多重聚合酶链反应方法在结核杆菌检测中的应用

[目的]建立结核病诊断及快速检测方法。[方法]将结核杆菌标准菌株、临床病例标本、对照标本采用多重PCR体系进行检测，以研究多重PCR方法对上述菌株检测的敏感性和特异性。[结果]多重PCR体系检测结核杆菌DNA的灵敏性最低为30～210个结核杆菌，对结核病病例和对照标本检测的灵敏度为94．6％，特异度为100％。[结论]多重PCR技术用于结核分支杆菌的鉴定简便、快速、特异，适于在卫生检疫系统和临床实验室应用。     

食源性致病菌多重聚合酶链反应快速检测

[目的]建立快速检测食源性致病菌的多重聚合酶链反应(PCR)方法.[方法]以出血性大肠杆菌的编码大肠杆菌不耐热毒素的B亚单位(LTB)基因、福氏志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、霍乱弧菌肠毒素细胞外分泌蛋白(EPSM)基因作为目的基因,分别设计一对引物,优化各种工作条件,建立一种多重PCR诊断方法.[结果]应用所建立的多重PCR方法能快速、特异地检测出出血性大肠杆菌194 bp、福氏志贺菌606 bp、霍乱强菌482 bp的目的基因.[结论]该检测方法简单、快速、准确、灵敏度高,可广泛应用于食品卫生检测和临床检验等领域.     

聚合酶链反应快速检测钩端螺旋体

为了早期、快速、准确地诊断钩端螺旋体病（钩体病），本研究利用ＰＣＲ技术，以问号钩体螺旋体（钩体）高度保守基因的一段序列为引物，对广东省近年流行的4个血清型的典型株进行了扩增，并对1997年7～9月清远市钩体病流行期15份早期血清进行了检测，现报告如下。一、材料与方法：1．菌株：问号钩体4种血清型（赖型、犬型、秋季型和波摩那型）标准菌株由广东省卫生防疫站提供。2．钩体ＤＮＡ提取：钩体培养物离心后，加1%ＳＤＳ及终浓度40μｇ／ｍｌ的ＰｒｏｔｉｎａｓｅＫ于37℃水浴裂解菌体，以等体积酚：氯仿抽提3次，然后以等体积异丙…     

聚合酶链反应快速检测伯氏疏螺旋体

莱姆病（lymediseaseLD）是以伯氏疏螺旋体（Bor－reliaburgdorfcriBB）为病原体侵害人体c造成多器'g，多系统受损的感染性疾病[1]。病人常有蝉叮咬史，早期出现症状为慢性游走性红斑（ECM），继而发热似感冒样症状，肌肉以及心脏和神经系统异常；晚期患者具有反复发作性关节炎（acedermatitischroniaacfrophi－cansACA）等症状。该病在美国、欧洲流行范围很广。1986年以来，我国在东北、新疆、福建等边远地区都发现有莱姆病的存在。1990年，在北京西山地区长角血蟀中分离出～林伯氏疏螺旋体到。该病临床症状复杂，诊断通常需要结合实…     

应用聚合酶链反应快速检测葡萄球菌肠毒素基因

金黄色葡萄球菌肠毒素已被视为食物中毒的主要因素之一,引起世界各国的普遍关注,因此建立快速检验方法势在必行.一般的传统方法的整个操作过程繁杂,时间长.我们将PCR技术应用于食物中毒中金葡菌肠毒素的检测与分型,不仅缩短了检测时间,提高了检出率,而且能够对肠毒素进行分型,可为流行病学调查提供准确依据.     

聚合酶链反应技术快速检验饮用水及医院污水中结核杆菌的研究

聚合酶链反应技术快速检验饮用水及医院污水中结核杆菌的研究武建军周秀梅刘保勤牛宏志医院污水中结核杆菌的测定，通常采用罗氏培养基培养后鉴定的方法，时间长达８周，不能及时了解医院污水污染的状况。笔者采用了先集菌，后使用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增测定的方...     

应用聚合酶链反应快速检测女性生殖道沙眼衣原体

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１２８例女性生殖道沙眼衣原体进行了检测。３７份标本沙眼衣原体阳性，其中５例伴淋菌感染，９例伴解脲支原体感染，显示沙眼衣原体感染常与其它性病伴发，对妇女的健康构成威胁。ＰＣＲ方法简便、快速、敏感、特异，适用于沙眼衣原体的检测     

多重聚合酶链反应检测流感嗜血杆菌

目的 建立检测流感嗜血杆菌的多重聚合酶链反应(M-PCR)方法 .方法 合成扩增流感嗜血杆菌编码P6外膜蛋白基因的引物(Hi),鉴定流感嗜血杆菌种特异性;合成扩增流感嗜血杆菌编码荚膜基因的引物(Hi-cap),鉴定菌株是否具有荚膜;设计并合成6对扩增流感嗜血杆菌不同血清型(荚膜型)编码摹因的引物(Hia-Hif),鉴定菌株的血清型,以其他呼吸道常见病原体菌株做对照,应用M-PCR方法 对200株临床分离的疑似流感嗜血杆菌菌株进行鉴定和血清分型.结果 M-PCR方法 检测流感嗜血杆菌具有高度的敏感性和特异性.对照菌株应用种(Hi)、荚膜(Hi-cap)和荚膜型(Hia-Hif)特异引物没有扩增出DNA片段.M-PCR方法 检测DNA的最低检测量为0.935 Pg.对临床分离的200株疑似流感嗜血杆菌鉴定,189株为流感嗜血杆菌,与API R NH鉴定结果 一致.其中1株具有荚膜,为f血清型,与玻片凝集法鉴定结果 一致.结论 M-PCR方法 检测流感嗜血杆菌具有较高的敏感性和特异性,可用于流感嗜血杆菌感染病例标本的快速检测和病例诊断.     

聚合酶链反应检测梅毒螺旋体

利用PCR法对临床梅毒病人皮疹渗出液、全血、血清样本中的梅毒螺旋体进行检测。结果表明：皮疹渗出液检出率最高(30／30)，全血样本检出率较低(8／20)。血清样本26例仅检出1例。在12例早期梅毒病人中。PCR检测全部阳性。结果提出PCR法特异性强。敏感性高，有利于早期诊断。及时治疗。     

聚合酶链反应快速诊断结核性脑膜炎

结核性脑膜炎(TBM)是最严重的肺外结核病,发展中国家的结核病例中此病的发生率为7～12％。由于脑脊液中(CSF)结核茵很少,涂片不易检出,培养又需时6～8周,因此早期诊断常为推测性。本文报道用聚合酶链反应(PCR)检测CSF标本的结果,并与常规细菌学及酶联免疫吸附试验(ELISA)等检测结果进行比较。病例组为34例疑诊为TBM的患者,对照组为51例非TBM患者。TBM临床诊断标准为:发热、头痛及颈项强直持续2周以上。支持证据通过下列检查获得:(1)CSF中淋巴细胞>0.02×10~9/L,蛋白>     

荧光定量-聚合酶链反应法快速检测麻疹病毒核酸

目的：采用荧光定量一聚合酶链反应（FQ-PCR）法，检测麻疹病毒核酸，用以建立和推广一种敏感、特异、快速的麻疹检测新技术。方法：TaqMan特异性荧光标记探针法，进行特异性、敏感性和麻疹疑似患者临床标本的检测。结果：FQ-PCR法检测麻疹病毒核酸具有高度的特异性和敏感性，本次试验检测灵敏度达0．1TCID砷。在14份麻疹患者咽拭子标本中，有13份标本检出麻疹病毒核酸，从核酸提取至完成检测仅需3h。结论：FQ-PCR法为麻疹病毒核酸检测提供了一种可靠的方法。     

应用改进的聚合酶链反应快速检测水中的肠道病毒

近年来 ,聚合酶链式反应 (ＰＣＲ)技术由于特异性强、操作简便已广泛用于环境中肠道病毒的检测。常规ＰＣＲ 1次只能检测 1种病毒 ,而水中病毒有多种 ,因而不能满足实际应用的需要。Ｔｓａｉ等[1] 用多重ＰＣＲ1次检测脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒和轮状病毒 3种病毒 ,这种方法需要引物较多 ,引物之间易相互干扰 ,检测 3种以上病毒就比较困难。Ｚｏｌｌ等[2 ] 采用通用引物ＰＣＲ技术检测肠道病毒 ,但是这种方法只能证明有无肠道病毒的存在 ,不能鉴别病毒种类。我们首次将通用引物ＰＣＲ和多重ＰＣＲ相结合用于肠道病毒检测 ,兼顾了两者的…     

聚合酶链反应对霍乱病原菌快速检测方法的建立

霍乱弧菌快速、准确的鉴定是控制霍乱流行的重要手段,多年来全球对霍乱弧菌进行了不懈的研究,创立了许多行之有效的检定方法,如生物学试验等.在分子生物学飞速发展的今天,创立霍乱弧菌鉴定的分子生物学方法已成必然趋势,其中聚合酶链反应(PCR)就是应用较多,发展较快的有效的方法之一,它具有较高灵敏度及强大的特异性,运用NESTED-PCR法更能达到10 0/ml的检定水平.     

TaqMan-MGB荧光定量逆转录聚合酶链反应快速检测甲型流感病毒

目的:建立一种特异、灵敏、快速检测甲型流感病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法。方法:根据GenBank登录的流感毒株序列,应用生物软件在甲型流感病毒膜蛋白(MP)基因的保守区设计与筛选引物和MGB探针,对荧光定量RT-PCR反应体系与条件进行优化,验证方法的特异性和敏感性。并通过对疑似流感临床样本的检测,以评价该方法的实际应用价值。结果:该方法对甲型流感病毒的检测有高度的特异性、通用性,对乙型流感、麻疹、风疹、腮腺炎、RSV和腺病毒等其他呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.1TC ID50,可从疑似流感患者含漱液中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需2.5 h左右,且操作简便,重复性好。结论:本研究建立的MGB荧光定量RT-PCR的方法具有特异、敏感、快速的特点,适用于甲型流感疫情的应急快速检测。     

聚合酶链反应检测HBVDNA的临床意义

本文应用高度灵敏及特异性的聚合酶链反应(PCR)检测各型乙肝病毒感染者血清中的HBVDNA,同时检测五项乙肝病毒血清标志(HBVM),以探讨PCR检测HBVDNA的临床意义。 1 材料及方法 1.1 研究对象 169例HBV感染者均为我院1994年住院病人。男性125例,女性44例。平均年龄为32.2岁。本组169例均按1990年(上海)全国病毒性肝炎学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准进行诊断。急性肝炎(AH)31例,慢性迁延性肝炎(CPH)30例,慢性活动性肝炎(CAH)52例,重型肝炎16例,肝硬化(LC)10     

聚合酶链反应检测人胃螺杆菌

人胃螺杆菌（Ｈｈ）是慢性胃炎的又一病原菌，体外尚不能培养。作者用对应于细菌１６ＳｒＲＮＡ的螺杆菌属特异引物和细菌通用引物配对，建立了一套ＰＣＲ直接检测人胃粘膜活检标本中Ｈｈ的方法。１２例形态学检查证实为Ｈｈ感染者，１１例ＰＣＲ结果阳性，而大肠杆菌、空肠弯曲菌、双歧杆菌等８种常见肠道菌均阴性；普通ＰＣＲ灵敏度达０．１ｎｇＤＮＡ水平，巢式ＰＣＲ则可检测出０．０１ｎｇＤＮＡ。     

聚合酶链反应检测流感嗜血杆菌的研究

流感嗜血杆菌(HI)是小儿呼吸道细菌性感染的主要致病菌之一,但目前国内尚缺乏早期、快速、敏感和特异的诊断方法,我们进行了用聚合酶链反应(PCR)检测HI的研究。为了观察PCR的特异性,在研究中采用了a、b、c、d、e和f六型的HI标准菌株和30株HI野生菌株,以及7种对照菌株(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、嗜肺军团杆菌、脑膜炎双球菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、霍乱弧菌)。在观察了PCR特异性的基础上,检测了40例肺炎患儿鼻咽深部分泌物(其中30例同时检测了尿标本)。所用引物为来自编码HI外膜蛋白P6。的基因序列,预期扩增产物273bp。     

逆转录酶—聚合酶链反应检测肠道病毒

建立一种特异，敏感的检测肠道病毒的逆转录酶－聚合酶链（RT－PCR）方法，在肠道病毒RNA高度保守的5’端非编码区设计，选择，合成三对引物，采用RT－PCR对175株已知肠道病毒和23份粪便标本进行检测，三对外物RT－PCR均显示高度特异性，敏感性，对23份粪便标本检测，E1E2引物有9份阳性，C1C2引物为7份阳性，P1P2均为阴性 ，与常规检测结果基本一致，这一检测方法具有较高特异性和敏感性，可用于临床快速检测肠病毒。     

逆转录酶——聚合酶链反应检测肠道病毒

建立一种特异、敏感的检测肠道病毒的逆转录酶—聚合酶链(RT—PCR)方法。在肠道病毒RNA高度保守的5’端非编码区设计、选择、合成三对引物,采用RT—PCR对175株已知肠遭病毒和23份粪便标本进行检测。三对引物RT—PCR均显示高度特异性、敏感性。对23份粪便标本检测,E_1E_2引物有9份阳性,C_1C_2引物为7份阳性,P_1P_2均为阴性,与常规检测结果基本一致。这一检测方法具有较高特异性和敏感性,可用于临床快速检测肠遭病毒。