抗表皮生长因子受体的单链抗体ER(Fv)的构建及其抗肿瘤活性研究

 目的 利用大肠杆菌表达抗表皮生长因子受体（EGFR）的单链抗体并对其抗肿瘤活性进行研究。方法 构建含有抗EGFR单链抗体基因片段的重组质粒,IPTG诱导大肠杆菌表达单链抗体ER(Fv),用Ni离子亲和柱纯化单链抗体。ELISA测定ER(Fv)与纯EGFR抗原的结合能力;流式细胞术分析ER(Fv)与肿瘤细胞的结合;MTT法检测ER(Fv)对肿瘤细胞体外增殖的影响;动物试验测定ER(Fv)的体内抑瘤效果。结果 应用基因工程菌表达带有组氨酸标签肽 （His-tag） 的单链抗体ER(Fv),相对分子质量约为27×103,主要以包涵体形式存在,收获量约为10 mg·L-1。ELISA测定ER(Fv)与纯EGFR抗原的亲和常数为4.0×107 L·mol-1。单链抗体能与肿瘤细胞表面的EGFR发生特异性结合,其与3种EGFR高表达肿瘤细胞的解离常数皆为10-7 mol·L-1。细胞增殖实验显示,单链抗体可抑制EGFR高表达肿瘤细胞的增殖。体内抑瘤实验表明,单链抗体对人鳞状上皮癌A431裸鼠移植瘤具有中度的生长抑制作用,5,10和20 mg·kg-1 3个剂量组35 d的抑瘤率分别为43.9%、46.7%和54.8%,与对照组相比存在显著差异。结论 成功地表达了抗EGFR单链抗体ER(Fv),其对肿瘤细胞具有良好的亲和力和一定的生长抑制作用,为研制靶向EGFR的抗体药物提供基础。     

黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶联G-蛋白结合活性的影响

目的 :观察黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶G 蛋白结合活性的影响。方法 :以放射配基结合分析法检测CHOml细胞M1受体的结合特性 ,用 [3 5S]GTPγS结合活性检测M1受体偶联的G 蛋白的结合活性 ,并计算偶联效率。结果 :QST对M1受体密度、[3 5S]GTPγS结合活性、偶联效率有上调作用 (P <0 0 1) ,而QT无作用 (P >0 0 5)。结论 :QST对M1受体的偶联功能有上调作用     

云南松松塔提取物体外抗HIV-1活性初步研究

目的研究云南松松塔提取物(C:醇提水沉后经碱提酸沉法得到的沉淀;D:滤液1倍醇沉得到的沉淀;F:滤液2倍醇沉过滤后再5倍醇沉得到的沉淀;H:醇提水沉后水溶液五倍醇沉得到的沉淀)体外抗HIV-1活性,明确云南松松塔提取物活性组段。方法采用细胞毒性实验、合胞体形成抑制实验、HIV-1感染细胞保护实验筛选云南松松塔提取物体外抗HIV-1活性组段。结果云南松松塔提取物对C8166细胞毒性小,其CC50均大于5000μg·ml-1;云南松松塔提取物C、D、F、H抑制C8166细胞合胞体形成的EC50分别为232.59,56.46,47.44,1687.72μg·ml-1。云南松松塔四个提取物对MT4细胞毒性小,均大于1000μg·ml-1,在1000μg·ml-1时,云南松松塔提取物对HIV-1感染的MT4细胞的保护率分别为(42.39±0.36)%、(15.94±6.15)%、(29.86±3.41)%、(14.98±10.75)%。结论云南松松塔提取物C、D、F均有体外抗HIV-1活性;云南松松塔提取物H无体外抗HIV-1活性;云南松松塔四个提取物对HIV-1感染MT-4细胞保护作用弱。     

太芪培元颗粒体外抗HIV-1病毒活性研究

目的评价太芪培元颗粒体外对HIV-1病毒的抑制活性。方法 MTT法检测太芪培元颗粒细胞毒性;通过细胞病变法检测太芪培元颗粒对HIV-1急性感染的抑制活性;应用HIV-1 p24抗原ELISA检测太芪培元颗粒对HIV-1急性感染细胞中病毒复制的抑制活性,并计算药物治疗指数。结果太芪培元颗粒细胞毒性实验CC_(50)为(3.761±0.370)mg/m L;合胞体抑制实验EC_(50)为(0.454 5±0.204 6)mg/m L,治疗指数为5.84~12.97;p24抑制实验EC_(50)为(0.56±0.27)mg/m L,治疗指数为5.30~8.74。结论太芪培元颗粒体外抗HIV-1活性较弱。     

柴胡果胶性多糖处理的巨噬细胞的促进Fc受体产生与细胞内信息传递系的解析

作者等曾报告,柴胡的果胶性多糖(bupleuran 2Ⅱb)可促进巨噬细胞(МФ)清除免疫复合物,从RT-PCR的结果可知,该活性是由于Fc受体基因的转录促进活性所致。此次,对与促进Fc受体产生有关的细胞内信息传递系进行了研究。 Fc受体的测定:以bupleuran刺激TGC培养基培养的小鼠腹腔МФ,培养15小时后,在4℃条件下使之与免疫复合物反应,根据МФ结合的免疫复合物的量来测定。细胞     

清疕饮调控S1P/S1PR5信号通路对HaCaT炎症模型的影响

目的 通过体外实验探讨清疕饮和鞘氨醇-1-磷酸受体5(sphingosine-1-phosphate receptor 5,S1PR5)信号对鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate, S1P)诱导的人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes, HaCaT)生物学功能的影响,研究清疕饮在角质细胞(keratinocytes, KC)上对银屑病的治疗机制。方法 脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)(1μg/mL,24小时)刺激HaCaT细胞,酶联免疫吸附测定实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定细胞上清中S1P含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time-polymerase chain reaction, q-PCR)法检测S1PRs mRNA转录水平,筛选出高特异性的S1P/S1PR5通路。细胞增殖和细胞毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)法测定细胞存活率,q-PCR法检测白介素(i...     

抑颤汤对帕金森病模型大鼠旋转行为及M和DA受体的影响

目的 :探讨抑颤汤治疗帕金森病 (Parkinson’sdisease ,PD)在脑黑质细胞及其受体方面的作用机制。方法 :运用 6 羟基多巴诱发法建立PD大鼠模型 ,通过随机分组 ,用放免法测定各组大鼠双侧脑组织M、DA受体数量及亲和力的变化。结果 :抑颤汤能明显改善PD模型大鼠的旋转行为 (P <0 0 1 ) ,与生理盐水组比较 ,抑颤汤组大鼠损毁侧脑组织DA和M受体最大结合量 (Bmax)和亲和常数 (KD) ,抑颤汤组较生理盐水组均有明显提高 (P <0 0 5或P <0 0 1 )。结论 :抑颤汤能刺激PD模型大鼠受体系统 ,使DA、M受体的亲和力和敏感性提高 ,从而改善PD大鼠的旋转行为     

赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响

目的：评价赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响。方法：采用富含雌激素受体的雌激素依赖性人乳腺癌细胞株MCF-7细胞，分别以E-SCREEN法观察赤豆提取物对其增殖的影响，以RT-PCR法、Western blot法观察赤豆对孕激素受体mRNA和蛋白表达的影响，并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价赤豆提取物发挥雌激素样作用的机制。结果：与溶剂对照组比较，赤豆（10～200 μg·mL^-1）能显著促进MCF-7细胞的增殖，100 μg·mL^-1时作用达到最大；赤豆提取物能明显诱导MCF-7细胞孕激素受体(PR)基因mRNA和蛋白的表达，以上作用均能被雌激素受体拮抗剂所完全拮抗。结论：赤豆提取物具有雌激素活性，此作用是通过雌激素受体(ER)介导的。     

多烯紫杉醇主动靶向脂质体对S180肉瘤细胞小鼠移植瘤生长的影响

目的:研究叶酸受体多烯紫杉醇主动靶向脂质体(FA-PDCT-L)对S180肉瘤细胞小鼠移植瘤的抑制作用及体内毒性。方法:利用自制两亲性嵌段共聚物叶酸-聚乙二醇-聚胆固醇氰基丙烯酸脂(FA-PEG-PCHL)修饰FA-PDCT-L,采用激光共聚焦显微镜检测脂质体与MCF-7细胞的结合机制;建立S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为DCT注射液(DCT-I)、未修饰DCT脂质体(DCT-L)和FA-PDCT-L和模型组(生理盐水),按10 mg·kg-1·d-1尾静脉注射给药,观察小鼠移植瘤生长变化并计算抑瘤率;采用TUNEL法测定细胞凋亡;观察各组动物肝功能及骨髓抑制血液生化指标。结果:FA-PDCTL与MCF-7细胞的结合量明显高于其他试验组。与模型相比,DCT-I,DCT-L和FA-PDCT-L组小鼠瘤体积均减少,其中FAPDCT-L的作用最为显著,抑瘤率79.03%,凋亡指数(45.7±3.4)%。FA-PDCT-L组动物的肝功能及骨髓抑制生化指标均与空白组无显著差异。结论:FA-PDCT-L通过FA-PEG-PCHL介导的细胞内化使脂质体进入细胞,显示出了比市售DCT-I更好的抗肿瘤疗效和更低的毒性。     

麦考酚酸体外对肝脏自然杀伤细胞活性及其受体表达的影响

 目的探讨麦考酚酸(MPA)对肝脏自然杀伤(NK)细胞活性的影响及其机制。方法分离C57BL/6小鼠肝脏NK细胞,用不同浓度MPA处理24h后,³H-TdR释放法检测NK细胞杀伤活性,ELISA法检测培养上清IFN-γ,IL-2,IL-10含量,流式细胞术检测NK细胞受体NKG2D,NKG2A,Ly49A的表达情况。结果不同浓度MPA处理后肝脏NK细胞杀伤活性较正常对照明显降低(P<0.01),IFN-γ,IL-2分泌量降低,而IL-10分泌量增高,NK细胞活化性受体NKG2D和抑制性受体Ly49A的表达下调,抑制性受体NKG2A的表达上调,高浓度的MPA作用后结果更明显。结论MPA通过下调肝脏NK细胞活化性受体NKG2D并上调抑制性受体NKG2A而抑制肝脏NK细胞活性并影响细胞因子的分泌。     

乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白对大鼠佐剂型关节炎滑膜细胞因子的作用

目的:观察乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(tyPe Ⅱ collagen,CⅡ)对大鼠佐剂型关节炎(adjuvant arthritis,AA)滑膜细胞因子的作用.方法:限制性胃蛋白酶降解法提取乌梢蛇CⅡ,SDS-PAGE凝胶电泳法和紫外分光光度计法鉴定;采用完全弗氏佐剂(complete Freud′s adjuvant,CFA)足垫皮下注射诱导AA大鼠模型;收集滑膜细胞上清液,L929细胞毒性法检测滑膜细胞上清液中TNF-α生物活性,MTT法检测滑膜细胞上清液中IL-1β生物活性;ELISA法检测滑膜细胞上清液细胞因子水平.结果:提取的CⅡ分子量约为118kD～120 kD,紫外光谱吸收仪测定提取的CⅡ吸收峰为230nm,均与标准的牛鼻中隔CⅡ相符;乌梢蛇CⅡ各剂量组体外对滑膜细胞上清液TNF-α和IL-1β活性没有直接作用;乌梢蛇CⅡ中剂量组可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结共培体系上清液TNF-α和IL-1β活性(P＜0.01),乌梢蛇CⅡ低、高剂量可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结(PP)共培体系上清液IL-1β活性(P＜0.05);灌服乌梢蛇CⅡ低、中剂量组与模型组比较,TNF-α活性下降(P＜0.05);中剂量组与模型组比较,IL-1β活性下降(P＜0.05);模型组与空白对照组比较,滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平显著升高(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中、高剂量组与模型组比较,均能抑制滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ低剂量组能显著抑制滑膜上清液IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中剂量能显著升高滑膜上清液TGF-β(P＜0.01);结论:乌梢蛇CⅡ体外对滑膜细胞炎症因子无直接作用,灌服乌梢蛇CⅡ可以抑制滑膜细胞炎症因子的水平和活性.     

白术茯苓汤及水煎液提取分离组分对脾气虚大鼠血管活性肠肽受体亲和力的影响

目的:观察白术茯苓汤及其水煎液提取分离组分对脾气虚大鼠血管活性肠肽(VIP)受体亲和力的影响。方法:以耗气破气加饥饱失常法复制脾气虚大鼠模型,采用放射性配基结合分析法检测各组VIP受体最大结合容量(RT)和受体亲和常数(Kd)。结果:各组RT无统计学差异;与空白组比较,模型组Kd值升高(P0.01);与模型组比较,总多糖、络合物组Kd值呈下降趋势,白术内酯Ⅲ组Kd值呈升高趋势,但皆无统计学意义;白术茯苓汤组、组分配伍组Kd值显著降低(P0.05)。结论:白术茯苓汤及组分配伍组能提高VIP受体亲和力;不同组分对Kd的效应具有一定差异性,配伍则显示可能具有协同增效作用。     

基于Th1/TH2“漂移”及“触发”sTREM1、CD64观察针药结合治疗卒中相关性肺炎的临床研究

目的:观察针药结合治疗卒中相关性肺炎(SAP)临床疗效及对Th1/TH2、sTREM1、CD64的影响。方法:将SAP患者按随机数字表法分为对照组和研究组,对照组给予一般处理及常规针刺治疗,研究组在对照组基础上加"化痰止咳针刺和益气化痰方口服",治疗前后观察2组中医证候、欧洲卒中评分(ESS)、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)、降钙素原(PCT)变化。采用ELISA法检测血清γ干扰素(IFN-γ)、白介素(IL)-6、可溶性髓细胞表达触发受体1 (sTREM1)、人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(CD64)表达。结果:治疗后研究组中医证候积分、ESS及WBC、CRP、PCT均显著改善,且Th1/Th2、IFN-γ升高,IL-6、CD64、sTREM1显著降低,研究组在改善咳嗽、发热、WBC、CRP、ESS方面优于对照组,调节IFN-γ、CD64、sTREM1表达优于对照组。结论:针药结合可调节SAP患者Th1/TH2漂移,降低炎性指标,改善临床症状。     

黄花倒水莲雌激素活性成分筛选

目的:研究黄花倒水莲不同提取成分的雌激素活性。方法:体外培养子宫内膜癌细胞株Hec-1-B,种于96孔板,24h后给予黄花倒水莲总黄酮、总皂苷、总多糖提取物,并以补佳乐为阳性药,加药24h后,Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)分别检测不同成分对细胞生长的影响;另种96孔板,给予不同成分提取物,24h后,提取上清液,用人(Human)雌激素受体(ER)ELISA检测试剂盒,测得ER受体的含量,反应雌激素活性情况。结果:CCK-8结果显示总黄酮和总皂苷对细胞具有毒性,在0.5g·L~(-1)、1g·L~(-1)、2g·L~(-1)时有显著性差异(P0.05或P0.01),有明显的量效关系;总多糖和阳性药补佳乐对细胞没有毒性,能够促进细胞增殖。ELISA试剂盒显示,总多糖组和补佳乐组ER含量相同且低于正常组。结论:黄花倒水莲不同部位中总多糖具有雌激素活性。     

基于TRPV1通道分析诃子制草乌减轻H9c2心肌细胞毒性的作用机制

目的:探究瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道在诃子制草乌减轻心肌细胞毒性中的作用机制.方法:以体外培养的H9c2心肌细胞为模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌细胞中TRPV1 mnRNA的表达水平;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测细胞中...     

可溶性重组人肿瘤坏死因子受体融合蛋白对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及其可能的机制

 目的　研究可溶性重组人肿瘤坏死因子受体融合蛋白 (rhu-TNFR-Fc)对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及其初步机制。方法　测非致炎侧继发性足肿胀,用ELISA法测血清中IL-1β ,TNF-α的水平;Griess法测上清NO的含量;流式细胞术检测T淋巴细胞亚群;L929细胞杀伤法、ELISA法检测rhu-TNFR-Fc对大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的影响。结果　rhu-TNFR- Fc(0.44,0.88,1.75mg·kg^-1)皮下给药对佐剂性关节炎(AA)大鼠的继发性足肿胀有显著的治疗作用,并呈现较明显的剂量依赖性,改善AA大鼠多发性关节炎病变症状 ;通过中和TNF-α对AA大鼠过高的血清IL-1β、细胞上清NO的产生有明显的抑制作用(P<0.01);但对CD4⁺T淋巴细胞与CD8⁺T淋巴细胞的比值无明显的影响。结论　rhu-TNFR-Fc有明显的抗炎作用,其抗炎作用可能与其中和TNF-α,并进一步使IL-1分泌及NO的生成减少有关。     

人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用

目的:探讨人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用。方法:通过基于细胞的肾脏保护试验,研究了发酵黑参(FBG)及其活性成分人参皂苷20(S)-Rg3对猪肾(LLC-PK1)细胞中顺铂(化疗药物)诱导的损伤的保护作用。结果:由顺铂诱导的细胞活力降低,再使用FBG提取物和人参皂苷20(S)-Rg3依赖剂量后明显恢复。用FBG提取物或人参皂苷20(S)-Rg3处理后会降低顺铂诱导升高与磷酸化c-Jun N-末端激酶(JNK),p53和裂解的半胱天冬酶-3升高的蛋白。通过用FBG和人参皂苷20(S)-Rg3的共同处理,由于顺铂的诱导导致凋亡LLC-PK1细胞升高的百分比显著降低。结论:人参皂苷20(s)-Rg3可改善LLC-PK1的细胞毒性,人参皂苷20(S)-RG3可能是通过阻断JNK-P53-caspase-3信号级联反应来介导这种作用的重要组成部分。     

天雄口服液影响小鼠免疫功能的实验研究

目的　观察天雄口服液对小鼠免疫器官、体液免疫功能和细胞免疫功能的影响。方法　将小鼠随机分为生理盐水组、还精煎 (阳性对照 )组和 3种剂量的天雄口服液给药组。灌胃后第 11天脱颈椎处死、解剖 ,并采用称重法、溶血素实验法、单向免疫扩散法、EA花环法和Yc花环法进行测定。结果　小鼠脾脏和胸腺质量增加 ;小鼠血清的IgM和IgG含量显著升高 ;腹腔巨嗜细胞的Fc受体和C3b受体活性显著提高 ;作用与还精煎口服液相类似。结论　天雄口服液可提高机体的免疫功能     

黄芪活性成分QST、AT对CHOml细胞M1受体及其偶联G—蛋白结合活性的影响

目的观察黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶G-蛋白结合活性的影响.方法以放射配基结合分析法检测CHOml细胞M1受体的结合特性,用[35S]GTPγS结合活性检测M1受体偶联的C-蛋白的结合活性,并计算偶联效率.结果QST对M1受体密度、[35S]GTPγS结合活性、偶联效率有上调作用(P＜0.01),而QT无作用(P＞0.05).结论QST对M1受体的偶联功能有上调作用.     

黄芪活性成分QST、QT对CHOnl细胞M1受体及其偶联G-蛋白结合活性的影响

目的:观察黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶G-蛋白结合活性的影响.方法:以放射配基结合分析法检测CHOml细胞M1受体的结合特性,用[35S]GTPγS结合活性检测M1受体偶联的C-蛋白的结合活性,并计算偶联效率.结果:QST对M1受体密度、[35S]GTPγS结合活性、偶联效率有上调作用(P＜0.01),而QT无作用(P＞0.05).结论:QST对M1受体的偶联功能有上调作用.