抗CD47单克隆抗体制备及其促巨噬细胞吞噬作用鉴定

目的:制备可识别肿瘤细胞表达CD47蛋白的抗CD47单克隆抗体,并鉴定其抗肿瘤作用。方法:利用BL21(DE3)原核表达系统表达CD47胞外段蛋白,利用Ni-NTA层析纯化表达蛋白。免疫BALB/c小鼠,制备并筛选分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株。利用正辛酸-硫酸铵沉淀方法纯化抗CD47单抗。利用流式细胞术检测纯化抗体的活性。利用巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验,检测抗CD47单抗的抗肿瘤作用。结果:表达并纯化了CD47胞外段蛋白,筛选到了分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株—7D4,流式细胞术检测结果显示,抗体具有结合肿瘤细胞的活性,但是对不同肿瘤类型细胞的结合效率存在差异。巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验发现,利用抗体封闭肿瘤细胞CD47信号后,可以增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。结论:抗CD47单抗—7D4可以促进巨噬细胞的吞噬作用,具有潜在应用价值。     

CD47分子在弥漫大B细胞淋巴瘤肿瘤微环境中的研究进展

弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是成年人常见的高度侵袭性恶性血液肿瘤。DLBCL为一种高度异质性淋巴瘤,患者在分子生物学特征、临床表现和预后方面均存在巨大差异。目前越来越多的证据表明,肿瘤微环境对DLBCL的发生、发展发挥着重要的作用。CD47分子是一种整合素相关蛋白,在DLBCL细胞中过度表达,并在淋巴瘤免疫逃逸中起关键作用。本文拟就CD47分子相关信号通路、在DLBCL肿瘤微环境中的作用和DLBCL中靶向CD47分子的治疗策略等方面的研究进展进行综述。     

CD47与淋巴瘤免疫治疗相关性的研究进展

CD47属于免疫球蛋白超家族成员,在人体多种细胞和组织上均有表达,但在肿瘤细胞上表达得更多,特别是在各种造血系统肿瘤中高表达。肿瘤细胞上表达的CD47与巨噬细胞上的信号调节蛋白α（SIRPα）结合抑制巨噬细胞对肿瘤的吞噬作用可导致肿瘤免疫逃逸。近年来CD47成为肿瘤研究的新热点,本文就CD47的结构与表达、CD47-SIRPα、靶向CD47抗体药物与淋巴瘤免疫治疗相关性研究作一综述。     

CD47在输卵管癌中的表达及临床意义

目的:检测CD47在输卵管癌和正常输卵管组织中的表达，并探讨其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测输卵管癌患者标本73例和正常输卵管标本31例中CD47的表达情况，分析其与输卵管癌患者临床病理参数的关系及其表达对患者预后的影响。结果:CD47以胞膜着色为主，亦有胞浆着色，CD47在输卵管癌高表达率为42.5％，明显低于正常输卵管组织的83.9％（P＜0.01）。生存曲线分析显示CD47阴性表达的输卵管癌患者死亡率增高（P＜0.05）。结论:CD47表达的减低可指导临床诊断原发性输卵管癌，且其表达减低与输卵管癌预后不良有关。     

CD47在淋巴瘤治疗中的研究进展

CD47作为一种跨膜蛋白,广泛分布于多种细胞,通过与巨噬细胞上信号调节蛋白α（SIRPα）结合,释放抑制信号,逃避巨噬细胞的吞噬。淋巴瘤细胞CD47表达上调是诱导免疫逃逸的重要机制之一,也是潜在的治疗靶点。文章就CD47诱导的免疫逃逸、靶向CD47的单克隆抗体和细胞免疫治疗等治疗手段在淋巴瘤治疗中的研究进展进行综述。     

CD47在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的 通过TCGA数据库及人类蛋白质谱数据库分析CD47表达、胰腺癌临床病理特征及患者总存活率之间的关系。通过GEPIA数据库进一步分析了CD47基因表达与免疫细胞浸润的关系。方法 在(TCGA)数据中初步筛选胰腺癌组织和癌旁正常组织中CD47的表达。应用蛋白质组学数据库(CPTAC)和人类蛋白质图谱数据库评估CD47蛋白的表达。应用(ROC)曲线评价CD47 mRNA表达对胰腺癌的诊断价值。采用多因素分析和Kaplan-Meier生存曲线分析CD47表达与临床病理参数和总生存期(OS)的关系。同时，使用GEPIA数据集探究CD47基因表达与免疫细胞浸润的关系。结果 胰腺癌组织中CD47表达明显高于癌旁正常组织。ROC曲线分析显示，以5.236为界值，CD47鉴别胰腺癌与癌旁对照的准确性、敏感性和特异性分别为97.0%、95.0%和91.8%。Kaplan-Meier生存分析显示，CD47高表达的胰腺癌患者预后比CD47低表达的患者差。单因素和多因素分析显示，CD47是胰腺癌患者的独立危险因素。相关分析表明，CD47的表达与肿瘤纯度和免疫浸润有关。结论 CD47表达缺失与胰腺癌的疾病进...     

CD47与胰腺癌相关性的研究进展

CD47分子是一种高度糖化的跨膜蛋白,存在于所有组织的多种细胞表面上。近几年的研究表明,CD47分子与多种恶性肿瘤密切相关,在大部分肿瘤细胞中呈现高表达,它与特异性配体结合后,可对免疫细胞吞噬肿瘤细胞产生抑制作用,使其产生免疫逃逸,故可促进肿瘤的发生与发展。胰腺癌是常见的消化系统肿瘤,恶性程度极高,诊断、治疗困难,预后不理想。与其他肿瘤类似,胰腺肿瘤与人体免疫系统之间也存在一定相关性,但CD47与胰腺癌相关性的研究甚少,故本文将从CD47的分子结构、生理功能、表达情况及与胰腺癌的相关性进行综述,并对胰腺癌的免疫治疗进行总结和展望。     

CD47在肾细胞癌预后评价中的应用价值

[目的]研究CD47分子在肾细胞癌（RCC）组织中的表达情况、临床意义及其在预后评价中的应用价值。[方法]收集37例RCC患者的组织标本,同时以25例肾移植供肾的标本作为对照。实时定量PCR法和Western blot法分别检测各样本组织中CD47 mRNA和蛋白的表达量。生存分析探讨CD47表达与患者预后情况的关系。Cox比例风险模型分析影响患者生存时间的危险因素。[结果]RCC组织中CD47的mRNA和蛋白表达量明显高于正常肾脏组织。CD47高表达组的中位生存时间和3年生存率明显低于低表达组。多因素分析表明,CD47表达水平、肿瘤直径、肿瘤分化程度及肿瘤TNM分期是影响RCC患者生存时间的独立危险因素。[结论]CD47在RCC组织中表达增高,且高表达CD47患者预后较差。CD47在RCC患者的预后判断中具有较好的应用价值。     

CD47在肿瘤中的表达及治疗应用

近年来研究发现,CD47通过上调在肿瘤细胞表面的表达来影响肿瘤的生长与转移,同时,其表达上调预示临床预后较差;而CD47单抗可通过激活适应性免疫及直接介导细胞凋亡等机制抑制肿瘤生长.此外,CD47还具有调节血液系统和胃肠道系统正常组织细胞的放射性损伤修复作用,有望成为肿瘤治疗的新靶点.     

CD47基因mRNA在人恶性胸膜间皮瘤中的表达及意义

目的:分析CD47基因mRNA在MPM细胞和组织中的表达,并评价其与MPM患者临床病理特征及预后的关系。方法:采用RT-qPCR分析人正常胸膜间皮LP9细胞系和MPM细胞系NCI-H28（上皮样型）、NCI-H2052（肉瘤样型）、NCI-H2452（双相混合型）中CD47基因mRNA表达量;采用RT-qPCR检测12例MPM组织及配对正常胸膜组织中CD47基因mRNA表达量。通过Oncomine数据库对非瘤组织与MPM组织中CD47基因的表达差异进行分析。利用TCGA数据库对CD47基因mRNA表达量与MPM临床病理特征的相关性进行分析。构建Kaplan-Meier模型探讨CD47基因mRNA表达量对MPM患者预后的影响。利用cBioportal在线工具对CD47与MPM肿瘤标志物基因的表达进行相关性分析。结果:RT-qPCR检测和Oncomine数据库检索发现,与配对正常胸膜细胞和组织相比,MPM细胞和组织中CD47基因mRNA的表达量均呈现显著的增加（P＜0.01）。CD47基因表达量与MPM患者肿瘤类型相关（P＜0.05）。CD47基因表达量与MPM患者总生存率和无疾病进展生存率均无显著关联（Logrank P＞0.05）。Cox多因素分析表明,非上皮性型肿瘤是导致MPM患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。CD47基因表达与EFEMP1、MSLN和CALB2基因的表达具有显著正相关（P＜0.01）。结论:CD47基因mRNA在MPM细胞和组织中均呈现显著增高,其表达量与MPM患者的肿瘤类型相关,但CD47基因mRNA表达量与MPM患者预后之间无显著关联。     

CD47在非小细胞肺癌中的表达及意义

摘 要： ［目的］ 通过检测CD47在非小细胞肺癌中的表达,了解CD47在非小细胞肺癌表达的意义及其与预后的相关性。［方法］ 采用免疫组化EnvisionTMplus法检测52例非小细胞肺癌患者癌及癌旁组织中CD47的表达,分析CD47与非小细胞肺癌患者临床病理参数及预后的关系。［结果］ CD47在非小细胞肺癌及癌旁组织中表达阳性率分别为80.8%(42/52),34.6%(18/52),癌组织CD47阳性率明显高于癌旁组织(P＜0.05)。CD47与非小细胞肺癌患者的临床分期、淋巴结转移相关(P＜0.05)。CD47阳性患者术后3年总体生存率低于阴性患者(χ2=4.314,P=0.038)。［结论］ CD47与非小细胞肺癌侵袭、转移和预后密切相关,有可能成为非小细胞肺癌的参考指标。     

CD47抑制剂在恶性肿瘤治疗中研究进展

目的 针对淋巴瘤和恶性实体肿瘤,多项以CD47为靶点单克隆抗体的Ⅰ-Ⅱ期临床试验已经展开,本研究对CD47抑制剂在多种恶性肿瘤临床应用中的研究进展进行综述.方法 应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“CD47、巨噬细胞、免疫治疗、恶性肿瘤”为关键词,检索2009-01-2018-12的相关文献,共检索到...     

CD47-SIRPα信号通路在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:探讨CD47-SIRPα信号通路在宫颈癌组织中的表达,分析其表达水平与患者临床特征之间的关系。方法:收集120例宫颈癌病理标本及临床资料作为研究对象,60 例宫颈上皮内瘤变组织(HSIL)及16例正常宫颈组织作为对照组。采用免疫组织化学法检测CD47和SIRPα的表达水平,并分析其相关性及临床意义。结果:宫颈癌组织中CD47高表达率为68%,显著高于正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤变组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。SIRPα在宫颈癌组织中的高表达率（21%）低于宫颈上皮内瘤变组织（35%）及正常宫颈组织（44%）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。CD47与SIRPα表达呈正相关。CD47的表达水平与宫颈癌临床分期、分化程度、淋巴结转移、HPV感染相关（P＜0.05）,与年龄无关(P＞0.05)。结论:CD47-SIRPα信号通路是宫颈癌中有潜在价值的诊断和预测分子标志,同时可能为抗肿瘤免疫治疗提供潜在靶点。     

靶向CD47 抗肿瘤治疗的研究进展

[摘要] CD47 是细胞表面高度糖化的穿膜蛋白，是一种“别吃我”信号，可与信号调节蛋白α（SIRPα）等形成CD47-SIRPα 抑制信号复合体，从固有免疫和适应性免疫两方面同时逃避机体的免疫监视。研究发现，CD47 在血液肿瘤和多种实体瘤中高表达，通过与巨噬细胞上的SIRPα 配体结合，启动一系列抑制性的信号转导而躲避吞噬，其高水平表达既能促进肿瘤细胞的生长又能促进肿瘤细胞的转移。通过抗CD47 抗体阻断CD47-SIRPα 信号通路，达到抑制肿瘤细胞的免疫逃逸，增强巨噬细胞的吞噬作用和适应性免疫应答，是免疫治疗肿瘤的新途径。目前，国内外开展了越来越多靶向CD47-SIRPα 的药物或抗体的基础研究和临床试验，有望从抗体分子设计和重组蛋白等方面解决靶向CD47 抗肿瘤治疗时发生的贫血和输液相关不良反应等问题。本文就CD47 的分子结构与生理功能、CD47-SIRPα 表达调控机制、CD47 抗肿瘤治疗研究现状以及靶向CD47 导致的相关生物安全性问题和解决方案等方面进行综述，为CD47新靶点的基础研究和临床应用提供参考。     

抗CD47靶向治疗研究现状及应用前景

在肿瘤发生发展过程中,肿瘤细胞逃逸了免疫系统的监视;免疫逃逸机制对于研发新的抗肿瘤治疗方案具有重要的意义。免疫治疗旨在激活患者自身的免疫系统,是肿瘤治疗相关研究的前沿,具有广阔的应用前景。CD47是一种广泛表达的细胞表面分子,肿瘤细胞可能借此“别吃我”信号,逃避了肿瘤免疫;肿瘤干细胞中CD47的表达水平甚至比肿瘤细胞更高。通过使用抗CD47抗体阻断CD47-SIRPα通路,从而介导细胞吞噬作用,能够靶向性杀伤肿瘤细胞。现在多项关于CD47靶向治疗的临床试验正在进行中,包括两种单克隆抗体和一种融合蛋白。然而由于使用动物模型不一,可能高估了这些药物的临床疗效预测。现将CD47抗肿瘤治疗相关研究的背景及潜在问题加以综述,并对该治疗的未来应用前景予以展望。      

天然免疫检查点CD47-SIRPα在恶性肿瘤中的研究进展

针对CTLA-4/B7和PD-1/PD-L1的免疫检查点抑制剂现已广泛应用于临床,其他检查点抑制剂也正在开发中。CD47是广泛表达于正常细胞表面的蛋白质,在肿瘤细胞中呈过表达状态,其受体为髓系抑制性免疫受体SIRPα。阻断CD47与SIRPα之间的相互作用可增强巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬作用进而消灭肿瘤细胞。此外,越来越多的证据表明阻断CD47-SIRPα轴还可以增强抗原呈递细胞的功能,从而刺激T细胞介导的抗癌免疫。随着该领域研究的发展,CD47-SIRPα轴的临床应用将会是未来肿瘤免疫治疗的热点之一。     

抗CD47单克隆抗体对卵巢癌细胞靶向治疗的体外研究

  目的   探讨抗CD47单克隆抗体在体外对巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞作用的影响。  方法   收集天津医科大学附属肿瘤医院2011年6月至2011年12月手术切除的卵巢组织样本45例(包含卵巢癌组织样本39例, 正常卵巢组织样本6例), 获得的组织细胞通过流式细胞术分析CD47的表达水平, 通过细胞功能学实验观察抗CD47单克隆抗体在体外对小鼠巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞的靶向治疗作用。  结果   流式细胞术分析显示, 卵巢癌细胞系SKOV-3细胞和卵巢癌组织细胞中CD47表达水平均明显高于正常人卵巢上皮细胞, 差异具有统计学意义(P < 0.01), 且与疾病的分化程度相关(P < 0.05)。细胞功能学实验结果显示, 抗CD47单克隆抗体在体外可促进巨噬细胞对卵巢癌细胞的吞噬作用, 各实验组(1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL)分别较空白对照组吞噬指数显著增加, 并且随抗体浓度的增加吞噬指数呈浓度依赖性, 差异均具有统计学意义(P < 0.01)。统计学分析显示, 10μg/mL浓度组吞噬指数达到峰值, 同20μg/mL浓度组吞噬指数无显著性差异(P > 0.05)。  结论   CD47高表达于卵巢癌组织细胞, 且与组织分化程度相关。抗CD47单克隆抗体在体外可促进巨噬细胞对卵巢癌肿瘤细胞的吞噬作用, 为卵巢癌的靶向治疗提供了实验依据。      

CD47在初诊正常核型急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义

目的 探讨CD47在初诊正常核型急性髓系白血病(AML)患者中的表达水平及临床意义.方法 选取137例初诊正常核型AML患者及3名健康志愿者.采用流式细胞术及实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)对健康志愿者骨髓造血干细胞(HSC)和造血祖细胞(MPP)及AML患者骨髓单个核细胞(MNC)和白血病干细胞(LSC,Lin-CD34+CD38-CD90-)的CD47表达水平进行检测;采用基因组分析平台检测患者FMS样酪氨酸激酶3内部串联重复(FLT3-ITD).采用超高速流式分选系统分选CD34+CD38-CD47lo和CD34+CD38-CD47hi细胞.将两组细胞均用MethoCult H4445培养液培养接种于含有琼脂糖的甲基纤维素板,12 d后计数MPP集落形成单位(CFU),同时将1×105个CD34+CD38-CD47lo和CD34+CD38-CD47hi细胞分别移植到经280 cGy照射的NSG(NOD-SCID IL-2Rγnull)小鼠,8周后处死小鼠,流式细胞术检测人CD45+细胞比例.结果 CD47的表达在初诊正常核型AML患者中高于健康志愿者,CD47在AML各法、美、英协作组(FAB)亚型中均有表达,相对表达量比较差异无统计学意义(F=0.545,P>0.05).137例患者中CD34+CD38-CD47hi 37例,其中17例(46%)FLT3-ITD阴性,20例(54%)为FLT3-ITD阳性;CD34+CD38-CD47lo的患者100例,其中63例(63%)FLT3-ITD阴性,37例(37%)FLT3-ITD阳性,CD34+CD38-CD47hi与CD34+CD38-CD47lo患者相比较,FLT3-ITD阳性率差异无统计学意义(χ2=3.79,P>0.05).将FACS分选的CD34+CD38-CD47lo和CD34+CD38-CD47hi接种于含有琼脂糖的甲基纤维素板12 d后,仅CD34+CD38-CD47lo细胞可以形成CFU.NSG小鼠移植实验显示CD34+CD38-CD47lo细胞可重建造血,CD34+CD38-CD47hi植入失败.结论CD34+CD38-CD47hi富集LSC,可作为AML患者化疗后微小残留病的监测指标.     

胃肠道原发B细胞性淋巴瘤的病理学特征及播散机制

目的研究胃肠道原发B细胞性淋巴瘤的病理学特征及淋巴细胞归巢受体CD44在其播散中的作用。方法对199例胃肠道原发B细胞性淋巴瘤进行病理组织学及免疫组化研究。结果胃肠道原发B细胞性淋巴瘤以DL(70.9%)发病率最高,MALT淋巴瘤(9.5%)次之。LN1染色在MALT淋巴瘤、MZC均为核周点状阳性。1例MLP肿瘤细胞LN1染色特性及形态学特征与MALT淋巴瘤相同。199例中单克隆性cIg检出率为49.7%,在MALT淋巴瘤为100%。临床Ⅲ、Ⅳ期组的CD44阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期组(P<0.001);在全身弥漫播散病例CD44阳性率高于MALT内播散者。结论MALT淋巴瘤来源于MZC,其惰性生物学行为与细胞来源有关。MLP除可为多中心起源的套细胞来源外,也可是MALT淋巴瘤晚期扩散的结果。cIg检测有助于胃肠道淋巴组织良恶性疾病的鉴别诊断。CD44表达与淋巴瘤的血道播散密切相关。     

CD147蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨CD147蛋白表达在乳腺癌发生中的作用及与临床病理特征之间的关系.方法采用免疫组织化学(S-P)技术检测了CD147蛋白在58例乳腺癌标本和15例乳腺纤维腺瘤标本中的表达.结果CD147蛋白分子在乳腺癌组织中的表达率明显高于乳腺纤维腺瘤.CD147的表达与肿瘤的临床分期、淋巴结状况、组织学分级有显著性差异.结论CD147表达在乳腺癌的发生发展中可能有重要作用.