组织工程化人工肋骨三维支架材料的比较及生物学评价

目的 通过生物学评价考察多孔磷酸钙和聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA/HA)两种组织工程化人工肋骨材料的安全性,并筛选出较为合适的材料.方法 利用两种材料的浸提液进行热源试验、溶血试验、急性伞身毒性试验等生物学评价.利用micro-CT进行材料孔隙率和HA含量的测定,并将两种材料分别与猪骨髓基质干细胞进行培养,观察其接种后连续6 d细胞的生长情况和4、12、24 h细胞黏附情况.结果 两种材料均无急性全身毒性反应、溶血和热源作用.micro-CT结果显示,多孔磷酸钙较PLGA/HA有更高的HA含量(P≤0.05),与人松质骨接近,并且孔径大小均衡,互相连通.细胞增殖试验显示,多孔磷酸钙组细胞较PLGA/HA组生长明显快(P≤0.05).黏附试验显示,细胞对于两种材料的黏附率都不足50%,但两者无明显差异(P>0.05).结论 多孔磷酸钙和PLGA/HA对机体毒性较小,安全可靠;作为组织工程化人工肋骨的支架来说多孔磷酸钙比PLGA/HA更为合适.     

两种组织工程化人工肋骨支架材料的制备及体内外降解实验研究

目的选择组织工程界常用的聚乳酸-羟基乙酸共聚物／羟基磷灰石（PLGA／HA）与多孔磷酸钙（CPC）两种支架材料,通过体内外降解实验筛选出更为符合组织工程化人工肋骨支架的材料。方法将PLGA／HA（PLGA／HA组）和CPC（CPC组）两种材料分别进行体外实验和动物体内实验,体外实验：将同等大小的PLGA／HA和CPC材料浸入0．9％NaCl溶液,并保持无菌,放入37℃温箱内,分别于2、4、8、12和24周时取出称重,比较两种材料在体外的降解速度差异;体内实验：将同等大小的PLGA／HA和CPC材料各2片分别植入20只新西兰大白兔脊柱两侧的皮下,于2、4、8、12和24周取出称重,各时间点分别处死4只大白兔;材料周围组织送组织学检查及扫描电子显微镜观察。结果薄层CT扫描（Micro—CT）和扫描电子显微镜观察结果,CPC组较PLGA／HA组具有较好的三维结构（1101．2228±0．6184mg／ccm vs．1072．5523±0．7442mg／ccm）及孔隙率（70．26％±0．45％ vs．72．82％±0．51％）;体外实验显示：两组材料在体外降解速度均较慢,至6个月时才有明显的降解,其中PLGA／HA组降解相对较多,降解了60％;体内实验显示：PLGA／HA组降解比体外更快,3个月时已基本降解完,比CPC组降解快,降解了96％;另外CPC组材料周围的炎症反应明显比PLGA／HA组轻,更适合细胞的生长和黏附。结论对再生时间较长的长段肋骨缺损,CPC比PLGA／HA更适合。     

可塑形脱细胞软骨基质材料的制备及性状研究

目的 利用牛膝关节透明软骨进行脱细胞处理,制备新型可塑形生物材料,探讨脱细胞软骨基质作为组织工程载体材料的可行性. 方法 采集新鲜牛膝关节,切取关节表面透明软骨,冻干后低温粉碎为软骨微粒,胰酶、Triton X-100及低张Tris-HC1溶液联合作用进行脱细胞处理,冷冻干燥塑形,紫外线交联后制备脱细胞软骨基质材料.采用组织学、免疫组织化学、扫描电镜、孔隙率测定及生物力学检测等对材料的理化性状进行观察分析.取4只成年新西兰白兔骨髓制备BMSCs,传至第3代进行实验.观察浓度分别为100%、10%及1%的材料浸提液培养BMSCs 0、24、48及72 h后相对乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率,以含5?S的DMEM培养基作为阴性对照,观察细胞毒性作用;并将浓度为1×107 个/mL的BMSCs单细胞悬液与材料复合培养,观察细胞黏附情况. 结果 制备的脱细胞软骨基质材料呈白色多孔状结构.HE染色示材料由纤维状的软骨微粒形成网状结构,基质内无细胞成分残留;阿尔新蓝染色示微颗粒呈蓝色.材料Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性.扫描电镜材料为多孔状海绵结构,孔径30～150μm.压汞法测定材料平均孔隙率为89.37%,平均孔径为90.8μm.力学分析示脱细胞软骨基质材料的压缩模量为(17.91±0.98)MPa,未经脱细胞处理的软骨微粒材料压缩模量为(15.12 ±0.77)MPa,差异无统计学意义(P>0.05);与正常牛关节软骨的(26.30±1.98)MPa比较差异均有统计学意义(P<0.05).细胞毒性实验显示,培养0、24、48及72 h,100%、10%、1%浓度材料浸提液条件培养基和阴性对照DMEM培养基相对LDH释放率差异无统计学意义(P>0.05).细胞黏附实验显示细胞可黏附于材料上,生长状态良好. 结论 牛关节软骨经脱细胞处理后,制成的多孔状脱细胞软骨基质材料,既保持了软骨基质中的主要成分,又具有良好的理化性质和生物相容性,可作为组织工程研究的一种新型载体材料.     

磷酸钙骨水泥材料的孔径大小与大鼠骨髓基质干细胞黏附能力之间的关系

目的 评价不同大小孔径的磷酸钙骨水泥(CPC)材料对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)黏附能力的影响.方法 采用盐析法制备3种不同孔径(200～300 μm、300～450 μm、450～600 μm)的CPC材料,利用Micro-CT测量3种材料的平均孔径、孔隙率.无菌条件下取新生大鼠BMSCs原代培养并传代;将3组材料分别放置于24孔板内,每种材料接种2×105个细胞后.于接种后12、24 h收集细胞并计数,计算细胞黏附率;并对24 h收集细胞行Annexin V FITC/PI双标记,流式细胞仪检测细胞凋亡、坏死检测,并利用扫描电镜观察细胞形态及黏附情况.结果 Micro-CT测量结果显示:3种CPC材料孔径间相互连通,孔隙率均>67%,平均孔径分别为240、410、510 μm.接种后12 h,3种材料表面细胞黏附率及坏死率比较差异均无统计学意义(P>0.05);200-300 μm组在接种后24 h细胞黏附量明显少于300～450 μm组和450-600 μm组,差异有统计学意义(P<0.05);200～300 μm组材料表面细胞坏死数量明显多于450～600 μm组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 孔径大小可影响大鼠BMSCs在多孔CPC材料上的黏附能力,随着孔径增大,细胞黏附率逐渐增高,细胞坏死率逐渐降低,为进一步研究孔径结构对细胞的影响提供了实验依据.

Abstract：

Objective To study the effect of different pore sizes of calcium phosphate cement (CPC) scaffolds on cell adhesion. Methods Rat bone mesenchymal stem cells (BMSCs) primarily cultured were used in the present study. CPC scaffolds of 3 pore sizes (200 to 300 (μm, 300 to 450 μm, 450 to 600 μm) were respectively groups A, B and C. Micro-CT was used to analyze the average pore size and porosity of each group. The 3 kinds of CPC were placed in 24-well plates and 2 × 105 cells were incubated per well. In each group, the cells were harvested 12 and 24 hours after incubation to count cell numbers and adhesion rate. Cell apoptosis and necrosis were detected by flow cytometry and cell morphology and adhesion were observed by scanning electron microscope (SEM) 24 hours after incubation. Results Micro-CT showed that pores of the CPC used in this study were interconnected and the porosity of each group was greater than 67%. The average pore sizes of the 3 groups were 240 μm, 410 μm and 510 μm respectively. At 12 hours, there were no significant differences between the 3 groups in cell adhesion and necrosis ( P > 0. 05). At 24 hours, cell adhesion in group A was significantly less than in groups B and C ( P < 0. 05), and cell necrosis in group A was significantly more than in group C (P < 0. 05). Conclusion In CPC scaffolds for culture of BMSCs,cell adhesion rate may increase gradually and cell necrosis may decrease gradually with the increase of pore size.     

胶原-透明质酸钠-纤维蛋白胶复合去抗原松质骨支架的制备及特征

[目的]探索胶原-透明质酸钠-纤维蛋白胶多孔支架复合去抗原松质骨的骨软骨一体化材料的制备方法及其特征.[方法]将胶原、透明质酸钠及纤维蛋白胶混匀,利用纤维蛋白胶的粘合性与去抗原牛松质骨复合,成为骨软骨一体化的支架材料.通过大体观察和扫描电镜观察了解材料的孔径和交通情况;分离、增殖仔兔骨髓基质细胞(BMSCs),取第3代BMSCs接种至支架材料复合培养,1、3、5、7和10 d后,行MTT检测并绘制细胞生长曲线;取第7 d标本,行扫描电镜观察.[结果]经交联和复合的一体化骨软骨支架材料具有良好的三维多孔结构,骨相孔径约300～500μm,软骨相孔径约80～120μm,两部分连接紧密;电镜观察见骨相及软骨相均有细胞黏附,细胞周围有基质存在;MTF检测显示,各时间点的OD值在实验组与对照组之间无统计学差异(P＞0.05).[结论]胶原-透明质酸钠-纤维蛋白胶多孔支架复合去抗原牛松质骨的一体化材料具有良好的空间结构和生物相容性,可用于修复骨软骨联合缺损的组织工程支架材料的研究.     

软骨细胞外基质/壳聚糖复合多孔支架和骨髓间充质干细胞构建组织工程软骨

[目的]探讨软骨细胞外基质和壳聚糖制备复合多孔支架,同时并对小鼠骨髓间充质干细胞构建组织工程软骨的可行性进行观察.[方法]以猪关节软骨细胞外基质和壳聚糖为原料,采用冷冻干燥法制备软骨细胞外基质/壳聚糖复合多孔支架.通过扣描电镜观察材料内部结构及孔径大小,液体位移法测定材料的孔隙率,MTT方法检测支架浸提液毒性.将小鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养并用TGF-β1成软骨诱导后,与材料复合培养,扫描电镜观察细胞在材料上的生长粘附情况.[结果]软骨细胞外基质/壳聚精复合支架具有疏松多孔结构,孔径大小(159±36)μm,孔隙率为90.5%±2.3%,复合支架中的软骨细胞外基质成分甲苯胺蓝染色、番红O染色均呈阳性,MTT结果显示支架无细胞毒性.诱导的骨髓间充质干细胞在支架表面生长良好.[结论]软骨细胞外基质/壳聚糖复合材料具有合适的孔径和孔隙率,生物相容性良好,是组织工程软骨的良好支架载体.     

多孔磷酸钙/骨基质明胶复合骨水泥修复兔腰椎骨缺损的实验研究

目的探讨多孔磷酸钙/骨基质明胶复合骨水泥(以下简称多孔复合骨水泥)修复兔腰椎骨缺损的效果。方法采用Urist等的方法制备成年新西兰兔骨基质明胶(bone matrix gelatin,BMG),参考W/O/W复乳法制作聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic)acid,PLGA]空白微球,将PLGA空白微球和BMG与磷酸钙骨水泥(calcium phosphate cement,CPC)复合,构建多孔复合骨水泥。通过体外抗溃散观察、孔隙率测定及生物力学试验,观察其理化特性;并以CPC作对照。取30只2月龄新西兰兔,制备L_3椎体大小为4 mm×3 mm×3 mm的骨缺损后,分别填入多孔复合骨水泥(实验组,n=15)和CPC(对照组,n=15)。术后第4、8、12周,X线片观察骨融合情况,micro-CT分析骨密度(bone mineral density,BMD)、骨体积分数(bone volume fraction,BVF)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th.)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N.)和骨小梁分离度(trabecular spacing,Tb.Sp.),组织学观察新生骨形成情况。结果两种骨水泥均有较好抗溃散性,多孔复合骨水泥孔隙率为55.06%±1.18%,抗压强度为(51.63±6.73)MPa,与CPC的孔隙率(49.38%±1.75%)以及抗压强度(63.34±3.27)MPa相比,差异有统计学意义(t=4.254,P=0.006;t=2.476,P=0.034)。X线片观察示,随时间延长,两组材料与宿主之间的边界逐步模糊,且实验组第12周时边界已消失、对照组仍可见。micro-CT检测各时间点实验组BMD、BVF、Tb.Th.、Tb.N.以及Tb.Sp.与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。组织学观察示,随时间延长,两组植入材料中均见新骨生长,其中实验组新生骨与宿主骨形成骨性连接,优于对照组。结论多孔复合骨水泥具有骨诱导活性和骨传导双重作用,可以有效促进兔腰椎骨缺损修复重建。     

脱细胞软骨基质三维支架的制备及特性研究

[目的]探索脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备及其应用于关节软骨组织工程的可行性。[方法]新鲜牛膝关节软骨粉碎后,梯度离心法获取软骨微粒,采用改进的Courtman改良法处理细胞后,再冷冻干燥,制备脱细胞软骨基质三维多孔支架。然后,采用京尼平对三维支架进行交联,再次冷冻干燥后,对支架材料进行大体、组织学染色及扫描电镜观察,分别测定支架的孔隙率、溶胀率、降解率。最后,分离培养兔骨髓基质细胞(BMSCs),采用MTT法检测BMSCs在支架材料上的生长、增殖情况,以柱形图表示。[结果]大体观察显示支架呈疏松多孔状,京尼平交联后整体呈深蓝色。组织学观察显示支架材料无软骨细胞碎片残留,HE染色、甲苯胺兰染色观察均未见软骨细胞残留。测量示支架孔隙率为90%,溶胀率为(1314±337)%,降解率2周为(13.69±7.3)%,4周为(25.99±8.9)%。MTT法显示细胞在支架上生长良好,与对照组DMEM培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P0.05),提示支架无细胞毒性。扫描电镜显示支架内孔洞较明显,BMSCs通过细胞突起黏附于支架表面,黏附良好,能较好地在其上生长。[结论]经改进的Courtman改良法处理的软骨基质三维多孔支架脱细胞更彻底,保留了软骨的天然细胞外基质成分,天然交联剂京尼平交联后支架的细胞相容性好,抗降解性得到了提高,是一种适用于软骨组织工程的良好载体。     

静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维作为组织工程支架的体外细胞相容性研究

目的 探讨静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)/聚乙二醇(PEG)共聚物纳米纤维作为组织工程支架的可行性,及其与大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的体外相容性. 方法 静电纺丝法分别制备PLGA/PEG和PLGA纳米纤维支架,扫描电镜(SEM)观察材料结构;分离培养大鼠BMSCs,取第3代BMSCs分别接种于PLGA/PEG纳米纤维支架和PLGA纳米纤维支架进行培养,噻唑蓝(MTT)法测定其细胞毒性及细胞增殖;接种后2、4、6h血球计数板计数法测定其黏附率;DAPI荧光染色观察细胞核形态;SEM观察细胞和支架的形态、黏附及生长情况. 结果 SEM观察显示两组支架呈相互交联的多孔网状无纺结构.PLGA/PEG组和PLGA组纤维直径分别为(655±57)nm和(539±48)nm;孔隙率分别为86.8％±1.5％和84.7％±1 2％.MTT检测BMSCs在两组支架中生长良好,OD值均随时间延长而增大,两组各时间点比较差异均有统计学意义(P＜0 05).各时间段PLGA/PEG组的细胞黏附率明显高于PLGA组,差异均有统计学意义(P＜0.05).DAPI染色示各组细胞核形态正常,核质均染,未见明显凋亡及坏死细胞;PLGA/PEG组细胞较PLGA组明显增多.SEM观察显示,PLGA/PEG组BMSCs在支架上生长良好,基质分泌、生长情况优于PLGA组. 结论 采用静电纺丝法制备的PLGA/PEG纳米纤维支架安全无毒,具备合适的孔径和孔隙率,适合BMSCs生长,细胞相容性良好,是一种组织工程良好的支架载体.     

新型脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备

目的 探讨脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备方法以及将其应用于关节软骨组织工程的可行性. 方法 取天然人软骨粉碎后,采用梯度离心法取100 nm～5μm软骨微丝,脱细胞处理后制备为质量体积比为3%的悬液,采用冷冻冻干法制备脱细胞软骨基质三维多孔支架.254nm紫外线和碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺对支架进行交联.冷冻冻干后,对支架材料进行组织学及扫描电镜观察,测定支架孔径和孔隙率、吸水率,并采用MTT法分析支架浸提液毒性.分离培养犬BMSCs,用TGF-β1成软骨诱导后种植至支架,倒置显微镜、电镜观察细胞在支架上的生长、分化情况. 结果 组织学观察显示,三维多孔支架中无软骨细胞碎片残留,甲苯胺蓝染色、番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均呈阳性.扫描电镜显示支架内孔洞相互连通,孔径为(155±34)μm,孔隙率为91.3%±2.0%,吸水率为2 451%±155%.MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照DMEM培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P＞0.05),支架无细胞毒性.倒置显微镜观察,细胞在支架上黏附良好;扫描电镜下细胞在支架上均匀分布,细胞呈圆形或椭圆形,并有基质分泌. 结论 制备的脱细胞软骨基质三维多孔支架去细胞彻底,保留了软骨ECM主要成分,无毒,具备合适的孔径和孔隙率,生物相容性良好,是软骨组织工程良好的支架载体.     

载rhBMP-2人工骨促进家兔脊柱融合实验研究

目的 探讨CPC作为rhBMP-2载体促进家兔脊柱融合的作用及效果. 方法 取1 mg rhBMP-2分别与1 g CPC、体积为6.0 cm×2.0 cm×0.5 cm的医用明胶海绵(absorbable gelatin sponge,AGS)吸附复合,冻干制备rhBMP-2/CPC、rhBMP-2/AGS生物材料.45只24周龄新西兰兔,体重2.5～3.5 kg,随机分为A(n=17)、B(n=11)、C(n=17)3组.暴露L5、6横突,将L5、6横突后缘骨皮质磨除,露出松质骨,行后路双侧L5、6横突间植骨,A、B、C组分别植入rhBMP-2/CPC、rhBMP-2/AGS、CPC 3种材料.于术后4、8、24周,行大体、组织学观察及影像学检查. 结果 术后4、8周脱钙组织切片,A组均见明显骨痂连接;B组仅见小片骨痂;C组见纤维连接,局部少许软骨.术后4周A、B、C组脱钙组织切片评分分别为(7.30±0.76)、(3.68±1.60)和(1.75±0.54)分,术后8周分别为(8.32±1.11)、(3.75±1.23)和(1.47±0.23)分;各时间点A、B组以及A、C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).不脱钙硬组织切片术后4、8周A组均见类松质骨样骨组织再生,C组植入物周围见纤维连接,少许成骨.术后4周单位面积内成骨面积A、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05);术后8周,A、C组间比较差异有统计学意义(P<0.05).三维重建CT评分A、B、C组分别为(2.50± 0.57)、(1.00±0.00)和(1.00±0.00)分,C组与A、B组以及A、B组间比较差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 CPC作为rhBMP-2载体能够促进家兔脊柱骨性融合,可作为一种新型的人工骨修复材料.     

EFFECT OF DILUTING PROPOFOL ON THE INCIDENCE OF PAIN ON INJECTION AND VENOUS SEQUELAE

The effect of diluting propofol in 5% dextrose on the incidenceof i.v. injection pain was studied in 100 adult patients. Severeinjection pain occurred in 32% (16 patients) who received undilutedpropofol, compared with 10% (five patients) who received dilutepropofol. We concluded that the dilution of propofol significantlyreduced the incidence of severe pain during injection withoutincreasing postoperative venous sequelae.     

COMPARISON OF THE EFFECTS OF PANCURONIUM AND TUBOCURARINE ON DIFFERENT MUSCLES OF YOUNG AND OLD MICE

In order to evaluate the sensitivity of different muscle typesto neuromuscular blocking drugs, a system using mouse musclesin vitro was developed and applied to detect changes in drugsensitivity in relation to age. The effect of pancuronium andtubocurarine on initial twitch and on the ratio of fourth twitchto first twitch (T4/T1) of a train-of-four at 2 Hz were comparedin fast-twitch, slow-twitch and respiratory muscles in the mouse.The muscles used were: extensor digitorum longus (EDL), soleus(SOL) and diaphragm (DIA). For both drugs the order of decreasingsensitivity was EDL > SOL > DIA. This result was the samewhether first twitch or T4/T1 was used, although the latterwas a more sensitive indicator. The sensitivity of neuromuscularblock was less in muscles from old (30–33 month) animalsthan in the equivalent muscles from young (8–12 month)animals.     

INFLUENCE OF AGE AND SEX ON THE PHARMACOKINETICS OF THIOPENTONE

Thiopentone was given to eight women and eight men (60–79yr). The disappearance of thiopentone from the venous bloodwas described by a three-compartment open model. The only significantdifference between the sexes was a higher initial venous concentrationin males. The dose (mg kg ^–1) for induction was 70% ofthe value (P<0.05) previously reported for a comparable groupof younger men and women (20–40 yr). The volumes of distributionV₂ and V₃ were larger in the elderly (P<0.05). The terminalhalf-lives were increased with advancing age (from 75% to 100%on average) (P0.01). The clearance value was 50% greater inthe older women than in a group of young women. For all groupsa significant correlation between initial drug concentrationand k₁₂ supported the hypothesis that the redistribution rateconstant k₁₂ is the predominant factor in the pharmacokineticprofile of a dose of thiopentone sufficient to obtund the eyelashreflex.     

瘦素对hBMSCs成骨分化的作用及机制研究

目的 探讨瘦素(leptin,LEP)对hBMSCs成骨分化的作用及机制. 方法 采用全骨髓法培养hBMSCs,取第3代hBMSCs分为A、B、C、D、E、F组,待细胞贴壁后各组分别加入400、200、100、50 ng/mL LEP、100 ng/mL BMP和普通培养基2 mL进行培养.于培养后7 d行ALP染色、21 d行矿化结节染色,倒置相差显微镜观察染色结果 ;并于培养后7、14、21 d,检测各组ALP活性、骨钙素(osteocalcin,OCN)水平,筛选LEP的最佳诱导浓度;B、E、F组细胞培养7 d后,采用RT-PCR检测成骨相关基因:核心结合因子(core-binding factor α1,Cbfα1)、ALP、Col Ⅰ、OCN mRNA的表达. 结果 诱导培养7 d,ALP染色结果 显示,A、B、C、D、E组细胞胞浆均呈蓝色阳性着色,F组呈弱阳性;诱导培养21 d,矿化结节染色结果 显示,A、B、C、D、E组细胞染色呈阳性,F组呈阴性.B组培养后7、14、21 d,ALP、OCN活性低于E组,但显著高于其余各组,差异均有统计学意义(P<0.05),200 ng/mL LEP为最佳浓度.B、E、F组细胞培养7d,F组Cbfα1、ALP、Col Ⅰ、OCNmRNA均不表达;B、E组各产物mRNA均有表达,但B组低于E组. 结论 LEP可促进hBMSCs成骨分化,其机制可能为LEP促进了成骨相关基因的表达.     

THE EFFECT OF CONCENTRATION ON VASOACTIVITY OF BUPIVACAINE AND LIGNOCAINE

In a double-blind trial bupivacaine 0.125, 0.25 and 0.5% andlignocaine 0.5, 1 and 2% were given intradermally to 31 volunteers.Vasoconstriction was observed more frequently at low concentrationsof each drug, and vasodilatation at high concentrations. Theseobservations were highly significant (P< 0.001). Durationof action was unaffected by concentration, except in the caseof bupivacaine 0.5%, the effect of which was longer lastingthan that of other solutions     

成骨细胞与诱导剂对骨髓基质干细胞的增殖与成骨分化的影响

目的探索一种新的骨髓基质干细胞(marrow stromal stem cells,MSCs)增殖与成骨分化的体外诱导培养体系. 方法乳大鼠颅骨来源的第3代成骨细胞与诱导剂(1 nmol/L地塞米松、10 mmol/L β-甘油磷酸钠、50μg/ml抗坏血酸)对大鼠股骨、胫骨来源的MSCs生长的影响.于8块24孔板上培养MSCs,每孔接种5×104个第3代MSCs.按培养成分不同分为4组,每组2块.DMEM培养为对照组;诱导剂培养为诱导剂组;成骨细胞培养为成骨细胞组;联合使用成骨细胞与诱导剂培养为联合诱导组.计数诱导1～8 d各组MSCs的数量并绘制细胞生长曲线,检测诱导10 d的MSCs的碱性磷酸酶活性,采用RT PCR检测诱导2周时MSCs骨钙素mRNA的表达水平.结果原代及传代MSCs形态正常.细胞生长曲线示MSCs数量均随时间延长增加.成骨细胞组增殖最快,诱导剂组增殖最慢,5～8 d成骨细胞组及诱导剂组细胞数量与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).联合诱导组碱性磷酸酶活性为2.01±0.56 U与对照组0.68±0.14 U、诱导剂组1.27±0.43 U及成骨细胞组0.77±0.19 U比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).对照组不表达骨钙素mRNA,诱导剂组为0.783±0.094、联合诱导组为0.814±0.071与成骨细胞组0.302±0.026比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论联合使用成骨细胞和诱导剂诱导MSCs,不影响MSCs的正常增殖而促进MSCs的成骨分化,诱导效果较好,可望成为一种新的骨组织工程种子细胞的体外培养体系.     

肝胆管结石对肝胆系统影响的临床与实验研究

为研究肝胆管结石对肝胆系统的影响,作者从大体、纤胆镜、光镜和电镜等不同层次对160例肝胆管结石病人的肝胆系统进行了观察。发现84例(52.5％)有胆管损害,40例有肝脏损害(25％);但在光镜和电镜观察下,几乎所有病例有肝细胞变性。为证实临床所见,作者进行了动物实验,将60只家兔分为4组:胆管胆石注入组和泥沙注入组,胆石和泥沙对肝组织的亚急性毒理实验组。结果显示,在梗阻等机械性因素相同的条件下,胆石对肝胆系统可造成更大的损害。作者认为,①肝胆管结石无论是否为肝内结石或有无梗阻均可造成肝胆系统的损害;②胆石对肝胆系统的损害除梗阻因素外,胆石内有害物质的直接作用也是重要原因。因此,肝胆管结石一经确诊应及早行有效治疗。     

SOME EFFECTS OF ANAESTHESIA AND SURGERY ON CARBOHYDRATE AND FAT METABOLISM

The effects of emotional stress, nitrous oxide and halothaneanaesthesia, a 1-minute period of hypoxia, and surgery, on theblood sugar, plasma free fatty acids (FFA) and insulin wereinvestigated. The emotional stress of being brought to the operatingtheatre and the stress of surgery seem to be more importantthan anaesthesia in causing a rise in blood sugar and plasmaFFA. There was a corresponding fall in levels of plasma insulin.The infusion of Phentolamine in two patients did not preventthe failure of insulin response to injected glucose during surgery.The clinical significance of this temporary state of glucoseintolerance is discussed. ^*Present address: Department of Biochemistry,Bristol University.