基于NF-κB信号通路探讨小青龙汤合玉屏风散对变应性鼻炎大鼠MUC5AC和MUC5B表达的影响

目的:基于NF-κB信号通路观察小青龙汤合玉屏风散对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜MUC5AC和MUC5B表达的影响,揭示小青龙汤合玉屏风散治疗变应性鼻炎的作用机制。方法:将清洁级健康雄性Wistar大鼠48只按体重采用随机区组法分为6组,即分成正常组、AR模型组、Forskolin(c AMP激活剂)干预组、H89(PKA抑制剂)干预组、PDTC(NF-κB抑制剂)干预组、小青龙汤组合玉屏风散组,每组8只。采用卵蛋白全身致敏与局部攻击方法制作AR大鼠模型,观察小青龙汤合玉屏风散组治疗后鼻黏膜MUC5AC和MUC5B表达,结果进行统计学分析。结果:模型组MUC5AC和MUC5B表达上调,c AMP激活剂Forskolin干预组、NF-κB抑制剂PDTC干预组、小青龙汤组合玉屏风散治疗组均能使MUC5AC和MUC5B表达下调,而PKA抑制剂H89能上调MUC5AC和MUC5B表达。结论:小青龙汤合玉屏风散治疗变应性鼻炎作用机制可能与抑制NF-κB信号通路和兴奋c AMPPKA信号通路使MUC5AC和MUC5B表达下调有关。     

基于NF-κB信号通路探讨麻黄细辛附子汤对变应性鼻炎大鼠MUC5AC和MUC5B表达影响

目的:基于NF-κB信号通路通过观察麻黄细辛附子汤对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜MUC5AC和MUC5B表达的影响,探讨麻黄细辛附子汤治疗AR的作用机理。方法:选用健康雄性清洁级Wistar大鼠48只,按体重将大鼠采用随机区组法分为6组,即分成正常对照组、模型对照组、Forskolin干预组、H89干预组、PDTC干预组、麻黄细辛附子汤组,每组8只。AR大鼠模型的制作采用卵蛋白全身致敏与局部攻击方法,观察麻黄细辛附子汤组治疗后鼻黏膜MUC5AC和MUC5B表达,对实验结果进行统计学分析。结果:模型对照组MUC5AC和MUC5B表达增加,Forskolin干预组、PDTC干预组、麻黄细辛附子汤组均能使MUC5AC和MUC5B表达减少,而H89能增加MUC5AC和MUC5B表达。结论:麻黄细辛附子汤治疗变应性鼻炎作用机理可能一方面抑制NF-κB信号通路,另一方面兴奋cAMP-PKA信号通路,使MUC5AC和MUC5B表达下调有关。     

白细胞介素-33上调A549细胞中黏蛋白基因MUC5AC和MUC5B的表达

目的:探讨白细胞介素-33(IL-33)对A549细胞中黏蛋白基因表达的影响及其作用机制。方法:体外培养人肺腺癌细胞A549,给予IL-33刺激,通过荧光定量PCR技术(RT-PCR)检测黏蛋白家族基因MUC1,MUC5AC,MUC5B和NF-κB下游基因的mRNA水平,Western Blot检测IκBα的磷酸化水平。随后在IL-33刺激的A549细胞中加入NF-κB抑制剂PDTC,将A549细胞分为对照组,IL-33刺激组,PDTC处理组以及IL-33和PDTC共同处理组,RT-PCR检测黏蛋白家族基因MUC5AC和MUC5B的mRNA水平。结果:IL-33(100ng/ml)处理24h后,A549细胞中MUC5AC和MUC5B的mRNA水平高于对照组(P<0.05),同时NF-κB下游基因(RELA,RELB,NFκB2)的表达也显著高于对照组(P<0.01)。IL33处理A549细胞5min后,IκBα的磷酸化水平显著高于对照组。随后加入NF-κB通路抑制剂PDTC可以有效抑制IL33对MUC5AC基因的激活(P<0.05),而PDTC对MUC5B基因的激活没有影响。结论:IL-33可以通过激活NF-κB信号通路来上调A549细胞中MUC5AC基因的表达,而IL-33上调MUC5B的表达则可能是通过其他信号通路。     

黏蛋白MUC2、MUC5AC mRNA在分泌性中耳炎大鼠模型的表达

目的 探讨变应性分泌性中耳炎分泌型黏蛋白MUC2、MUC5AC mRNA的表达变化及白三烯受体拮抗剂的抑制作用. 方法 建立卵白蛋白激发变态反应性中耳炎大鼠模型,实验动物分为对照组6只、实验组6只和干预组7只.采用RT-PCR技术分别检测MUC2、MUC5AC mRNA在3组中耳黏膜的表达变化. 结果 对照组中,MUC2 mRNA在中耳黏膜表达相对值为(0.23±0.08),MUC5AC mRNA则不表达;实验组表达相对值分别为(0.38±0.07)和(0.45±0.06),与对照组比较差别有统计学意义(P＜0.01);干预组可部分抑制黏蛋白的表达,相对值分别为(0.28±0.07)和(0.29±0.09),与实验组比较差别有统计学意义(P＜0.01). 结论 MUC2、MUC5AC mRNA在变应性中耳炎中表达上调,可被白三烯受体拮抗剂部分抑制.     

MUC5B 和 TSLP 在新疆乌鲁木齐市维吾尔族和汉族变应性鼻炎患者鼻粘膜的差异性表达

目的：观察新疆乌鲁木齐市维吾尔族和汉族变应性鼻炎患者鼻粘膜 MUC5B 和 TSLP 的差异表达,探讨其对变应性鼻炎（AR）发生和发展的作用。方法：选择变应性鼻炎患者40例（维吾尔族和汉族各20例）,设定为 AR 组,以及同期非变应性鼻炎患者20例（维吾尔族和汉族各10例）,设定为对照组,取下鼻甲粘膜采用免疫组化染色观察 MUC5B 和 TSLP 的表达水平。结果：与对照组比较,AR 组的 MUC5B 水平明显降低,而 TSLP水平明显升高,有统计学差异（P ＜0．05）。维吾尔族和汉族人 TSLP 水平差异不大（P ＞0．05）,但维吾尔族人 MUC5B 水平明显高于汉族人（P ＜0．05）。结论：MUC5B 低表达、TSLP 高表达的人群易患变应性鼻炎,汉族人的 MUC5B 表达水平低于维吾尔族,这可能是新疆汉族人变应性鼻炎较高发的原因之一。     

变应性鼻炎与慢性单纯性鼻炎鼻黏膜成纤维细胞中组胺受体蛋白的表达

[目的]观察鼻黏膜成纤维细胞中是否存在组胺受体蛋白的表达,并比较在变应性鼻炎与慢性单纯性鼻炎鼻黏膜成纤维细胞中的表达程度.[方法]用流式细胞仪在TNF-α,IL-1β刺激下比较变应性鼻炎组与慢性单纯性鼻炎组鼻黏膜成纤维细胞组胺受体蛋白的表达.[结果]可见少量的组胺受体蛋白表达,变应性鼻炎组与慢性单纯性鼻炎组鼻黏膜成纤维细胞组胺受体蛋白表达量间无显著性差异. [结论]在TNF-α,IL-1β刺激下变应性鼻炎鼻黏膜成纤维细胞组胺受体蛋白的表达量稍低于慢性单纯性鼻炎.     

血清MUC1、MUC2及MUC5AC表达与胃癌的关系

目的:检测胃癌患者血清中MUC1、MUC2及MUC5AC含量,探讨与胃癌的关系。方法:制备MUC1、MUC2及MUC5AC黏蛋白芯片,免疫荧光检测,采用CEA作为指示指标,对30例胃癌患者及30例健康人进行黏蛋白血清水平的检测。结果:胃癌组三种黏蛋白血清水平增高,两组间差异显著(P<0.01)。MUC1的阳性表达与胃癌TNM分期相关(P<0.01),MUC2、MUC5AC的阳性表达与TNM分期无关(P>0.05)。三种黏蛋白(MUC1、MUC2、MUC5AC)的表达随胃癌分化程度降低有增高的趋势。各单一黏蛋白以及黏蛋白两两之间和联合诊用于胃癌诊断的敏感性及特异性均较高,其中单一黏蛋白中,MUC1的的敏感性和特异性最好,分别达到81.5%、75.8%,联合诊断(三种黏蛋白中至少两种阳性)的敏感性和特异性达到96.0%、82.9%。结论:检测血清黏蛋白MUC1、MUC2及MUC5AC水平,可以提高胃癌诊断的敏感性及特异性,为胃癌的早期诊断提供新的思路。     

黏蛋白MUC2、MUC5AC在大肠腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨黏蛋白MUC2、MUC5AC在大肠腺癌中的表达情况及其临床意义。方法：采用S-P免疫组织化学法对20例正常大肠黏膜和64例大肠腺癌组织中MUC2、MUC5AC蛋白的表达情况进行检测。结果：64例大肠腺癌中MUC2、MUC5AC蛋白的阳性表达率分别为59、4％和60、9％,与正常大肠黏膜标本相比较,两者差异具有统计学意义;MUC2、MUC5AC蛋白的阳性表达均与大肠腺癌的Dukes分期和淋巴结转移有关。结论：MUC2蛋白表达下调或MUC5AC蛋白表达上调可能参与了大肠腺癌的发生、发展过程,与肿瘤的浸润转移有关。     

激活蛋白-1对香烟烟雾提取物诱导气道 黏蛋白5AC基因表达的调控作用

目的：了解激活蛋白-1（AP-1）参与调控香烟烟雾诱导的气道黏蛋白（MUC）5AC表达的作用机制,探讨此过程中AP-1活化的可能信号途径。 方法：体外培养人气道上皮细胞BEAS-2B,给予香烟烟雾提取物（CSE）刺激,干预实验用c-Jun 的显性负性突变体TAM67转染细胞阻断AP-1的DNA结合活性;用SP600125和PD98059预处理分别阻断c-Jun氨基端激酶（JNK）和细胞外信号调节激酶（ERK）的活性。以ELISA法检测MUC5AC蛋白含量,Western印迹检测磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化ERK（ p-ERK）和磷酸化P38（ p-P38）含量,RT-PCR检测MUC5AC mRNA 表达水平, EMSA测定AP-1的 DNA结合活性。 结果：CSE（1 g/L）刺激后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量明显高于对照组（均P＜0.01）,AP-1 的DNA结合活性也明显强于对照组（P＜0.01）,伴随p-ERK和p-JNK蛋白含量显著增加,与对照组相比,差异有统计学意义（均P＜0.01）,而P38含量无明显变化(P＞0.05);与CSE组相比,TAM67转染细胞后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量均显著降低 (P＜0.01);与CSE组相比,用SP600125或PD98059处理细胞后可明显抑制AP-1的 DNA结合活性 (均P＜0.05),并下调MUC5AC蛋白含量和mRNA的表达（均P＜0.05）。 结论：AP-1参与调控CSE诱导的气道MUC5AC基因表达的过程,此过程是由JNK和ERK信号转导通路激活AP-1,再由AP-1与MUC5AC启动子上AP-1 DNA反应元件结合后在转录水平上调MUC5AC的表达而实现的。     

透明质烷和CD44参与调节气道黏液高分泌的分子机制

目的了解透明质烷（HA）和CD44在气道黏液高分泌中的作用,探索信号因子活化表皮生长因子（EGF）／表皮生长因子受体（EGFR）信号通路的分子机制。方法体外培养BEAS-2B气道上皮细胞,给予中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）刺激,以活性氧（ROS）清除剂（DMTU）、透明质酸酶（Hase）、CD44抗体和组织激肽释放酶抑制剂（PI）作为干预因素。RT—PCR检测黏蛋白（MUC）5ACmRNA表达。ELISA法检测MUC5AC及EGF蛋白含量;Westernblotting分析磷酸化EGFR（p-EGFR）蛋白水平。结果NE刺激后MUC5AC、EGF、P—EGFR蛋白及MUC5ACmRNA表达均较对照组显著增高（P〈0．01）,给予DMTU干预后上述指标水平均明显降低（P〈0．01）;在加入DMTU后用Hase处理细胞,上述指标水平均较DMTU组明显升高（P〈0．05）,EGF蛋白含量增高更为明显（P〈0．01）;CD44抗体或PI处理后上述指标水平均明显低于NE组（P〈0．05）,EGF蛋白含量降低更为显著（P〈0．01）。结论NE可刺激细胞产生ROS,后者可裂解HA致其解聚,并使之与CD44结合而活化组织激肽释放酶（TK）,由活化的TK对前体EGF加工处理成EGF,由此启动EGFR信号级联反应,上调MUC5AC基因的表达。     

晚期糖基化终末产物受体促进甲苯二异氰酸脂哮喘小鼠MUC5AC表达及气道黏液高分泌

目的 探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号对甲苯二异氰酸脂(TDI)哮喘小鼠黏蛋白MUC5AC表达及气道黏液分泌的影响.方法 在体内水平上建立TDI小鼠哮喘模型,实验分4组:对照组、TDI溶剂(AOO)致敏激发组、TDI致敏激发组、RAGE抑制剂处理组.采用糖原染色评估各组间气道黏液分泌情况,Western blotting及免疫组化法检测MUC5AC表达水平.同时通过Western blotting检测各组间细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路磷酸化水平.在体外水平配制TDI-人血清白蛋白(TDI-HSA)复合物,刺激人支气管上皮细胞(16HBE)及经慢病毒转染空载体和shRNA-RAGE载体的人支气管上皮细胞,检测各组MUC5AC及ERK通路分子表达情况,加入ERK抑制剂U0126后,进一步评估MUC5AC mRNA表达情况.结果 与对照组相比,TDI哮喘组小鼠糖原染色阳性率及MUC5AC表达升高(P<0.05),p-ERK表达增多(P<0.05),RAGE抑制剂处理组糖原染色阳性率及MUC5AC表达较TDI组减少(P<0.05).同时,p-ERK表达下降(P<0.05).体外水平,与对照组相比,TDI-HSA处理组MUC5AC mRNA及p-ERK表达增多(P<0.05),sh RNA-RAGE组MUC5AC mRNA及p-ERK表达下调(P<0.05),ERK抑制剂预处理组,MUC5AC mRNA表达下调(P<0.05).结论 TDI小鼠哮喘模型下RAGE可能通过激活ERK通路促进黏蛋白MUC5AC的表达及黏液高分泌的发生.     

甲基丁香酚对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜水通道蛋白5的影响

目的 观察甲基丁香酚对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜水通道蛋白(aquaporin,AQP)5表达的影响,并探讨其意义。方法 Wistar 大鼠126只随机分为正常对照组,变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)模型对照组,布地奈德阳性对照组,甲基丁香酚80 mg/kg组、40 mg/kg组、20 mg/kg组及10 mg/kg组,每组18只,除正常对照组外,其余组大鼠经卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏建立变应性鼻炎模型,造模成功后分别给予蓖麻油、布地奈德及对应剂量甲基丁香酚干预,于给药1、2、4周后应用免疫组织化学方法观察鼻黏膜AQP5的分布,Western blotting比较各组鼻黏膜中AQP5的表达,Real-time PCR比较AQP5 mRNA的表达。结果 AQP5主要位于鼻黏膜腺上皮及导管上皮细胞的胞膜和胞质。AR模型对照组大鼠鼻黏膜的AQP5及AQP5 mRNA均较正常对照组表达减少(P<0.05)。各给药组大鼠鼻黏膜AQP5及AQP5 mRNA均较AR模型对照组有不同程度增高。药物干预1、2、4周,布地奈德阳性对照组AQP5的表达与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05), 与AR模型对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05);布地奈德阳性对照组的AQP5 mRNA分别与正常对照组及AR模型对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。干预2周后,甲基丁香酚各剂量组AQP5的表达即与布地奈德阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。干预1周, 20 mg/kg组的AQP5 mRNA与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 甲基丁香酚可能通过上调AQP5的表达减轻鼻黏膜腺体水肿程度、减少腺体分泌,从而缓解变应性鼻炎鼻痒、喷嚏及流涕等症状。     

磷酸二酯酶-4抑制剂对烟雾诱导的COPD大鼠肺组织中MUC5AC表达的影响及其作用机制的研究

目的:探讨磷酸二酯酶-4抑制剂罗氟司特对吸烟鼠肺组织MUC5AC表达的影响及其分子机制。方法:将Wistar大鼠随机分为对照组、烟雾组、罗氟司特组、烟雾+罗氟司特组。对照组和罗氟司特组大鼠置于无烟环境中饲养,烟雾组和烟雾+罗氟司特组大鼠暴露于有烟环境,免疫组化法检测各组大鼠肺组织MUC5AC的表达,PCR法检测MUC5AC mRNA表达量,WesternBlot检测MUC5AC蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,烟雾组大鼠肺组织MUC5AC的mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而烟雾+罗氟司特组MUC5AC的表达水平较烟雾组显著降低(P<0.05)。结论:磷酸二酯酶-4抑制剂罗氟司特通过抑制吸烟鼠肺组织MUC5AC的表达,改善COPD。     

中性粒细胞弹力蛋白酶引起黏蛋白5AC高表达的信号转导机制

目的研究中性粒细胞弹力蛋白酶（NE）通过表皮生长因子受体（EGFR）引起黏蛋白（MUC）5AC高表达的上游信号通路。方法培养人气道BEAS@B上皮细胞,给予NE刺激,以肿瘤坏死因子转换酶抑制剂-1（TAPI-1）及活性氧（ROS）清除剂DMTU为干预因素。RT-PCR检测干预前后细胞中MUCSACmRNA含量;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测培养上清中MUCSAC、可溶性转化生长因子（TGF）-α蛋白含量;Westem印迹分析磷酸化表皮生长因子受体（P-EGFR）蛋白水平。结果NE刺激后引起MUCSAC基因转录和蛋白表达水平明显高于未给予NE刺激的对照组（P〈0．01）,同时伴随可溶性TGF-α及p-EGFR蛋白水平的增高,与对照组相比,差异有统计学意义（均P〈0．01）;加入浓度为20umol/L的肿瘤坏死因子转换酶抑制剂TAPI-1后可明显下调上述指标的表达水平（均P〈0．01）,DMTU也同样降低了MUC5AC的基因转录、产物水平以及可溶性TGF-α蛋白相对含量,与单纯NE刺激组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）,但对单纯外源性TGF-α刺激组引起的MUCSAC基因转录和蛋白合成增加无明显作用（均P〉0．05）。结论NE能刺激细胞产生ROS,再活化肿瘤坏死因子转换酶（TACE）引起黏蛋白产生的增多,组成EGFR通路上游的主要信号分子,故ROS／TACE／TGF-α前体／EGFR转导途经是NE引起气道黏液高分泌的重要机制。     

针刺对去势雌兔干眼症模型眼表粘蛋白MUC5AC、MUC19表达的影响

目的 研究针刺对更年期干眼症模型去势雌兔眼表蛋白MUC5AC和MUC19的表达影响,为更年期干眼症治疗提供依据。 方法 选择健康成年雌兔45只,将其随机分为对照组、模型组、针刺组(每组15只),模型组和针刺组行双侧卵巢切除建立干眼模型,2周后对针刺组采取针刺治疗,分别于去势前、2周后、3周后、6周后行Schirmer试验、泪膜破裂时间检测、荧光染色评分、虎红染色评分、免疫组化染色检测MUC5AC的MUC19表达水平。 结果 2周和3周时模型组和针刺组Shirmer值、BUT时间、荧光染色评分、虎红染色评分值与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);3周时针刺组和模型组的Shirmer值和虎红染色评分差异有统计学意义(P<0.05);6周时模型组的Shirmer值、BUT时间、荧光染色评分、虎红染色评分值与对照组和针刺组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。实验3周后针刺组MUC5AC和MUC19表达水平较模型组显著升高(P<0.05),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);6周后针刺组黏蛋白表达水平继续升高,明显高于模型组(P<0.05)。 结论 针刺治疗可提高眼表黏蛋白的表达,提示其在干眼症治疗中具有应用价值。      

张力敏感性阳离子通道在机械牵张引起气道黏液高分泌中的作用

目的 观察张力敏感性阳离子通道、Ca2+内流和豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物(MARCKS)在机械牵张引起气道黏液高分泌中的作用.方法 人气道黏膜上皮细胞(HBE16)体外培养,采用小型生物撞击机给予机械牵张刺激,各组培养细胞依施加条件不同而分为对照、牵张、牵张+钆、牵张+硝苯吡啶、牵张+低分子量肝素、牵张+MARCKS效应结构域(ED)锁核酸(LNA)以及牵张+MARCKS的ED无关对照LNA序列共7组,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光法观察与胞吐相关的突触相关膜蛋白SNAP23以及黏蛋白(MUC)5AC mRNA和蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞培养上清中MUC5AC分泌.结果 机械牵张能显著升高人气道黏膜上皮细胞中SNAP23和MUC5AC表达,显著提升细胞培养上清中MUC5AC分泌(P＜0.05);钆、硝苯吡啶、MARCKS的ED-LNA均能抑制机械牵张对SNAP23表达和MUC5AC表达、分泌的提升作用(均P＜0.05);而低分子量肝素未能显著降低SNAP23表达和MUC5AC表达、分泌(P＞0.05).结论 机械牵张能升高人气道黏膜上皮细胞MUC5AC的表达,其机制可能与张力敏感性阳离子通道、Ca2+内流和MARCKS途径有关.