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1.
[摘要]
目的探讨去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)对人黑色素瘤A375细胞周期、ROS自由基及细胞凋亡的影响及其机制。
方法培养人A375黑素瘤细胞,分别采用10,20,40 μmol/L NCTD预处理,培养48 h后,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞周期的影响,采用免疫印迹法检测NCTD对人A375黑素瘤细胞蛋白Cyclin D1和P21表达的影响,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞ROS及凋亡水平的影响。
结果10,20,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于对照组,S期和G2期细胞比例低于对照组,20,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于10 μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于20 μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于20 μmol/L NCTD组(P<0.05)。40 μmol/L NCTD组处理人A375黑色素瘤细胞48 h后,细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A和CDK2低于对照组,P21蛋白高于对照组(P<0.05)。10,20,40 μmo/L NCTD组细胞内ROS水平高于对照组,20,40 μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于20 μmol/L NCTD组(P<0.05)。10,20,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于对照组,20,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于20 μmol/L NCTD组(P<0.05)。NAC组细胞凋亡率低于对照组,NCTD组和NAC+NCTD组细胞凋亡率高于对照组,NAC+NCTD组细胞凋亡率低于NCTD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论NCTD通过阻滞细胞G1周期、减少S期抑制人A375黑色素瘤细胞的增殖,通过诱导ROS水平升高诱导细胞凋亡。 相似文献
2.
免疫因素在特发性门脉高压症发病机制中的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨免疫因素在特发性门脉高压症(IPH)发病机制中的作用。方法:采用流式细胞术检测IPH和正常对照组外周血T淋巴细胞亚群和CD19+B细胞,IPH和肝硬化患者及正常对照组血清可溶性TNF α受体 II( sTNF α r II) 、可溶性血管细胞粘附分子 1(sVCAM 1)的水平及血管细胞粘附分子 1(VCAM 1)在肝脏中的表达。结果:与对照组相比,IPH组CD3+、CD4+、CD8+明显降低(P<0.05), CD4+/CD8+明显升高(P<0.05),CD19+无差别(P>0.05);IPH组血清中sTNF α r II 和sVCAM 1水平明显高于对照组[(38.84±8.38)ng/ml vs (28.14±7.37 )ng/ml;(44.06±17.28)ng/ml vs (32.18±8.72)ng/ml,P均<0.05],与肝硬化组无明显差异[(38.84±8.38)ng/ml vs(36.33±11.06)ng/ml;(44.06±17.28)ng/ml vs(34.78±11.32)ng/ml,P均> 0.05];IPH组sTNF 和sVCAM 1水平呈正相关 (r=0.556, P<0.05);VCAM 1在IPH和肝硬化患者的肝脏中均有明显的表达,但IPH患者在汇管区周围表达明显,而肝硬化患者表达散在,正常肝脏则几乎无表达。结论:IPH患者细胞免疫降低,在IPH发生中VCAM 1介导了炎症细胞对肝内门脉损伤,最终导致纤维化,sTNF α r II可独立也可通过上调VCAM 1表达起作用。 相似文献
3.
目的:通过观察蛋白酶体抑制剂Lactacystin(LAC)对C6细胞增殖率的影响,探讨LAC引起胶质瘤细胞增殖率发生改变的机制,为临床上治疗胶质瘤提供理论依据。方法:体外培养大鼠胶质瘤C6细胞,选择处于对数生长期的细胞,实验分为对照组、LAC 2.5 μmol/L组、LAC 5.0 μmol/L组及LAC 10.0 μmol/L组,MTT法检测各组C6细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电势,RT-PCR方法检测各组细胞中Bax和bcl-2 mRNA表达,Western blotting方法检测各组细胞中Bax、bcl-2和P65 蛋白表达。结果:与对照组比较,LAC 5.0 μmol/L组和LAC 10.0 μmol/L组细胞增殖率、线粒体膜电势和P65蛋白表达水平降低(P<0.05),而细胞凋亡率、Bax/bcl-2 mRNA和蛋白的比值增加(P<0.05)。结论:LAC通过诱导细胞凋亡抑制C6细胞的增殖率,其引起凋亡的方式可能是通过线粒体途径,此外在这个过程中NF-κB信号通路也可能影响细胞的增殖率。 相似文献
4.
目的:探讨瑞舒伐他汀(Rosu)对同型半胱氨酸(Hcy)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响。方法原代培养HUVECs,2~3代进行试验,MTT实验设立空白对照组、Hcy(0.2~1.2 mmol/L)组、Rosu(0.5、1.0、2.0和5.0 mmol/L)组,实验组:Rosu 1.0 mmol/L和2.0 mmol/L进行预处理细胞,2 h后加入0.6 mmol/L浓度的Hcy损伤HUVECs,Real time PCR法测定VCAM-1 mRNA表达,Western blot法测定细胞VCAM-1蛋白含量;Rosu 2.0 mmol/L+甲羟戊酸( Mev )100μmol/L预处理2 h后再加入0.6 mmol/L浓度的Hcy以了解Mev对VCAM-1蛋白表达的影响。结果 Hcy组VCAM-1蛋白和mRNA表达较空白对照组明显增强(P<0.05);Rosu组VCAM-1蛋白和mRNA表达较Hcy组明显减弱(P<0.05),且Mev不能阻断Rosu的这种作用。结论 Rosu可通过抑制HUVECs表达VCAM-1产生抗炎作用,且这种作用独立于其调脂作用。 相似文献
5.
目的 探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD) 对血管紧张素II(AngII)诱导的大鼠心肌成纤维细胞I型胶原mRNA表达的作用。方法 提取新生Wistar大乳鼠原代心肌成纤维细胞,传代培养,采用2~4代细胞。实验分为空白对照组,AngII (0.01、 0.1、 1μmol/L)组,NAD(250μmol/L)组, AngII(1μmol/L)+ NAD (250μmol/L )组,FAM组,Sirt1-siRNA+AngII(1μmol/L)组,Sirt1-siRNA 组,Sirt1-siRNA+ NAD(250μmol/L)组,Sirt1-siRNA+Ang II(1mol/L)+NAD(250μmol/L)组。刺激24h后,提取总RNA, Real time RT-PCR法分别检测SIRT1和I型胶原mRNA的表达。结果 心肌成纤维细胞I型胶原mRNA的表达随着AngⅡ浓度升高明显增加(P<0.05),呈浓度依赖性。与空白对照组比较,NAD(250μmol/L)组SIRT1 mRNA表达增高(P<0.05)。与AngⅡ(1μmol/L)组比较,AngII (1μmol/L)+ NAD(250μmol/L )组I型胶原mRNA的表达明显减少(P<0.01)。相对于FAM组,Sirt1-siRNA转染后各组SIRT1 mRNA的表达减少(P<0.05),而心肌成纤维细胞I型胶原mRNA表达增多(P<0.05)。结论 NAD可以抑制心肌成纤维细胞 I型胶原mRNA的表达,SIRT1影响I型胶原mRNA的表达,它们对Ang II诱导的心肌纤维化有保护作用。 相似文献
6.
目的 探索二苯乙烯苷对HepG2 细胞胆固醇含量的影响及其作用机制。方法 将细胞随机分为
正常组、模型组(ox-LDL 50 mg/L)、A 组(ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷250μmol/L)、B 组(ox-LDL
50 mg/L+ 二苯乙烯苷188μmol/L)、C 组(ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷125μmol/L)及D 组(ox-LDL
50 mg/L+ 二苯乙烯苷62.5μmol/L)。细胞处理48 h 后,采用油红O 脂肪染色法观察、胆固醇测定试剂盒测
定各组胆固醇的含量并用逆转录聚合酶链反应检测肝癌HepG2 细胞ABCG1、ABCA1 及SR-BI 的表达水平。
结果 正常组、A、B、C 和D 组细胞内总胆固醇(TC)、细胞内游离胆固醇(FC)含量均低于模型组(P <0.05),
同时A、B、C 和D 组上清TC 和FC 含量较正常组升高(P <0.05)。二苯乙烯苷能够降低HepG2 细胞内
胆固醇含量,增加胆固醇外流率(P <0.05),其中二苯乙烯苷浓度为125μmol/L 时达最高值。模型组细胞
ABCA1 mRNA 表达水平较正常组下降(P <0.05)。A、B、C 和D 组ABCA1、ABCG1 和SR-BI mRNA 表
达水平较模型组上升(P <0.05)。结论 二苯乙烯苷能够降低HepG2 细胞胆固醇的含量,其机制可能是通过
上调ABCA1、ABCG1 和SR-BI 的表达水平而增加胆固醇外流。 相似文献
7.
目的: 观察硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对幽门螺杆菌(H. pylori)感染的GES-1细胞CSE,NF-κB及IL-8 mRNA表达及其形态学的影响,探讨其对H. pylori所致胃黏膜细胞炎症的作用及机制。方法: 将GES-1细胞培养24 h后分为对照组(不加H. pylori及NaHS)、H. pylori组、NaHS组(又分为4个亚组,分别加入 50,100,200或400 μmol/L NaHS)和H. pylori+NaHS组(又分为4个亚组,分别加入H. pylori与50,100,200或400 μmol/L NaHS),每组分别培养3,6,及12 h,用RT-PCR法检测各组GES-1细胞CSE,NF-κB 及IL-8 mRNA表达,并分析其相关性。结果: H. pylori组CSE,NF-κB及IL-8 mRNA表达均较对照组增加(P<0.05),200 μmol/L NaHS组和400 μmol/L NaHS组CSE表达较对照组降低(P<0.05);而NaHS各组NF-κB和IL-8 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);NaHS各组、H. pylori+200 μmol/L NaHS组及H. pylori+400 μmol/L NaHS组CSE,NF-κB及IL-8 mRNA表达均较H. pylori组降低(P<0.05);H. pylori组、H. pylori+200 μmol/L NaHS组及H. pylori+400 μmol/L NaHS组CSE,NF-κB及IL-8 mRNA表达之间均呈正相关(P<0.05)。结论: H. pylori诱导GES-1细胞NF-κB和IL-8 mRNA表达,并上调CSE mRNA表达;200和400 μmol/L NaHS能抑制H. pylori感染诱导的GES-1细胞NF-κB和IL-8 mRNA表达,改善H. pylori感染所致的细胞形态学变化,对细胞起保护作用。 相似文献
8.
目的: 验证同型半胱氨酸(Hcy)是否具有促进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)去分化的作用。 方法: SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4~7代细胞用于实验。VSMCs分为对照组、100 μmol/L Hcy干预组、500 μmol/L Hcy干预组、1 000 μmol/L Hcy干预组共4组。MTT法测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法检测各组VSMCs的迁移情况;ICC法检测各组VSMCs的细胞形态;Western blot法检测各组VSMCs中SM-actin、SM-MHC、Calponin、骨桥蛋白(OPN)的表达情况。 结果: 相比于对照组,Hcy组VSMCs增殖迁移增加;细胞形态变圆;SM-MCH和Calponin表达减少( P<0.01〉;OPN表达增加( P<0.01),Hcy的这一作用与浓度呈正相关。 结论:Hcy可以促进VSMCs去分化,这可能是其促进VSMCs增殖和迁移的机制之一。 相似文献
9.
目的: 探讨IL 35在2型糖尿病(T2DM)合并颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis,CAS)病变中的作用。方法: 选取70例T2DM患者,其中单纯T2DM 36例,T2DM合并CAS 34例,同时选择年龄、体重指数(BMI)、性别匹配的健康人群35例作为对照组。实时定量PCR检测人外周血单个核细胞(PBMCs)P35 mRNA和EBI3 mRNA表达水平;通过液相芯片仪检测各组患者血清IL 35及可溶性血管细胞黏附分子1(sVCAM 1)浓度。体外建立高糖刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)模型,设低糖处理组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖处理组(25 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、IL 35+高糖组(50 ng/mL IL 35+25 mmol/L葡萄糖),流式细胞仪检测各组HUVECs凋亡率和VCAM 1阳性率。结果: 与对照组\[9.37(3.72~14.55)ng/mL\]相比,单纯T2DM组\[5.01(2.37~9.87)ng/mL\]和T2DM合并CAS组\[3.92(2.15~6.36)ng/mL\]患者血清IL 35浓度明显降低,且T2DM合并CAS组降低更明显(P<0.05);与对照组\[687.4(664.2~832.6)\]相比,单纯T2DM组\[785.2(754.5~938.1)\]及T2DM合并CAS患者\[932.4(892.6~1 028.3)\]血清sVCAM 1浓度明显升高,且T2DM合并CAS患者sVCAM 1浓度升高更显著。与对照组相比,单纯T2DM组和T2DM合并CAS组外周血PBMCs 中P35 mRNA表达明显下降(P<0.05)。体外培养HUVECs后,高糖组刺激24 h及48 h后HUVECs凋亡率比低糖组明显增加(P<0.05),IL 35+高糖组刺激48 h后HUVECs凋亡率比高糖组明显降低(P<0.05);高糖组刺激48 h后HUVECs VCAM 1阳性率比低糖组明显升高(P<0.05),IL 35+高糖组HUVECs VCAM 1阳性率比高糖组明显下降(P<0.05)。 结论: 体内外实验证实IL 35在高血糖相关的内皮细胞损伤中可能发挥保护作用。 相似文献
10.
目的探讨柴胡皂苷D对胃癌SGC-7901细胞生长、迁移抑制作用和Norrin、Livin水平的变化。方法实验分为对照组(正常培养SGC-7901细胞)、低剂量组(SGC-7901细胞+5滋mol/L柴胡皂苷D)、中剂量组(SGC-7901细胞+10滋mol/L柴胡皂苷D)和高剂量组(SGC-7901细胞+20滋mol/L柴胡皂苷D)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞24、48、72h细胞增殖情况;采用TUNEL法检测各组细胞凋亡情况;采用Transwell检测各组细胞迁移能力;采用real-timePCR对各组细胞中Norrin及Livin的表达进行检测;采用Westernblot检测各组细胞Norrin、Livin、CDC25A、cyclinA2、p21和cyclinD1表达。结果与对照组比较,低剂量组对SGC-7901细胞生长、凋亡和Norrin、Livin、p21及cyclinD1的表达未产生明显影响(P>0.05),但可减低SGC-7901细胞CDC25A、cyclinA2表达(P<0.05);中、高剂量组SGC-7901细胞生长抑制作用明显,荧光TUNEL显示凋亡率高于对照组(P<0.05),Norrin及LivinmRNA表达减少(P<0.05),CDC25A及cyclinA2表达具有抑制作用(P<0.05),且具有剂量依赖性,对p21及cyclinD1无明显影响(P>0.05)。结论柴胡皂苷D可能通过Norrin、Livin的表达、干扰肿瘤细胞生长周期、介导肿瘤细胞凋亡等作用,抑制人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移能力。 相似文献
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背景 三苯氧胺(TAM)是乳腺癌内分泌治疗的主要药物,当前乳腺癌耐药TAM(TAM-R)细胞治疗困难,迫切需要探索新的治疗方法。薯蓣皂苷(Dio)对肿瘤有一定的抑制作用,设想研究Dio对乳腺癌TAM-R细胞生长的影响,期望为治疗提供参考。目的 研究Dio对乳腺癌TAM-R细胞生长的影响。方法 2017年1月-2018年6月,培养TAM-R细胞,分别针对细胞生长与凋亡,自噬、凋亡、代谢标志物以及自噬情况等多项指标进行相应实验。具体为细胞计数器测定六组(对照组、Dio 0.625 μg/ml组、Dio 0.800 μg/ml组、Dio 1.000 μg/ml组、Dio 1.250 μg/ml组、Dio 2.500 μg/ml组)不同剂量的Dio处理TAM-R细胞5 d细胞生长情况;测定六组(对照组、TAM 10-7 mol/L组、Dio 1 μg/ml组、Dio 2 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 1 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 2 μg/ml组)不同剂量TAM和Dio处理TAM-R细胞3 d细胞凋亡情况;Western blotting法检测四组(对照组、Dio 0.80 μg/ml组、Dio 1.25 μg/ml组、Dio 2.50 μg/ml组)不同剂量的Dio对TAM-R自噬标志物LC3、Beclin-1,凋亡标志物Bax、Bim以及pAMPK、p53的影响;采用荧光显微术观察六组(对照组、Rapamycin 20 nmol/L组、Chloroquine 10 μmol/L组、TAM 10-7 mol/L组、Dio 1 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 1 μg/ml组)Dio及其抑制剂、诱导剂处理的TAM-R细胞的自噬情况。结果 六组TAM-R细胞数量比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中各Dio浓度组TAM-R细胞数量低于对照组(P<0.05)。六组TAM-R细胞凋亡数量比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中TAM 10-7 mol/L组、Dio 1 μg/ml组、Dio 2 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 1 μg/ml组、TAM 10-7 mol/L+Dio 2 μg/ml组TAM-R细胞凋亡数量高于对照组,TAM 10-7 mol/L+Dio 2 μg/ml组TAM-R细胞凋亡数量高于Dio 2 μg/ml组(P<0.05)。各组LC3、Beclin-1、Bax、Bim、pAMPK、p53表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。荧光显微术检测显示,TAM 10-7 mol/L+Dio 1 μg/ml组自噬活动高于Dio 1 μg/ml组和TAM 10-7 mol/L组。结论 Dio对TAM-R细胞生长有抑制作用,且能增强TAM对TAM-R细胞的生长抑制和凋亡作用,对自噬、凋亡标志物蛋白均有影响。 相似文献
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背景 恶性肿瘤的发病率不断上升,放疗所致的正常器官的辐射损伤难以避免,精胺是具有极高生物活性的一种多胺类物质,研究证明外源性精胺具有一定的活性氧清除剂作用,而心脏作为常见的辐射损伤器官,外源性精胺对辐射损伤的心肌细胞的影响研究较少。目的 探讨精胺对辐射所致氧化损伤H9c2心肌细胞的影响。方法 2018年12月至2020年12月,取对数生长期的H9c2心肌细胞加入精胺,分为100 μmol/L组、200 μmol/L组、400 μmol/L组,空白对照组为加等量不含药物的培养液,采用CCK8溶液计算各组细胞培养12、24、48 h的存活率。根据前期筛选结果将体外培养的H9c2心肌细胞分为空白对照组(单纯DMEM培养基)、单纯辐射组(单纯X线照射)、辐射+100 μmol/L精胺组及辐射+200 μmol/L精胺组;各组用医用直线加速器进行照射,X线照射后继续培养0、12、24、48 h,计算细胞凋亡率。使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光显微镜拍摄各组细胞照射后状态,丙二醛(MDA)试剂盒检测各组细胞MDA水平,总超氧化物歧化酶(T-SOD)试剂盒检测各组细胞的SOD活性。结果 100 μmol/L组、200 μmol/L组、400 μmol/L组24 h细胞存活率高于12、48 h(P<0.05)。处理时间12 h:空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、200 μmol/L组及400 μmol/L组(P<0.05);100 μmol/L组、200 μmol/L组细胞存活率高于400 μmol/L组(P<0.05)。处理时间24 h:空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、400 μmol/L组(P<0.05);100 μmol/L组细胞存活率低于200 μmol/L组,高于400 μmol/L组(P<0.05);200 μmol/L细胞存活率高于400 μmol/L组(P<0.05)。处理时间48 h:空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、200 μmol/L组及400 μmol/L组(P<0.05);100 μmol/L组细胞存活率低于200 μmol/L组,高于400 μmol/L组(P<0.05);200 μmol/L组细胞存活率高于400 μmol/L组(P<0.05)。处理时间0 h:辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组细胞凋亡率高于空白对照组(P<0.05);辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组细胞凋亡率高于单纯辐射组(P<0.05);辐射+200 μmol/L精胺组细胞凋亡率低于辐射+100 μmol/L精胺组(P<0.05)。处理时间为12、24、48 h细胞凋亡情况同处理时间为0 h。空白对照组0 h细胞凋亡率低于12、48 h(P<0.05),12 h细胞凋亡率低于24 h(P<0.05),24 h细胞凋亡率低于48 h(P<0.05)。辐射+200 μmol/L精胺组24 h细胞凋亡率低于0 h、12 h和48 h(P<0.05),12 h细胞凋亡率低于0、48 h(P<0.05),24 h细胞凋亡率低于48 h(P<0.05)。辐射+100 μmol/L精胺组24 h细胞凋亡率低于0、48 h(P<0.05),12 h细胞凋亡率低于0、48 h(P<0.05)。单纯辐射组0 h细胞凋亡率低于12、24、48 h(P<0.05);12 h细胞凋亡率低于24、48 h(P<0.05);24 h细胞凋亡率比48 h低(P<0.05)。处理时间为12 h时:空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);单纯辐射组比辐射+100 μmol/L精胺组细胞及辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性高,比辐射+100 μmol/L精胺组细胞MDA水平低(P<0.05);辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高(P<0.05)。处理时间为24 h时:空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);单纯辐射组比辐射+100 μmol/L精胺组及辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低,比辐射+200 μmol/L精胺组细胞MDA水平高(P<0.05);辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高(P<0.05)。处理时间为48 h时:空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);单纯辐射组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高(P<0.05);辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高(P<0.05)。给予X线照射24 h后,空白对照组H9c2心肌细胞形态呈长梭形,细胞核形态完整,染色均匀;辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组的H9c2心肌细胞出现不同程度的变化,如细胞形态变圆、细胞核碎裂、染色不均匀等,其中200 μmol/L精胺组的细胞形态最接近空白对照组细胞,变化程度较轻。结论 精胺对辐射导致的心肌细胞的氧化损伤具有保护作用,且其保护作用与浓度及时间有关,在一定浓度范围内高浓度精胺的保护能力更强,各浓度精胺处理24 h时的细胞保护能力最强。 相似文献
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实时定量PCR检测氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721中CHOP和GRP78 mRNA表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察氯化镉(CdCl2)处理人肝癌SMMC-7721细胞系中CHOP和GRP78 mRNA表达的改变,在mRNA水平探讨氯化镉对肝癌细胞内质网应激的影响。方法:以人肝癌细胞株SMMC-7721细胞为研究模型,细胞暴露于氯化镉浓度为0、5、10、20、30及40 μmol?L-1的培养液中24 h,0 μmol/L组为对照组。采用SYBR荧光实时定量PCR法检测CHOP和GRP78 mRNA表达,相对定量采用比较CT值法。结果:随着氯化镉剂量的增加,CHOP mRNA表达水平有逐渐增多的趋势,各组mRNA表达均高于对照组,其中10、20和40 μmol/L组与对照组比较差异有显著性(P<0.05);GRP78 mRNA表达有逐渐增多的趋势,各组mRNA表达均高于对照组,其中5、20和40 μmol/L组与对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:氯化镉可诱导人肝癌SMMC-7721细胞中CHOP和GRP78 mRNA表达增多。 相似文献
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目的 探讨重组人红细胞生成素(rhEPO)对高糖诱导的正常人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化过程中炎性因子的变化及其可能机制。方法 体外培养HK-2细胞,采用随机数字表法分为空白对照组(未加任何刺激物)、高糖诱导组(高糖终浓度为30 mmol/L)、甘露醇对照组(甘露醇为24.5 mmol/L)、rhEPO对照组(rhEPO终浓度为20 U/ml)、不同浓度rhEPO干预组(rhEPO终浓度分别为5、10、20 U/ml+高糖)及Rho激酶抑制剂(Y27632)组(Y27632终浓度为30 μmol/L,加入Y27632 30 min后加高糖,高糖终浓度为30 mmol/L),以上各组均培养24 h。采用RT-PCR检测各组细胞RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平;采用细胞免疫荧光法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测人纤维连接蛋白(FN)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达水平。结果 各组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中高糖诱导组与5 U/ml rhEPO组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达均高于空白对照组,10 U/ml rhEPO组、20 U/ml rhEPO组及Rho激酶抑制剂组RhoA、ROCK1 mRNA表达均低于空白对照组(P<0.05);不同浓度rhEPO组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达均低于高糖诱导组(P<0.05),Rho激酶抑制剂组ROCK1 mRNA表达低于高糖诱导组(P<0.05);10 U/ml rhEPO组与20 U/ml rhEPO组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达均低于5 U/ml rhEPO组(P<0.05);20 U/ml rhEPO组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达均低于10 U/ml rhEPO组(P<0.05)。各组α-SMA、E-cadherin、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中高糖诱导组、不同浓度rhEPO组、Rho激酶抑制剂组α-SMA、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达均高于空白对照组,E-cadherin均低于空白对照组(P<0.05);不同浓度rhEPO组、Rho激酶抑制剂组α-SMA、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达均低于高糖诱导组,E-cadherin均高于高糖诱导组(P<0.05);10 U/ml rhEPO组、20 U/ml rhEPO组α-SMA、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达均低于5 U/ml rhEPO组,E-cadherin均高于5 U/ml rhEPO组(P<0.05);Rho激酶抑制剂组α-SMA、FN蛋白表达均低于5 U/ml rhEPO组,E-cadherin均高于5 U/ml rhEPO组(P<0.05);20 U/ml rhEPO组α-SMA、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达均低于10 U/ml rhEPO组,E-cadherin均高于10 U/ml rhEPO组(P<0.05);Rho激酶抑制剂组α-SMA、E-cadherin、FN蛋白表达均低于10 U/ml rhEPO组(P<0.05)。Pearson直线相关结果分析,高糖诱导组、不同浓度rhEPO干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.885、0.901、0.886、0.868,P<0.05)。结论 rhEPO可抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,rhEPO还可以通过减少炎性因子的产生,减轻炎性反应,从而延缓糖尿病肾病(DN)的进展,延缓肾间质纤维化,其机制可能与RhoA/ROCK信号通路有关。 相似文献
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目的 探讨细胞外pH值的变化及其波动对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的作用及机制。方法 2014年11月—2015年3月,选取8~10周龄健康雄性SD大鼠6只。采用简单随机抽样法选取2只大鼠,体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs。采用随机数字表法将VSMCs分为pH 7.4组和高磷组,高磷组又分为pH 6.8+磷组、pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组和pH 6.8/7.7+磷组。pH 7.4组采用含10% 胎牛血清(FBS)的DMEM培养基培养。高磷组采用高磷培养基(10 mmol/L β-甘油磷酸)培养,并根据数字酸度计的读取值酌情加入1 mol/L HCl或7.4% NaHCO3调整pH值;pH 6.8/7.7+磷组第1天给予pH 7.7刺激、第2天给予pH 6.8刺激。将剩余4只大鼠按照上述方法培养,重复2次。采用免疫组织化学(SP法)进行细胞鉴定。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)mRNA相对表达水平及B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)mRNA/Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA。采流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 倒置相差显微镜下可见:大鼠胸主动脉组织块贴壁3~4 d后细胞从组织块边缘爬出,细胞为长梭形,呈束状排列;5~6 d成同心圆状细胞团,形成明显的细胞生长晕,并围绕组织块边缘呈束状、放射状延伸;6~7 d后细胞融合成片,细胞体梭形或不规则三角形,细胞质向外伸出2~3个长短不等的突起。免疫组织化学检测可见:细胞质表达强阳性。pH 6.8+磷组Caspase-3 mRNA表达水平低于pH 7.4组,pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组Caspase-3 mRNA表达水平高于pH 7.4组(P<0.05);pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组、pH 6.8/7.7+磷组Caspase-3 mRNA表达水平高于pH 6.8+磷组(P<0.05);pH 7.7+磷组Caspase-3 mRNA表达水平高于pH 7.4+磷组,pH 6.8/7.7+磷组Caspase-3 mRNA表达水平低于pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组(P<0.05)。pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组、pH 6.8/7.7+磷组Bcl-2 mRNA/Bax mRNA分别小于pH 7.4组、pH 6.8+磷组(P<0.05);pH 7.7+磷组Bcl-2 mRNA/Bax mRNA小于pH 7.4+磷组(P<0.05);pH 6.8/7.7+磷组Bcl-2 mRNA/Bax mRNA大于pH 7.7+磷组。pH 6.8+磷组、pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组、pH 6.8/7.7+磷组细胞凋亡率大于pH 7.4组(P<0.05);pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组、pH 6.8/7.7+磷组细胞凋亡率大于pH 6.8+磷组(P<0.05);pH 7.7+磷组细胞凋亡率大于pH 7.4+磷组,pH 6.8/7.7+磷组细胞凋亡率小于pH 7.4+磷组(P<0.05);pH 6.8/7.7+磷组细胞凋亡率小于pH 7.7+磷组(P<0.05)。结论 细胞外酸性环境能够抑制高磷培养的大鼠VSMCs凋亡,而细胞外碱性环境能够促进其凋亡。其具体机制可能是影响了Bcl-2、Bax的表达水平进而影响了Caspase-3的表达水平,从而影响了细胞凋亡。 相似文献
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目的:探讨左旋含羞草碱对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞凋亡及DNA损伤相关蛋白表达的影响。方法:观察左旋含羞草碱作用不同时间后FaDu细胞的生长状况;以流式细胞仪检测左旋含羞草碱与枸橼酸铁铵对FaDu细胞凋亡的影响;CCK-8法检测左旋含羞草碱与枸橼酸铁铵作用后FaDu细胞的增殖活性;Western blot法检测左旋含羞草碱作用于FaDu细胞后p-Histone-H2AX、p-ATR、p-ATM、p-mTOR等DNA损伤相关蛋白的表达。结果:不同浓度的左旋含羞草碱作用于咽鳞状细胞癌FaDu细胞不同时间后细胞的生长受到抑制;100 μmol/L枸橼酸铁铵对FaDu细胞的凋亡具有抑制作用,缺铁或铁过量对肿瘤细胞凋亡具有促进作用;与对照组比,左旋含羞草碱组(200 μmol/L)FaDu细胞凋亡最显著,左旋含羞草碱200 μmol/L+枸橼酸铁铵50 μmol/L组和左旋含羞草碱200 μmol/L+枸橼酸铁铵100 μmol/L组FaDu细胞凋亡差异无统计学意义,枸橼酸铁铵组(50、100 μmol/L)FaDu细胞凋亡明显减低;对FaDu细胞增殖活性影响由强到弱依次为左旋含羞草碱组(200 μmol/L)、左旋含羞草碱200 μmol/L+枸橼酸铁铵50 μmol/L组、左旋含羞草碱200 μmol/L+枸橼酸铁铵100 μmol/L组,与对照组比,差异有统计学意义(P<0.05);随着左旋含羞草碱浓度的增加,FaDu细胞p-ATR蛋白的表达降低,p-Histone-H2AX、p-ATM、p-mTOR等蛋白的表达增强。结论:左旋含羞草碱可能通过干扰FaDu细胞铁代谢,调控AKT/mTOR等信号通路,引起细胞DNA双链损伤,导致肿瘤细胞凋亡。 相似文献
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目的:探讨姬松茸多糖(ABP)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用及其可能的机制。方法:HUVECs分为Control组、LPS组(终浓度为1 μg/mL LPS构建细胞损伤模型)、LPS+ABP组(LPS基础上分别用10、20、50 μg/mL ABP进行干预),CCK-8法检测ABP对HUVECs的细胞毒性作用,ELISA法、Western blot及RT-PCR检测各组炎症因子及细胞黏附分子的表达,Western blot和免疫荧光法检测各组NF-κB信号通路相关蛋白表达及核转位。结果:LPS组TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1蛋白及p-p65/p65、p-IκB/IκB蛋白相对表达量较Control组显著升高(P <0.01);LPS+ABP组随药物浓度升高,TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1蛋白及p-p65/p65、p-IκB/IκB蛋白表达较LPS组逐渐降低(P <0.05)。LPS组TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1 mRNA较Control组显著升高(P <0.01);LPS+ABP组随药物浓度升高,TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达较LPS组逐渐降低(P <0.05)。结论:ABP可以通过抑制LPS诱导的炎症因子和细胞黏附分子的表达来减轻HUVECs的损伤,其机制可能与抑制细胞中NF-κB信号通路的激活有关。 相似文献
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目的 探讨镁离子对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化相关因子表达水平的影响。方法 选择5周龄健康雄性SD大鼠6只。以组织贴壁法进行原代VSMCs培养,至3~5代时用于细胞实验。将VSMCs采用随机数字表法分为正常对照组、高磷组(加入10 mmol/L β-甘油磷酸)、镁干预组〔加入10 mmol/L β-甘油磷酸+3 mmol/L硫酸镁(MgSO4)〕、2-氨基乙氧基二苯基硼酸(2-APB)干预组(10 mmol/L β-甘油磷酸+3 mmol/L MgSO4+10-4 μmol/L 2-APB)。采用邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞培养14 d后钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞培养14 d后碱性磷酸酶(ALP)活性,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测0、3、6、10、14 d时细胞内基质G蛋白(MGP)mRNA和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达水平。结果 细胞培养14 d后,4组钙水平比较,差异有统计学意义(F=409.800,P<0.05);高磷组、2-APB干预组钙水平高于正常对照组和镁干预组 (P<0.05)。4组ALP活性比较,差异有统计学意义(F=490.901,P<0.05);高磷组、2-APB干预组ALP活性高于正常对照组和镁干预组 (P<0.05)。培养14 d后,4组MGP mRNA和OPN mRNA的表达水平比较,差异有统计学意义(F=1 279.905、1 157.247,P<0.05);镁干预组MGP mRNA和OPN mRNA的表达水平高于高磷组及2-APB干预组 (P<0.05)。动态观察MGP mRNA和OPN mRNA的表达变化,结果显示在培养第3天时,高磷组MGP mRNA和OPN mRNA表达水平均降低(P<0.05),并随着时间的延长呈下降趋势|镁干预组MGP mRNA和OPN mRNA表达水平均升高(P<0.05),并随着时间的延长呈上升趋势。结论 高浓度镁离子在抑制VSMCs钙化过程中可上调MGP及OPN的表达,并呈一定时间依赖性,为临床进一步研究提供了参考依据。 相似文献
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目的 探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞凋亡及Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录启动因子3(STAT3)信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组(不做干预)、LPS组(1 μg/mL LPS)和LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷组(1 μg/mL LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷);酶联免疫吸附试验(ELISA)和活细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]表达水平和细胞活力,筛选出最适浓度黄芩苷后,再次分组:对照组、LPS组、LPS+10 μmol/L黄芩苷组、LPS+AG490组、LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组和LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组。用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷、Hoechst33258染色法、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法分别检测细胞增殖、凋亡、mRNA[细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)]表达及相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组细胞炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达水平显著升高,24和48 h细胞活力显著降低(P<0.05);与LPS组相比,LPS+10、20和40μmol/L黄芩苷组炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α显著降低(P<0.05),干预24 h LPS+10 μmol/L黄芩苷组细胞活力显著升高(P<0.05),选择干预24 h的LPS+10 μmol/L黄芩苷组进一步实验。与对照组相比,LPS组细胞增殖率、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA及蛋白表达、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+10 μmol/L黄芩苷组和LPS+AG490组显著逆转了上述指标的变化(P<0.05);与LPS+10 μmol/L黄芩苷组相比,加入JAK2/STAT3通路抑制剂后,上述指标变化更为显著(P<0.05),LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组则与LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组结果相反(P<0.05)。结论 黄芩苷可抑制LPS诱导的大鼠心肌H9C2细胞的凋亡及炎症,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3通路的信号转导相关 相似文献
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目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法 将体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为4组:对照组,AngⅡ组(0.1、1.0、10.0 μmol/L),EPO组(1、10、100 U/L),AngⅡ+EPO组(EPO 1、10、100 U/L预处理1 h后加AngⅡ 1.0 μmol/L)。各组处理0、24、48 h时,CCK-8法检测系膜细胞增殖情况,免疫印迹法检测系膜细胞ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平,ELISA法检测系膜细胞培养上清液中ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白水平。结果 单独给予AngⅡ或EPO均可刺激系膜细胞增殖,AngⅡ组亚组和EPO组亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平均高于对照组,且48 h时高于24 h时,24 h时高于0 h时,差异均有统计学意义(P<0.05);单独给予AngⅡ或EPO均可促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、Col Ⅳ和FN,除EPO 1 U/L亚组Col Ⅰ蛋白表达水平与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)外,AngⅡ组亚组和EPO组其他亚组ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 1 U/L亚组比较,AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 10 U/L亚组和AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 100 U/L亚组在24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05),但与对照组及同浓度单纯EPO亚组比较,AngⅡ1.0 μmol/L+EPO组各亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Ang Ⅱ能刺激系膜细胞增殖,促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、Col Ⅳ和FN,EPO亦有一定程度类似作用,但两者同时存在时,EPO可拮抗AngⅡ诱导的系膜细胞增殖及ColⅠ、Col Ⅳ和FN的合成及分泌,提示EPO除可纠正肾性贫血外,可能对AngⅡ诱导的肾小球硬化具有抑制作用而保护肾功能。 相似文献