6)、methyl,2-piperidinecarboxylate(7)、吡嗪(8)、原儿茶酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、脱氧胸苷(10)、环(脯-丝)(11)、环(脯-天冬酰胺)(12)、苯丙氨酸(13)、多巴胺(14)、肌苷(15)、酪胺(16)。结论化合物3、7~12、14、16均为首次从美洲大蠊及大蠊属中分离得到。     

实时荧光定量PCR技术及其在中医药研究中的应用

在中医现代化研究过程中,越来越多地应用先进的现代科学技术,聚合酶链式反应(PCR)技术作为一项重要的研究工具,亦被不断地用于中医药的研究。荧光定量PCR是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术,在PCR反应体系中计入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效,高通量而且高敏感性等特点,极大地克服了原有PCR技术的不足,目前该技术已逐渐成为中医药研究中的重要手段。本文概述了实时荧光定量PCR技术分别在中医诊断、中医药理研究、中医证实质研究和针刺作用机制研究中的应用。通过文献研究表明:应用实时荧光定量PCR,可以从分子基因水平探讨方剂或单味药及有效成分在组织、细胞及至分子层次上的作用机制,了解药物作用部位及靶点。探讨中医证候的病理生理学基础,并为阐明其生物学本质提供了新思路。使我国传统中医药体系的科学性在分子生物学的基因水平上得到了初步的验证。这些研究思路和方法为中医药的研究提供了借鉴,实时荧光定量PCR有望更广泛的应用于中医药研究中。     

基于LNA-TaqMan探针实时荧光定量PCR检测技术的药用黄精掺伪研究

目的 建立一种快速、灵敏、有效的实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）方法,用于检测湖北黄精掺伪药用黄精。方法 基于锁核酸（LNA）-TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,利用不同基原药用黄精样品的叶绿体DNA中trnC-petN基因序列差异,根据常见混伪品湖北黄精特异性差异位点设计筛选探针引物,并对引物及LNA-TaqMan探针的特异性进行验证。根据扩增曲线临界循环数（C_t）值的差值计算湖北黄精掺伪比例。结果 基于LNA-TaqMan探针能够特异性地检测出湖北黄精并确定掺伪比例,在湖北黄精掺伪1%时,仍可稳定检出。结论 该方法简便准确、稳定可靠,可以用于药用黄精掺伪湖北黄精定量检测。     

美洲大蠊中甘露醇的提取工艺研究

目的 优选美洲大蠊中甘露醇的提取工艺.方法 对提取方法、溶剂浓度进行单因素考查;采用正交实验设计,以液固比、提取时间、提取次数作为考察因素,对提取工艺进行优化;以甘露醇为标准品,采用紫外可见分光光度法测定美洲大蠊中甘露醇的含量.结果 美洲大蠊中甘露醇的最佳提取工艺为:以水为溶剂,液固比1∶8,回流提取3次,每次1h.结论 优化确定的最佳工艺条件合理、可靠.     

美洲大蠊油脂急性毒性及其拮抗美洲大蠊提取液肝脏保护作用的初步研究

目的研究美洲大蠊油脂对小鼠急性毒性作用及美洲大蠊油脂对美洲大蠊提取液保护肝损伤的拮抗作用。方法分别采用最大体积一天内1次和2次灌胃给药,观察7 d内小鼠的体重、行为及死亡等情况;采用腹腔注射0.2%CCl_4油溶液,引起小鼠急性肝损伤,测定小鼠血液中血清丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST)的活性及肝重系数。结果美洲大蠊油脂最大耐受量为1.92 kg生药/kg体重,相当于成人临床剂量5g生药/60kg体重的384倍;美洲大蠊油脂与提取液合并给药,美洲大蠊油脂抑制CCl_4肝损伤小鼠肝重系数降低(P<0.01),抑制小鼠血清中AST、ALT降低(P<0.01)。结论美洲大蠊油脂无明显急性毒性反应,美洲大蠊油脂拮抗美洲大蠊提取液保护肝损伤的药理作用。     

美洲大蠊药效物质提取工艺优化

目的美洲大蠊药效物质提取工艺优化。方法以得率及体外抗肿瘤细胞活性为评价指标,筛选美洲大蠊药效物质的提取溶剂;以得率及体外抗肿瘤细胞活性为评价指标,以溶剂剂量、提取时间、浸泡时间为影响因素,正交试验优化美洲大蠊药效物质的提取工艺。结果美洲大蠊药效物质最佳提取溶剂为75%乙醇,其IC_(50)为9.11 mg/mL;美洲大蠊药效物质最佳提取工艺为溶剂剂量15倍、提取时间1.0小时、浸泡时间2.0小时。结论筛选美洲大蠊药效物质的最佳提取工艺,为美洲大蠊提取物为主的制剂开发提供理论依据。     

美洲大蠊的有效成分及相关药理学研究进展

美洲大蠊是传统动物类中药"蜚蠊"的重要基源药材之一,传统功效主要包括通利血脉、敛疮生肌、利水消肿、健脾消疳等.由于其疗效确切,以其为主要原料的中成药在临床上广泛使用,尤其在各种创面的修复上,疗效显著.该药物目前尚未被《中华人民共和国药典》收录,地方标准也仅是以总氨基酸中的丙氨酸含量为质控标准,具有生理活性的小分子肽类、...     

美洲大蠊药渣制备壳聚糖工艺的优化

目的优化美洲大蠊药渣制备壳聚糖的工艺。方法以美洲大蠊脱脂药渣为原料,采用正交试验优化甲壳素与壳聚糖的制备工艺。结果最佳条件为脱钙处理用盐酸体积分数3%,温度60℃,处理时间0.5 h;脱蛋白质用氢氧化钠体积分数3%,温度90℃,处理时间1.5 h;脱色用10%双氧水,温度70℃,处理时间5 h;脱乙酰基用氢氧化钠体积分数56%,温度100℃,处理时间4 h。结论美洲大蠊药渣制备壳聚糖有着潜在的应用前景。     

实时荧光PCR快速检测鼠疫耶尔森菌方法的建立

目的建立一种能快速检测鼠疫耶尔森菌的实时荧光PCR方法。方法以鼠疫耶尔森菌pla毒力基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,探针的5’端标记荧光报告基团FAM,3’端标记荧光淬灭基团TAMRA;建立一种能快速检测样本中鼠疫耶尔森菌的实时荧光PCR方法,并对方法的特异性和灵敏度进行评价。结果该实时荧光PCR方法只对鼠疫耶尔森菌进行特异扩增,同种属的小肠结肠炎耶尔森菌以及伤寒杆菌、肺炎衣原体、嗜肺军团杆菌其他症状相似病原体均无扩增;该方法在65 min内即可完成检测,操作方便快速,对菌悬液最低可检测至10个菌体。结论本研究建立的实时荧光PCR检测鼠疫耶尔森菌方法不仅能实现对鼠疫杆菌的快速检测,还可为鼠疫耶尔森菌引发疫情的监控和溯源提供参考。     

美洲大蠊前处理工艺及其体外抗肿瘤活性研究

目的:研究美洲大蠊前处理工艺对蛋白质含量及其体外抗肿瘤的影响。方法:通过沸水、低温两种方式分别将美洲大蠊烫杀、冻杀,用传统干燥、真空干燥、冷冻干燥三种方式干燥美洲大蠊,以得率、含水量、醇浸出物含量、蛋白质含量为理化指标,以体外抗肿瘤实验为活性指标,选出最佳的前处理工艺。结果:蛋白质得率高低为冷冻干燥真空干燥传统干燥。含水量高低为真空干燥传统干燥冷冻干燥。醇浸出物含量高低为真空干燥传统干燥冷冻干燥。蛋白质含量测定高低为真空干燥冷冻干燥传统干燥。体外细胞实验:真空干燥对A549、HeLa、MCF-7、SGC-7901、Bel-7402五种细胞均具有较强抑制作用,其次为冷冻干燥,传统干燥效果最弱。结论:本实验通过比较三种前处理工艺对美洲大蠊中蛋白质含量及其体外抗肿瘤的影响,确定以真空干燥为美洲大蠊前处理工艺,为美洲大蠊的进一步开发提供依据。     

美洲大蠊提取物对3株人及小鼠白血病细胞的细胞毒性研究

目的:通过美洲大蠊提取物对体外白血病细胞的细胞毒性测试,探讨美洲大蠊提取物对白血病细胞的抑制作用.方法:美洲大蠊醇提物,通过聚酰胺柱层析分离划段得不同部位,采用MTT法对所得部位进行人及小鼠白血病细胞的细胞毒性测试.结果:有多个部位样品的IC50值小于10μg/mL.结论:通过样品与对照品细胞毒活性结果比较,表明美洲大蠊提取物中存在具有对人及小鼠白血病细胞生长抑制作用的物质,值得对其进行进一步的研究.     

双链探针实时荧光PCR技术用于BRCAI突变筛查的初步研究

以自行设计的荧光双链探针作为检测探针，结合实时荧光PCR检测，以构建的BRCAI基因外显子2（162A→G）突变为模型，建立荧光双链探针实时荧光PCR用于BRCAI突变检测的初步模型。结果表明该方法是一种简单、高通量、高灵敏度的筛查BRCAI基因突变的方法。     

昆虫美洲大蠊油脂化合物的GC-MS分析

目的:分析美洲大蠊油脂的化学成分,为开发利用该资源提供实验依据.方法:采用GC-MS联用仪,分析美洲大蠊油脂的化学成分.结果:从中鉴定出23个组分,占峰面积的89.1%,主要成分是酯、脂肪酸和烷烃.结论:预示美洲大蠊油脂具有一定防治心血管疾病作用.     

美洲大蠊醇提取物的木瓜蛋白酶酶解工艺

目的:优选木瓜蛋白酶对美洲大蠊醇提取物的酶解工艺.方法:以水解度为指标,通过单因素和正交试验,分别考察酶解温度、酶解时间、pH、加酶量、底物浓度对木瓜蛋白酶酶解美洲大蠊醇提取物的影响.结果:木瓜蛋白酶酶解美洲大蠊醇提取物的最佳工艺条件为酶解温度55℃,时间3h,pH 7.0,加酶量8400 U·mg-1,底物浓度0.5％.在此条件下,水解度可达9.87％.酶解后的样品相对分子质量变小,相对分子质量分布变宽.结论:优选方法稳定,操作简便,为进一步研究美洲大蠊提供依据和基础.     

美洲大蠊提取物对实验性肝纤维化的影响

目的 探讨美洲大蠊提取物对四氯化碳(CCl4)所致实验性肝纤维化的影响.方法 采用CCl4复制小鼠肝纤维化模型,同时用0.25 g/kg的美洲大蠊提取物灌胃治疗,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ), IV型胶原(IV-C),层粘蛋白(LN),并以光镜现察肝脏组织学改变,进行炎症活动度分级及肝纤维化分期.结果 美洲大蠊提取物有降低ALT,AST的作用,并显能著降低HA,LN,PCⅢ和Ⅳ-C.经治疗后的肝胜细胞变性、坏死及纤维组织增生明显减少.结论 美洲大蠊提取物具有抗实验性肝纤维化的作用.     

美洲大蠊粪便提取物抗氧化活性及其化学成分研究

[目的]探究美洲大蠊粪便提取物的抗氧化活性和化学成分.[方法]采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法测定美洲大蠊粪便提取物的抗氧化能力.综合利用溶剂提取法、大孔吸附树脂、制备高效液相色谱等分离纯化方法,对美洲大蠊粪便提取物中的化学成分进行提取分离,通过核磁共振波谱、质谱法鉴定化合物结构.[结果]DP...     

美洲大蠊不同提取物及不同提取方法对肿瘤细胞的细胞毒性作用

目的:研究美洲大蠊不同提取物及不同提取方法对肿瘤细胞的细胞毒性,为美洲大蠊的抗肿瘤细胞研究提供实验依据。方法:以人肝癌SMMC-7721细胞株,红白血病细胞株K562,人结肠癌细胞株HCT116 3种肿瘤细胞为研究对象,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法,比较不同的提取物(乙醇提取液、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位)和不同的提取方法(渗漉法、超声法、回流法)对3种肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性。结果:美洲大蠊乙醇提取液和乙酸乙酯部位对上述肿瘤细胞增殖均有不同程度的抑制作用,其中以乙醇提取液的活性最强;3种提取方法提取的美洲大蠊均表现出不同程度的体外抗肿瘤活性,其中以渗漉法提取的美洲大蠊对3种肿瘤细胞的抑制作用最强,所计算出的半数抑制浓度(IC50)均最小。结论:美洲大蠊乙醇提取液的体外抗肿瘤活性最强,乙酸乙酯部位次之,美洲大蠊宜选择渗漉法提取。