人红细胞生成素对高糖诱导肾近曲小管上皮细胞转分化过程中炎性因子的影响及其可能机制

目的 探讨重组人红细胞生成素（rhEPO）对高糖诱导的正常人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）转分化过程中炎性因子的变化及其可能机制。方法 体外培养HK-2细胞,采用随机数字表法分为空白对照组（未加任何刺激物）、高糖诱导组（高糖终浓度为30 mmol/L）、甘露醇对照组（甘露醇为24.5 mmol/L）、rhEPO对照组（rhEPO终浓度为20 U/ml）、不同浓度rhEPO干预组（rhEPO终浓度分别为5、10、20 U/ml+高糖）及Rho激酶抑制剂（Y27632）组（Y27632终浓度为30 μmol/L,加入Y27632 30 min后加高糖,高糖终浓度为30 mmol/L）,以上各组均培养24 h。采用RT-PCR检测各组细胞RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平;采用细胞免疫荧光法检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平;采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测人纤维连接蛋白（FN）、白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的蛋白表达水平。结果 各组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;其中高糖诱导组与5 U/ml rhEPO组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达均高于空白对照组,10 U/ml rhEPO组、20 U/ml rhEPO组及Rho激酶抑制剂组RhoA、ROCK1 mRNA表达均低于空白对照组（P＜0.05）;不同浓度rhEPO组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达均低于高糖诱导组（P＜0.05）,Rho激酶抑制剂组ROCK1 mRNA表达低于高糖诱导组（P＜0.05）;10 U/ml rhEPO组与20 U/ml rhEPO组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达均低于5 U/ml rhEPO组（P＜0.05）;20 U/ml rhEPO组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达均低于10 U/ml rhEPO组（P＜0.05）。各组α-SMA、E-cadherin、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;其中高糖诱导组、不同浓度rhEPO组、Rho激酶抑制剂组α-SMA、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达均高于空白对照组,E-cadherin均低于空白对照组（P＜0.05）;不同浓度rhEPO组、Rho激酶抑制剂组α-SMA、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达均低于高糖诱导组,E-cadherin均高于高糖诱导组（P＜0.05）;10 U/ml rhEPO组、20 U/ml rhEPO组α-SMA、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达均低于5 U/ml rhEPO组,E-cadherin均高于5 U/ml rhEPO组（P＜0.05）;Rho激酶抑制剂组α-SMA、FN蛋白表达均低于5 U/ml rhEPO组,E-cadherin均高于5 U/ml rhEPO组（P＜0.05）;20 U/ml rhEPO组α-SMA、FN、IL-6及TNF-α蛋白表达均低于10 U/ml rhEPO组,E-cadherin均高于10 U/ml rhEPO组（P＜0.05）;Rho激酶抑制剂组α-SMA、E-cadherin、FN蛋白表达均低于10 U/ml rhEPO组（P＜0.05）。Pearson直线相关结果分析,高糖诱导组、不同浓度rhEPO干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达水平呈正相关（r=0.885、0.901、0.886、0.868,P＜0.05）。结论 rhEPO可抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,rhEPO还可以通过减少炎性因子的产生,减轻炎性反应,从而延缓糖尿病肾病（DN）的进展,延缓肾间质纤维化,其机制可能与RhoA/ROCK信号通路有关。     

红细胞生成素对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制

目的：肾间质纤维化（ renal interstital fibrosia , RIF）的核心是肾小管上皮细胞转分化。探讨促红细胞生成素（Erythropoietin, EPO）对高糖诱导的正常人肾小管上皮细胞（human kidney cells, HK-2）转分化的影响及其可能机制。方法体外培养HK-2细胞,按随机数字表法分为空白对照组、高糖诱导组（高糖终浓度30 mmol/L）、甘露醇对照组（甘露醇浓度24．5 mmol/L）、EPO对照组（ EPO终浓度为20 U/mL）、5 U/mL EPO干预组、10 U/mL EPO干预组、20 U/mL EPO干预组及ROCK抑制剂（ Y27632）组（ Y27632终浓度为30μmol/L,加入Y2763230 min后加高糖,高糖终浓度为30 mmol/L）,各组均刺激24 h。应用RT-PCR法检测细胞 RhoA mRNA、ROCK1 mRNA 的水平;细胞免疫荧光法检测细胞 E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（αsmoothmuscleactin,α-SMA）的表达;ELISA法检测上清液纤维连接蛋白（fibronectin, FN）的表达。结果 RT-PCR结果显示高糖诱导组RhoA mRNA及ROCK1 mRNA表达较空白对照组显著升高（1．400±0．022 vs 0．945±0．132,1．913±0．011 vs 1．007±0．002,P＜0．05）;5、10、20 U/mL EPO干预组,RhoA mRNA的表达水平（0．278±0．006、0．770±0．005、0．334±0．009）均较空白对照组（0．945±0．131）减少（P＜0．05）,ROCK1 mRNA的表达水平（1．418±0．006、0．919±0．004、0．477±0．002）较空白对照组（51．007±0．002）减少（P＜0．05）;ELISA及细胞免疫荧光结果显示高糖诱导组FN、α-SMA蛋白的表达较空白对照组明显增加[（14545．53±317．27）ng/mL vs （2582．50±87．20）ng/mL,0．335±0．006 vs 0．224±0．006,P＜0．05];直线相关性分析,高糖诱导组,5、10、20 U/mL EPO干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达均呈正相关（P＜0．05）。高糖诱导组α-SMA较空白对照组上升,E-钙黏蛋白较空白对照组下降（P＜0．05）;EPO干预组及ROCK抑制剂组E-钙黏蛋白表达较高糖诱导组增加,而α-SMA表达下降（P＜0．05）;ELISA结果显示,EPO干预组ROCK抑制剂组FN表达较高糖诱导组下降（P＜0．05）,且下降程度与EPO浓度相关。结论 EPO可抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,从而延缓肾间质纤维化,其机制可能与RhoA/ROCK信号通路有关。     

促红细胞生成素对高糖环境下系膜细胞凋亡的影响及其可能机制

目的探究促红细胞生成素（EPO）在高糖环境下对正常人肾小球系膜细胞凋亡的影响及其可能机制,为延缓糖尿病肾病（DN）进展寻找新的治疗方法。方法体外培养正常人肾小球系膜细胞。将培养后的正常人肾小球系膜细胞随机分为8组:空白对照（A）组（未加任何刺激物）,高糖（B）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1),高渗（C）组(甘露醇25 mmol·L-1),EPO（D）组(EPO 20 U·mL-1),低浓度EPO干预（E）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1+EPO 5 U·mL-1),中浓度EPO干预（F）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1+EPO 10 U·mL-1),高浓度EPO干预（G）组(D-葡萄糖30mmol·L-1+EPO 20 U·mL-1),Y27632（H）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1+Rho激酶抑制剂10μmol·L-1)。各组细胞均培养24 h。RT-PCR检测各组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA的表达水平,流式细胞术检测各组的细胞凋亡。结果C、D、E 3组系膜细胞凋亡率与A组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与B组比较,C、D、E、F、G 5组系膜细胞凋亡率、RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平均降低,H组系膜细胞凋亡率、ROCK1 mRNA表达水平均降低（均P<0.05）;与E组比较,F、G、H 3组系膜细胞凋亡率均升高,RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平均降低（均P<0.05）;与F组比较,G、H 2组系膜细胞凋亡率、ROCK1 mRNA表达水平均降低,G组RhoA mRNA表达水平降低、H组RhoA mRNA表达水平升高（均P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示,B组及E、F、G 3组RhoA mRNA表达与ROCK1 mRNA表达均呈正相关（r=0.829、0.898、0.831、0.861,均P<0.05）。结论 EPO可抑制高糖诱导的正常人肾小球系膜细胞的凋亡,其作用机制可能与阻断RhoA/ROCK信号通路有关。     

全反式维甲酸对高糖环境下HK-2细胞转分化的影响及其可能机制

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对高糖环境下正常人肾小管上皮 HK‐2细胞株转分化的影响及其可能机制。方法将体外培养的 HK‐2细胞按随机数字表法分为以下7组：空白组、高糖组、高渗组、高糖＋低浓度ATRA组、高糖＋中浓度ATRA组、高糖＋高浓度ATRA组、Rho激酶抑制剂Y27632干预组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT‐PCR）检测各组细胞RhoA及ROCK1 mRNA表达水平,采用细胞免疫荧光检测高糖环境下 HK‐2细胞α‐平滑肌肌动蛋白（α‐SMA）及E‐钙黏蛋白的表达变化。结果 RT‐PCR结果显示：空白组与高渗组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平较空白组、高渗组高,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后, RhoA及ROCK1 mRNA表达较高糖组减少,差异均有统计学意义（P＜0．05）,且呈现ATRA浓度依赖性。相关性分析示,高糖组及各ATRA干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达水平呈正相关（P＜0．05）。细胞免疫荧光检测结果显示：空白组与高渗组α‐SMA及E‐钙黏蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组α‐SMA表达水平较空白组高,E‐钙黏蛋白表达水平较空白组低,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后,α‐SMA表达明显减少,E‐钙黏蛋白表达明显增多,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 ATRA可部分逆转高糖环境下 HK‐2细胞转分化的过程,其机制可能与抑制RhoA／ROCK信号通路有关。     

Rho／Rho激酶在COPD大鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的探讨Rho／Rho激酶信号通路在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道中的表达及其对气道的影响。方法清洁级相同重量级Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组、COPD组、Y-27632干预组,每组20只。分析各组大鼠的支气管壁厚度（War）和平滑肌厚度（Warn）,以及RhoA,ROCKlImRNA的表达。结果与对照组相比,COPD组大鼠RhoA,ROCK1ImRNA表达明显增高,wat、wam也明显增加（P〈0．05）;与C（）PD组相比,Y-27632干预组大鼠RhoA,ROCKIImRNA的表达明显降低,Wat、wam也明显降低（P〈0．05）。结论COPD组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达明显增高;应用ROCKⅡ特异性拈抗剂Y一27632能够明显控制RhoA,ROCKⅡmRNA的表达,从而抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠的气管壁增厚和平滑肌增殖。     

Rho／Rho激酶在哮喘小鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的研究Rho／Rho激酶（ROCK）信号通路在哮喘小鼠气道中的表达及其对气道重塑的作用。方法清洁级BALB／c雄性小鼠39只,随机分为对照组、哮喘组、Y-27632干预组、地塞米松干预组,每组10只（其中对照组9只）。建立哮喘小鼠模型,并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预,光镜观察肺组织结构,Image—proplus图像分析软件测量支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白含量,RT—PCR法测定RhoA、ROCKⅡ mRNA含量。结果（1）哮喘组小鼠RhoA、ROCKⅡ表达明显增高,应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。（2）Y-27632干预组小鼠Wat和Wam均明显低于哮喘组小鼠。结论哮喘小鼠肺组织RhoA及ROCKⅡ表达增多,ROCKll受体拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达,明显抑制哮喘小鼠Wat和Wam。     

法舒地尔对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨法舒地尔通过RhoA/ROCK（ Rho激酶）通路是否能减轻脂多糖（ LPS）诱导的大鼠急性肺损伤（ ALI）。方法：18只Wistar健康大鼠随机分为对照组（ NS组）、脂多糖组（ LPS组）及法舒地尔干预组（ FAS组）各6只;LPS组和FAS组采用小剂量LPS 1 mg/kg腹腔注射16 h后,气管内滴注LPS 3 mg/kg建立ALI模型。 FAS组在腹腔注射LPS前30 min和气管滴注LPS后1 h给予腹腔注射法舒地尔10 mg/kg。于气管滴注LPS造模后,观察3 h后处死大鼠,通过HE染色观察各组肺组织形态学改变,测肺组织湿/干重比、丙二醛含量、髓过氧化物酶活性,反转录-聚合酶链反应及Western blot法检测肺组织匀浆中ROCK2（Rho激酶2）mRNA及蛋白的表达情况。结果：与NS组比较,LPS组肺组织病理形态学改变明显,FAS组较LPS组相比明显减轻;LPS组肺湿/干重比、丙二醛含量和髓过氧化物酶活性均较NS组明显增高（P〈0.01）,而FAS组较LPS组均有不同程度降低（P〈0.05-P〈0.01）;LPS组ROCK2 mRNA 表达较NS组明显增高（P〈0.01）,而FAS组与LPS组差异无统计学意义（P〉0.05）;LPS组ROCK2蛋白表达较NS组明显增高（P〈0.01）,而FAS组较LPS组表达水平降低（P〈0.05）。结论：法舒地尔通过RhoA/Rho激酶信号通路能够减轻LPS诱导的大鼠ALI。     

重组人促红细胞生成素治疗肾间质纤维化的作用机制研究

目的 探讨重组人促红细胞生成素（rHuEPO）治疗肾间质纤维化（RIF）的作用机制。方法 2014年7月-2015年6月,将人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）随机分为7组：空白对照组（E1组）：未加任何刺激物;rHuEPO对照组（E2组）：rHuEPO终浓度为20 U/ml;人纯化清蛋白诱导组（E3组）：人纯化清蛋白终浓度为5 mg/ml;E4组：加人纯化清蛋白（5 mg/ml）和rHuEPO（5 U/ml）;E5组：加人纯化清蛋白（5 mg/ml）和rHuEPO（10 U/ml）;E6组：加人纯化清蛋白（5 mg/ml）和rHuEPO（20 U/ml）;Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y27632组（E7组）：加ROCK抑制剂Y27632（10 μmol/L）,30 min后加人纯化清蛋白（5 mg/ml）。采用细胞增殖试验检测刺激16、24、48、72 h时各组细胞增殖数,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测RhoA、ROCK mRNA表达水平,细胞免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测纤维连接蛋白（FN）表达水平。结果 16 h时,各组细胞增殖数比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。24、48、72 h时,各组细胞增殖数比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中E3~E6组高于E1组、E2组,E4~E6组高于E3组,E7组低于E3组,E5组、E6组高于E4组,E6组高于E5组（P＜0.05）。各组RhoA mRNA表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中E3~E6组高于E1组、E2组,E4~E6组低于E3组,E5组、E6组低于E4组,E6组低于E5组（P＜0.05）。各组ROCK mRNA表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中E3~E6组高于E1组、E2组,E4~E7组低于E3组,E5组、E6组低于E4组,E6组低于E5组（P＜0.05）。各组α-SMA表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中E3~E5组高于E1组、E2组,E4~E7组低于E3组,E5组、E6组低于E4组,E6组低于E5组（P＜0.05）。各组E-cadherin表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中E3~E6组低于E1组、E2组,E4~E7组高于E3组,E5组、E6组高于E4组,E6组高于E5组（P＜0.05）。各组FN表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中E3~E5组高于E1组、E2组,E4~E7组低于E3组,E5组、E6组低于E4组,E6组低于E5组（P＜0.05）。E3组、E4组、E5组、E6组RhoA mRNA与ROCK mRNA均呈正相关（P＜0.05）。结论 人纯化清蛋白能诱导HK-2细胞发生上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）,进而发生RIF,而rHuEPO通过阻断EMT的RhoA/ROCK信号转导通路从而抑制RIF发生,且在一定范围内rHuEPO水平越高,其抑制作用越强。     

Rho/ROCK信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用及干预

目的 观察法舒地尔对慢性哮喘大鼠镜下气道重塑改变及肺组织RhoA和ROCKⅠ表达的影响,探讨Rho/ROCK信号转导通路在哮喘气道重塑中的作用。方法 雄性SD大鼠分为3组,建立慢性哮喘大鼠型,统计支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数,观察肺组织病理及超微结构的变化,测定肺内支气管壁厚度（WTt）和支气管平滑肌厚度（WTm）,免疫组化法和real-timePCR法分别检测肺组织中RhoA及ROCKⅠ表达情况。结果（1）哮喘组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞占细胞总数百分比均明显高于正常对照组（均P＜0.01）;法舒地尔干预后明显抑制炎症细胞浸润,该组BALF中细胞总数较哮喘组不同程度降低（P＜0.01）。（2）哮喘组肺组织镜下可见明显炎症性和结构性病理变化,法舒地尔组肺组织炎症反应及重塑改变较哮喘组改善。（3）哮喘组WTt和WTm较正常对照组明显增加（均P＜0.01）,法舒地尔组WTt和WTm较哮喘组明显降低（均P＜0.01）。（4）哮喘组大鼠肺组织RhoA和ROCKⅠ蛋白和mRNA的表达水平明显高于正常对照组（均P＜0.01）,法舒地尔组明显低于哮喘组（均P＜0.01）。（5）WTt、WTm均与大鼠肺组织中ROCKⅠ蛋白水平呈明显正相关（r=0.743、0.974,均P＜0.01）。结论哮喘大鼠RhoA和ROCKⅠ表达增高,法舒地尔可能通过影响RhoA和ROCKⅠ的表达,减轻气道炎症及改善气道重塑,表明Rho/ROCK信号转导通路参与哮喘气道重塑的形成。     

川芎嗪对脂多糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coil forming protein kinase,ROCK2)、肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化及细胞骨架连接蛋白(ezrin-radxin-moesin,ERM)磷酸化水平的影响。方法:以体外培养的HUVEC为实验对象,分为对照组、LPS组和TMP组(0.5、1.0、1.5 mg/mL),荧光定量PCR测定内皮细胞RhoA、ROCK2和信使RNA(p-Ezr mRNA)的表达,Western blot法测定内皮细胞RhoA、ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白水平的表达。结果:与对照组比较,LPS组RhoA、ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及RhoA、ROCK2和p-Ezr mRNA表达均显著升高(P<0.01);与LPS组比较,TMP 3组RhoA蛋白表达与mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05),ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及ROCK2、p-Ezr mRNA表达均降低(P<0.05~P<0.01),且TMP 3组之间ROCK2、p-MLC和p-ERM的分子表达差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。结论:TMP对LPS诱导的HUVEC损伤的保护作用可能是通过抑制Rho/ROCK信号通路中ROCK2、p-MLC和p-ERM的表达,以减弱LPS对内皮细胞骨架的损伤。     

Rho/ROCK激酶信号通路在大鼠宫腔粘连中的作用

目的 复制宫腔粘连大鼠模型,探讨Rho/ROCK信号通路相关蛋白的表达及其在宫腔粘连中的作用机制。方法 SD大鼠宫腔注入0.5?ml 95%乙醇,复制宫腔粘连模型;对照组注入等量生理盐水。术后15?d观察两组子宫内膜形态学变化,免疫组织化学法检测子宫内膜角蛋白、波形蛋白、Rho（RhoA、RhoB、RhoC）、Rho激酶（ROCKI、ROCKII）及TGF-β1表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜厚度变 薄（P?<0.05）;两组腺体数目比较,模型组腺体数目减少（P?<0.05）;两组角蛋白比较,模型组表达下降（P?<0.05）;两组波形蛋白比较,差异无统计学意义（P?>0.05）;两组大鼠子宫内膜RhoA、RhoB、RhoC、ROCKI、ROCKII的表达比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,模型组均高于对照组;模型组大鼠子宫内膜TGF-β1的表达高于对照组（P?<0.05）。结论 注射无水乙醇可复制稳定的大鼠宫腔粘连动物模型,其Rho/ROCK信号通路处于激活状态,TGF-β1通过激活Rho/ROCK信号通路促使子宫内膜损伤后组织纤维化,参与宫腔粘连的发生、发展。     

肿瘤坏死因子-α抑制剂己酮可可碱对糖尿病大鼠阴茎海绵体RhoA/Rho激酶信号通路的影响

目的：研究糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中RhoA/Rho激酶信号通路改变以及肿瘤坏死因子（TNF）吨抑制剂己酮可可碱（PTX）对该信号通路和阴茎勃起功能的影响。方法：SD大鼠分为对照组、糖尿病组和糖尿病药物干预组;高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素注射诱导糖尿病;腹腔埋置微渗透泵持续慢性给药;在体记录阴茎海绵体窦内压（ICP）：ELISA检测血清TNF-α浓度;Western blot检测海绵体组织中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和神经型一氧化氮合酶（nNOS）以及RhoA/Rho激酶信号通路分子的蛋白表达水平。结果：与糖尿病组比,糖尿病药物干预组血清TNF-α浓度明显下降（P〈0.01）,阴茎海绵体组织中RhoA、ROCK1和p-MYPT1表达下调（P〈0.05）,eNOS和nNOS表达增加（P〈0.05）,阴茎ICP指数显著升高（P〈0.05）。结论：TNF-α促进阴茎海绵体组织RhoA/Rho激酶信号通路的激活与表达上调,参与糖尿病性勃起功能障碍的发病机制：PTX对糖尿病大鼠的勃起功能有保护作用。     

基于RhoA/ROCK通路研究天麻素对高血压病左心室肥厚大鼠心室重构的影响

目的 观察天麻素对高血压病左心室肥厚大鼠心室重构的影响,从Ras同族体基因家族成员A（Ras homolog gene family member A,RhoA）/Rho激酶（Rho-associated kinase,ROCK）通路探究其作用机制。方法 将100只SD雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,天麻素低剂量（16 mg/kg）、中剂量（24 mg/kg）、高剂量（32 mg/kg）组和依那普利组（1.5 mg/kg）,每组15只。采用腹主动脉缩窄法复制左心室肥厚模型。采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）和白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）水平,计算左心室肥厚指数（left ventricular hypertrophy index,LVHI）;苏木精-伊红染色和Masson染色观察心肌的组织形态学变化;qRT-PCR和Western blot法检测心肌组织RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠尾动脉收缩压、LVHI及血清AngⅡ、IL-6水平显著升高（P＜0.05）,心肌组织纤维化程度升高,RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,天麻素低、中、高剂量组和依那普利组尾动脉收缩压、LVHI及血清AngⅡ、IL-6水平均显著下降（P＜0.05）,心肌纤维程度降低,RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。依那普利组大鼠心肌组织RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平最低,天麻素的作用具有剂量依赖性。结论 天麻素能有效降低高血压病大鼠尾动脉血压、LVHI和血清AngⅡ、IL-6水平,改善其心室重构,其机制与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。     

MYPT1通过RhoA/ROCK信号通路抑制结直肠癌细胞增殖和迁移

目的 探讨实肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（MYPT1）在结直肠癌发生发展中的作用及其可能的作用机制。方法 RT-PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测结直肠癌细胞迁移能力,生物信息学软件筛选可与MYPT1相互作用的蛋白质,通过TCGA数据库分析MYPT1表达水平及与RAS同源基因家族成员A（RhoA）和锌离子相关的RhoA蛋白1（ROCK1）的相关性。根据实验方案进行分组,分为空白对照组、阴性对照组、MYPT1过表达组、RhoA过表达组、MYPT1过表达+RhoA空载组和MYPT1过表达+RhoA过表达组。结果 和癌旁正常组织及正常肠粘膜细胞相比,MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达（P＜0.05）。过表达MYPT1可抑制结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1负调控RhoA和ROCK1的表达（P＜0.05）。过表达RhoA促进结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1通过下调RhoA的表达抑制ROCK1表达（P＜0.05）。MYPT1通过负调控RhoA抑制细胞增殖和迁移（P＜0.05）。结论 MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达,其通过RhoA/ROCK信号通路调控结直肠癌细胞增殖和迁移。     

RhoGDI1在TNF-α诱导内皮细胞损伤中的作用研究*

目的：阐明Rho特异鸟苷酸解离抑制因子1（RhoGDI1）和Rho/ROCK信号通路在肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导内皮细胞损伤中的作用机制。方法：采用siRNA技术干扰人脐静脉内皮细胞RhoGDI1表达,实验分为正常对照组,10μg·L-1 TNF-α处理组和RhoGDI1干扰组。MTT法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测RhoGDI1、RhoA、ROCK表达及活化。结果：TNF-α处理和RhoGDI1干扰均显著降低内皮细胞存活率,提高内皮细胞的凋亡。TNF-α处理后RhoGDI1表达显著下降,TNF-α处理和RhoGDI1干扰均可显著提高RhoA表达以及ROCK活化。结论：TNF-α可能通过抑制RhoGDI1促进Rho/ROCK信号通路的活化,最终引起内皮细胞凋亡。     

蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：观察蜕皮甾酮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖、细胞外基质的影响。方法：体外培养大鼠MCs细胞株,分低糖组、高糖组、高糖＋蜕皮甾酮组（EDS组）,分别作用12、24、48h,MTT法检测细胞增殖活力,ELISA法检测细胞上清中FN的含量。结果：与低糖组比较,高糖组12h、24h、48h MCs增殖显著增快（P〈0.01）,FN含量明显增加（P〈0.05）;与低糖组比较,EDS在浓度〉1×10-5mol/L时MCs增殖显著减慢（P〈0.01）;与高糖组比较,EDS 1×10-6mol/L组各时间点及1×10-7mol/L组24h、48h MCs增殖显著减慢（P〈0.05或P〈0.01）,EDS 1×10-6mol/L组各时间点FN含量均有降低（P〈0.05或P〈0.01）;EDS 1×10-10、1×10-8mol/L组各时间点FN含量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：①蜕皮甾酮在浓度〉1×10-5mol/L时对MCs有明显的细胞毒性作用。②蜕皮甾酮可抑制高糖诱导的MCs增殖。③蜕皮甾酮能减少高糖培养大鼠MCs细胞外基质的增加。     

基于RhoA/Rho信号通路探讨产妇子宫平滑肌组织 Thr38、KCa3.1、KLF4表达水平与产后出血的关系

目的：基于RhoA/Rho信号通路探讨产妇子宫平滑肌组织CPI-17(Thr38)、KCa3.1、Krüppel样因子4(KLF4)表达水平与产后出血的关系。方法：选择80例宫缩乏力性产后出血产妇为观察组,选择同期80例无产后出血产妇为对照组。采用肌条等长张力测定法检测离体子宫平滑肌的自发收缩活动力,以及加入Rho激酶抑制剂(Y-27632)后的子宫平滑肌收缩活动力。采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应法检测子宫平滑肌组织中RhoA、ROCKⅠ以及ROCKⅡmRNA表达水平,采用蛋白质印迹法检测RhoA、ROCKⅠ以及ROCKⅡ以及Thr38、KCa3.1、KLF4表达水平。采用Pearson相关分析RhoA蛋白以及子宫平滑肌收缩活动力与Thr38、KCa3.1、KLF4的关系。结果：观察组的子宫平滑肌收缩活动力、收缩频率以及收缩幅度均低于对照组(P<0.05～P<0.01),加入Y-27632后,2组子宫平滑肌收缩活动力均低于加入前(P<0.05)。观察组RhoA/Rho信号通路相关mRNA以及蛋白(RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ)表达水平均低于对照组(P<0...     

当归芍药散含药血清抑制内皮素-1介导的肝星状细胞收缩的机制研究

目的 探讨当归芍药散（Danggui Shaoyao San,DSS）含药血清对内皮素-1（endothelin,ET-1）介导的肝星状细胞内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）和RhoA/ROCKⅡ蛋白表达的影响。方法 将实验动物分为空白组和给药组,分别提取血清,－20 ℃冻存备用。细胞实验分为6组：空白组,模型组,DSS含药血清高、中、低剂量组,Y-27632抑制剂组。肝星状细胞培养24 h后,采用Western blot法检测细胞内RhoA、ROCK Ⅱ、eNOS蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,模型组RhoA、ROCK Ⅱ蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,细胞内eNOS蛋白表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,DSS含药血清各剂量组RhoA、ROCKⅡ蛋白表达水平减少（P<0.05）,DSS含药血清高、中剂量组细胞内eNOS蛋白表达水平增多（P<0.05）。结论 DSS可通过抑制肝星状细胞RhoA、ROCK蛋白的表达,上调eNOS蛋白的表达,抑制ET-1诱导的肝星状细胞收缩。     

Rho/Rho激酶信号通路在低氧致肺纤维化中的作用及法舒地尔的干预效应

目的 观察人胚肺成纤维细胞低氧培养24 h对致纤维化相关因子表达的影响及不同浓度法舒地尔(6、12、25 μmol/L)的干预作用.方法 以人胚肺成纤维细胞(MRC-5)为研究对象,体外构建以HIF-1α蛋白的高表达为特征的低氧微环境,低氧(37 ℃、5%CO2 、2%O2 、93%N2) 培养0、6、12、24 h,Western blot法检测各低氧时间点RhoA、ROCK1、CTGF蛋白的表达及以低氧24 h为对照组,观察低氧24 h下不同浓度法舒地尔对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达的影响;RT-PCR、MTT法分别检测低氧24 h下不同浓度法舒地尔对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)CTGF mRNA表达和细胞活力的影响,均以低氧24 h为对照组.以常氧(21%O2,74%N2,5% CO2)24 h及低氧24 h为对照,ELISA 法测定低氧24 h下不同浓度法舒地尔对细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)表达的影响.结果①随着低氧作用时间延长,RhoA、ROCK1、CTGF蛋白表达上调并逐渐增强.②低氧24 h下不同浓度法舒地尔(6、12、25 μmol/L)对CTGF蛋白及mRNA水平均有抑制作用(P<0.05,P<0.01).③与低氧24 h对照组比较,低氧24 h下不同浓度法舒地尔(6、12、25 μmol/L)均对细胞上清ColⅠ的合成及细胞增殖活性均有抑制作用(P<0.01).结论 低氧可能是通过激活Rho/Rho激酶信号通路促发CTGF的高表达进而引发肺成纤维细胞细胞外基质表达增加等一系列促纤维化反应,而法舒地尔通过抑制Rho/Rho激酶信号通路来干预低氧致纤维化因子的转录和表达.     

重组人红细胞生成素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和TGF-βmRNA的影响

目的探讨重组人红细胞生成素(rHuEPO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖和表达TGF-βmRNA的影响。方法以大鼠M Cs为研究对象,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度为5 mmol/L),高糖组(HG组,葡萄糖浓度为10、20、30、40、50 mmol/L),其中30 mmol/L的高糖组分别以不同浓度rHuEPO(1、10、50、100、1 000 U/mL)分别干预24、48、72 h,Cell Counting Kit-8(CCK-8)比色法检测细胞增殖情况。用RealtimePCR法测定干预24、48、72 h时细胞TGF-βmRNA表达水平。结果在30 mmol/L以下时,葡萄糖能明显刺激M Cs的增殖,以30 mmol/L培养72 h反应最佳,rHuEPO在低于100 U/mL时能促进高糖诱导的M Cs增殖。rHuEPO在1 000 U/mL时,细胞毒性明显,大部分细胞死亡。结论高糖在一定时间和浓度内有刺激大鼠M Cs增殖的效应,rHuEPO在一定浓度和时间内能刺激高糖培养的MCs增殖,抑制高糖培养的MCs表达TGF-βmRNA。