P170在肺癌中的表达及临床意义

研究表明，肿瘤的耐药与多药耐药基因mdrl的扩增和／或其编码的P170的过度表达有关[1]。本研究应用SP免疫组比法，检测P170在不同组织类型、不同分化程度肺癌组织中的表达，现将结果报告如下。1材料与方法1．1材料本组病人48例，其中非小细胞肺癌（NSCLC）42例（鳞癌19例，腺癌23例），小细胞肺癌（SCLC）6例，均为化疗前患者。同时取癌旁正常肺组织8例，距癌灶至少5cm以上。标本均经病理学确诊。1．2方法采用免疫组化SP法（StrePtavidinPeroxdaseConjugataedMethod）。P170单抗JSB－1由美国MaximBiotechInc生产，工作浓度为1：1…     

多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌表达的研究

目的：研究多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌的表达情况及其两者关系。方法：应用单克隆抗体ＱＣＲＬ－１行ＬＳＡＢ免疫组化法研究６１例非小细胞肺癌组织中多药耐药相关蛋白表达水平。结果：肺癌组织中多药耐药相关蛋白表达的总阳性率为６８．９２％；癌旁正常肺组织呈阴性或弱阳性表达；高和中分化肺癌多药耐药相关蛋白表达的阳性率高于低分化癌（Ｐ＜０．００５）；Ⅰ－Ⅱ期肺癌多药耐药相关蛋白表达的阳性率高于Ⅲ－Ⅳ期者（Ｐ＜０．０１）。结论：表明多药耐药相关蛋白是非小细胞肺癌多药耐药的重要参与因素。     

多药耐药相关蛋白基因在肺癌组织中的表达及意义

目的探讨多药耐药相关蛋白基因（MRP1）、肺耐药蛋白（LRP）基因和增值细胞抗原Ki-67在肺癌中的表达及相关性。方法应用免疫组织化学方法,检测110例肺癌组织和22例其他恶性肿瘤（食管癌、胃癌、膀胱癌等）组织中LRP、MRP1及Ki-67的表达情况,并以其中的23例癌旁组织作比较。结果非小细胞肺癌（NSCLC）中MRP1、LRP表达水平显著高于癌旁组织（P〈0．05）,小细胞肺癌（SCLC）与癌旁组织无显著性差异（P〉0．05）。其他恶性肿瘤组织中其表达水平显著高于癌旁组织（P〈0．05）。Ki-67在各种肿瘤组织中均呈阳性表达,与LRP、MRP,表达无相关性。结论NSCLC存在广泛的原发性多药耐药现象,耐药基因LRP、MRP。参与了肺癌多药耐药的形成,LRP的表达率最高,可作为一项独立的预警指标,耐药与肿瘤细胞增殖无明显相关性。     

人非小细胞肺癌中FHIT基因转录本异常的研究

目的 探讨ＦＨＩＴ基因转录表达异常在人肺癌发生、发展中的作用。方法 ３应用ｎｅｓｔｅｄ ＲＴ－ＰＣＲ方法对３５例人非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织、癌旁组织和远癌肺组织。１０例肺良性病变肺组织以及４株肺癌细胞株中ＦＨＩＴ基因转录表达异常进行了研究。结果 ３５例肺癌中１４例肺癌组织存在ＦＨＩＴ转录表达异常,异常率为４０％;在这１４例癌组织转录本异常病例中,５例癌旁组织亦见转隶本异常（３５．７１％,５／     

柯萨奇病毒-腺病毒受体在肺癌组织中的表达意义

目的：初步探讨柯萨奇病毒-腺病毒受体（Coxsackie and adenovirus receptor,CAR）与人肺鳞状细胞癌及腺癌发生、发展的关系,为设计腺病毒载体对肺癌进行基因治疗的方案提供理论依据。方法：采用免疫组织化学方法检测112例肺癌（包括鳞状细胞癌65例,腺癌47例）组织中CAR的表达情况,利用统计学方法（SPSS10.0软件）分析CAR的表达在鳞状细胞癌、腺癌以及癌旁正常肺组织中有否差异。结果：正常肺组织中仅有少量CAR的表达。两类型肺癌分别与癌旁组织CAR的表达差别有统计学意义（P〈0.01）,在鳞状细胞癌中CAR的表达较癌旁组织提高34.75%,在腺癌中CAR的表达较癌旁组织提高38.30%。其中,鳞状细胞癌的CAR阳性率为43.08%,腺癌的阳性率为70.21%,两类型肺癌间CAR表达的阳性率差别亦有统计学意义（P〈0.01）。但CAR的表达在肺鳞状细胞癌不同组织学分级中（Ⅰ～Ⅲ级）的差别未有统计学意义（P〉0.05）。此外,我们发现在肺腺癌中所包含的细支气管肺泡癌部分几乎都有CAR的表达。结论：肺癌组织（鳞状细胞癌和腺癌）CAR的表达普遍提高,提示CAR与肺癌的发生、发展有一定的联系,并且与肺腺癌的形成及发展的关系更为密切,因此为进一步实现用腺病毒载体对肺癌进行基因治疗提供了理论基础。     

雌激素受体α介导氧化磷酸化通路在肺癌发生中的作用

目的：通过生物信息学方法探讨雌激素受体α（ESRRA）在肺癌发生发展中的作用。方法：利用UALCAN在线平台对人肺癌组织（包括肺腺癌与肺鳞癌）和癌旁正常肺组织中ESRRA基因的表达变化进行分析,并利用Kaplan-Meier Plotter数据库对肺癌中ESRRA及其相关基因的表达进行生存分析。利用GEPIA2在线平台获得与ESRRA表达模式相似的前50个基因,在GeneMANIA在线平台上构建这50个基因编码的蛋白质-蛋白质的相互作用网络,并通过DAVID数据库对该50个基因群进行GO分析和KEGG通路富集。通过TIMER 2.0在线平台分析肺癌组织中ESRRA与富集在氧化磷酸化通路中核心基因表达水平的相关性。利用Western blot法验证ESRRA蛋白在肺癌细胞系中的表达水平。结果：与癌旁正常肺组织相比,ESRRA在肺癌组织中高表达（P<0.01）,ESRRA表达水平高的肺癌患者显示出较差的预后（P<0.01）。与ESRRA表达模式相似的前50个基因主要富集在氧化磷酸化通路,包括ATP5B、ATP5G3、COX5A、COX8A、SDHD、UQCRC1和UQCRC2。其中ATP5B、COX8A和UQCRC1在肺癌组织中的表达水平与ESRRA的表达呈正相关（P<0.05）。ATP5B、ATP5G3、COX5A、COX8A、SDHD、UQCRC1和UQCRC2在肺癌组织中均高表达,ATP5B、ATP5G3、COX5A、COX8A表达水平高和SDHD表达水平低的肺癌患者均显示出较差的预后（P<0.01）。Western blot验证结果显示,与正常人支气管上皮16HBE细胞相比,ESRRA蛋白的相对表达水平在肺腺癌NCI-H1975细胞和肺鳞癌SW900细胞中均高表达（P<0.01）。结论：ESRRA介导氧化磷酸化通路中ATP5B和COX8A的表达改变引起能量代谢紊乱可能是其促进肺癌发生和导致肺癌不良预后的原因之一。     

整合素在肺癌细胞中的差异表达

目的应用基因芯片技术研究整合素基因家族在三种肺癌细胞株A549（肺腺癌）、H1650（肺泡细胞癌）、DMS53（小细胞肺癌）中的表达差异。方法提取肺癌细胞A549、H1650、DMS53的mRNA,反转录为cDNA,以32P标记cDNA,与整合素基因芯片进行杂交,经放射自显影后读取灰度值并进行统计学分析。结果整合素基因家族中ITGB1在三种肺癌细胞A549、H1650和DMS53上均出现高表达;ITGA4在H1650的表达显著高于A549和DMS53（＞2倍）;ITGA3在小细胞癌细胞DMS53中的表达显著低于非小细胞癌(NSCLC)细胞A549和H1650;ITGB6、ITGB8在DMS53中的表达显著高于A549。结论一些整合素亚单位在三种肺癌细胞株A549、H1650、DMS53中的表达谱存在差异,有望为肺癌的靶基因治疗提供实验依据。     

耐药相关基因MDR1、MRP、LRP及其表达产物P-gp、MRP、LRP在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的：研究探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织和癌旁组织中多药耐药基因1（muhidrug resistance genel,MDR1）、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-related proteins,MRP）、肺耐药蛋白（lung resistance protein,LRP）mRNA及其相应蛋白P—gP、MRP、LRP的表达情况及临床意义。方法：运用聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组织化学法（IHC）检测43例NSCLC组织及癌旁组织标本中耐药基因MDR1、MRP、LRPmRNA及其蛋白P-gP、MRP、LRP的表达水平。结果：MDR1、MRP和LRP mRNA3种基因在43例肿瘤组织中的表达率分别为79．06％（34／43）、65．17％（28／43）和86．05％（37／43）,癌旁组织中的表达率分别为20．00％（3／15）、13．33％（2／15）和13．33％（2／15）;P—gP、MRP和LRP3种耐药蛋白在肺癌组织中的表达率分别为74．42％（32／43）、67．44％（29／43）和88．37％（38／43）,癌旁组织中的表达率分别为13．33％（2／15）、20．00％（3／15）和6．67％（1／15）,上述3种基因及其蛋白在肺癌组织与癌旁组织的表达差异有显著性（P〈0．05）。肺癌组织中既存在耐药基因MDR1、MRP和LRP的共表达,也存在耐药蛋白P-gP、MRP和LRP的共表达,3种基因与其相应蛋白表达密切相关。肺腺癌组织中MDR1及其蛋白P-gP、LRP mRNA表达率较高,与其它病理类型相比差异有显著性（P〈0．05）,MRP mRNA及其蛋白MRP表达与肺癌病理类型、临床分期和组织学分级无关（P〉0．05）。结论：NSCLC存在着广泛的原发性多药耐药现象,耐药基因MDR1、MRP和LRPmRNA及其相应蛋白参与了肺癌多药耐药的形成,检测多药耐药基因可为指导临床用药提供一定的理论依据及策略。     

一条新的人肺腺癌耐药相关基因全长cDNA片段的克隆及序列分析

背景与目的：肺癌细胞的多药耐药（multi-drug resistance,MDR)是药物治疗失败的重要原因,但其机制尚未完全清楚。我们已经通过SSH发现了1条新的耐药相关基因片段,经检索GenBank,发现其与2001年4月公布的一条新的基因序列BC006151同源性高达99%。本研究旨在克隆该基因的全长,并检验该基因在几种肺癌细胞株中的表达,为进一步研究功能和调控奠定基础。方法：根据BC006151基因序列设计引物,通过RT-PCR证实肺腺癌MDR细胞SPC-A-1/CDDP确实包含BC006151基因后,扩增该基因全长cDNA,通过测序对所得序列进行分析,并对其编码蛋白的氨基酸序列进行预测。应用半定量RT-PCR方法检验小细胞肺癌SH77、大细胞肺癌H460、肺腺癌SPC-A-1和SPC-A-1/CDDP等细胞株中该基因mRNA的表达。结果：成功克隆了BC006151基因的全长CDNA片段,长1298bp,它具有完整的阅读框和编码区,并与经SSH获得的片段有极高的同源性。该基因在MDR细胞株SPC-A-1/CDDP的表达明显高于其亲代细胞株;SPC-A-1表达高于H460,SH77未见表达。结论：BC006151基因是与cDDP致肺腺癌MDR密切相关的一条新基因。该基因全长CDNA片段的克隆将有助于阐明其在肺癌MDR发生中的作用。     

非小细胞肺癌中MDR1和MDRP基因的表达及意义

目的 探讨多药耐药基因（ＭＤＲ１）和多经耐药相关蛋白基因（ＭＤＲＰ）在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的表达及意义。方法 采用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,对３３例ＮＳＣＬＣ组织及相应癌旁组织中ＭＤＲ１和ＭＤＰＲ基因表达进行检测。结果癌组织中ＭＤＲ１和ＭＤＲＰ阳性率（分别为６９．７％和６３．６％）明显高于癌旁组织（３６．４％和３０．３％,Ｐ〈０．０１）;两基因的表达水平也显著高于癌旁肺组织（     

肺腺癌及鳞癌MDR1-mRNA和MRP-mRNA表达的研究

观察３０例肺癌组织及癌肺组织ＭＤＲ１－ｍＲＮＡ及ＭＲＰ－ｍＲＮＡ的表达。方法：ＲＴ－ＰＣＲ方法。结果：ＭＤＲ１－ｍＲＮＡ在肺癌组织及癌旁肺组织的表达阳性率分别为４０．０％及１６．６７％（Ｐ＝０．０４５）,ＭＤＲ１－ｍＲＮＡ的表达与细胞分化程度,临床分期及病理类型无关;ＭＲＰ－ｍＲＮＡ在肺癌主癌旁肺组织的表达分别为４３．３３％及２６．６７％,ＭＲＰ＝ｍＲＮＡ的表达与细胞分化程度有关,低分者ＭＲＰ的表     

肺耐药蛋白基因表达与肺癌临床病理生理特征的关系

目的 探讨肺耐药蛋白（ＬＲＰ）基因表达与肺癌临床病理特征的关系。方法 采用逆转录一多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,检测４９例肺癌组织和组应的４１例癌旁肺组织中ＬＲＰ基因表达水平,结果 肺癌与癌旁肺组织中均有ＬＲＰ基因表达,两者的阳性率分别为６３．３％（３１／４９）和２１．９％（９／４１）,具有显著性差异（Ｐ〈０．０１）,非小细胞肺癌ＬＲＰ表达阳性率（７０．７％,２９／４１）高于小细胞肺癌（２５％、２／８）（Ｐ〈０．０５）,腺癌（９１．７％,１１／１２）表达阳性率高于鳞癌（５０％,１１／２２）（Ｐ〈０．０５）;吸烟患者的ＬＲＰ基因表达（７４．３％,２６／３５）显著高于非吸烟患者（３５．７％,５／１４）（Ｐ〈０．０５）,结论 ＬＲＰ基因表达与肺癌耐药有关,吸烟可导致ＬＲＰ基因表达增加。     

肺癌组织中多药耐药基因及相关蛋白表达的研究

目的:探讨P-糖蛋白(P-glycopro-tein,P-gp)、肺癌耐药蛋白(lung cancer resis-tence protein,LRP)和多药耐药相关蛋白(multidrug resistence protein,MRP)在肺癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用SP法检测116例术前未做化疗的肺癌组织中P-gp、LRP和MRP的表达水平。结果:P-gp在腺癌组织中的阳性表达率为78.26%(36/46),小细胞癌为63.64%(7/11),鳞状细胞癌为47.46%(28/59);三者相比差异有统计学意义,P=0.018。LRP在腺癌组织中的阳性表达率为89.13%(41/46),鳞状细胞癌为44.07%(26/59),小细胞癌为27.27%(3/11);三者相比差异有统计学意义,P=0.0001;MRP在不同癌组织中的表达差异无统计学意义,P=0.4165。在腺癌、鳞状细胞癌和小细胞癌组织中同时有两种或两种以上耐药基因产物表达阳性率分别为89.13%(41/46)、49.15%(29/59)和27.28%(3/11),三种类型间比较差异有统计学意义,P=0.0001。结论:不同组织学类型的肺癌存在不同程度的耐药性,检测P-gp、LRP和MRP的协同表达对于指导临床化疗方案的实施有重要意义。     

非小细胞肺癌组织中ABCG4表达与耐药的相关性研究

目的 检测ABCG4 mRNA和蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达,分析其表达与病理类型及NSCLC细胞耐药的相关性,为研究其耐药机制提供理论基础。方法 采用免疫组化染色、RT-PCR及Western blotting检测ABCG4在NSCLC组织中的表达;MTT法检测NSCLC对化疗药物的敏感性,分析药物敏感性与ABCG4 mRNA和蛋白表达的相关性。结果 ABCG4蛋白阳性主要定位于细胞膜和胞质,其在NSCLC组织中的阳性表达率为73.9%（68/92）,而在30例癌旁正常肺组织中几乎不表达。ABCG4蛋白在肺鳞癌和肺腺癌中的阳性表达率分别为67.3%和81.4％,差异无统计学意义（P＞0.05）。环磷酰胺、吉西他滨、多柔比星、紫杉醇和顺铂在NSCLC组织中的药物敏感程度与其相应组织中ABCG4蛋白阳性表达有关（rs均＞0.3,P均＜0.05）;除紫杉醇外,环磷酰胺、吉西他滨、多柔比星和顺铂在NSCLC组织中的药物敏感程度与其相应组织中ABCG4 mRNA表达量有关（P均＜0.05）。结论 ABCG4在肺鳞癌、肺腺癌中高表达,其表达程度与NSCLC部分化疗药物耐药有关,为进一步研究ABCG4在NSCLC中的表达及可能耐药机制提供实验依据。     

非小细胞肺癌中肿瘤微环境细胞的表达特点及其与临床生存概率的相关性

目的:探究常见的肿瘤微环境细胞在非小细胞肺癌中的表达特点及其与临床生存概率的相关性。方法:我们首先从TCGA数据库中获取肺腺癌、肺鳞癌的基因表达数据和相应的临床信息；接着通过非参数检验分析了几种常见肿瘤微环境细胞在癌组织和癌旁肺组织之间的表达差异，以及细胞浸润程度与非小细胞肺癌生存概率之间的关系,并进行了多因素生存分析。结果:在肺腺癌中，CD4+、CD8+T细胞、内皮细胞、巨噬细胞低表达，B细胞、肿瘤相关成纤维细胞（cancer associated fibroblasts，CAFs）高表达，生存概率与CD4+T细胞呈正相关；在肺鳞癌中，内皮细胞、巨噬细胞低表达，CAFs高表达，生存概率与CD8+T细胞呈正相关。结论:在肺腺癌、肺鳞癌肿瘤微环境中，浸润细胞的表达量各不相同，且与临床生存概率相关。     

非小细胞肺癌非耐药蛋白基因表达与临床疗效关系的研究

目的探讨肺耐药蛋白（LRP）基因在非小细胞肺癌（NSCLC）气管镜活检组织或淋巴结活检组织中的表达与其临床疗效的关系。方法应用免疫组织化学S-P技术对19例非小细胞肺癌气管镜活检组织和28例肺癌转移的淋巴结活检组织进行LRP表达水平的检测,并观察其经NP方案化疗2个周期后的临床疗效。结果非小细胞肺癌LRP的表达阳性率为61.70%;在肺腺癌和肺鳞癌中的表达阳性率分别为76.92%和42.86%;LRP在两组间的表达有显著性差异（P〈0.05）。LRP表达水平在TNM分期中差异无显著性（P〉0.05）;经2个周期标准NP方案化疗后总有效率为42.55%,其中LRP表达阳性和阴性的临床有效率分别为24.14%和72.22%,两组间存在显著性差异（P〈0.05）。结论LRP在非小细胞肺癌中存在不同程度的表达,阳性者化疗疗效明显高于阴性者。     

TMEM196基因在肺癌中的甲基化修饰与表达调控

目的:分析TMEM196基因在肺癌组织中的甲基化情况以及甲基化发生对TMEM196基因表达的影响。方法:采用MSP方法检测肺癌组织、癌旁正常对照组织及肺癌细胞株TMEM196基因甲基化率;用去甲基化药物5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)处理肺癌细胞后,采用RT-PCR法检测TMEM196 mRNA表达水平。 结果:肺癌组织中TMEM196基因甲基化发生率为57%(28/49),而正常对照组织中该基因甲基化发生率为0(0/20)。TMEM196基因甲基化与肿瘤的分化程度(P=0.012)和临床分期显著相关(P=0.007),而与患者的年龄、性别、吸烟以及肿瘤的病理分类无显著相关(P>0.05)。TMEM196基因在肺癌细胞株H1975和H1650中高甲基化且表达缺失,去甲基化药物(5-aza-dC)处理细胞后TMEM196 mRNA表达明显升高,说明TMEM196基因表达可能受甲基化调控。结论:TMEM196基因甲基化与肺癌的发生发展密切相关,推测该基因通过DNA甲基化失活参与了肿瘤的发生。     

PD-L1对肺癌细胞迁移能力的影响

目的:探索PD-L1在肺癌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响.方法:采用流式细胞术检测不同病理类型肺癌细胞株表面PD-L1分子表达水平,分别选择高、中、低表达的细胞株,后添加细胞因子诱导肺癌细胞株,采用免疫印迹术筛选出能够提高肺癌细胞株PD-L1分子表达水平的细胞因子;采用siRNA干扰技术,下调中、高表达PD-L1的肺癌细胞株中PD-L1的分子表达水平,transwell实验检测细胞迁移能力改变.结果:PD-L1在细胞株HCC827、H1299、A549(腺癌)、H226、H520(鳞癌)、H460(大细胞癌)、H446(小细胞癌)表面的表达水平分别为HCC827、H460(高表达),H1299、H226、H446、H520(中表达),A549(低表达).选择具有transwell迁移能力的腺癌细胞株H1299、A549,分别添加细胞因子IL-4、IL-6、IL-13、TGF-β-1、IFN-γ培养,筛选出TGF-β-1、IFN-γ两种因子能够上调肺癌细胞株PD-L1的表达水平,transwell实验结果显示细胞迁移能力较对照组显著增强.si-PD-L1干扰肺癌细胞株PD-L1表达后,PD-L1的表达水平明显下调,细胞迁移能力较对照组显著减弱;TGF-β-1、IFN-γ诱导细胞株PD-L1表达水平上调后能够引起细胞迁移能力增强,经siRNA干扰后,PD-L1表达水平下调,细胞迁移能力随之显著减弱.结论:PD-L1的表达能促进肺癌细胞的迁移,可能参与肺癌转移过程.