胰岛素样生长因子-II对卵巢癌细胞SKOV3中MMP-9表达的调节作用

目的 :探讨胰岛素样生长因子 II(IGF II)对卵巢癌细胞SKOV3的基质金属蛋白酶 9(MMP 9)、金属蛋白酶组织抑制剂 1(TIMP 1)表达的影响。方法 :细胞 (1.5× 10 5/ml)培养 4 8h后 ,加入不同浓度的IGF II ,再培养 18h。用RT PCR法测定MMP 9mRNA、TIMP 1mRNA水平 ,用明胶酶谱法半定量测定MMP 9蛋白水平的变化。结果 :IGF II可刺激MMP 9蛋白的分泌。随着IGF II浓度增加 ,诱导作用增强 ;浓度较高时 ,MMP 9的分泌量轻度下降。但IGF II不影响MMP 9和TIMP 1的基因表达水平。结论 :IGF II可刺激卵巢癌细胞SKOV3中MMP 9的分泌 ,在卵巢癌的侵袭转移方面可能起重要作用     

RASSF1A基因在卵巢癌组织及腹腔冲洗液中的表达及意义

目的探讨RASSF1A(RAS 相关区域家族1A) 基因转录表达与卵巢癌发生、发展的关系.方法 2003年7月至2005年2月蚌埠医学院附属医院采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 的方法检测42 例卵巢恶性肿瘤患者癌组织、腹腔冲洗液(或腹水)中RASSF1A mRNA 的表达水平,以及11例正常卵巢和19例卵巢良性肿瘤组织中RASSF1A mRNA的表达.结果 RASSF1A mRNA 在所有正常和卵巢良性肿瘤组织中均表达,而在卵巢恶性肿瘤组织中存在较高的表达缺失率(57.1%).RASSF1A mRNA的表达缺失率与卵巢恶性肿瘤的临床分期有关,Ⅲ～Ⅳ期卵巢恶性肿瘤组织中RASSF1A mRNA的表达缺失率显著高于Ⅰ～Ⅱ期,淋巴结转移阳性者RASSF1A mRNA 表达缺失率(73.9%) 明显高于淋巴结转移阴性者(36.8%) (P< 0.05) ;腹腔冲洗液(或腹水)细胞学阳性者,其RASSF1A mRNA的表达缺失率显著升高.结论 RASSF1A 转录表达缺失可能参与调控卵巢癌的发生、发展过程,并且提示RASSF1A表达可作为判断卵巢癌预后的一个指标.     

抑制长链非编码RNA FAL1表达对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制

目的：探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA（lncRNA） FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法：利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹（Western blotting）检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2（p-MEK1/2）蛋白的表达水平。结果：lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织[（15.04±2.24） vs. （2.93±0.39）,P＜0.05]。沉默lncRNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强[（18.38±0.73）% vs. （2.86±0.09）%,P＜0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低[（6.68±1.49）μm vs. （12.85±2.56）μm,（25.80±2.59）个 vs. （145.6±5.23）个,均P＜0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低（P＜0.05）。结论：lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制。     

Aurora-Ipl1激酶1 mRNA在卵巢恶性肿瘤组织中的表达及其意义

目的 :研究卵巢恶性肿瘤组织中Aurora Ipl1激酶 1(AIK1)mRNA的表达 ,探讨AIK1基因与卵巢肿瘤发生的关系。方法 :采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测 2 7例卵巢恶性肿瘤、15例卵巢良性肿瘤或瘤样病变、12例正常卵巢组织中AIK1mR NA。结果 :AIK1mRNA在卵巢恶性肿瘤组织中的表达显著高于卵巢良性病变 (P <0 .0 5 )及正常组织 (P <0 .0 5 )。AIK1mRNA的表达与年龄、组织学类型、分期、腹水等无关 (P >0 .0 5 )。结论 :卵巢恶性肿瘤中AIK1mRNA表达上调 ,提示AIK1基因与卵巢癌发生有关     

Genistein对人卵巢癌细胞系TC-1增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的:研究植物雌激素染料木黄酮(genistein)对人卵巢癌细胞系TC-1细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用的机制。方法:应用MTT法检测不同浓度genistein对TC-1细胞的生长抑制作用,电镜观察药物作用后细胞超微结构的改变,流式细胞仪检测细胞周期、定量分析凋亡,DNA琼脂糖凝胶电泳法确定凋亡。结果:TC-1细胞经不同浓度genistein处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,5mg/L和10mg/L genistein作用72h后,抑制率分别达到89·84%和97·99%。genistein阻断TC-1细胞生长于G2/M期,在G0/G1前出现典型的亚二倍体凋亡峰,且凋亡呈时间依赖性。电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。DNA凝胶电泳可观察到细胞凋亡特异的DNA梯形带。结论:genistein对TC-1细胞生长的抑制作用呈明显的时间及浓度依赖性,并诱导其发生凋亡。     

胰岛素样生长因子-Ⅱ对卵巢癌细胞SKOV3中MMP-9表达的调节作用

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)对卵巢癌细胞SKOV3的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响.方法细胞(1.5×105/ml)培养48h后,加入不同浓度的IGF-Ⅱ,再培养18h.用RT-PCR法测定MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA水平,用明胶酶谱法半定量测定MMP-9蛋白水平的变化.结果IGF-Ⅱ可刺激MMP-9蛋白的分泌.随着IGF-Ⅱ浓度增加,诱导作用增强;浓度较高时,MMP-9的分泌量轻度下降.但IGF-Ⅱ不影响MMP-9和TIMP-1的基因表达水平.结论IGF-Ⅱ可刺激卵巢癌细胞SKOV3中MMP-9的分泌,在卵巢癌的侵袭转移方面可能起重要作用.     

重组人肿瘤坏死因子对卵巢癌AO细胞C－erbB－2表达和形态学的影响

用流式细胞仪和电镜技术检测了用重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）处理前后人卵巢癌ＡＯ细胞Ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达和形态学改变。结果表明，经ｒｈＴＮＦ处理的ＡＯ细胞培养４８ｈ后，细胞Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达强度下降，形态发生变化。提示ｒｈＴＮＦ具有低调节人卵巢癌ＡＯ细胞ｃ－ｅｒｂＢ－２表达的作用。     

重组人肿瘤坏死因子对卵巢癌AO细胞C－erbB－2表达和形态学的影响

用流式细胞仪和电镜技术检测了用重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）处理前后人卵巢癌ＡＯ细胞Ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达和形态学改变。结果表明，经ｒｈＴＮＦ处理的ＡＯ细胞培养４８ｈ后，细胞Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达强度下降，形态发生变化。提示ｒｈＴＮＦ具有低调节人卵巢癌ＡＯ细胞ｃ－ｅｒｂＢ－２表达的作用。     

罗格列酮对人卵巢癌SKOV3细胞中PPARγ和β-catenin表达的影响

目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators activated re-ceptorgamma，PPARγ）的特异性配体罗格列酮对人卵巢癌SKOV3细胞中PPAγ和β-catenin表达的影响，并探讨其机制。方法：设立对照组和实验组，采用荧光定量RT-PCR技术和免疫细胞化学方法检测干预前后细胞中PPARγ、β-catenin mRNA和蛋白水平的变化。结果：免疫细胞化学和荧光定量RT-PCR结果显示：SKOV3细胞表达PPARγ，罗格列酮作用于SKOV3细胞24h后PPARγ mRNA和蛋白表达水平上调，而β-cateninmRNA和蛋白表达水平下调。结论：罗格列酮通过活化PPARγ，下调β-catenin mRNA和蛋白表达水平，从分子水平上揭示PPARγ可能是基因治疗卵巢癌的理想靶点。     

实时荧光定量PCR分析雌激素受体相关受体α,β,γ与雌激素受体α,β在卵巢癌中mRNA的表达模式

目的:明确孤儿受体—雌激素受体相关受体(estrogen receptor-related recep-tor,ERRs)各亚型以及雌激素受体亚型在卵巢癌中mRNA的表达模式。方法:采用Light-Cycler-PCR定量检测40例卵巢癌标本以及15例正常卵巢组织中各种ERRs亚型和ERs亚型mRNA的表达丰度。采用ELISA方法分析各样本血清CA-125水平。结果:卵巢癌组织中ERRαmRNA表达的丰度和阳性表达率显著高于正常卵巢组织(P=0.04和P=0.02),ERRβ在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的RNA表达的丰度和阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);ERRγmRNA在正常卵巢以及卵巢癌组织中表达的丰度差异无统计学意义(P>0.05),但卵巢癌组织中ERRγ的阳性表达率显著增高(P=0.045)。ERRs家族和ERs家族在卵巢癌中有很高的共同表达率,ERα/ERRα的比率在卵巢癌组织中明显下降(P=0.0412)。结论:ERRs与ERs在卵巢癌中有共同表达,两个家族间的相互作用可能是卵巢癌复杂的肿瘤内分泌生物学行为的分子基础。     

EGFR信号通路相关分子在上皮性卵巢癌表达的研究

目的:探讨EGFR、Akt、Raf-1、ERK mRNA在上皮性卵巢癌组织中表达的临床意义、相关性及对预后的影响。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测14例正常卵巢组织、16例卵巢良性肿瘤组织及61例上皮性卵巢癌组织中EGFR、Akt、Raf-1、ERK mRNA的表达,并分析它们与临床病理参数之间的关系及其相关性。结果:卵巢癌组织中EGFR、Akt、Raf-1、ERK阳性表达率显著高于正常卵巢及卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);EGFR、Akt表达水平与卵巢癌手术病理分期、细胞学分级及淋巴结转移有关(P<0.05),Raf-1表达水平与手术病理分期及淋巴结转移有关(P<0.05);ERK表达水平与细胞学分级有关(P<0.05);两两比较,EGFR与Raf-1,Akt与Raf-1,Akt与ERK,Raf-1与ERK mRNA的表达呈正相关(P<0.05)。结论:上皮性卵巢癌组织EGFR、Raf-1、Akt、ERK的过表达与卵巢癌的发生发展及侵袭有关,可能为多靶点联合治疗提供新方向。     

肿瘤转移抑制基因kai1对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 :探讨肿瘤转移抑制基因kai1对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法 :脂质体介导kai1cDNA转染高转移性人卵巢癌细胞系HO 891 0PM ,免疫细胞化学S P法检测转染前后细胞内kai1蛋白的表达。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、平板克隆形成实验观察kai1基因对细胞增殖能力的影响 ,经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化。结果 :转染kai1cDNA后HO 891 0PM细胞内可检测到kai1蛋白的稳定表达 ,细胞增殖能力较前无明显变化 ,侵袭能力明显下降。结论 :外源性肿瘤转移抑制基因kai1可通过脂质体有效转染高转移性人卵巢癌细胞系HO 891 0PM ,降低其侵袭能力 ,有望成为卵巢癌基因治疗的新的候选基因     

宫颈鳞癌脱落细胞人端粒酶逆转录酶mRNA的表达及意义

目的探讨宫颈鳞癌脱落细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达及其在宫颈鳞癌早期诊断中的作用。方法采用实时荧光定量RT-PCR技术,检测人宫颈癌Hela细胞株(细胞组)以及2008年4-10月广东省妇幼保健院经临床和病理证实的31例宫颈鳞癌(病例组)、21例正常或宫颈炎症(对照组)宫颈脱落细胞中hTERT mRNA的表达,以细胞组hTERT mRNA的表达作为定性、定量参照;对病例组及对照组同时采用液基薄层细胞学(TCT)检查。结果 (1)在病例组和对照组宫颈脱落细胞中hTERT mRNA阳性表达率分别为80.6%和9.5%,其相对定量表达水平NhTERT分别为0.4646～13.7823和0.0093～0.0816,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)采用宫颈脱落细胞hTERT mRNA表达进行宫颈鳞癌筛查的灵敏度和特异度分别为80.6%和90.5%。结论宫颈鳞癌患者脱落细胞hTERT mRNA的阳性表达率及表达水平均异常增高,检测宫颈脱落细胞hTERT mRNA的表达,有助于宫颈鳞癌的早期诊断。     

IFN-γ对溴隐亭诱导的流产大鼠下丘脑-垂体-卵巢中TGF-β1表达的影响

目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)对流产大鼠下丘脑-垂体-卵巢中转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:将40只孕1 d SD大鼠随机分为4组,分别为正常组(A组)、流产模型组(B组)、流产模型+IFN-γ组(C组)和流产模型+IFN-γ抗体组(D组),每组10只。B～D组于孕6～8 d每日皮下注射溴隐亭0.3 mg/kg,建立流产模型;C组于孕9～11 d每日肌注IFN-γ(100 IU/kg);D组于于孕9～11 d每日肌注IFN-γ抗体(100μg/kg)。妊娠12 d灌注多聚甲醛固定后取材,采用免疫组织化学SP法对每组下丘脑、垂体和卵巢中TGF-β1的表达进行检测。结果:B、C组下丘脑、垂体和卵巢中TGF-β1阳性细胞数和OD值均较A组低,D组下丘脑和垂体中TGF-β1阳性细胞数和OD值较A组低;C组下丘脑、垂体和卵巢中TGF-β1阳性细胞数、下丘脑和卵巢中OD值均低于B组;D组下丘脑、垂体和卵巢中TGF-β1阳性细胞数和OD值均较B、C组低。结论:IFN-γ对流产大鼠下丘脑-垂体-卵巢中TGF-β1的表达具有下调作用。     

S1P/S1PR对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的研究

目的：探究鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受体（S1P/S1PR）对人卵巢癌SKOV3细胞促血管生成作用的影响和机制。方法：管腔形成实验探究S1P对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的影响;实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测S1P处理后的人卵巢癌SKOV3细胞中血管生成因子白细胞介素8（IL-8）、IL-6、血管内皮生长因子（VEGF）的变化情况;设计合成小干扰RNA（siRNA）干扰序列基因沉默SKOV3细胞中S1PR1、S1PR2和S1PR3的表达,蛋白质印迹（Western-blot）和qRT-PCR检测SKOV3细胞中S1PR的下调结果;qRT-PCR检测S1PR对SKOV3细胞IL-8、IL-6、VEGF表达的影响。结果：管腔形成实验结果显示,S1P处理后的SKOV3细胞培养上清液重悬人脐静脉内皮细胞融合细胞（EA.hy926）,其管腔形成的数量多于对照组（t=3.667,P=0.021）,表明S1P促进了人卵巢癌细胞SKOV3的促血管形成能力。S1P处理后的SKOV3细胞中血管生成因子IL-8、IL-6、VEGF mRNA的表达水平较对照组升高,差异有统计学意义（均P＜0.05）。S1PR1和S1PR3基因沉默可显著降低SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的mRNA表达水平,差异有统计学意义（均P＜0.05）,而S1PR2基因沉默后IL-8、IL-6、VEGF的mRNA变化不明显。结论：S1P通过S1PR1/3上调人卵巢癌SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的表达,从而增强了SKOV3细胞的促血管生成作用,S1P/S1PR通路有望成为抑制卵巢癌生长的治疗新靶点。     

siRNA抑制卵巢癌SKOV3细胞EPAS1表达及细胞增殖的体外研究

目的:探讨RNA干扰对卵巢癌SKOV3细胞中缺氧诱导因子2(EPAS1)表达及细胞增殖的抑制作用。方法:合成靶向EPAS1的小干扰RNA(siRNA)并进行转染。实验分为实验组、阳性对照组、阴性对照组及空白对照组。采用RT-PCR和western blotting检测各组细胞EPAS1 mRNA和蛋白表达水平,通过MTT法检测各组细胞增殖情况。结果:应用EPAS1-siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞后,实验组的EPAS1mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞增殖明显受限,与其他三组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组基因沉默效率为63.9%,蛋白抑制率为48.1%,细胞增殖抑制率为56.9%。结论:靶向EPAS1基因的siRNA可以抑制卵巢癌SKOV3细胞中EPAS1的表达,从而抑制SKOV3细胞在体外的增殖。     

人垂体肿瘤转化基因1在卵巢癌中表达的研究

目的　检测卵巢癌组织中人垂体肿瘤转化基因 1(hPTTG1)的表达。方法　将 4例卵巢癌组织用含 5 12条人类基因的基因表达谱芯片筛查卵巢癌相关基因。对上调基因hPTTG1在 39例卵巢癌组织及 18例正常卵巢组织中的表达情况用免疫组化方法进行检测。结果　hPTTG1在所有卵巢癌标本中均呈阳性表达 ,而在正常卵巢中无表达。免疫反应性的强弱与卵巢癌的病理类型、临床分期及组织学分级无显著相关性。结论　hPT TG1表达增高可能是卵巢癌的一个分子标志 ,有可能作为一个治疗靶点。     

透明质酸结合蛋白1在人卵巢癌细胞系中表达及其与紫杉醇敏感性的关系

目的探讨透明质酸结合蛋白1在人卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910PM、HO-8910LM、OVCA429和OVCA420中的表达和定位及其与紫杉醇敏感性之间的关系。方法 2007年2月至2008年12月在哈尔滨医科大学附属三院研究所应用荧光定量RT-PCR技术和免疫荧光化学法结合激光共聚焦显微镜分别检测人卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910PM、HO-8910LM、OVCA429和OVCA420中HABP1 mRNA和蛋白的表达以及其在细胞中的定位,MTT法分析各卵巢癌细胞系对紫杉醇的敏感性。结果 HABP1 mRNA在人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达水平分别是OVCA420的3.7、2.8和2.1倍(P值均<0.05),HO-8910LM和OVCA420中HABP1 mRNA的表达水平无统计学差异(P值>0.05),激光共聚焦显示5种人卵巢癌细胞系中HABP1蛋白的表达变化趋势与mRNA水平基本一致,其中SKOV3、OVCA429和HO-8910PM细胞系中HABP1蛋白在细胞核周的表达量明显高于OVCA420和HO-8910LM。MTT分析显示,SKOV3、OVCA429、OVCA420、HO-8910PM和HO-8910LM细胞对紫杉醇的中效浓度分别是:0.047μmol/L、0.221μmol/L、0.723μmol/L、0.092μmol/L和0.672μmol/L,相关分析显示HABP1 mRNA表达水平与卵巢癌细胞对紫杉醇的中效浓度之间的相关系数为-0.888,P<0.05。结论 HABP1的表达与卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性呈显著正相关,其机制可能是由于其在细胞中的分布位置不同所致,HABP1可作为筛选卵巢癌化疗药物的指标之一。     

NM23-H1B基因mRNA在卵巢上皮性肿瘤组织中表达的研究

目的研究NM23-H1B基因与卵巢上皮性肿瘤的相关性。方法收集2003年4月至2004年2月手术切除的卵巢上皮性肿瘤标本48份,其中卵巢上皮性癌（卵巢癌）40份,卵巢交界性上皮性肿瘤8份,正常卵巢组织标本8份。采用RT-PCR技术、RNA印迹（northern blot）法、原位杂交实验,检测NM23-H1B基因mRNA的表达。结果经RT-PCR方法检测在所有的标本中均有NM23-H1B基因mRNA的表达,在正常卵巢组织中表达较低,而在所有的卵巢肿瘤中表达均高于正常卵巢组织,早期（Ⅰ、Ⅱ期）卵巢癌中的表达高于晚期（Ⅲ、Ⅳ期）。northern blot法检测结果显示NM23．H1B基因mRNA在正常卵巢组织的表达较低,交界性肿瘤中的表达则与正常卵巢组织中相似,而在卵巢癌组织中表达明显增高,在早期卵巢癌中分化好（G1级）者表达明显高于分化较差（G2、G3级）者。原位杂交实验检测结果显示,在所有的卵巢癌标本中NM23-H1B基因mRNA阳性表达率为100％（40／40）,在正常卵巢组织中阳性表达率为0,在8份卵巢交界性肿瘤标本中,有2份NM230H1B基因表达阳性,阳性表达率为2／8。结论NM23-H1B基因与卵巢癌发生发展有相关性。     

人重组γ－干扰素（hrIFN－γ）对人胎盘滋养层hCG分泌和蜕膜蛋白质合成的影响

研究证明人重组γ－干扰素（ｈｒＩＦＮ－γ）对人胎盘滋养层组织绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和蜕膜组织蛋白质合成在体外实验中均有抑制作用。结果指出ｈｒＩＦＮ－γ在剂量为２５０Ｕ／ｍｌ培液和２５００Ｕ／ｍｌ培液时明显地抑制滋养层组织ｈＣＧ分泌，与对照组比较Ｐ值分别为０．０５和０．０１，并呈剂量相关反应，同时ｈｒＩＦＮ－γ在剂量范围为１０Ｕ～１０００Ｕ／ｍｌ培液时，明显抑制蜕膜蛋白质合成３Ｈ亮氨酸掺入的ｃｐｍ值，在对照组和实验组之间无论是细胞内或是分泌蛋白都有明显差别（Ｐ＜０．０５），而且抑制作用呈剂量相关反应，ＩＦＮ－γ抗血清能阻断其抑制作用，但ＩＦＮ－α对蜕膜组织蛋白质合成无作用。