槲皮素对大鼠原代肝细胞HO-1蛋白表达及活性的影响

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞中I型血红素氧化酶(HO-1)蛋白表达及酶活性的影响。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。用不同剂量(25、50、100、200 mol/L)槲皮素作用大鼠原代肝细胞12 h,或用50 mol/L槲皮素作用肝细胞不同时间(2～12 h)后,提取肝细胞微粒体,检测HO-1酶活性变化,并用WesternBlot方法检测HO-1蛋白表达水平的变化。结果大鼠原代肝细胞经50～200 mol/L槲皮素处理12 h,或用50 mol/L槲皮素处理4～12 h后,HO-1蛋白表达水平和酶活性与对照组比较明显升高(P<0.05)。结论槲皮素能够诱导大鼠原代肝细胞的HO-1蛋白表达,提高肝细胞内HO-1的酶活性。     

亚砷酸钠对L-02肝细胞的氧化损伤作用

[目的]探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对体外培养的人肝细胞株(L-02)的氧化损伤作用. [方法]用不同浓度NaAsO2(50,100,150 μmol/L)染毒L-02肝细胞24 h,MTT法检测NaAsO2对L-02肝细胞生长的影响;流式细胞仪检测L-02肝细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;钼酸铵法测定过氧化氢酶(catalase,CAT)活性;单细胞凝胶电泳(single-cell gel electrophoresis,SCGE)法检测DNA损伤. [结果]NaAsO2作用L-02肝细胞24h后,50、100、150 μmol/L浓度NaAsO2组的L-02肝细胞存活率和CAT活性与对照组相比显著降低(P<0.01).且呈剂量-反应关系;100、150μmol/L浓度NaAsO2组ROS生成量显著增多(P<0.01);50 μmol/L的NaAsO2即可引起出现彗星现象的细胞数明显高于对照组,拖尾细胞阳性率明显升高(P<0.01),且呈剂量-反应关系. [结论]NaAsO2对L-02肝细胞的生长具有明显的抑制作用,可引起L-02肝细胞内ROS增多和CAT活性降低,引起细胞DNA损伤.     

氢醌对L-02肝细胞DNA损伤及细胞周期的影响

目的 探讨氢醌(HQ)对体外培养L-02肝细胞DNA损伤及细胞周期的影响.方法 将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80、160和320 μmol/L)的HQ作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定L-02肝细胞的相对存活率,采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA的损伤状况,并采用流式细胞术检测细胞周期分布状况.结果 在0～80 μmol/L的范围内,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P＞0.05);当染毒剂量超过160μmol/L时,其存活率则明显地下降(P＜0.01).随着HQ作用浓度的升高,L-02肝细胞DNA链的断裂程度也随着逐渐增加.0～80μmol/L范围内的HQ作用24h后,L-02肝细胞的细胞周期也发生了明显的改变,表现为S期细胞比例明显增加,G1期细胞的比例下降.结论 HQ对L-02肝细胞DNA具有损伤作用,并且在体外能够引起明显的S期细胞阻滞.     

氯化镉对人肾小管上皮细胞线粒体功能及PGC-1α蛋白表达的影响

目的探讨氯化镉(CdCl_2)对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)线粒体功能、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子α(PGC-1α)蛋白表达的影响,以及CdCl_2致HK-2细胞线粒体氧化损伤的机制。方法体外培养HK-2细胞,以0、10、20、30、40、50和60μmol/L CdCl_2干预24 h后收集细胞,MTT法观察细胞活力;Mito SOXTM活细胞荧光染色观察线粒体中活性氧(ROS)生成情况,多功能酶标仪测定线粒体中呼吸链复合物Ⅲ活性,流式细胞仪分析线粒体膜电位变化;Western blot法检测CdCl_2对HK-2细胞总蛋白中PGC-1α表达的影响。结果与对照组相比,当CdCl_2浓度增加到20、60μmol/L作用24 h后HK-2细胞存活率下降为(77.60±0.82)%和(41.97±1.22)%(P0.01);并呈剂量依赖性引起线粒体呼吸链复合物Ⅲ的活性下降和线粒体ROS增多(P0.05),JC-1单体阳性率的比值分别为对照组的1.51、1.58、1.72、2.41和3.47倍(P0.01);而细胞总蛋白中PGC-1α蛋白的表达随氯化镉剂量的增加而减少(P0.05)。结论氯化镉可通过抑制PGC-1α蛋白表达,抑制线粒体呼吸链复合物Ⅲ的活性,促进线粒体ROS生成,诱导线粒体膜电位下降,导致对HK-2细胞的毒性损伤。     

维生素E对邻苯二甲酸二丁酯细胞毒性的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对小鼠淋巴瘤细胞(EL4)的毒作用及维生素E(VitE)对细胞的保护作用.方法 分别用10、100、500、1 000 μmol/L DBP作用细胞24 h,并且VitE进行干预,检测细胞增殖、乳酸脱氢酶(LDH)活力及丙二醛(MDA)含量.结果 DBP作用EL4细胞24 h,100～1 000 μmol/L DBP均能明显促进EL4细胞增殖.1 000 μmol/L DBP可明显升高EL4细胞上清液中LDH活力及MDA含量.与1 000 μmol/L DBP组比较,50 μmol/L VitE能显著降低细胞上清液中LDH活力及MDA含量.结论 DBP使EL4细胞产生氧化损伤,这可能与DBP的免疫毒性有关.     

氯化锰对PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响

目的 探讨氯化锰(MnCl2)对人神经细胞株PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响,揭示锰毒性作用机制.方法 取对数生长期PC12细胞,用含100、300、500、700、900 μmol/LMnCl2的培养液,分别作用24、48、72 h,采用四甲基偶氮唑蓝(M1T)比色实验检测细胞生长状况,流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体跨膜电位.结果 24 h后,700和900 μmol/L MnCl2处理组细胞抑制率与对照组比较差异具有显著性(P<0.05);48、72 h后,所有的MnCl2处理组细胞抑制率与对照组比较差异具有显著性(P<0.05);48 h后,500、700和900 μmol/L MnCl2处理组与对照组比较细胞G1期呈递增趋势,S期呈递减趋势,G2/M百分比和细胞凋亡率升高(P<0.05);各MnCl2处理组与对照组比较荧光强度呈不同程度下降(P<0.05).结论 MnCl2可引起PC12细胞生长抑制,导致线粒体跨膜电位下降,引起细胞凋亡.     

赤霉素对大鼠肝细胞线粒体呼吸功能的影响

目的探讨植物生长调节剂赤霉素对大鼠肝细胞线粒体呼吸功能的影响。方法 24只SD雄性大鼠随机分为4组,即对照组和3个赤霉素染毒组,各组动物分别用含0、40、160和640mg/kg赤霉素饲料喂养35天。染毒结束24h后处死动物,取大鼠肝,提取线粒体,分别用荧光分光光度法、紫外分光光度法、Clark氧电极测定线粒体膜电位变化、线粒体呼吸链复合体活性和线粒体呼吸功能的变化。结果高浓度赤霉素处理组大鼠肝细胞线粒体ComplexⅠ和ComplexⅢ活性以及中、高浓度赤霉素处理组肝细胞线粒体ComplexⅣ活性显著高于对照组(P<0.05)。高浓度赤霉素处理组大鼠肝细胞线粒体Ⅲ态耗氧量与对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论动物摄入高浓度赤霉素饲料可使肝细胞线粒体呼吸功能增强。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

吡虫啉对原代培养的大鼠海马神经元NO含量和NOS活性的影响

目的　研究新型农药吡虫啉对原代培养的大鼠海马神经元细胞培养液内NO(一氧化氮 )含量和细胞内NOS(一氧化氮合酶 )活性的影响。方法　原代培养的大鼠海马神经元成熟后 ,分组加入不同浓度的吡虫啉进行染毒 ,于染毒后 12h、2 4h、4 8h分别在相差显微镜下观察其形态学改变 ,并测定细胞死亡率 ,细胞培养液内NO含量及细胞内NOS的活性。结果　与DMSO对照组相比 ,除 0 ,10 -6mol/L吡虫啉组外 ,随染毒浓度增加 (10 -5～ 10 -3 mol/L)和染毒时间延长 ,出现细胞肿胀、胞体内颗粒增多和突起断截等改变 ,细胞间网络也变稀疏 ;细胞死亡率和细胞培养液NO含量在作用 2 4h后增加 (P <0 0 5 ) ,作用 4 8h继续增加 (P <0 0 1)。细胞内NOS活性在作用 12h于 10 -3 mol/L组首先出现升高 (P <0 0 1) ;作用 2 4h ,10 -5～ 10 -4mol/L组也升高 (P <0 0 1) ,10 -3 mol/L继续升高 (P <0 0 1) ;作用 4 8h ,各浓度组吡虫啉的细胞内NOS活性与 2 4h时相比无明显变化。结论　 10 -5～ 10 -3 mol/L浓度的吡虫啉可引起原代培养的大鼠海马神经元细胞培养液内NO含量和细胞内NOS活性的升高 ,这可能与其神经毒性作用有关。     

线粒体钙超载激活线粒体凋亡途径在甲基汞致神经元凋亡中的作用

目的 探讨线粒体钙超载并诱导线粒体凋亡途径活化在甲基汞致神经元凋亡过程中的作用及其机制。 方法 取出生24 h内的新生昆明小鼠,解剖取脑皮质,进行原代神经元培养。细胞发育成熟后,应用含不同浓度甲基汞(methyl-mercury,MeHg,0、0.25、0.5、1 μmol/L)的培养液分别处理神经元1、3、6 h,测定神经元细胞活力,确定适宜暴露时间后,测定神经元线粒体内钙离子水平,线粒体膜电位,细胞色素c(cytochrome c,Cyt c)、凋亡诱导因子(apoptosis induce factor,AIF)、天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3, caspase 3)蛋白表达水平及细胞凋亡率。 结果 神经元经不同浓度MeHg处理后,细胞活力降低。在0.25、0.5、1 μmol/L MeHg处理组,神经元线粒体内钙离子水平升高,线粒体膜电位下降,Cyt c、AIF、caspase3蛋白表达水平升高,细胞早期凋亡率升高,且都呈现剂量效应关系。在1 μmol/L MeHg处理组,上述指标与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。 结论 甲基汞暴露会诱发神经元线粒体钙超载并激活线粒体凋亡途径进而导致细胞凋亡。     

硒对大鼠胚胎神经细胞增殖和分化的影响

为探讨不同浓度硒对神经细胞增殖和分化的影响，将细胞培养物经不同浓度（０．０１～１０ｕｍｏｌ／Ｌ）亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）处理，用ＭＴＴＩ地检测细胞增殖率，并观察细胞形态变化和细胞分化程度，结果：低浓度硒（０．０１～０．１ｕｍｏｌ／Ｌ）能促进神经细胞增殖和分化；较高浓度硒（０．０５～５ｕｍｏｌ／Ｌ）则抑制神经细胞增殖和分化，并均呈剂量－效应关系，高浓度硒（１０ｕｍｏｌ／Ｌ）引起细胞毒性，提示低浓度     

Cr(Ⅵ)干涉VDAC1 mRNA表达与细胞内ATP水平的联系

目的探讨Cr(Ⅵ)对细胞内电压依赖性离子通道(VDAC1)mRNA表达和三磷酸腺苷(ATP)水平的干涉效应及其之间的联系。方法实验共分成6个处理组,分别用0、2、4、8、16和32μmol/L Cr(Ⅵ)染毒处理12、24和36 h,然后用逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和荧光素生物发光法分别检测细胞内VDAC1mRNA和能量ATP水平。结果 (1)细胞内VDAC1 mRNA表达在12h明显低于对照组水平,在24h表达水平有所增加,染毒36h后,各剂量组均明显增加,平均增加至对照组的2.65倍;(2)细胞内ATP含量在12h增高,高剂量组(2μmol/L)尤为明显,在24h后细胞内ATP水平明显下降,染毒36h后,低剂量(2μmol/L和4μmol/L)组ATP含量又回升至对照水平,在高浓度(8、16和32μmol/L)组,ATP仍处较低水平;(3)相关分析显示,细胞内VDAC1 mRNA表达与ATP水平之间呈中度负相关(r=0.604,P<0.05)。结论 Cr(Ⅵ)对细胞内ATP水平的干涉效应与VDAC1 mRNA表达异常有关,VDAC1 mRNA表达增加是Cr(Ⅵ)诱导细胞内能量ATP水平降低的分子机制之一。     

镉对肾上腺皮质细胞线粒体功能的影响

目的 研究镉对肾上腺皮质细胞线粒体功能的影响,为探讨其内分泌毒作用机制提供依据。方法 原代分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,用氯化镉（ＣｄＣｌ２）０、６．２５、１２．５０、２５．００、５０．００、１００．００、２００．００ｕｍｏｌ／ｌ处理细胞１ｈ,以５０ｕｍｏｌ／Ｌ ＣｄＣｌ２处理细胞０、１５、３０、６０、１２０、２４０ｍｉｎ,观察ＣｄＣｌ２对肾上腺皮质细胞线粒体功能毒作用的剂量－效应及时间－效应关系。应用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）试验检测线粒体酶活力,用流式细胞仪结合罗丹明１２３（Ｒｈ１２３）和碘化丙啶（ＰＩ）双标记法检测线粒体膜电位（ＭＭＰ）和细胞存活状态。结果 ＣｄＣｌ２引起细胞线粒体酶活力及ＭＭＰ降低：以６．２５～２００．００ｕｍｏｌ／Ｌ ＣｄＣｌ２染毒细胞１ｈ,对照组ＭＴＴ的平均吸光度（Ａ５７０ｎｍ）值为０．     

苯并[a]芘对体外培养大鼠皮层神经元HSP70表达的影响

目的 研究苯并[a]芘(B[a]P)对体外培养大鼠皮层神经元热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 分离培养SD大鼠皮层神经元,用0、0.1、0.5 、1、5和10μmol/L浓度的B[a]P染毒24h观察剂量-效应关系;用0、0.5和5μmol/L浓度的B[a]P染毒24、48和72h观察时效关系.培养液中均添...     

顺铂对大鼠肝细胞毒性及谷胱甘肽的保护作用

目的探讨顺铂对原代培养的大鼠肝细胞的毒性及谷胱甘肽对其影响.方法从大鼠的肝脏分离培养肝实质细胞接种于96孔培养板,培养3h后加入一系列浓度的顺铂,或在加入顺铂前16和4h,分别加入谷胱甘肽(glutathione,GSH)合成抑制剂DL-buthionine-(S,R)-sulfoximine(BSO)和GSH的前体物半胱氨酸,继续培养,分别在8,24和48 h 3个时间点用噻唑蓝(MTT)方法检测细胞存活率.结果顺铂对大鼠肝细胞有明显的毒性,在不同的时间点有各自的剂量-反应关系,顺铂对大鼠肝细胞在8,24和48 h 3个时间点半数抑制浓度(IC50)分别为1.13,0.21和0.15 mmol/L;BSO能使3组IC50均降低,分别为0.017,0.011和0.013 mmol/L,而半胱氨酸则可使3组IC50均升高,均大于5mmol/L.结论顺铂对大鼠肝细胞具有明显的毒性作用,且呈时间和剂量依赖关系;BSO可增强顺铂的肝细胞毒性,而半胱氨酸对顺铂引起的肝细胞毒性有保护作用,提示细胞内GSH对顺铂所致肝细胞毒性有保护作用.     

无机砷对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1 mRNA和蛋白表达的诱导作用

[目的]观察亚砷酸钠（sodium arsenite,NaAsO2）对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达的诱导作用。[方法]以5μmol／L和10μmol／L的NaAsO2作用Chang肝细胞株2、6、12h和24h,分别用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot法检测细胞内HO-1的mRNA和蛋白表达情况。[结果]5μmol／L和10μmol／LNaAs02暴露2h开始出现HO-1mRNA的诱导表达;6h的表达水平明显高于对照组和2h暴露组（P〈0．01）。其中,10μmol／LNaAsO2暴露12h和24h的mRNA表达均明显高于该浓度的6h暴露组（P〈0．01）;但24h的HO-1 mRNA表达水平与12h组相比没有明显升高。NaAsO2暴露诱导的HO-1蛋白表达则从6h开始出现,12h组明显高于6h组,24h组明显高于12h组（均P〈0．01）;5μmol／L和10μmol／L NaAsO2分别暴露6、12h和24h的HO-1蛋白表达量分别是对照组的2．80、9．34、18．15和3．97、12．92、23．29倍;此外,10μmol/LNaAsO2暴露12h和24h的HO-1 mRNA和蛋白表达均明显高于对应时间的5μmol／L组（P〈0．01）。[结论]NaAsO2暴露能够有效和持续性诱导Chang肝细胞株HO-1的mRNA和蛋白表达,是无机砷暴露的一种细胞保护性适应性反应。     

活性氧在微囊藻毒素-LR诱导细胞凋亡效应中的作用探讨

[目的]研究微囊藻毒素．LR（MC—LR）对原代大鼠肝脏细胞的促凋亡效应以及探讨活性氧（ROS）在这一效应中的作用。[方法]采用胶原酶灌注法获取原代大鼠肝脏细胞,用William’s E培养液重悬后接种于铺被鼠尾胶原的孔板内,分为1个对照组和4个染毒组,370C、5％CO2条件下培养3h后换液并染毒各梯度浓度的MC—LR,使各染毒组毒物终浓度分别为1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7、1×10^-8mol／L。染毒相应时间后,采用中性红比色实验检测细胞存活率,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内ROS含量。[结果]中性红比色实验发现,至染毒期末观察到1×10^-5、1×10^-6mol／L两个染毒组的肝脏细胞几乎全部死亡（〉95％）,1×10^-7mol／L染毒组部分肝脏细胞死亡（约30％）;流式细胞术观察到MC—LR染毒后早期（5min）诱导细胞调亡,同时观察到肝脏细胞内短时间（15min）快速产生大量的ROS。[结论]MC—LR诱导原代大鼠肝脏细胞快速产生大量的ROS,这可能是MC-LR诱导细胞凋亡并最终导致细胞死亡的毒性作用机制之一。     

槲皮素拮抗酒精性肝损伤中胆红素的介导效应

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧合酶(heme Oxygenase-1,HO-1)及其代谢产物胆红素对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应。方法二步胶原酶灌注技术分离培养SD大鼠原代肝细胞,在孵以200 mmol乙醇建立酒精性肝细胞氧化损伤模型的同时,加入槲皮素(100μmol)、hemin(20μmol)等及不同剂量(2-100μmol)的胆红素干预24 h后,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及氧自由基(ROS)水平及培养基中总胆红素水平。结果槲皮素明显抑制了乙醇孵育后细胞MDA和ROS水平的升高,有效维持了细胞内GSH水平和SOD活力;加入外源性胆红素也显示出相同的保护效应,且具有一定的剂量依赖性;锌原卟啉IX(ZnPP-IX)则明显抑制了上述槲皮素的保护效应。结论槲皮素诱导HO-1对酒精所致大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用,其机制与HO-1的代谢产物之一胆红素有关。