核转录因子-κB圈套策略对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的:观察NF-κB圈套寡核苷酸(Decoy ODNs)对NF-κB活性的影响,进一步探讨其对人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法:设计NF-κB圈套寡核苷酸,将FITC标记的NF-κB Decoy ODNs转染HepG2,共聚焦显微镜观察其核内定位,描记生长曲线;凝胶阻滞法(EMSA)检测转染前后NF-κB活性;再分别用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。Western blot检测HepG2细胞中Bcl-2和Fas的含量。结果:NF-κB Decoy ODNs转染HepG2细胞后定位于胞核,NF-κB活性明显下降,其显著抑制细胞生长,促进HepG2细胞凋亡;低活性NF-κB可以下调Bcl-2、增加Fas的表达水平。结论:NF-κB圈套寡核苷酸促进肝癌细胞HepG2凋亡的机制可能与其下调NF-κB的活性,使促凋亡蛋白Fas表达增加和降低抑凋蛋白Bcl-2表达有关。     

Ciglitazone在NF-κB圈套寡核苷酸抑制肝癌细胞增殖中的作用

目的:观察核转录因子-κB圈套寡核苷酸抑制NF-κB活性后,肝癌HepG2细胞对ciglitazone敏感性的变化。方法:运用基因转染技术将NF-κB圈套寡核苷酸转染入肝癌HepG2细胞中,检测转染前后NF-κB活性。再用ciglitazone处理转染细胞,描记HepG2细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测处理前后细胞周期素D1(Cyclin D1)的变化。结果:转染后的肝癌HepG2细胞NF-κB活性明显降低;ciglitazone抑制HepG2细胞增殖作用增强,70.65%的细胞被阻滞于G1/G0期,Cyclin D1表达明显下降。结论:NF-κB圈套寡核苷酸能增加肝癌HepG2细胞对ciglitazone的敏感性,可能与其下调NF-κB的活性、增强ciglitazone抑制肝癌细胞增殖和阻滞细胞周期有关。     

NF-κB decoy寡核苷酸联合阿霉素诱导裸鼠肝癌细胞HepG_2凋亡

目的:探讨NF-κB decoy寡核苷酸协同阿霉素对裸鼠肝癌细胞HepG2的作用及机制。方法:接种传代培养的人肝癌细胞HepG2于裸鼠皮下,局部注射NF-κB decoy寡核苷酸和/或阿霉素进行治疗。观测裸鼠瘤体大小变化,计算抑瘤率;HE染色观察肝癌组织结构和细胞形态改变;TUNEL法检测细胞凋亡。结果:NF-κB decoy寡核苷酸联合阿霉素治疗组裸鼠肝癌细胞的生长受到明显抑制,抑瘤率为80.52%;肿瘤重量、体积明显小于单用NF-κBdecoy寡核苷酸、阿霉素治疗组及对照组;联合组癌组织凋亡增加,凋亡指数为(39.8±1.6)%,与其余3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:NF-κB decoy寡核苷酸协同阿霉素能抑制NF-κB活性,促进肝癌细胞凋亡,增加其对化疗药物的敏感性。     

肝癌组织中Survivin和NF—κB的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

目的 分析Survivin、核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)在肝组织中的表达及其与肝癌细胞增殖和凋亡间的相互关系.方法 应用免疫组织化学链霉卵白素-生物索-辣根过氧化物酶复合物法(streptavidin peroxidase conjugated method,SP)检测44例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织,25例癌旁相应组织、9例正常肝组织中Survivin、NF-κB、Ki-67蛋白的表达情况,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测凋亡细胞.并计算增殖指数(proliferation index,PI)和凋亡指数(apoptosis index,AI).结果 HCC组织中Survivin、NF-κB蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01);HCC组织中Survivin阳性表达病例平均PI值(35.19土16.53)%显著高于阴性表达者(16.38±10.11)%(P<0.05),Survivin阳性表达病例平均Al值(3.15±1.52)%显著低于阴性表达者(5.24±2.27)%(P<0.05);HCC标本中NF-κB阳性表达病例平均PI值(29.88±13.71)%与阴性表达者(24.15±10.87)%比较无统计学意义(P>0.05),NF-κB阳性表达病例平均AI值(2.89±1.42)%显著低于阴性表达者(4.91±2.04)%(P<0.05);NF-κB与Survivin的表达呈显著正相关(P<0.05).结论 Survivin和NF-κB在HCC中高表达.Survivin通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡的方式共同影响肝癌的生物学特性.而NF-κB通过抑制细胞凋亡的方式影响肝癌的生物学特性,对肝癌的细胞增殖无显著影响.NF-κB与Survivin的表达呈正相关.     

白介素-1受体相关激酶-2和磷脂酰肌醇 3-激酶协同调控白介素-1诱导的NF-κB 活化

目的研究白介素1受体相关激酶2(IRAK-2)和磷脂酰肌醇 3-激酶(PI 3-激酶)在白介素-1(IL-1)诱导核因子- κB(NF-κB)活化中的作用.方法 Lipofectin介导反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸转染HepG2细胞后,用逆转录PCR法检测IRAK-2 mRNA和PI 3-激酶 mRNA表达水平,以Sandwich ELISA法检测NF-κB的活化.结果 (1) 反义IRAK-2寡核苷酸和反义PI 3-激酶寡核苷酸分别抑制IRAK-2 mRNA和PI 3-激酶mRNA的表达;(2)反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸部分抑制NF-κB活化;(3)与反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸单独转染HepG2细胞相比,反义IRAK-2 寡核苷酸和反义PI 3-激酶寡核苷酸共转染HepG2细胞对NF-κB的抑制作用明显增强.结论在HepG2细胞中,IRAK-2和PI 3-激酶都调控NF-κB活化但都不能完全激活NF-κB,IRAK-2和PI 3-激酶在调控NF-κB 活化时有协同作用.     

塞来希布抑制人肝癌HepG2细胞生长及COX-2、NF-κB表达

目的:观察塞来希布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞生长及COX-2和NF-κB表达的影响,探讨celecoxib抗肿瘤作用的机制。方法:用不同浓度的celecoxib作用于HepG2细胞,检测其对HepG2细胞增殖和凋亡以及COX-2、NF-κB表达的影响。结果:celecoxib呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡;celecoxib处理组HepG2细胞COX-2和NF-κB蛋白表达明显减弱(P<0.05),COX-2蛋白表达和NF-κB蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论:celecoxib明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制COX-2和NF-κB的蛋白表达有关。     

NF-κB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸对肾小球系膜细胞细胞因子表达的影响

目的　设计合成靶向 NF-κB的哑铃形圈套 ODNs,并检测其对 NF-κB转录活性和肾小球系膜细胞细胞因子 (IL - 6和 TGF-β1)表达的抑制效应。方法　采用电泳迁移率改变实验 (EMSA)体外检测哑铃形圈套 ODNs对 NF-κB转录活性的抑制效应。提取大鼠肾小球系膜细胞 ,随机分为正常对照组、L PS刺激组、哑铃形圈套 ODNs处理组、无关圈套 ODNs处理组和脂质体处理组。采用阳离子脂质体将 2、4、8mg/ L 不同剂量哑铃形圈套 ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞 ,6 h后用 L PS刺激 ,收集转染后 8、12、18上清和细胞。用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)法检测上清细胞因子蛋白表达 ,逆转录 PCR(RT- PCR)法检测细胞因子 m RNA转录。结果　哑铃形圈套 ODNs在体外能有效地抑制 NF-κB与其顺式元件的结合 ;4、8mg/ L剂量哑铃形圈套 ODNs可明显抑制 L PS诱导的大鼠肾小球系膜细胞 IL - 6和 TGF-β1 转录与表达。结论　靶向 NF- κB的哑铃形圈套 ODNs在体外可抑制 NF- κB的转录活性 ,从而对体外培养的肾小球系膜细胞细胞因子的表达具有抑制效应     

NF-κB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸抑制肾小球系膜细胞IL-6的表达

目的 设计合成靶向NF-κB的哑铃形“圈套”ODNs，并检测其对N-κB转录活性和’肾小球系膜细胞IL-6表达的抑制效应。方法 采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对NF-κB转录活性的抑制效应。提取大鼠肾小球系膜细胞，随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组。采用阳离子脂质体将2、4、8mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞，6h后用LPS刺激，收集转染后8、12、18h上清和细胞。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清IL-6蛋白表达，逆转录PCR(RT-PCR)法检测IL-6mRNA转录。结果 哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合；4、8mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞IL-6转录和表达。结论 靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制NF-κB的转录活性，从而对体外培养的肾小球系膜细胞炎性因子IL-6的表达具有抑制效应。     

NF-κB靶向性哑铃形圈套寡核苷酸抑制肾小球系膜细胞TGF-β1的表达

目的:设计合成靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对NF-κB转录活性和肾小球系膜细胞TGF-β1表达的抑制效应.方法:采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对NF-κB转录活性的抑制效应.提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组.采用阳离子脂质体将2,4,8 mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6 h后用LPS刺激,收集转染后8,12,18 h上清和细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清TGF-β1蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测TGF-β1mRNA转录.结果:哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;4,8 mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1转录和表达.结论:靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而对体外培养的肾小球系膜细胞炎性因子TGF-β1的表达具有抑制效应.     

TNF-α/NF-κB通路干预对肝癌多药耐药相关P-gp表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)单抗及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/p65siRNA干预NF-κB活化对肝癌HepG2细胞增殖和细胞膜糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响.方法:体外培养人HepG2细胞并给予抗人TNF-α单克隆抗体,以流式细胞术检测细胞凋亡的情况;设计并合成针对NF-κB/p65 siRNA的质粒,在转录水平干扰NF-κB活化,以Western Blot检测P-gp表达.结果:单抗作用后,肝癌细胞凋亡的比率明显增加(P＜0.01),用药后细胞株NF-κB表达水平明显降低(P＜0.01),与培养液中明显降低的TNF-α水平呈显著正相关(r=-0.89,P＜0.01); NF-κB/p65 siRNA干预后可下调化疗药物引起的癌细胞NF-κB和P-gp的过表达.结论:以TNF-α单体干预肝癌细胞中NF-κB活化,可使细胞凋亡增加,siRNA可通过特异性抑制NF-κB/p65编码的mRNA,下调P-gp水平,促进肝癌细胞凋亡.     

他克莫司对5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制的初步探讨

目的:观察他克莫司(FK506)对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨.方法:体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721;应用流式细胞仪检测5-FU及联合FK506对细胞凋亡和细胞周期的影响;TransAM NF-κB核转录因子活性检测试剂盒检测NF-κB p65活性;细胞免疫组织化学检测NF-κB p65激活后入核情况;免疫印迹分析Cyclin D1蛋白表达差异.结果:5-FU可诱导肝癌细胞凋亡,其作用随浓度的增加而增强(P<0.05);随着5-FU用药浓度的增加,S期细胞比例和细胞增殖指数(PI)也增加; 5-FU可激活NF-κB而入核,Cyclin D1蛋白的表达逐渐增强.FK506预处理增强了5-FU诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,同时S期细胞比例和PI也减少; FK506预处理可抑制NF-κB入核,并可下调Cyclin D1基因的表达.结论:FK506能够协同5-FU诱导肝癌细胞株凋亡,增强肝癌细胞株对5-FU的敏感性,这种作用可能是通过抑制NF-κB活性进而下调Cyclin D1基因的表达,导致G0/G1期停滞而实现.     

BC047440基因通过NF-κB调节HepG2细胞增殖的初步研究

目的观察Bc047440基因能否通过增强NF—κB的活化而促进HepG2细胞的增殖。方法设计针对BC047440基因的小干扰RNA（siRNA），构建pGenesil-1-BC047440-siRNA真核表达载体，用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenesil-1-Bc047440．siRNA、pGenesil—1—HK—siRNA转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株；实验分为3组：转染siRNA表达载体组、无关质粒组和未处理的亲本HepG2细胞组。采用平板克隆形成实验分析细胞的增殖活性，通过Westernblot检测细胞质p50含量，EMSA检测NF—κB的核转位，荧光素酶试验检测各组细胞的NF—κB活化情况。结果细胞增殖实验显示转染siRNA组细胞增殖能力明显降低，BC047440基因沉默后的HepG2的细胞质p50含量低于野生株HepG2，NF-κB核转位低于野生株HepG2，其荧光素酶和海肾荧光素酶活性比值只有野生株的1／4。结论BC047440基因能促进肝癌细胞的增殖，其调节机制可通过NF—κB信号途径实现，提示BC047440基因可能成为抑制人肝癌细胞生长的有效靶点。     

选择性抑制转录核因子κB活性对白血病K562细胞生存素表达的影响

目的探讨高选择性的蛋白酶抑制药MG132诱导的K562细胞凋亡及其对转录核因子KB（NF-κB）活性和抗凋亡蛋白生存素（Survivin）表达的影响。方法采用细胞形态学观察和流式细胞术检测细胞凋亡,免疫细胞化学和Western印迹分析NF-KB的活性和Survifin的表达。结果不同浓度的MG132作用24h后可诱导K562细胞凋亡,呈剂量依赖效应。NF-κB和Survivin在K562细胞中异常高表达,MG132作用后均明显下调。2、4、6、8μmol／LMG132作用于K562细胞24h后,NF-κB活性分别下调至作用前的75．0％±3．7％、59．9％±5．3％、45．4％±5．7％和25．0％±4．2％,而Survivin蛋白表达分别下调至作用前的90．9％±10．1％、66．7％±5．2％、45．4％±5．7％和30．3％±6．6％,NF-κB活性降低的同时Survivin蛋白的表达也下调,两者密切相关（Pearson相关系数0．989,P〈O．01）。结论MG132可有效地抑制NF-κB的活性,诱导K562细胞发生凋亡,同时抗凋亡蛋白Survifin的表达也随之下调。     

持续表达的丙型肝炎病毒NS4B激活HepG2细胞内质网应激反应的研究

目的研究持续表达的丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)对HepG2细胞内质网应激反应的影响。方法 NS4B重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)NS4B通过脂质体转染HepG2细胞,G418筛选、基因组PCR和Western blot鉴定稳定转染细胞;RT-PCR检测稳定转染细胞内人X盒结合蛋白1(XBP1)mRNA剪接,荧光素酶试验检测稳定转染细胞内GRP78启动子、XBP1启动子和核因子κB(NF-κB)活性。结果基因组PCR和Western blot鉴定证实NS4B基因整合到转染HepG2细胞的染色体上,并有效表达;在NS4B稳定转染的HepG2细胞中,检测到XBP1mRNA剪接、XBP1和Grp78启动子激活、Ca2+稳态变化及NF-κB激活。结论 NS4B在HepG2的稳定表达诱导了内质网应激反应,揭示NS4B可能通过诱导肝细胞内质网应激反应在HCV感染及其致病性中发挥作用。     

戊四氮及NF-κB圈套结构对神经元样细胞突触素表达的影响

目的通过观测戊四氮（pentylenetetrazol，PTZ）及NF—κB（nuclear factor kappa B decoy）圈套寡核苷酸结构对神经元样PC12细胞突触素（synaptophysin，P38）表达的影响，进一步探讨癫痫的发病机制。方法应用免疫印迹技术检测PTZ干预前后神经元样PC12细胞突触素的表达情况，进而运用基因转染技术将NF-κB圈套寡核苷酸转入神经元样PC12细胞中，激光共聚焦成像技术（confocal laser scanning microscope，CLSM）检测转染前后NF—κB活性的变化，免疫印迹观察转染前后突触素的变化情况。结果①PTZ干预后神经元样PC12细胞突触素的表达显著增高；②CLSM检测显示转染NF-κB圈套寡核苷酸后神经元样PC12细胞中NF-κB活性明显下降，但突触素蛋白表达水平不见降低。结论PTZ促进了突触素的表达，NF-κB对突触素的表达不具有调控作用，可能另有其他途径。     

HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)的调控作用。方法 利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCVC蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性。RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及P50、P65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响。结果 ①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高。②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCVC蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12．8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2．6倍。③RT-PCR显示IκB mRNA在QBC939HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCVC蛋白的QBC939HCV C 细胞株的胞核中的P50、P65蛋白高水平表达,而未转染HCVC蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的P50、P65蛋白。在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达。QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反。结论 HCVC蛋白通过增加IκB降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用。     

NF-κB核酸对大鼠血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响

目的探讨NF-κB核酸对增殖的血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响.方法大鼠胸主动脉平滑肌细胞传代培养,实验共分六组.阳离子脂质体转染法将NF-κB寡核苷酸导入血管平滑肌细胞,检测细胞凋亡、细胞内NF-κBp65基因表达以及ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白合成情况.结果血管平滑肌细胞转染NF-κB反义或诱骗寡核苷酸后,细胞凋亡增强,凋亡时间延长.反义组NF-κBp65蛋白质表达较正义组降低(P<0.05);反义+诱骗联合干预并未优于反义组单独治疗,但与诱骗组相比NF-κBp65的蛋白质表达降低(P<0.05).反义组、诱骗组的ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白质表达较相应的对照正义组、诱骗对照组均降低(P<0.05).结论 NF-κB的反义和诱骗寡核苷酸均能抑制血管平滑肌细胞ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的蛋白质表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,使细胞凋亡增强;NF-κB反义寡核苷酸及反义+诱骗寡核苷酸联合干预可减少NF-κB生成.     

丙型肝炎病毒核心蛋白对人源肝细胞生物学行为的影响

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对人源肝细胞生物学行为的影响及其相关机制。方法表达HCV核心蛋白的真核表达质粒pcDNA3.1-core转染人源永生化肝细胞QSG7701,建立稳定表达HCV核心蛋白的细胞株——QSG7701／core,利用生长曲线、平板克隆实验和流式细胞术等方法检测HCV核心蛋白对细胞细胞生物学行为的影响;细胞免疫组织化学检测其对活化的caspase-3蛋白表达的影响;利用Western印迹从磷酸化和非磷酸化水平检测核心蛋白对丝裂原蛋白激酶(MAPK)的影响;运用报道基因和凝胶电泳阻滞迁移实验(EMSA)等方法检测转录激活因子1(AP-1)、核因子κB(NF-κB)等转录因子活性的改变。结果HCV核心蛋白可明显抑制人源永生化肝细胞QSG7701的增殖和凋亡;同时下调MAPK通路激酶磷酸化水平和AP-1、NF-κB等转录因子的活性。结论HCV核心蛋白对MAPK通路和AP-1、NF-κB等转录因子的活性的负调控可能是其抑制增殖和凋亡的主要机制,并在病毒持续感染和病变慢性化以及肝癌(HCC)发生过程中起重要作用。     

木犀草素的体外抗炎机制研究

【目的】观察木犀草素对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞(小鼠单核/巨噬细胞系)核因子κB(NF-κB)和环氧合酶2(COX-2)表达及NF-κB DNA结合活性的影响,探讨其体外抗炎机制。【方法】以RAW264.7细胞为研究对象,选用对数生长期的细胞,分别设空白对照组,脂多糖(LPS)处理组(模型组),5、15、45μmol/L木犀草素处理组(中药低、中、高剂量组);加入药物30 min后再加入终浓度为1μg/mL的LPS继续培养12 h,分别采用酶免疫测定法(EIA)检测木犀草素对RAW264.7细胞前列腺素E2(PGE2)生成的影响;电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB的DNA结合活性;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定RAW264.7细胞中COX-2 mRNA的水平;Western blot法测定RAW264.7细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达。【结果】木犀草素能显著性抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2的生成,降低NF-κB的DNA结合活性;下调LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2 mRNA、NF-κB和COX-2蛋白的表达。【结论】木犀草素的抗炎作用可能与其能抑制核内NF-κB的表达和DNA结合活性从而下调COX-2的表达有关。     

骨髓基质细胞保护药物诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的机制研究

目的研究原代正常骨髓基质细胞对多发性骨髓瘤细胞的保护作用及其内在机制。方法脂质体介导Notch1特异性小干扰RNA转染多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞与骨髓基质细胞共培养,采用细胞形态学观察和流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Notch1及NF-κB p65蛋白表达变化。结果多发性骨髓瘤细胞与基质细胞共培养增加了Notch1活化形式(N1-ICD)蛋白的表达;共培养组与悬浮培养组药物诱导的细胞凋亡率分别为(15.30±2.21)%、(32.88±3.27)%;小干扰RNA有效的下调Notch1蛋白的表达;干扰共培养组与控制共培养组细胞的凋亡率分别为(41.47±4.01)%和(24.89±3.68)%;下调Notch1后NF-κB p65蛋白表达没有改变。结论骨髓基质细胞保护药物诱导的多发性骨髓瘤细胞的凋亡,该保护作用通过激活Notch1通路实现。下调Notch1共培养恢复药物诱导的凋亡作用不是通过NF-κB通路,可能存在其他机制。