豚鼠初级精母细胞延迟外向钾离子电流的研究

应用机械分离技术获得豚鼠单脑初级精母细胞后，进行全细胞式膜片钳记录。结果表明；在标准盐溶液中，当钳制电位－９０ｍＶ，指令电压（－６０￣＋１４０）ｍＶ，步阶电压２０ｍＶ时，可记录到外向离子电流。将标准盐溶液换成含４ｍｍｏｌ／Ｌ的ＴＥＡ盐溶液，外向电流显著抑制。冲洗换液后大部分电流恢复，表明此电流为外向Ｋ离子流。     

豚鼠初级精母细胞延迟外向K~+电流的研究

笔者应用机械分离获得豚鼠单个初级精母细胞,采用全细胞式膜片钳技术记录该细胞离子通道电流.结果表明:在标准盐溶液中,当钳制电位-90mV、指令电压-60～+180mV、步阶电压20mV时,可记录到外向离子电流;将标准盐溶液换成含4mmol/L的四乙基氯化氨(TEA)盐溶液,外向电流显著抑制,冲洗换液后大部分电流恢复,表明此电流为外向K~+流.     

适用于膜片钳实验的豚鼠心室肌细胞快速分离

获得正常的单个心肌细胞是细胞电生理实验中的膜片钳技术研究的基础，自从Kono和Powell等首先报道应用酶解法以来，实验者对各种方法进行了研究，但获得理想细胞的百分数不稳定，大多数与“钙反常”导致细胞死亡有关。我们参照商立军等方法加以改进，建立了一种简单、稳定、高效的耐钙心肌细胞的分离方法，并通过全细胞膜片钳记录证实该分离方法得到的细胞有正常的电生理特性，值得推广。     

膜片钳技术研究中钙耐受的心室肌细胞分离方法

目的：探索并建立适合于膜片技术研究的心室肌细胞急性酶分离方法。方法：采用改进的自制的Langendorff心脏灌流系统,用无钙Tyrode液和酶解液逆行主动脉灌流之后,分次剪取心肌组织置于细胞保存液（KB液）中保存以供全细胞膜片钳方式记录膜电位和膜电流。结果：分离所得80%-90%的细胞呈杆状,边缘清楚,表面光滑,纹理清晰,可记录到典型的动作电位。结论：控制好分离心室肌细胞的实验条件以及熟练掌握实验操作的方法,是分离出适合于膜片钳实验的心室肌细胞的重要因素。     

小鼠初级精母细胞染色体的制备

小鼠初级精母细胞染色体制备技术已广泛运用于细胞畸变的检测和医学细胞学实验中,传统的秋水仙素和沉淀软化法分离精原细胞和初级精母细胞尚不够完善,本文介绍不用秋水仙素处理小鼠的改进方法。1 材料与方法试剂:2.2%柠檬酸三钠缓冲液;1%柠檬酸钠低渗液;甲醇:冰醋酸=3:1固定液,Giemsa染色液(pH=6.8,磷酸缓冲液稀释10倍),所用试剂均临用前配制。动物:雄性小鼠8～12周龄。     

适合膜片钳实验的心肌细胞分离方法研究

目的：摸索并建立简便可行的适于做膜片钳实验的心肌细胞急性分离方法。方法：采用自行改进的Langendorff心脏灌流装置,用无钙台氏液和酶解液逆行主动脉灌流之后,剪取心肌组织置于KB液中保存以供全细胞膜片钳方式记录电流,结果：分离所得80％～90％的细胞呈杆状,边缘清楚,表面光滑,纹理清晰,可记录到典型的快钠电流。结论：控制好分离心肌细胞的实验条件以及熟练掌握实验操作的方法,是分离出适合于膜片钳实验的心肌细胞的重要因素。     

哺乳动物初级精母细胞体外培养的研究

目的:探讨哺乳动物初级精母细胞体外培养分化的可能性.方法:制备雄性大鼠睾丸初级精母细胞,与非洲绿猴肾上皮细胞(Vero细胞)共培养,观察初级精母细胞体外培养过程中的生长行为,用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记跟踪观察大鼠初级精母细胞在体外培养中的分化情况.结果:大鼠初级精母细胞与Vero细胞共培养后能进行减数分裂阶段分化,生成精子细胞;BrdU标记检测结果显示,培养前在体内标记BrdU的细胞为初级精母细胞,培养后在有BrdU标记的细胞中有早期精子细胞.结论:哺乳动物初级精母细胞在体外培养中能进行分化.     

膜片钳技术的应用进展

膜片钳技术是研究离子通道的"金标准",应用该技术可以证实细胞膜上离子通道的存在,并能对其电生理特性、分子结构、药物作用机制等进行深入的研究.     

急性分离的脊髓腹角神经元膜片钳记录技术

目的:建立急性分离的脊髓腹角神经元膜片钳记录技术以深入研究脊髓腹角神经元上受体的作用。方法:选用6~11 d的新生SD大鼠,麻醉后分离出含腰骶膨大的脊髓,制备切片,给予酶消化,切除背角,将腹角吹打分离出单细胞,进行膜片钳记录。结果:(1)分离的腹角神经元形态良好,胞体呈纺锤形、三角形和多边形伴多条细长突起;(2)7个神经元记录到自发动作电位,其细胞电生理特性为:静息电位(-61.88±16.70)mV;阈电位(-47.39±8.02)mV;锋电位幅值(55.79±17.17)mV;超射(8.39±7.70)mV;放电频率(13.54±9.97)Hz;(3)7个神经元给予1 mmol/L谷氨酸诱发电流幅值(324.56±90.54)pA,翻转电位(19.43±12.10)mV;8个神经元给予2 mmol/L尼古丁诱发电流幅值(296.91±77.44)pA,翻转电位(29.06±14.88)mV。结论:急性分离脊髓腹角神经元膜片钳记录技术切实可行,可用于脊髓腹角神经元相关调质或药物的作用机理研究。     

一种改进的适用于膜片钳技术的海马神经元分离方法

目的探讨获得适用于膜片钳技术的单个海马神经元的方法。方法取3～6日龄Sprague-Dawley新生大鼠10只,应用酶消化及机械分离法,急性分离出大鼠海马神经元,通过倒置显微镜直接观察和全细胞膜片钳技术分别对分离得到的海马细胞的形态学和电生理学特征进行研究。结果急性分离所得海马具有锥形胞体的顶树突特征,立体感强。在全细胞膜片钳记录模式下可记录到全细胞电流及钠通道电流,该电流可被1μmol·L~(-1)的河豚毒素完全阻断。结论应用该酶消化及机械分离法急性分离的新生大鼠海马神经元形态和生理特性良好,适用于海马神经元的膜片钳研究。     

一种适用于膜片钳研究的豚鼠心室肌细胞急性分离方法

目的 获得适用于心肌细胞膜片钳研究的单个心室肌细胞.方法 应用酶消化和机械分离的方法分离出生25～30 d的豚鼠心室肌细胞,从形态学及电生理学方面鉴定急性分离的豚鼠心室肌细胞活性,在电镜下观察活性较好的豚鼠心室肌细胞形态学特点,并选用活性较好的单个心室肌细胞进行膜片钳钳制,记录心室肌细胞Ik电流.结果 形态学方面:活性...     

白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响

目的 研究白藜芦醇对正常豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流的影响,旨在探讨白藜芦醇抗心律失常作用机制.方法 酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术研究白藜芦醇对豚鼠单个心室肌细胞钾电流的影响.结果 白藜芦醇可明显增强慢性激活延迟整流钾电流(IKS),并呈剂量依赖性.结论 白藜芦醇可增强IKS,缩短动作电位时程(APD).     

改良移植技术建立豚鼠至大鼠异位心脏移植模型

目的 建立简便易行的豚鼠至大鼠异种颈部心脏移植模型.方法 采用Cuff技术(对照组,n=40)和改良Cuff技术(实验组,n=40)行豚鼠-大鼠异种异位心脏移植.结果 进行正式实验80例,成功率分别为为95%(对照组)和97.5%(实验组),移植后平均存活时间分别为(16.89±3.00)min和(50.64±1.95)min, 应用改良方法移植可使供心总缺血时间由(20.97±1.05)min缩短至(7.95±0.97)min.结论 改良移植技术建立豚鼠至大鼠异位心脏移植模型操作简便,重复性好,适合非协调性异种心既移植超急性血管排斥机制及抗排斥方面的研究.     

酶解法分离犬肺静脉肌袖和心房肌细胞

目的:探索简单实用重复性好的犬肺静脉肌袖和心房肌细胞的分离方法。方法:采用两步酶解法,分离得到犬肺静脉肌袖细胞和心房肌细胞,用形态学和台盼蓝染色鉴别分离的心肌细胞,使用倒置显微镜观察和摄像记录。结果:分离心肌细胞的存活率为30%～60%,形态呈杆状、折光性好、横纹清晰,膜状态良好。结论:使用两步酶解法能获得存活率高,数量较多的心肌细胞,是一种简单实用的分离心肌细胞的方法。     

大鼠螺旋神经节细胞的电压依赖型钠离子通道的研究

目的 认识大鼠螺旋神经节细胞膜上电压依赖型钠离子通道的电生理特征。方法 采用全细胞电压钳记录模式，观察分离出的大鼠螺旋神经节细胞在不同的钳制电压下胞膜上钠离子通道电流的幅度、激活和失活等电生理特性。结果 在全细胞电压钳制下共在17个螺旋神经节细胞膜上成功记录到钠离子通道电流。钠离子通道电活动有着电压依赖特性，在-40mv激活，-20mV最大，＋20mV失活，但钠离子通道电流与电压为非直线性关系，同样，该通道对0．05μmol／L河鱼屯毒素阻滞剂敏感，且大鼠螺旋神经节细胞膜上的电流密度都基本相同。结论 大鼠螺旋神经节细胞存在着电压依赖型钠离子通道，其电生理学特性适合作初级听神经元离子通道的实验研究。     

氟哌啶醇对豚鼠心室肌细胞IK的影响

目的 观察氟哌啶醇对豚鼠单个心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)通道的作用,探讨氟哌啶醇致心律失常的离子基础.方法 应用全细胞膜片钳技术记录氟哌啶醇对豚鼠单个心室肌细胞IK的影响.结果 在获得单个细胞后,分别给予0.3、1.0 、3.0 μmol/L的氟哌啶醇.延迟整流钾电流在试验电压+70 mV时,从给药前的(16.660 4±1.571 7)分别减少至(5.025 5±1.937 2)、(9.857 2±3.900 2)、(7.179 4±1.816 0)pA/pF (n=7,P＜0.01).结论 氟哌啶醇可抑制IK,使动作电位时程延长而引发心律失常,其致心律失常作用可能与其对钾通道的作用有关.     

乳酸司帕沙星对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流的影响

目的:观察乳酸司帕沙星(SPX)对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)的影响.方法:采用酶消化方法分离单个豚鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IK,观察不同浓度SPX(0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L和1 000 μmol/L)对IK的影响.结果:除0.1 μmol/L外,SPX浓度分别为1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L、1 000 μmol/L时IK的脉冲电流和尾电流较正常心室肌细胞脉冲电流和尾电流均减少(P＜0.05或0.01).SPX明显抑制了IK的脉冲电流和尾电流(P＜0.05),SPX的量效关系曲线显示SPX的IC50为14.89 μmol/L. 结论:SPX能浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞IK,提示高浓度SPX有引发心律失常的潜在不良反应.     

双环法、Lejour 法与垂直双蒂法治疗乳房下垂的疗效比较

目的 探究双环法、Lejour 法与垂直双蒂法在乳房下垂治疗中的效果。方法 选取2015 年3 月- 2017 年2 月在武汉科技大学附属天佑医院诊治的67 例乳房下垂患者为研究对象,依据治疗方案不同,将其纳 入双环组23 例,Lejour 组26 例,垂直双蒂组18 例,比较3 组患者手术前后的临床资料。结果 Lejour 组温哥 华瘢痕评分低于双环组、垂直双蒂组（P <0.05）。Lejour 组满意度高于双环组、垂直双蒂组（P <0.05）;3 组 并发症发生率比较,差异无统计学意义（P >0.05）。末次随访时3 组乳房形态与术前相比效果明显,且Lejour 组与双环组、垂直双蒂组比较,差异有统计学意义（P <0.05）。末次随访时,3 组乳头乳晕感觉与术前比较差 异无统计学意义（P >0.05）,组间比较差异无统计学意义（P >0.05）。结论 双环法、Lejour 法与垂直双蒂法 治疗乳房下垂,均能改善乳房症状,达到乳房塑形效果,且患者较满意,术后并发症发生率低,但Lejour 法治 疗后乳房形态更好,瘢痕更小,且依旧有泌乳功能。