PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对胰腺癌PANC-1细胞VEGF表达的影响

目的:探讨PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对人胰腺癌PANC-1血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:抑制剂LY294002和PD98095分别处理人胰腺癌PANC-1细胞,Western blotting检测细胞VEGF蛋白表达。结果:分析表明LY294002和PD98095处理后的PANC-1细胞的磷酸化AKT、磷酸化ERK1/2及VEGF蛋白表达水平均明显低于对照组VEGF(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2细胞信号通路能够下调VEGF蛋白表达,进而抑制肿瘤新生血管的生成及浸润转移能力。     

miR-431-5p通过调控AKT1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡研究

目的研究miR-431-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测人正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞CFPAC-1和PANC-1中miR-431-5p表达水平。转染miR-431-5p模拟物至胰腺癌CFPAC-1细胞中过表达miR-431-5p后,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中Cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-431-5p与AKT1的调控关系。结果与hTERT-HPNE细胞相比,胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1中miR-431-5p表达量降低（P < 0.05）。过表达miR-431-5p后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数降低,凋亡率升高,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-431-5p在CFPAC-1细胞中靶向负调控AKT1表达。同时过表达miR-431-5p和AKT1后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数升高,凋亡率降低,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论miR-431-5p通过靶向抑制AKT1降低胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡,可能是胰腺癌的潜在分子治疗靶点。     

黄酒多酚对同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其机制研究

目的 验证黄酒多酚（YWPC）是否具有抑制同型半胱氨酸（Hcy）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的作用以及其产生作用的信号通路。方法 采用组织贴块法培育SD大鼠胸主动脉VSMCs,取第4～7代细胞用于实验。细胞分为5组,分别为对照组,Hcy组（500 μmol/L Hcy）,YWPC 1 mg/L组（500 μmol/L Hcy+1 mg/L YWPC）,YWPC 10 mg/L组（500 μmol/L Hcy+10 mg/L YWPC）,YWPC 100 mg/L组（500 μmol/L Hcy+100 mg/L YWPC）。采用MTT法检测VSMCs增殖情况;细胞划痕实验和Transwell法检测VSMCs迁移和侵袭情况;Western blotting法检测p-AKT/AKT表达情况。为验证YWPC是否经Pi3K/AKT通路发挥抑制VSMCs的增殖和迁移,分别加入LY-294002和胰岛素生长因子1（IGF-1）用来抑制和激活Pi3K/AKT通路,细胞被分为Hcy组,YWPC组,LY-294002＋Hcy组,LY-294002＋YWPC组;Hcy组,YWPC组,IGF-1＋Hcy组,IGF-1＋YWPC组,再分别采用上述方法检测VSMCs增殖、迁移和侵袭情况。结果 培养大鼠胸主动脉VSMCs,2周左右细胞融合可以传代,经SM-actin细胞免疫荧光鉴定及DAPI核染,确定细胞纯度在99%以上。24、48 h时,5组OD值比较,差异有统计学意义（F=52.575,P=0.016;F=83.756,P=0.014）;其中Hcy组OD值高于对照组和YWPC组,且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。24、48、72、96 h时,5组VSMCs迁移面积比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;其中Hcy组VSMCs迁移面积多于对照组（P＜0.05）;YWPC组VSMCs迁移面积低于Hcy组,且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。48 h时,5组迁移细胞数比较,差异有统计学意义（F=79.354,P=0.001）;其中Hcy组穿透Transwell膜细胞数高于对照组（P＜0.05）;YWPC组穿透Transwell膜细胞数低于Hcy组,且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。5组p-AKT/AKT比较,差异有统计学意义（F=56.723,P=0.002）;其中Hcy组p-AKT/AKT高于对照组（P＜0.05）;YWPC组p-AKT/AKT低于Hcy组,且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。加入LY-294002:24 h时,各组OD值、VSMCs迁移面积比较,差异有统计学意义（F=46.875,P=0.004;F=67.723,P=0.002）;其中LY-294002+Hcy组OD值、VSMCs迁移面积低于Hcy组（P＜0.05）;LY-294002+Hcy组与LY-294002+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。48 h时,各组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较,差异有统计学意义（F=52.904,P=0.003;F=87.904,P=0.001）;其中LY-294002+Hcy组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT低于Hcy组（P＜0.05）;LY-294002+Hcy组与LY-294002+YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。加入IGF-1:24 h时,各组OD值、VSMCs迁移面积比较,差异有统计学意义（F=48.052,P=0.007;F=63.085,P=0.002）;其中IGF-1+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积高于YWPC组（P＜0.05）;IGF-1+Hcy组与IGF-1+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。48 h时,各组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较,差异有统计学意义（F=55.941,P=0.008;F=65.011,P=0.005）;其中IGF-1＋YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT高于YWPC组（P＜0.05）;IGF-1+Hcy组与IGF-1+YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 YWPC通过抑制Pi3K/AKT信号通路抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移。     

敲除hsa_circRNA_102958调节胰腺癌PANC-1细胞增殖、氧化应激和线粒体功能

目的 探讨敲除hsa_circRNA_102958对胰腺癌PANC-1细胞增殖、氧化应激和线粒体功能的影响.方法 胰腺癌PANC-1细胞转染shRNA-NC和3种不同的circ_102958shRNA 序列,RT-PCR 检测 circRNA_102958表达,选取干扰效果最好的circ_102958 shRNAl进行后续实验,CCK8检测细胞增殖倍数;Hoechst染色观察细胞形态变化;总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒和DCFH-DA试剂盒分别测定SOD、MDA、活性氧(ROS)含量;流式检测JC-1红/绿荧光比值;Western blot检测 Bax/Bcl-2、cleaved cas9/cas9、cleaved cas3/cas3、c-Myc蛋白表达.结果 与Control组相比,干扰circRNA_102958表达抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖能力(P＜0.05),细胞形态趋于紊乱,凋亡细胞增多,MDA和ROS含量上调(P＜0.05),SOD活性降低(P＜0.05),JC-1红/绿荧光比值下调(P＜0.05),Bax/Bcl-2、cleaved cas9/cas9和 cleaved cas3/cas3蛋白表达增高(P＜0.05).结论 干扰circRNA_102958表达抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖能力和线粒体功能,促进细胞凋亡和氧化应激水平.     

去甲斑蝥素体外抑制人胰腺癌细胞株PANC-1增殖的实验研究

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)体外抑制人胰腺癌细胞株PANC-1的增殖作用.方法 以不同浓度NCTD处理PANC-1细胞24 h后,采用MTT法检测其对PANC-1细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258染色观察PANC-1细胞形态的变化;Western blot印迹法检测NF-κ B p65和AKT蛋白的表达.结果 NCTD可导致处理的细胞增殖速度减慢,且抑制效应随药物剂量的增加而增强,细胞出现典型凋亡形态学改变,NF-κB p65和AKT蛋白的表达均出现明显下降(P＜0.01).结论 去甲斑蝥素能明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能是通过下调NF-κB p65和AKT的表达来实现的.     

VCAN通过PI3K/AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖

目的 探讨多能蛋白聚糖（VCAN）通过PI3K/AKT 信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响。方法 利用Western Blot 和qRT-PCR 检测VCAN 在正常人乳腺细胞MCF-10A 和三株乳腺癌细胞中的表达水平。选取VCAN 高表达细胞株MDA-MB-231 为实验对象,实验分组为NC 组、siRNA1-VCAN 组和siRNA2-VCAN 组。采用MTT 法及克隆形成法检测转染后的乳腺癌细胞增殖变化。Western Blot 检测p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K 的蛋白相对表达水平。结果 与正常人乳腺细胞相比,VCAN 在乳腺癌细胞中的表达量显著上升（P＜0.05）。下调VCAN 表达量,MDA-MB-231 细胞的增殖显著被抑制（P＜0.05）。同时,下调VCAN 表达量,p-AKT、p-PI3K 蛋白水平显著下降（P＜0.05）。结论VCAN 在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中,可能通过PI3K/AKT 信号通路调控细胞增殖能力。     

富血小板血浆促进人子宫内膜间充质干细胞（EnMSCs）增殖的机制

目的探讨PRP促进EnMSCs增殖的机制,为EnMSCs的扩增及临床应用提供理论基础。方法将EnMSCs随机分为对照组、2%PRP组、2%PRP+LY294002组,CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪监测细胞周期及Western Blot和ELISA检测细胞中p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR及p-mTOR的蛋白表达。结果 (1) CCK-8结果显示:与对照组相比较,2%PRP组EnMSCs的增殖水平显著较高(P <0.05);与2%PRP组相比,2%PRP+LY294002组EnMSCs的增殖水平显著较低(P <0.05);(2)流式细胞仪分析细胞周期结果显示:2%PRP组G2/M期细胞比例显著高于对照组和2%PRP+LY294002组,G0/G1细胞比例明显低于对照组和2%PRP+LY294002组,差异均有统计学意义(P <0.05);(3) 2%PRP组EnMSCs中p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、 p-mTOR的蛋白表达明显高于对照组及2%PRP+LY294002组,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 EnMSCs的增...     

沉默赖氨酸乙酰基转移酶基因对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨赖氨酸乙酰基转移酶（Kat5）对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）信号通路的作用,阐明Kat5在甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡中的可能作用机制。方法：RT-PCR和Western blotting法检测甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1、K1细胞和甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平。将对数生长期甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和沉默Kat5组（si-Kat5组）。空白对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞不转染,阴性对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染阴性对照siRNA,si-Kat5组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染Kat5 siRNA。RT-PCR和Western blotting法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组TPC-1细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组TPC-1细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组TPC-1细胞凋亡率,Western blotting法检测各组TPC-1细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、P21、P53、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PI3K、磷酸化PI3K （p-PI3K）、AKT和磷酸化AKT （p-AKT）蛋白水平。结果：甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1和K1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平均高于甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞（P<0.05）。各组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、细胞克隆形成率、细胞凋亡率以及细胞中CDK2、P21、P53、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（P<0.05）;与空白对照组和阴性对照组比较,si-Kat5组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖活性降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中CDK2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低（P<0.05）,P21、P53和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：甲状腺乳头状癌细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平升高,沉默Kat5基因可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

PI3K/AKT/GSK-3β信号在脑缺血预处理中的作用及对海马细胞凋亡的影响

目的 研究脑缺血预处理(CIPC)中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路调节变化及对海马细胞凋亡的影响.方法 制作脑缺血、CIPC及LY294002干预模型.进行神经功能缺损评分;TTC染色计算脑梗死体积;TUNEL法检测海马细胞凋亡;Western blot检测p-PDK1、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的蛋白表达,RT-PCR检测GSK-3β的转录.结果 ①与脑缺血组比较,CIPC组在神经功能缺损评分、脑梗死体积、细胞凋亡、GSK-3β蛋白表达及转录水平均降低(均P＜0.05),但脑缺血组与LY294002组比较,上述各检测值差异均无统计学意义(均P＞0.05);②与脑缺血组比较,CIPC组的p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的蛋白表达均增高,LY294002组各蛋白表达较CIPC组均降低(均P＜0.05),LY294002组与脑缺血组比较各蛋白表达差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 脑缺血预处理降低GSK-3β的转录和蛋白表达,增加p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的表达,减少神经元凋亡.LY294002可抵消脑缺血预处理的保护作用.     

氧糖剥夺/再灌注损伤小胶质细胞通过上调胸腺素β4影响PI3K/AKT信号通路

探究小胶质细胞表达的胸腺素β4（Tβ4）与脑缺血/再灌注损伤（I/R）后PI3K/AKT通路的关系。方法 拟采用局灶脑I/R的模型［21只成年雄性SPF级SD大鼠分为假手术组（Sham组,6只）和模型组（I/R组,15只）］和使用BV2细胞建立氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型（分为对照组、OGD/R组、shRNA Tβ4+Control组、shRNA Tβ4+OGD/R组、Control shRNA+Control组、Control shRNA+OGD/R组）,配合基因干扰技术,使用免疫组化、免疫荧光等方法检测大脑皮层及BV2细胞Tβ4表达水平,蛋白质印迹检测PI3K/AKT通路蛋白水平的变化。结果 与Sham组相比,大鼠局灶脑I/R损伤后,大脑皮层Tβ4蛋白表达显著升高,尤其是I 2 h/R 48 h组（P＜0.0001）。体外实验证实,与Control组相比,OGD/R损伤后Tβ4的在BV2细胞表达明显升高,尤其OGD 6 h/R 48 h组升高最明显（P＜0.0001）, p-PI3K/PIK和p-AKT/AKT比值也升高(P＜0.001),而当Tβ4基因被干扰时,p-PI3K/PIK(P＜0.05)和p-AKT/AKT（P＜0.01）也受到抑制。结论 局灶性脑I/R损伤后,Tβ4在大脑皮质小胶质细胞高表达,并且小胶质细胞高表达的Tβ4可能通过影响PI3K/AKT通路影响大脑缺血/再灌注损伤后的修复。     

Hsulf-1介导PI3K/AKT信号通路抑制肝癌细胞侵袭转移的作用机制研究

目的探讨人硫酸酯酶-1（Hsulf-1）基因介导磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路抑制肝癌细胞侵袭转移的作用机制。方法将构建成功的pcDNA3.1（+）-Hsulf-1质粒及Hsulf-1siRNA质粒分别转染肝癌细胞系SMMC7221细胞,应用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理,分为Hsulf-1过表达组、Hsulf-1siRNA组、抑制剂组及空白组;采用RT-PCR法及Westernblot法检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）和β连环蛋白（β-catenin）的mRNA及蛋白表达水平,采用Transwell小室实验法检测细胞迁移能力。结果Hsulf-1过表达组E-cadherin和β-cateninmRNA表达水平均明显高于空白组（均P＜0.05）;Hsulf-1siRNA组、抑制剂组E-cadherin和β-cateninmRNA表达水平均明显低于空白组（均P＜0.05）。与空白组比较,Hsulf-1过表达组Hsulf-1、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为高,p-AKT均明显为低（均P＜0.05）;Hsulf-1siRNA组p-AKT蛋白表达水平明显为高,Hsulf-1、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为低（均P＜0.05）;抑制剂组p-AKT、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为低（均P＜0.05）。与Hsulf-1siRNA组比较,抑制剂组p-AKT、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为低（均P＜0.05）。与空白组比较,Hsulf-1过表达组、Hsulf-1siRNA组SMMC7221细胞迁移数均明显为高,抑制剂组SMMC7221细胞迁移数明显为低（均P＜0.05）;与Hsulf-1siRNA组比较,抑制剂组SMMC7221细胞迁移数明显为低（P＜0.05）。结论Hsulf-1基因可通过PI3K/AKT信号通路刺激E-cadherin,β-catenin的表达,抑制肝癌细胞侵袭转移,是肝癌侵袭转移的重要机制。     

细胞周期调节因子在原发和复发鼻咽癌的表达

【目的】探讨细胞周期调节因子在鼻咽癌复发中的作用。【方法】采用LsAB法同时检测69例患者原发和复发鼻咽癌组织中p53、MDM2、p21ras和p21WAF1蛋白的表达。【结果】复发癌与原发癌相比阳性表达率方面,p53蛋白(78%和80%)或MDM2蛋白(84%和83%)很相近,p21ras蛋白(73%和93%)或p21WAF1蛋白(52%和84%)明显下降;高表达率方面,p53蛋白(42%和51%)很相近,MDM2蛋白(57%和32%)明显升高,p21ras蛋白(16%和65%)或p21WAF1蛋白(17%和46%)明显下降。其中,MDM2蛋白表达水平在复发癌明显升高主要见于复发间期<34个月患者组（P<0.05),p21ras蛋白和p21WAF1蛋白表达水平在复发癌明显下降见于复发间期<34个月和≥34个月患者组（均<0.02以下)。【结论】原发鼻咽癌临床治愈后,p53蛋白和MDM2蛋白过度表达以及p21WAF1蛋白低表达或不表达可能仍然对鼻咽癌的复发起重要作用;MDM2蛋白表达水平显著升高和p21WAF1蛋白表达水平显著下降可能进一步加促鼻咽癌的复发过程。     

宫颈癌中p53、p21WAF1/CIP1、MDM2的表达及其与HPV16感染的关系

目的：探讨子宫颈鳞状细胞癌中p53、p21^WAF1／CIP1、MDM2的表达及其与HPV16感染的关系。方法：采用免疫组化Envision二步法检测p53、p21^WAF1／CIP1及MDM2在43例子宫颈鳞状细胞癌、20例子宫颈上皮内瘤变（CIN）和15例正常对照组中的表达，高危HPV16DNA的检测应用原位杂交法。结果：HPV16、p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2在子宫颈癌中的阳性表达率分别为46．51％、34．88％、30．23％、25．58％；在CIN中的阳性表达率分别为45％、5％、60％、15％；HPV16在对照组中的阳性表达率为6．67％，p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2未见阳性表达。HPV16、p53、p21^WAF1／CIP1在3种不同组织中表达差异有统计学意义（P〈0．05），MDM2在3种不同组织中表达差异无统计学意义（P〉0．05）。p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2在子宫颈癌HPV阳性组和阴性组间表达差异无统计学意义（P〉0．05），p21^WAF1／CIP1蛋白表达与p53有关（P〈0．05），MDM2蛋白表达与p53无关（P〉0．05）。结论：在HPV16感染的子宫颈癌中，p53的转录功能仍然存在。     

miR-431-5p抑制MDM2表达影响白血病细胞增殖、凋亡的机制研究

目的探讨miR-431-5p靶向MDM2对白血病细胞增殖、凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测白血病患者、正常人骨髓细胞和白血病细胞HL-60、K562中miR-431-5p的表达。以K562细胞为研究对象,将其随机分为miR-NC组（转染miR-NC）、miR-431-5p组（转染miR-431-5p）、miR-431-5p+pcDNA3.1组（miR-431-5p和pcDNA3.1共转染）和miR-431-5p+pcDNA3.1-MDM2组（miR-431-5p和pcDNA3.1-MDM2共转染）。MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测MDM2、CyclinD1、P21、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因法和Western blot验证miR-431-5p和MDM2的靶向关系。结果与正常人骨髓细胞相比,白血病患者骨髓细胞和白血病细胞HL-60、K562中miR-431-5p的表达显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-NC组相比,miR-431-5p组K562细胞MDM2、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达明显下调,P21和Bax蛋白的表达明显上调,细胞的增殖活力显著减弱,凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-431-5p+pcDNA3.1组比较,miR-431-5p+pcDNA3.1-MDM2组K562细胞MDM2、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达明显升高,P21和Bax蛋白的表达明显降低,细胞的增殖活力显著升高,凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-431-5p通过靶向下调MDM2可抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞凋亡。     

夏枯草注射液对胰腺癌细胞PANC-1凋亡的影响及机制研究

目的通过研究夏枯草注射液（IPV）对人胰腺癌细胞系PANC-1的干预,观察其对癌细胞凋亡的影响,并探索其促进胰腺癌细胞凋亡的机制。方法以IPV干预PANC-1细胞,实验共分6组,1个空白对照组和5个药物干预组,干预组分别给予30、60、90、120、150mg/mL五个浓度梯度的IPV;RT-PCR检测细胞Bax与bcl-2的相对表达量的变化。结果随着IPV干预剂量的增加,胰腺癌细胞增殖明显受抑制具有统计学意义（P〈0.05）;使PANC-1细胞上调Bax和下调Bcl-2基因表达。结论夏枯草注射液可以促进胰腺癌细胞凋亡,其对PANC-1细胞的增殖抑制在一定剂量范围内有明显的浓度依赖性,该机制与夏枯草注射液调控胰腺癌细胞bcl-2家族基因表达相关,其可以使PANC-1细胞上调Bax和下调bcl-2基因表达,从而促使胰腺癌细胞凋亡、抑制增殖。     

miR-93-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的 微小miRNA-93-3p（miR-93-3p）对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞,分为NC组、HG组、anti miR NC组、anti miR-93-3p组、HG+ miR NC组、HG+miR-93-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR 93 3p的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C caspase-3）、磷酸化 磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、磷酸化 蛋白激酶 B（p-AKT）表达量。结果 与NC组相比,HG组miR 93 3p的表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞存活率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与anti miR NC组相比,anti miR-93-3p组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与HG+ miR NC组相比,HG+miR 93 3p组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著降低（P＜0.05）。结论 miR 93 3p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌。     

AKT 信号转导途径在尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：探讨AKT信号途径在尼古丁诱导大鼠气道平滑肌细胞增殖中发挥的作用。方法（1） Western blot检测不同浓度尼古丁作用原代培养的大鼠气道平滑肌细胞不同时间段,AKT／磷酸化AKT、GSK3β／磷酸化GSK3β在气道平滑肌细胞上的表达水平;（2）细胞分析计数仪检测AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖活性的影响。实验分组：对照组、尼古丁单独作用组、AKT抑制剂LY294002组、AKT抑制剂LY294002＋尼古丁组、GSK3β抑制剂SB216763组、GSK3β抑制剂SB216763＋尼古丁组;（3） EDU摻入法测定AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁处理大鼠气道平滑肌细胞DNA复制活性的影响,实验分组同上。对照组应用1％胎牛血清培养基,各抑制剂和尼古丁应用1％胎牛血清培养基配制,分别在尼古丁加入前30 min应用。结果（1）大鼠气道平滑肌细胞上有AKT和GSK3β的表达;尼古丁引起AKT和GSK3β的快速磷酸化,且尼古丁促进AKT和GSK3β的磷酸化作用具有时间依赖性;（2）细胞计数法显示,AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞计数明显低于尼古丁单独作用组,差异有统计学意义（P＜0．05）;（3）EDU摻入法测定显示,AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞DNA复制水平明显下降,与尼古丁单独作用组相比,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞的增殖作用依赖AKT／GSK3β信号途径。     

大蒜素在替莫唑胺诱导脑胶质瘤细胞耐药中的作用及其机制研究

目的探讨大蒜素在替莫唑胺（TMZ）诱导脑胶质瘤细胞耐药中的作用及其机制。方法将耐药胶质瘤细胞系U87/TMZ随机分为4组,分别加入0、10、25、50mg/L的大蒜素培养24h;采用Westernblot法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/抗蛋白激酶（AKT）相关蛋白表达、抗基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）1及抗基质金属蛋白酶（MMP）-2等相关蛋白表达,MTT法检测细胞凋亡率;加入50滋M抑制剂LY294002处理细胞1h,收集细胞并检测细胞凋亡率。结果随着大蒜素浓度的增加,抗磷酸化蛋白激酶（p-AKT）蛋白表达量明显降低（P＜0.05）。与0mg/L组比较,25mg/L组TIMP1、TIMP2蛋白表达量均明显增加（均P＜0.05）,而MMP-2、MMP-9蛋白表达量均明显减少（均P＜0.05）。与阻断前相比,10、25、50mg/L组加入抑制剂LY294002阻断后,细胞凋亡率均明显升高（均P＜0.05）;随大蒜素浓度增加,细胞凋亡率逐渐升高（P＜0.05）。结论脑胶质瘤细胞对TMZ耐药与PI3K/AKT信号传导通路活化有关,大蒜素能够增强脑胶质瘤细胞对TMZ的敏感性,其作用机制是通过阻断PI3K/AKT信号传导通路,上调TIMP1、TIMP2表达并下调MMP-2、MMP-9表达,从而改变TIMP/MMP平衡,发挥治疗作用。     

姜黄素对低氧下肺成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原表达的抑制作用研究

目的 探讨姜黄素对人胚肺成纤维细胞MRC-5在低氧下增殖和胶原表达中的作用及其机制.方法 以人胚肺成纤维细胞MRC-5进行培养,随机分为常氧组(12 h,24 h,36 h)、低氧组(12 h,24 h,36 h)、低氧(12 h,24 h,36 h)+姜黄素(5 μmol/L,10 μmol/L,20/μmol/L)组、低氧(36 h)+p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂SB203580(10 μmol/L)组和低氧(36 h)+三磷酸肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)阻断剂LY-294002(10μmol/L)组.分别采用MTT法检测细胞增殖情况,Western blot检测MRC-5细胞中磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化P38(p-p38)和Ⅰ型胶原α1前体(pro-collα1)蛋白的表达情况.结果 姜黄索能抑制低氧下肺成纤维细胞的增殖,并且以低氧(36 h)+姜黄素20 μmol/L组最为明显,SB203580和LY-294002能抑制MRC-5细胞增殖(P＜0.05).低氧下pro-collα1、p-AKT、p-p38蛋白表达较常氧下增强(P＜0.05),但姜黄素只对低氧下pro-collα1、p-p38蛋白的表达有抑制,且呈剂量依赖性(P＜0.05),姜黄素对p-AKT表达无明显影响(P＞0.05).结论 低氧促进MRC-5细胞增殖及胶原表达可能是通过PLK/AKT及p38MAPK途径,姜黄素对低氧下MRC-5细胞增殖及Ⅰ型胶原表达的抑制则可能是通过p38MAPK实现.     

姜黄素对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）Tca8113细胞增殖及凋亡的影响,并研究其作用机制。方法体外培养Tca8113细胞,不同浓度姜黄素（0、25、50、100 μmol/L）处理24、48h;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002、激动剂胰岛素样生长因子-1（IGF-1）姜黄素、IGF-1联合姜黄素处理24、48h。分别采用MTT法和流失细胞术检测细胞增殖和细胞凋亡情况;采用Western blot和RT-PCR法检测细胞PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平。结果姜黄素可显著抑制OSCCTca8113细胞的增殖并诱导凋亡,且具有一定的剂量和时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;同时,姜黄素下调Tca8113细胞中的PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平（P<0.05）。IGF-1处理促进了Tca8113细胞的增殖、降低了凋亡率,同时增加PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;与IGF-1组相比,IGF-1联合姜黄素组可降低细胞的活性、提高细胞的凋亡率,降低PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平（P<0.05）。结论姜黄素可抑制OSCCTca8113细胞的增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的表达有关。