冷冻伤性脑水肿神经细胞内钙离子浓度变化及尼莫地平的治疗作用

报告大鼠冷冻伤性脑水肿突触体内游离钙离子浓度([Ca~(2 )]_i)和脑组织水分含量变化之间的规律,并采用L-型钙离子通道阻滞剂尼莫地平进行治疗,研究其对神经细胞[Ca~(2 )]_i和脑水肿的影响.结果表明:冷冻后4h神经细胞内即已发生钙离子超载.伴随脑组织水分含量的增加.脑含水量随[Ca~(2 )]_i的升高而增加,两者呈正相关关系.应用尼莫地平治疗后神经细胞突触体内[Ca~(2 )]_i.明显下降,脑水肿亦明显减轻.     

神经细胞Ca~(2 )通道变化及对鼠血脑屏障通透性和外伤性脑水肿的影响

本实验通过大鼠的脑损伤模型,检测了脑皮质神经元突触体胞浆中游离Ca~(2 )浓度([Ca~(2 )]i),研究神经细胞 Ca~(2 )通道变化对血脑屏障(BBB)通透性和外伤性脑水肿的影响。结果表明,脑损伤后脑突触体胞浆中游离[Ca~(2 )]i显著升高,为对照值的10～16倍。Ca~(2 )超载使BBB通透性增高,加剧脑水肿。采用Ca~(2 )拮抗剂Nimodiipine 能阻断Ca~(2 )通道开放,降低BBB通透性,对脑水肿有显著治疗效果。氢溴酸山莨菪碱的治疗作用与Nimodipine基本相同。     

大鼠急性感染性脑水肿的脑保护作用研究

目的探讨百日咳菌液诱导的急性感染性脑水肿的发生机制和类型,并观察尼莫地平和MK-801的作用.方法测定脑组织水分含量和EB含量,Fura-2/AM测定突触体[Ca2+]i,放射性配基结合法测定NMDA受体的结合量.结果 [Ca2+]i随脑水肿时间的延长而持续进行性升高,伴随脑组织水分含量和EB含量增加.MK-801预处理和尼莫地平治疗后,脑组织含水量和EB含量及[Ca2+]i明显下降(P＜0.05).PB组与NS组相比Kd值有显著性差异,而Bmax差异无显著性.结论感染性脑水肿是混合性脑水肿,它的发生与Ca2+通道开放和NMDA受体介导的迟发性钙离子内流及BBB通透性增加密切相关.MK-801和尼莫地平通过缓解细胞内钙离子超载和改善BBB的通透性,从而减轻脑水肿.     

外伤性脑水肿神经元胞浆游离钙浓度及Ca~(2+)—ATP酶活性变化

本文研究大鼠脑损伤后皮质神经元突触体胞浆中游离钙浓度([Ca~(2+)]i),Ca~(2+)—ATP酶活性及脑组织水含量变化。并选用脑活素治疗,观察其对神经细胞Ca~(2+)超载及Ca~(2+)—ATP酶活性改变和脑水肿的影响。结果:脑损伤后神经元Ca~(2+)通道开放,伤后仅0.5小时,突触体胞浆中游离[Ca~(2+)]i已升高至1095.42±76.15nmol/L水平,为对照值的10倍;伤后6,24,48和72小时,[Ca~(2+)]i持续处于高水平,为对照值的16～17倍。与之相反,神经细胞线粒体Ca~(2+)—ATP酶活性显著下降。脑损伤后脑组织水含量增加,以脑白质增加较为明显。应用脑活素治疗后,线粒体Ca~(2+)—ATP酶活性有明显回升,神经元胞浆Ca~(2+)超载有所减轻,脑水肿有一定改善。     

脑损伤与神经细胞钙通道变化

脑损伤导致神经细胞钙通道开放、细胞内Ca~(2+)超载是加剧继发性脑损害的关键因素之一。本文着重综述脑损伤时神经细胞Ca~(2+)通道变化及细胞内Ca~(2+)超载对脑水肿等脑继发性损害的有关机理,以及钙拮抗剂治疗脑损伤的作用。     

凝血酶对原代培养海马神经元游离钙浓度的影响

目的研究凝血酶对原代培养海马神经元内游离Ca^2 水平的影响。方法采用原代培养大鼠海马神经元方法，用钙离子指示剂Fura-2双波长荧光检测凝血酶对海马神经元内游离钙浓度的影响。结果(1～40)U／ml凝血酶可使海马神经元内游离Ca^2 水平显著升高，且呈剂量依赖性。凝血酶受体激活肽可明显升高细胞内游离[Ca^2 ]i。当胞外Ca^2 为1．3mmol／L时，40U／ml凝血酶可使海马神经元游离[Ca^2 ]i明显增加；而当胞外Ca^2 为0．0mmol／L时，40U／ml凝血酶不影响海马神经元游离[Ca^2 ]i。预先加入MK-801可显著降低凝血酶的升钙作用。结论凝血酶使神经细胞内游离Ca^2 浓度异常升高的作用机制可能是通过激活凝血酶受体，继而激活NMDA受体门控的Ca^2 通道介导胞外Ca^2 大量内流。     

NMDA受体拮抗剂剂量与脑缺血再灌注大鼠海马内源性神经干细胞的增殖

背景：脑缺血再灌注后,过度释放的兴奋性氨基酸可通过NMDA受体激活内源性神经干细胞,促使其增殖、分化,修复神经细胞,但同时也导致细胞内钙离子超载,引起神经细胞的损伤。通过控制NMDA受体活化的程度,刺激内源性神经干细胞激活的同时把损伤减到最小。 目的：观察NMDA受体拮抗剂MK-801质量浓度对脑缺血再灌注大鼠海马内源性神经干细胞增殖的影响。 方法：健康雄性SD大鼠54只随机数字表法分为对照组(不进行任何处理)、手术组(缺血模型制作)及不同剂量MK-801组。采用大鼠四条血管阻断方法(Pulsinelli-4VO法)制备大鼠全脑缺血再灌注模型。不同浓度MK-801组在模型制作前30 min按照0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 ,1.2 mg/kg侧脑室注射MK-801。Western-blot、RT-PCR技术检测各组nestin蛋白及mRNA水平及表达。 结果与结论：MK-801剂量在0.8 mg/kg以下时,nestin mRNA及蛋白的表达差异无显著性意义(P > 0.05),呈现高表达;当剂量为0.8 mg/kg时,可明显抑制内源性神经干细胞增殖;在0.8mg/kg以上,对神经干细胞的抑制作用随着剂量的升高呈递增趋势;在1.2 mg/kg时,大鼠有躁动、共济失调等严重不良反应。nestin mRNA表达结果与蛋白表达趋势相吻合。说明MK-801的剂量与脑梗死后神经功能的修复有一定的关系,实验中0.6 mg/kg是一个比较合适的实验应用剂量,在此剂量下既可使MK-801减少兴奋性氨基酸对神经元的毒性作用,保护神经细胞,又使内源性神经干细胞的增殖不受较大影响。     

实验性脑梗死后突触体[Ca^2＋]i改变及神经生长因子治疗的影响

目的:探讨RHR脑梗死后病灶边缘额、顶叶皮层脑组织突触体内[Ca~(2+)]_i水平及其对神经生长因子(NGF)治疗的变化。方法:用Fura-2荧光标记,测定分离突触体内[Ca~(2+)]_i。结果:在RHR脑梗死后,静息状态下病灶边缘额、顶叶皮层脑组织突触体内[Ca~(2+)]_i在第3、7及14d明显升高,NGF脑室内注射12d后明显降低,同时减少运动障碍评分。结论:病灶边缘皮层突触体内[Ca~(2+)]_i的升高不利于神经运动功能的恢复,NGF降低突触体内[Ca~(2+)]_i促进运动功能恢复。     

脑损伤与钙及钙调素

近年来研究表明,中枢神经系统损伤后存在神经细胞钙离子(Ca~(2+))超载。认为神经细胞内Ca~(2+)超载及钙调素活性异常增高是引起继发性脑损害加重的关键。钙拮抗剂可抑制脑细胞Ca~(2+)内流,对颅脑损伤的救治有一定意义。     

Fura—2／AM法测定脑缺血后脑片细胞内游离钙

采用新型Ca~(2+)荧光指示剂Fura-2建立双波长法测定兔MCAO局灶脑缺血后脑片神经细胞内游离钙([Ca~(2+)]_i),结果显示脑缺血后神经元[Ca~(2+)]_i明显升高。     

钙信号系统与学习和记忆

目前认为,Ca~(2+)信号系统对突触可塑性和长时程增强(LTP)的形成起着重要作用。突触后[Ca~(2+)]i升高是诱导LTP的必要条件之一;钙调索直接参与LTP形成;Ca~(2+)依赖性蛋白激酶的含量和活性与学习、记忆呈正相关。衰老时以及阿尔茨海默病(AD)患者神经细胞Ca~(2+)内流增多、Ca~(2+)外排机制失调,神经细胞内[Ca~(2+)]i持续性升高;CaM含量降低及活性下调,CaMpKⅡ自身磷酸化活性降低。上述异常均可影响LTP,使突触可塑性降低,分别导致了老年和AD时的学习、记忆障碍。     

地卓西平马来酸盐对雄性大鼠自发活动和前脉冲抑制及再认记忆的影响

目的 观察急性腹腔注射N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂地卓西平马来酸盐(MK-801)刘大鼠自发活动、感觉运动门控和物体再认记忆的影响,探讨MK-801模拟精神分裂症不同内表现型的适宜剂量.方法 成年雄性SD大鼠共104只,按照体质量采用分层随机化方法进行分组.(1)取SD大鼠48只,分为MK-801小剂量组、MK-801中剂量组、MK-801高剂量组和对照组,每组12只,观察不同剂量MK-801 (0.1、0.2、0.4 mg/kg)对大鼠自发活动的影响;(2)取SD大鼠32只,分为MK-801小剂量组、MK-801中剂量组、MK-801高剂量组和对照组,每组8只,观察不同剂量MK-801(0.1、0.2、0.4 mg/kg)对大鼠前脉冲抑制(PPI)的影响;(3)取SD大鼠24只,分为MK-801小剂量组和对照组,每组12只,观察小剂量MK-801 (0.1 mg/kg)对大鼠物体辨别测试的影响.结果 (1)中高剂量MK-801 (0.2,0.4 mg/kg)呈剂量依赖性诱导大鼠自发活动的增加以及PPI的损害(P＜0.05或P＜0.01),小剂量(0.1 mg/kg)组在自发活动和PPI上与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).(2)小剂量MK-801组在物体辨别测试中对新物体的偏爱指数显著低于对照组[(57.79±10.66)％比(73.34±18.52)％,P＜0.05].结论 中高剂量MK-801可引起自发活动和感觉运动门控功能异常,而小剂量在排除运动系统异常的前提下可特异性地破坏大鼠的再认记忆,提示MK-801模拟精神分裂症的不同内表现型时应根据研究目的选择适宜剂量.     

神经节苷脂（GM1）对局灶脑缺血的保护作用

在建立兔大脑中动脉阻断(MCAO)局灶脑缺血模型基础上,观察了神经节苷脂(GM_i)对脑缺血后1h,2h,4h脑片细胞内Ca~(2 )([Ca~(2 )]_i),Na~ ,K~ -ATPase,Ca~(2 ),Mg~(2 )-ATPase活性及脑水肿的影响。结果显示GM_1能降低[Ca~(2 )]_i含量,恢复两种ATPase活性及减轻脑水肿。这为应用GM_i治疗临床脑缺血脑水肿提供了实验依据。     

实验性颅脑损伤脑组织5-羟色胺和钙离子含量变化的研究

目的:研究脑损伤后脑内5-羟色胺(5-HT)和钙离子(Ca~(2 ))含量变化规律及其对脑的继发性损害。方法:采用荧光分光光度法对大鼠脑损伤后不同时间脑组织5-HT及Ca~(2 )含量进行检测,同时测量脑含水量并作病理观察。结果:在脑损伤后4h,脑组织中5-HT及Ca~(2 )含量显著增高,伤后8h仍维持在高水平,伤后4h脑含水量递增,电镜观察神经细胞受损逐渐加重。结论:5-HT的过度合成和释放可使脑组织内Ca~(2 )集聚增加,造成神经细胞严重损伤,并引起和加重继发性脑损伤。     

Fura—2荧光标记法测定突触体内游离Ca^2＋浓度的原理及方法

测定细胞内Ca~(2 )浓度已成为研究脑水肿发生机制的焦点。本文采用Fura-2荧光标记法,测定冷冻伤性脑水肿时突触体内游离钙离子浓度变化,来探讨突触体的制备方法、Fura-2测定神经细胞突触体内Ca~(2 )浓度的原理、方法及Fura-2优缺点和其影响因素。     

多巴胺D1和谷氨酸NMDA受体参与调控异动症大鼠纹状体△FosB蛋白的表达

目的研究多巴胺D1和D2受体以及谷氨酸NMDA受体对△FosB蛋白表达水平的影响,由此探讨它们在左旋多巴诱导的异动症(Levodopa-induced Dyskinesia,LID)发病机制中的作用。方法对单侧黑质纹状体6-羟多巴胺(6-OHDA)损毁致帕金森病(PD)大鼠给予左旋多巴治疗28d制作LID模型,将大鼠分为7组:正常对照组、PD组、LID组、SCH23390治疗组、MK-801治疗组、raclopride治疗组和非LID组,分别观察各组行为学改变并进行异常不自主运动(abnormal involuntary movement,AI M)评分,用免疫组化和免疫印迹方法测定各组△FosB蛋白表达水平。结果多巴胺D1受体阻断剂SCH23390和谷氨酸NMDA受体阻断剂MK-801明显减轻LID大鼠行为学异常,而多巴胺D2受体阻断剂raclopride对异常不自主运动无明显影响;LID大鼠损毁侧纹状体△FosB蛋白表达较PD大鼠和非LID大鼠明显增加;与LID大鼠相比,MK-801和SCH23390均使△FosB蛋白表达显著下降,而raclopride没有这种效应;各组大鼠健侧纹状体△FosB蛋白表达水平没有显著差异。结论多巴胺D1受体和谷氨酸NMDA受体均通过参与调控纹状体△FosB蛋白的表达而影响大鼠LID的发生。     

钠/钙交换蛋白SLC24A6在实验性颅内出血导致脑损伤过程中的作用及机制研究

目的探究钾依赖钠/钙交换蛋白-6(SLC24A6)参与大鼠脑出血后继发性脑损伤的作用和可能机制。方法建立SD大鼠脑出血模型,检测大鼠脑出血后尾状核SLC24A6表达及其介导的细胞内钙浓度([Ca~(2+)]_i)随时间变化的情况,观察SLC24A6在正常氧浓度和低氧条件下对[Ca~(2+)]_i的调控。结果脑出血早期,尾状核SLC24A6蛋白和SLC24A6mRNA水平均降低,在脑出血后3 d降至最低水平,5和7 d后轻微升高。脑出血后早期,[Ca~(2+)]_i增加,于脑出血后3 d达最高水平,5和7 d时逐步下降。正常氧浓度下,转染SLC24A6导致HEK293[Ca~(2+)]_i升高。结论 SLC24A6通过抑制钙超载在脑出血后脑损伤中起保护作用。     

谷氨酸致人神经母细胞瘤细胞兴奋性毒损伤的机制(英文)

目的探讨谷氨酸导致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y cells)兴奋性毒损伤的机制。方法MTT法检测SH-SY5Y细胞存活率;测定乳酸脱氢酶释放量观察细胞损伤程度;DAPI染色法观察细胞凋亡形态学特点;钙流法检测胞浆钙离子浓度变化 ;以胞内谷胱甘肽、超氧化物歧化酶活性和胞外丙二醛含量检测谷氨酸引发SH-SY5Y细胞的氧化应激状态。结果谷氨酸导致SH-SY5Y细胞受损,包括存活率下降、乳酸脱氢酶释放量增多及形态结构发生改变;谷氨酸处理 20 min 后,胞浆钙离子浓度无显著改变,而处理 24 h 后,胞浆钙离子大量增加,且 MK801 (NMDA受体拮抗剂)及LY341495 (代谢型谷氨酸受体拮抗剂)均不能抑制钙离子内流的增多;谷氨酸可导致SH-SY5Y氧化损伤,包括胞内谷胱甘肽含量减少、超氧化物歧化酶活性降低、胞外脂质过氧化产物丙二醛水平升高等,而丹参酮IIA (一种抗氧化剂)可减轻这些氧化损伤。结论谷氨酸导致SH-SY5Y细胞兴奋性毒损伤可能是通过氧化损伤产生的,而不依赖于 NMDA 受体介导的钙稳态的破坏。     

CRH对培养下丘脑神经元胞浆cAMP作用的探讨

目的:研究促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对下丘脑神经元细胞内cAMP浓度的调节作用。方法:取孕17天胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元,采用PTI(Photon Technology International,PTI)测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca~(2+)]i)变化的影响,放射免疫方法测定神经元内cAMP含量,治疗组用CRHl受体特异性拮抗剂CP-154526处理下丘脑神经元后。结果:正常对照组的下丘脑神经元[[Ca~(2+)]i和cAMP含量较低,外源性CRH刺激后,[Ca~(2+)]i立即升高,神经元细胞内cAMP生成明显增加,预先应用CP—154526处理再用CRH刺激下丘脑神经元,各刺激组与对照组相比,差异显著。CP—154526可明显抑制CRH(10~(-6)mol/L)刺激的下丘脑神经元细胞内[Ca~(2+)]i和cAMP的生成增加。结论:CRH可通过与其1受体结合直接作用于下丘脑神经元,使神经元[Ca~(2+)]i和cAMP含量明显增加,在调节下丘脑神经元激活过程中CRH可能起了一定的重要作用。     

钙离子拮抗剂治疗中风的研究

一、钙通道的分子生物学研究细胞外液的钙离子浓度约为10~(-3)mol/L,而细胞内液为10~(-6)mol/L,其浓度梯度的维持主要靠三种互相依赖的系统调节:电压依赖性钙通道、受体或神经递质依赖的钙通道和第二信使调节的内部途径。最近的研究表明有三种不同类型的电压依赖性钙通道:T型、L型和N型。T通道开放的时间短暂,很快失活;L通道的开启产生持续的钙内流;N通道则具有区别于T、L型通道的独特性质,并且只存在于某些神经元上。三种通道中只有L型通道对经典的钙拮抗剂敏感。二、钙离子拮抗制的药理钙离子拮抗剂和无活性的L型电压依赖性钙通道结合引起构型变化后限制钙离子经该通道进入细胞内。在高浓度情况下钙离子拮抗剂也可以抑制钙离子经受体依赖性钙通道进入细胞内。药理剂量的